專利名稱：基于線粒體dna拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測用的試劑盒，具體涉及基于線粒體DM拷貝數(shù)預(yù)測高原肺 水胂發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，用于評定人體高原肺水腫的易感性。
背景技術(shù)：
高原肺水腫(high altitude pulmonary edema,縮寫HAPE)是一種特發(fā)于高 原低氧環(huán)境的肺水腫，起病急，進(jìn)展快，危害大，如果救治不及時(shí)，可在較短 的時(shí)間內(nèi)發(fā)展至呼吸衰竭，甚至死亡，是嚴(yán)重威脅進(jìn)入高原人群健康和生命的 急性重癥高原病。近年的調(diào)查表明，在從平原進(jìn)入海拔3000米以上高原的漢族 人群中，高原肺水腫的發(fā)病率高達(dá)O. 4%-2%。高原肺水腫發(fā)病有明顯的家族和個(gè) 體易感傾向，環(huán)境因素和遺傳貝素均可以影響高原肺水腫的發(fā)生。近年來，遺 傳因素在高原肺水腫發(fā)病機(jī)制中的作用逐漸受到重視張雪峰，高原施工人群 急性重型高原病患病率調(diào)查，《高原醫(yī)學(xué)雜志》，2005; 15(3): 7-8;陳有，高 原肺水腫發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展，《高原醫(yī)學(xué)雜志》，2005， 15 ( 2 ): 62-64;高鈺琪， 高原肺水腫的發(fā)病機(jī)制及防治，《人民軍醫(yī)》，2005; 482 ( 2 ): 108-111。
由于線粒體是動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)唯一含有DNA和蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的細(xì)胞器，是氧 傳送鏈的生理終點(diǎn)站，是細(xì)胞氧耗的主要位點(diǎn)。它在低氧習(xí)服和適應(yīng)中發(fā)揮著 重要作用。高原肺水腫是一種低氧習(xí)服不良的急性高原病，因而線粒體在高原 肺水肺的發(fā)生中發(fā)生著重要的作用Moudgi 1 R， Hypoxic pulmonary vasoconstriction,《J Appl Physiol》，2005; 98: 390-403。線豐立體呼吸鏈氧化磷酸化不但與線粒體DNA結(jié)構(gòu)的完整性相關(guān)，還與其拷貝數(shù)相關(guān)，線粒 體DNA拷貝數(shù)增加被認(rèn)為是總線粒體呼吸功能的代償，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多疾病 的易感性與線粒體DNA拷貝數(shù)相關(guān)周云麗，乳腺癌線粒DNA拷貝數(shù)改變的研 究及意義，《天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》，2005; 11 (5): 525-527;許洪波，喉癌線粒體 DNA拷貝數(shù)的臨床意義，《中國耳鼻咽喉頭頸外科》，2006， 13 ( 4 ): 219-222。 關(guān)于線粒體DNA拷貝數(shù)與高原肺水腫易感的相關(guān)性尚無報(bào)道。
通過SYBR (即SYBR GREEN染料，縮寫SYBR )定量PCR(聚合酶鏈反應(yīng))的 方法檢測線粒體DNA拷貝數(shù)，發(fā)現(xiàn)線粒體DNA拷貝數(shù)與高原肺水腫易感性之間 存在相關(guān)性。具體^L法是
(1 )健康對照組標(biāo)本(25例)在成都采集擬進(jìn)入高原人員靜脈血2ml (EDTA 抗凝)，然后與他們一起乘飛機(jī)達(dá)到拉薩(海拔3658米)，并觀察他們在拉薩一
周內(nèi)沒有發(fā)生高原肺水腫；
(2)高原肺水腫病例組標(biāo)本(25例)為與健康對照組標(biāo)本年齡匹配，按 高原病診斷標(biāo)準(zhǔn)我國高原病命名、分型及診斷標(biāo)準(zhǔn)，《高原醫(yī)學(xué)雜志》，19%: 2-4符合高原肺水腫診斷標(biāo)準(zhǔn)的病例。樣本收集過程中遵循"赫爾辛基"宣言， 本研究得到了收集對象的知情同意，采集靜脈血2ml (EDTA抗凝)。
(3 )分別用上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司UNIQ-10柱式臨床樣品基因組 抽提試劑盒(貨號SK1342 )提取健康對照組標(biāo)本和高原肺水腫病例組標(biāo)本的血 液白細(xì)胞DNA,然后釆用定量PCR(SYBR染料法)的方法分別擴(kuò)增健康對照組標(biāo) 本和高原肺水腫病例組標(biāo)本的線粒體DNA上的ND1基因(NADH Dehydrogenase Subunitl,縮寫ND1 )和核基因編碼的看家基因Beta-actin;再分別計(jì)算每例 標(biāo)本的NDl拷貝數(shù)與Beta-actin的拷貝數(shù)的比值，結(jié)果經(jīng)SPSS 12.0 (—種統(tǒng)計(jì)軟件)中的獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)，以P<0. 05為相差顯著，并通過該軟件 計(jì)算出95%的可信區(qū)間，以分別得到健康對照組和高原肺水腫病例組 NDl/Beta-actin拷貝數(shù)的參考值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在高原肺水腫病例組中 艦/Beta-actin的拷貝數(shù)比值顯著降低(表1 )。
表l高原肺水腫病例組和健康對照組中NDl/Beta-actin拷貝數(shù)比值
健康對照組(n=25)高原肺水腫病例組(n=25)
NDl/Beta-actin0. 0822±0. 00940. 0291±0. 00554
95%可信區(qū)間0. 0625-0. 10200. 0176-0. 0407
"高原肺水腫病例組vs健康對照組P=0. 000

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試 劑盒，能用于平原人進(jìn)入高原前對高原肺水腫易感者的篩選，指導(dǎo)高原肺水腫 的預(yù)防和治療，減輕急性重癥高原病的威脅。 —
本發(fā)明所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒， 包括分離包裝的ND1引物混合液，Beta-actin引物混合液，PCR反應(yīng)液，無菌 去離子水，定值標(biāo)準(zhǔn)品，健康對照13M，其特征是，
所述的ND1引物混合液中的上游引物(F)和下游引物U)的序列為 F: 5， -ATACAACTACGCAAAGGCCCCA-3，和R: 5， -AATAGGAGGCCTAGGTTGAGGT-3，； 所述的Beta-actin引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為 F: 5，-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3，和R: 5，-GAAGGMGGCTGGAAGAGTG-3，； 所述的PCR反應(yīng)液,含有PCR緩沖液、MgCl2、 dNTPs(脫氧核苷三磷酸)、SYBR 染料、Ex Taq酶;
6所述的定值標(biāo)準(zhǔn)品是用Beta-act in的上下游引物在PTC-200 PCR儀中進(jìn)行 目的片段的擴(kuò)增，得到含有目的片段的PCR產(chǎn)物，然后將目的片段插入克隆栽體
pMD18-T中，并將陽性克隆增菌后測序驗(yàn)證；從證實(shí)含Beta-actin基因片段的菌 液中提取質(zhì)粒。
所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，其所述 的健康對照DNA是采集擬進(jìn)入高原前的人員的靜脈血2ml (EDTA抗凝)，并且到 高原后在一周內(nèi)沒有發(fā)生高原肺水腫，然后，提取血液白細(xì)胞DNA，再將DNA 濃度調(diào)為50ng/y 1。
所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，其所述 的ND1引物混合液為lOOpl;其中上游引物和下游引物各50jal，濃度均為 10pmo1/)J 1。
所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，其所述 的Beta-actin引物混合液為400 nl;其中上游引物和下游引物各200 p 1，濃 度均為lOomol/ p 1。
所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，其所述 的定值標(biāo)準(zhǔn)品用無菌去離子水倍比稀釋為5管，每管體積200 yl，濃度分別為 1X104、 1X105、 1X106、 1X107、 1X1。8拷貝/jn 1。
所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，其所述 的無菌去離子水為1500ja 1。
本發(fā)明建立了利用定量PCR (SYBR染料法)方法檢測來線粒體DM拷貝數(shù) 的方法，能用于平原人進(jìn)入高原前對高原肺水腫易感者的篩選，指導(dǎo)高原肺水 腫的預(yù)防和治療，減輕急性重癥高原病的威脅，有利于進(jìn)入高原人群健康；該試劑盒使用簡單，操作方便，檢測快速。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水肺發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒， 包括分離包裝的ND1引物混合液，Beta-act in引物混合液，PCR反應(yīng)液，無菌 去離子水，定值標(biāo)準(zhǔn)品，健康對照DNA;
試劑盒中的ND1引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為
F:5， -ATACAACTACGCAAAGGCCCCA-3'和5， -AATAGGAGGCCTAGGTTGAGGT-3，；
所述的Beta-actin引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為
F: 5，-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3，和R: 5，-GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3,;
試劑盒中的PCR反應(yīng)液，含有PCR緩沖液、MgCh、 dNTPs(脫氧核苷三磷酸)、 SYBR染料、ExTaq酶，直接購于寶生物工程(大連)有限公司，貨號DRR041S。
試劑盒中的定值標(biāo)準(zhǔn)品是用Beta-actin的上下游引物在PTC-200 PCR儀中 進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增，得到含有目的片段的PCR產(chǎn)物，然后將目的片段插入克隆 栽體pMD18-T中，并將陽性克隆增菌后測序^;從證實(shí)含Beta-actin基因片段 的菌液中提取質(zhì)粒。
試劑盒中的健康對照DNA是采集擬進(jìn)入高原前的人員的靜脈血2邁1 (EDTA抗 凝)，并且到高原后在一周內(nèi)沒有發(fā)生高原肺水腫，然后，提取血液白細(xì)胞MA， 再將DM濃度調(diào)為50ng/nl。
試劑盒中的ND1引物混合液為IOO卩1;其中上游引物和下游引物各50y 1， 濃度均為10pfflol/y 1。
試劑盒中的的Beta-actin引物混合液為400 p 1;其中上游引物和下游引物 各200inl，濃度均為10pmol/p 1。試劑盒中的定值標(biāo)準(zhǔn)品用無菌去離子水倍比稀釋為5管，每管體積200ji 1， 濃度分別為lx104、 lxl05、 lxio'、 lxl07、 lxl(T拷貝/pl。 試劑盒中的無菌去離子水為1500 pl。
試劑盒中的定值標(biāo)準(zhǔn)品用Beta-act in上下游引物，在PTC-200 PCR儀中進(jìn)行 擴(kuò)增，條件為94"C預(yù)變性5min， 94"C變性30s， 60TC退火30s， 721C延伸45s， 94 TC變性30s， 60匸退火30s， 721C延伸45s……其中94匸變性30s， 60匸退火30s， 72 r延伸45s循環(huán)29次，72t:終末延伸8min, PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后用將目的片段 (擴(kuò)增產(chǎn)物)插入克隆栽體pMD18-T(購于寶生物工程有限公司)中，并將陽性 克隆增菌后測序發(fā)江；
從證實(shí)含有Beta-actin基因片段的菌液中提取質(zhì)粒，采用分光光度儀測得 質(zhì)粒濃度，再算出摩爾濃度Ot量除以堿基數(shù)+ 324. 5 + 10),再乘以阿拂加的羅 常數(shù)(6. 02x10")，得到質(zhì)粒的濃度為lxl(T拷貝/yl。將質(zhì)粒進(jìn)行倍比稀釋(共 稀釋五個(gè)梯度)。稀釋后將標(biāo)準(zhǔn)品(即上述質(zhì)粒)分別裝在200 n 1小管內(nèi)，于 -201C的水箱內(nèi)保存，避免質(zhì)粒反復(fù)凍融導(dǎo)致降解；
健康對照DM，在成都采集擬i^高原人員靜脈血2ml，然后與他們一起乘 飛機(jī)達(dá)到拉薩，并觀察他們一周且在這周內(nèi)沒有發(fā)生高原肺水肺，抽取靜脈血 2ml (EDTA抗凝)并提^jfe液白細(xì)胞DNA。
該試劑盒的使用說明
第一步，待測個(gè)體樣品準(zhǔn)備，采用上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司UNIQ-10 柱式臨床樣品基因組抽提試劑盒(貨號SJQ342 )提取待測個(gè)體靜脈血液中白細(xì) 胞基因組總DNA,然后用紫外分光光度儀對DM進(jìn)行定量；
第二步，PCR反應(yīng)體系配制，共配制十管；第一管到第五管為定值標(biāo)準(zhǔn)品，共5管，濃度分別為 取10n 1濃度為1 x 108拷貝/" 1的質(zhì)粒；
取10pl濃度為1 x 1()8拷貝/u 1的質(zhì)粒，加入90nl無菌去離子水，混勻 得到濃度為lxl(T拷貝/p 1的質(zhì)粒；
取IOM 1濃度為1 x 107拷貝/" 1的質(zhì)粒，加入90p 1無菌去離子水，混勻 得到濃度為lxl()6拷貝/jLil的質(zhì)粒；
取10Ml濃度為lxlO'拷貝/pl的質(zhì)粒，加入90m1無菌去離子水，混勻 得到濃度為lxl()5拷貝/p 1的質(zhì)粒；
取lOp 1濃度為1 x 1()5拷貝/u 1的質(zhì)粒，加入90 u 1無菌去離子水'混勻 得到濃度為lxl(T拷貝/^il的質(zhì)粒；
各取0. 5 m 1濃度從1 x 104至1 x 108拷貝/微升的標(biāo)準(zhǔn)品，然后每管都依次 加入Beta-actin引物混合液lpl， PCR反應(yīng)液12. 5 ji 1,無菌去離子水llnl， 混勻；
第六管為待測個(gè)體冊l的擴(kuò)增，取待測個(gè)體的DNA 0. 5pl，然后依次加入 NDl引物混合液lpl， PCR反應(yīng)液12. 5 n 1，無菌去離子水llul，混勻；
第七管為待測個(gè)體看家基因Beta-actin的擴(kuò)增，取待測個(gè)體的DNA 0. 5 p 1，然后依次加入Beta-actin引物混合液1 m 1， PCR反應(yīng)液12. 5 p 1，無菌去 離子水llnl，混勻；
第八管為空白對照，分別取Beta-act in引物混合液1 1， PCR反應(yīng)液12. 5 Ml,無菌去離子水11.5pl，混勻；
第九管為健康對照樣本ND1的擴(kuò)增，取對照DNAO. 5pl，然后依次加入ND1 引物混合液lnl， PCR反應(yīng)液12. 1，無菌去離子水lliil，混勻；第十管為健康對照樣本看家基因Beta-act in的擴(kuò)增，M照DNA 0. 5p 1， 然后依次加入Beta-actin引物混合液lpl， PCR反應(yīng)液12. 5 ju 1，無菌去離子 水11 p 1，混勻；
第三步，PCR擴(kuò)增條件，將第二步的十管已經(jīng)混勻的物質(zhì)分別;^Opticon monitor 1定量PCR 4義中，均按以下條件進(jìn)行PCR反應(yīng)951C預(yù)變性10s; 95 iC變性5s，60X:退火延伸20s，讀板，重復(fù)39個(gè)循環(huán)；
其中，NDl引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為221bp，序列如下
ATACAACTACGCAAAGGCCCCAACGTTGTAGGCCCCTACGGGCTACTACAACCCTTCGCTGACG CCATAAAACTCTTCACCAAAGAGCCCCTAAAACCCGCCACATCTACCATCACCCTCTACATCACCGCC
CCTCAACCTAGGCCTCCTATT;
Beta-actin引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為180bp,序列如下
CGGGAAATCGTGCGTGACATCAAGAAGCTGTGCTACGTCGCCCTGGACTTCGAGCGGGAGATGG CCATGGTGGCCTCCAGCTCC丁CCCTGGAGMGAGCTACAAGCTGCTCGATGGCCAGGTCATCACCATC GGCAACGAGCGGTTCCACTGCCCCGAGGCGCTCTTCCAGCCTTCCTTC。
第四步，數(shù)據(jù)分析，PCR反應(yīng)結(jié)束后，定量PCR儀通過比較待測標(biāo)本的Ct 值與標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct值，自動(dòng)生成每例樣本NDl和Beta-actin的拷貝數(shù)，然后， 分別用待測個(gè)體和對照的NDl拷貝數(shù)除以Beta-actin拷貝數(shù)，分別求得待測個(gè) 體和對照的NDl/Beta-actin拷貝數(shù)比值，如果對照的NDl/Beta-actin (第九 管/第十管)拷貝數(shù)比值位于0. G625-0. 1020之間時(shí)，提示我們實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和靈 敏度可信，當(dāng)此時(shí)待測個(gè)體(第六管/第七管)的拷貝數(shù)比值位于高原肺水腫易 感者原肺水腫的易感個(gè)體。
第一至第五管為定值標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增，以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線；
第六、七管是為了獲得待測個(gè)體的NDl基因和Beta-actin基因的拷貝數(shù);
第八管為空白對照管，以檢測整個(gè)PCR過程中是否有污染；
第九、十管是為了獲得健康對照的NDl基因和Beta-actin基因的拷貝數(shù)。序列表
<110>中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
<120>基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水肺發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒 <130>
<140> 200810232919.8 <141> 2008-10-24 <160> 6
<170> Patentln 3. 3
<210> 1 <211> 22 <212> DM <213>人工合成 <221> ND1上游引物 <400> 1
atacaactac gcaaaggccc ca 22
<210> 2 <211> 22 <212>腿 <213>人工合成 <221> ND1下游引物 < 2
aataggaggc ctaggttgag gt 22
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213>人工合成
<221> Beta-actin上游引物
<400> 3
cggg固tcg tgcgtgacat 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213>人工合成
<221> Beta-actin下游引物
<400> 4
gaaggaaggc tggaagagtg 20
<210> 5<211> 221
<212> DNA
<213> ND1核酸序列
<221> ND1 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
<400> 5
atacaactac gcaaaggccc caacgttgta ggcccctacg ggctactaca acccttcgct 60 gacgccataa aactcttcac caaageigccc ctaaaacccg ccacatctac catcaccctc 120 tacatcaccg ccccgacctt agctctcacc atcgctcttc tactatgaac ccccctcccc 180 atacccaacc ccctggtcaa cctcaaccta ggcctcctat t 221
<210> 6 <211> 180 <212〉 ■
<213> Beta-act in核絲列 <221> Beta-actin PCR擴(kuò)增片段 <400> 6
cgggaaatcg tgcgtgacat caagaagctg tgctacgtcg ccctggac" cgagcgggag 60 atggccatgg tggccyccag ctcctccctg gagaagagct acaagctgct cgatggccag 120 gtcatcacca tcggcaacga gcggttccac tgccccgagg cgctcttcca gccttccttc 180
權(quán)利要求
1、基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，包括分離包裝的ND1引物混合液，Beta-actin引物混合液，PCR反應(yīng)液，無菌去離子水，定值標(biāo)準(zhǔn)品，健康對照DNA，其特征是，所述的ND1引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為F5’-ATACAACTACGCAAAGGCCCCA-3’和R5’-AATAGGAGGCCTAGGTTGAGGT-3’；所述的Beta-actin引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為F5’-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3’和R5’-GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’；所述的PCR反應(yīng)液，含有PCR緩沖液、MgCl2、dNTPs、SYBR染料、Ex Taq酶；所述的定值標(biāo)準(zhǔn)品是用Beta-actin的上下游引物在PTC-200PCR儀中進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增，得到含有目的片段的PCR產(chǎn)物，然后將目的片段插入克隆載體pMD18-T中，并將陽性克隆增菌后測序驗(yàn)證；從證實(shí)含Beta-actin基因片段的菌液中提取質(zhì)粒。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) 的試劑盒，其特征是，所述的健康對照DNA是采集擬進(jìn)入高原前的人員的靜脈 血2ml，并且到高原后在一周內(nèi)沒有發(fā)生高原肺水腫，然后，提取血液白細(xì)胞 DM,再將DNA濃度調(diào)為50ng/ ja 1。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) 的試劑盒，其特征是，所述的ND1引物混合液為100y 1;其中上游引物和下游 引物各50pl，濃度均為10pmol/p 1。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) 的試劑盒，其特征是，所述的Beta-actin引物混合液為400 pl;其中上游引 物和下游引物各200 " 1,濃度均為10pmol/M 1。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) 的試劑盒，其特征是所述的定值標(biāo)準(zhǔn)品用無菌去離子水倍比稀釋為5管，每管 體積200 pl，濃度分別為1X104、 1X105、 1X106、 1X107、 lXl()8拷貝/微升。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) 的試劑盒，其特征是，所述的無菌去離子水為！500 p 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及基于線粒體DNA拷貝數(shù)預(yù)測高原肺水腫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，包括分離包裝的ND1引物混合液，Beta-actin引物混合液，PCR反應(yīng)液，無菌去離子水，定值標(biāo)準(zhǔn)品，健康對照DNA，其特征是，ND1引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為F5’-ATACAACTACGCAAAGGCCCCA-3’和5’-AATAGGAGGCCTAGGTTGAGGT-3’；所述的Beta-actin引物混合液中的上游引物和下游引物的序列為F5’-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3’和R5’-GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。本發(fā)明能用于平原人進(jìn)入高原前對高原肺水腫易感者的篩選，指導(dǎo)高原肺水腫的預(yù)防和治療，有利于進(jìn)入高原人群健康；該試劑盒使用簡單，操作方便，檢測快速。
文檔編號C12Q1/68GK101475981SQ200810232919
公開日2009年7月8日 申請日期2008年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月24日
發(fā)明者劉福玉, 羅勇軍, 麗 陳, 有 陳, 高文祥, 高鈺琪, 黃大愿, 黃學(xué)文 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)