專利名稱：產(chǎn)生可用作抗癌藥的蒽環(huán)類代謝物的遺傳修飾菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及波賽鏈霉菌(Sti^ptomyces peucetius)的遺傳修飾菌株及其用途，即 將這種菌株用于通過(guò)單批發(fā)酵來(lái)產(chǎn)生高滴度(titre)的蒽環(huán)類代謝物(如4'-表道諾紅 菌素(4'-印idaunorubicin)、13-二氫-表道諾紅菌素、4'-表-領(lǐng)地霉素和ε -紫紅霉 酮)的混合物，該混合物可用在本發(fā)明的下游工藝中，來(lái)生產(chǎn)活性藥用成分表阿霉素和/或 去甲柔毛霉素。
背景技術(shù)：
道諾霉素類化合物是一類由多種鏈霉菌(如波賽鏈霉菌、天蘭淡紅鏈霉菌 (S. coerulorubidus)、灰色鏈霉菌(S. griseus)、鏈霉菌 C5 (Streptomyces sp. C5)、波塞鏈 霉菌表灰變種(S. peucetius var. caesius)和分枝鏈霉菌(S. Bifurcus))產(chǎn)生的抗腫瘤抗 生素。這類抗腫瘤抗生素中的基本化合物為道諾霉素(DiMarco等人，1964)。自從1967年 和1971年起，道諾霉素及其14-羥基衍生物阿霉素分別開(kāi)始被用于癌癥化療。道諾霉素尤 其被用于血癌的治療，而阿霉素展示出了較寬的抗瘤譜。在目前已知被用于臨床應(yīng)用的所 有七種蒽環(huán)類藥物中，有六種屬于道諾霉素類。在這些化合物的生產(chǎn)工藝中，使用道諾紅菌 素(daimorubicin)或其糖苷配基-道諾紅菌素酮作為起始物料以進(jìn)行化學(xué)合成。蒽環(huán)類化合物被用于癌癥化療中已超過(guò)三十年的時(shí)間。阿霉素由于具有非常寬的 抗瘤譜，因此目前仍為主要使用的細(xì)胞毒素類藥物。表阿霉素是重要程度僅次于阿霉素的 抗腫瘤抗生素，現(xiàn)在表阿霉素變得更為重要了。道諾霉素類化合物可由通式I表述，
權(quán)利要求
一種微生物菌株，其以至少0.5g/升發(fā)酵液的滴度產(chǎn)生蒽環(huán)代謝物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌株，其中該菌株以至少0.Ig/升發(fā)酵液的滴度分別產(chǎn)生化 合物表道諾紅菌素、13-二氫-表道諾紅菌素、4'-表-領(lǐng)地霉素和ε-紫紅霉酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中該菌株所產(chǎn)生的表道諾紅菌素、 13-二氫-表道諾紅菌素、4'-表-領(lǐng)地霉素和ε-紫紅霉酮中的任意一種占全部蒽環(huán)代 謝物部分的至少10%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中內(nèi)源性道諾霉素代謝物的生物合 成被阻斷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中所述鮑霉素的生產(chǎn)被隨機(jī)誘變阻斷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中所述菌株攜帶有編碼4'-酮還 原酶和進(jìn)行0-甲基化所需的基因。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的菌株，其中所述基因?yàn)閑kr8和rdmB。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中該菌株選自鏈霉菌 (Streptomyces)屬。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中該菌株優(yōu)選選自波賽鏈霉菌 (Streptomyces peucetius)0
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任意一項(xiàng)所述的菌株，其中該菌株更優(yōu)選選自波塞鏈霉菌表 灰變禾中(Streptomyces peucetius var. caesius)。
11.一種通過(guò)發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)蒽環(huán)代謝物的方法，其通過(guò)利用根據(jù)權(quán)利要求1至10中任意 一項(xiàng)所述的生產(chǎn)菌株來(lái)進(jìn)行發(fā)酵。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述蒽環(huán)代謝物選自表道諾霉素類化合物和 紫紅霉酮。
13.根據(jù)權(quán)利要求11和12中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述蒽環(huán)代謝物優(yōu)選選自表道 諾紅菌素、13-二氫-表道諾紅菌素、4'-表-領(lǐng)地霉素和ε-紫紅霉酮。
14.根據(jù)權(quán)利要求11至13中任意一項(xiàng)所述的方法，其中通過(guò)在任何時(shí)間添加樹(shù)脂，從 發(fā)酵液中吸附出表道諾霉素類化合物粗品和ε _紫紅霉酮。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述樹(shù)脂選自離子型吸附劑和非離子型吸附劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述樹(shù)脂選自聚苯乙烯。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述樹(shù)脂選自XAD-7和DiaionΗΡ-20。
18.根據(jù)權(quán)利要求14至17中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述樹(shù)脂的添加量為1克/升至100克/升。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述樹(shù)脂的優(yōu)選添加量為15克/升至40克/升。全文摘要
本發(fā)明涉及一種微生物菌株，其以至少0.5g/升發(fā)酵液的滴度產(chǎn)生蒽環(huán)代謝物。
文檔編號(hào)C12R1/46GK101978043SQ200880015212
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2008年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月8日
發(fā)明者克里斯蒂娜·于利洪科, 米夏埃爾·蘭貝特 申請(qǐng)人:W.C.賀利氏有限公司