專利名稱：：β-葡糖苷酶增強(qiáng)的絲狀真菌全纖維素酶組合物和使用方法P_葡糖苷酶增強(qiáng)的絲狀真菌全纖維素酶組合物和使用方法1.相關(guān)申請(qǐng)的交叉參照本申請(qǐng)要求美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.60/970，842的權(quán)益，所述臨時(shí)申請(qǐng)于2007年9月7日提交，此處以其整體引入作為參考。2.領(lǐng)域本公開(kāi)內(nèi)容涉及酶的領(lǐng)域，特別是用于纖維素物質(zhì)酶促水解的方法和組合物。3.介紹由于非可再生能源的極限臨近，作為可再生能源的纖維素潛力巨大。纖維素可被轉(zhuǎn)化為糖，如葡萄糖，并通過(guò)眾多微生物(包括細(xì)菌、酵母和真菌)用作為能源用于工業(yè)目的。例如，可將纖維素物質(zhì)用酶轉(zhuǎn)化為糖，所得的糖可用作工業(yè)微生物的原料，生產(chǎn)如塑料和乙醇等產(chǎn)品。纖維素物質(zhì)作為可再生碳源的應(yīng)用取決于經(jīng)濟(jì)上可行的用于纖維素物質(zhì)酶促水解的纖維素酶的發(fā)展。纖維素酶是催化纖維素水解為如葡萄糖、纖維二糖和其他纖維寡糖等產(chǎn)物的酶。纖維素酶協(xié)同作用將纖維素水解為葡萄糖。外切纖維二糖水解酶(CBH)如CBHI和CBHII，一般作用于纖維素末端產(chǎn)生纖維二糖，而內(nèi)切葡聚糖酶(EGs)作用于纖維素的任意部位。這些酶共同將纖維素水解為較小的纖維寡糖(如纖維二糖)。纖維二糖由P-葡糖苷酶水解為葡萄糖。雖然許多微生物有能力降解纖維素，但這些微生物中只有少數(shù)，能產(chǎn)生顯著量的能將結(jié)晶纖維素完全水解的酶。相應(yīng)地，仍然存在著為工業(yè)應(yīng)用中水解纖維素開(kāi)發(fā)高效酶系統(tǒng)的需要。因此需要提高纖維素物質(zhì)酶促水解的效率和經(jīng)濟(jì)性。4.才既述本教導(dǎo)提供P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物和使用方法。通常，與單獨(dú)的全纖維素酶制品相比，P_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物有相等或更好的特異性性能。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物含有高于10%到大約80%(w/w，蛋白質(zhì))的P-葡糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物含有的全纖維素酶活性和P-葡糖苷酶活性為大約0.60到22pNPG/CMC單位。本教導(dǎo)還提供通過(guò)添加有效量的e-葡糖苷酶來(lái)減少水解纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶量的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法提供減少水解纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶的量，這是通過(guò)添加超過(guò)全纖維素酶的量的10%(w/w，蛋白質(zhì))的P-葡糖苷酶的量。在一些實(shí)施方案中，該方法包括全纖維素酶活性和P-葡糖苷酶活性，其中P-葡糖苷酶活性對(duì)纖維素酶活性的比值為大約0.60到22pNPG/CMC單位。本教導(dǎo)還提供了通過(guò)將纖維素物質(zhì)與有效量的P_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物進(jìn)行接觸來(lái)水解纖維素物質(zhì)的方法。本教導(dǎo)的這些和其他特征如下所述。5.附圖簡(jiǎn)述熟練的技術(shù)人員會(huì)理解，附圖只用于說(shuō)明目的，并非意圖以任何方式限制本教導(dǎo)的范圍。圖1是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在1%PASC上使用木霉屬(Trichoderma)全纖維素酶和木霉屬P-葡糖苷酶1，所述圖表顯示總％轉(zhuǎn)化率(A)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(B)。圖2是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在7%w/w微晶纖維素(Avicel)上用木霉屬全纖維素酶和木霉屬P-葡糖苷酶l，所述圖表顯示總百分比轉(zhuǎn)化率(A)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(B)。圖3是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在7^w/wPCS上用木霉屬全纖維素酶和木霉屬P-葡糖苷酶l，所述圖表顯示總百分比轉(zhuǎn)化率(A)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(B)。圖4是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在7^w/w甘蔗渣上用木霉屬全纖維素酶和木霉屬P-葡糖苷酶l，所述圖表顯示總百分比轉(zhuǎn)化率(A)、所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(B)和通過(guò)增加P-葡糖苷酶量的百分比轉(zhuǎn)化率(C)。圖5是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在7^w/wPCS上用木霉屬全纖維素酶RutC30和木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶1，所述圖表顯示總％轉(zhuǎn)化率(a)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(b)。圖6是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在l^w/wPASC上用木霉屬全纖維素酶和純化的木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶1，所述圖表顯示總％轉(zhuǎn)化率(a)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(b)。圖7是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在7^w/wPCS上用木霉屬全纖維素酶和純化的木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶1，所述圖表顯示總％轉(zhuǎn)化率(a)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(b)。圖8是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在l^w/wPASC上用木霉屬全纖維素酶和純化的木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶3，所述圖表顯示總％轉(zhuǎn)化率(a)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(b)。圖9是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在7^w/wPCS上用木霉屬全纖維素酶和純化的木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶3，所述圖表顯示總％轉(zhuǎn)化率(a)以及所產(chǎn)生纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(b)。圖10是顯示微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中在1%w/VPASC上用木霉屬全纖維素酶和純化的木霉屬P-葡糖苷酶7。將總％轉(zhuǎn)化率針對(duì)含有和不含P-葡糖苷酶7的給定劑量的木霉屬全纖維素酶來(lái)作圖。6.多種實(shí)施方案詳述應(yīng)當(dāng)理解前面的一般描述和后面的詳細(xì)描述都只是示例性和解釋性的，而不是此處所述組合物和方法的限制。除非此處另有定義，這里所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)，與本發(fā)明所屬領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員的一般理解有相同的意義。本申請(qǐng)中，除非另有說(shuō)明，單數(shù)詞的使用包括了復(fù)數(shù)形式。使用"或"表示"和/或"，除非另有說(shuō)明。同樣地，術(shù)語(yǔ)"包含/含有"("comprise"、"comprising"、"comprises")的各種詞性形式和"包括"的各種詞性形式("include"、"including"、"includes")并非意圖限制。此處引用的所有專利和出版物，包括這些專利和出版物中公開(kāi)的所有氨基酸和核苷酸序列，在此明確引入作為參考。此處提供的標(biāo)題，并不是對(duì)可以參考說(shuō)明書(shū)整體而得到的本發(fā)明各方面或?qū)嵤┓桨傅南拗?。相?yīng)地，此處的術(shù)語(yǔ)通過(guò)參考說(shuō)明書(shū)整體而得到更充分的定義。6.1|3_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物提供了P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物，及其制備和使用方法。通常，與單獨(dú)的全纖維素酶制品相比，此處所述的13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物有大約相等或更好的特異性性能。在一些實(shí)施方案中，與單獨(dú)的全纖維素酶制品相比，此處描述的P_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物在纖維素物質(zhì)糖化作用中有大約相等或更好的特異性性能。|3-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物可包括任何有13-葡糖苷酶活性的多肽。術(shù)語(yǔ)"P-葡糖苷酶"此處定義為分類(lèi)為EC3.2.1.21的P-D-葡糖苷葡糖水解酶(P-D-glocosideglucohydrolase)，和/或那些在某些GH家族中的酶，其包括但不限于在GH家族1、3、9或48中的酶，所述酶催化纖維二糖的水解(具有P-D-葡萄糖的釋放)。P-葡糖苷酶可從任何合適的微生物通過(guò)重組方法獲得或從商業(yè)來(lái)源得到。來(lái)自微生物的P-葡糖苷酶的合適并不限制的例子，包括并不限于細(xì)菌和真菌。合適的細(xì)菌包括熱酸菌屬(Acidothermus)、醋弧菌屬(Acetivibrio)、Aeromona、氣單胞菌屬(Aeromonas)、月旨環(huán)酸桿菌屬(Alicyclobacillus)、Anaerocellum、不云力桿菌屬(Acinetobacter)、方文線桿菌屬(Actinobacillus)、Alcanivorax、堿湖生菌屬(Alkalilimnicola)、Alkaliphilus、魚(yú)月星藍(lán)細(xì)菌屬(Anabaena)、節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)、固氮弧菌屬(Azoarcus)、固氮螺菌屬(Azospirillum)、Anaeromyxobacter、丁酸弧菌屬(Butyrivibrio)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、擬桿菌屬(Bacteroides)、蛭弧菌屬(Bdellovibrio)、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、包特氏菌屬(Bordetella)、包柔體屬(Borrelia)、慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)、布魯氏菌屬(Brucella)、伯克氏菌屬(Burkholderia)、丁酸弧菌屬(Butyrivibrio)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、熱解纖維素菌屬(Caldicellulosiruptor)、柄桿菌屬(Caulobacter)、纖維弧菌屬(Cellvibrio)、色桿菌屬(Chromobacterium)、棍狀桿菌屬(Clavibacter)、科爾韋爾氏菌屬(Colwellia)、棒狀菌屬(Corynebacterium)、藍(lán)細(xì)菌屬(CyMiobacteria)、噬纖維菌屬(Cytoph卿)、真桿菌屬(Eubacterium)、絲狀桿菌屬(Fibrobacter)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、粘桿菌屬(Gloeobacter)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、梭桿菌屬(Fusobacterium)、Hahella、動(dòng)球菌屬(Kineococcus)、乳球菌屬(Lactococcus)、利斯特氏菌屬(Listeria)、Maricaulis、粘細(xì)菌屬(Myxobacter)、中間原體屬(Mesoplasma)、甲基球菌屬(Methylococcus)、粘球菌屬(Myxococcus)、小雙孢菌屬(Microbispora)、酒球菌屬(0enococcus)、類(lèi)芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、發(fā)光桿菌屬(Photobacterium)、光桿狀菌屬(Photorhabdus)、果膠桿菌屬(Pectobacterium)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、胃球菌屬(Ruminococcus)、根瘤菌屬(Rhizobium)、紅細(xì)菌屬(Rhodobacter)、紅球菌屬(Rhodococcus)、紅育菌屬(Rhodoferax)、紅假單胞菌屬(Rhodopseudomonas)、Saccharophagus、Salinispora、沙門(mén)氏菌屬(Salmonella)、Solibacter、集胞藍(lán)細(xì)菌屬(Synechocystis)、沙雷氏菌屬(Serratia)、希瓦氏菌屬(Shewanella)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、鏈霉菌屬(Str印tomyces)、棲熱袍菌屬(Thermotoga)、棲熱菌屬(Thermus)、密螺旋體屬7(Tr印o固a)、Thermobifida、弧菌屬(Vibrio)、黃單胞菌屬(Xanthomonas)、食酸菌屬(Acidovorax)、Deinococcusgeothermalis、Desulfotalea、腸球菌屬(Enterococcus)、歐文氏菌屬(Erwinia)和耶爾森氏菌屬(Yersinia)。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶是從絲狀真菌得到的。術(shù)語(yǔ)"絲狀真菌"表示的是本領(lǐng)域技術(shù)人員承認(rèn)的任意和全部絲狀真菌。一般來(lái)說(shuō)，絲狀真菌是真核微生物，包括亞門(mén)真菌亞門(mén)(Eumycotina)和藻屬(Oomycota)的所有絲狀形式。這些真菌的特征在于營(yíng)養(yǎng)菌絲體，該菌絲體帶有由殼多糖、!3-葡聚糖和其他復(fù)雜多糖組成的細(xì)胞壁。在一些實(shí)施方案中，本教導(dǎo)中的絲狀真菌在形態(tài)、生理和遺傳方面與酵母不同。在一些實(shí)施方案中，絲狀真菌包括但不限于以下屬曲霉菌屬(Aspergillus)、支頂孢屬(Acremoni咖)、短梗霉屬(Aureobasidium)、白僵菌屬(Beauveria)、頭抱屬(C印halosporium)、Ceriporiopsis、Chaetomiumpaecilomyces、金小抱子屬(Chrysosporium)、麥角菌屬(Clavic印s)、方定抱腔菌屬(Cochiobolus)、隱球酵母屬(Cryptococcus)、黑蛋巢菌屬(Cyathus)、內(nèi)座殼屬(Endothia)、Endothiamucor、嫌抱屬(Fusarium)、Gilocladium、腐質(zhì)霉屬(Humicola)、稻溫病菌(Mag卿orthe)、毀絲霉屬(Myceliophthora)、漆斑菌屬(Myrotheci咖)、毛霉屬(Mucor)、脈孢菌屬(Neurospora)、白腐真菌(Phanerochaete)、柄孢殼屬(Podospora)、擬青霉屬(Paecilomyces)、青霉屬(Penicillium)、梨孢霉屬(Pyricularia)、根毛霉菌屬(Rhizomucor)、根霉屬(Rhizopus)、裂褶菌屬(Schizophylum)、殼多孢屬(Stagonospora)、碟節(jié)菌屬(Talaromyces)、木霉屬(Trichoderma)、Thermomyces、嗜熱子囊菌屬(Thermoascus)、梭孢殼屬(Thielavia)、彎頸霉屬(Tolypocladium)、發(fā)癬菌屬(Trichophyton)、和Trametespleurotus。在一些實(shí)施方案中，絲狀真菌包括但不限于以下幾禾中構(gòu)巢曲毒(A.nidulans)、黑曲毒(A.niger)、泡盛曲霉(A.)、棘孢曲霉(A.aculeatus)、A.kawachi例如NRRL3112、ATCC22342(NRRL3112)、ATCC44733、ATCC14331和菌株UVK143f;米曲霉(A.oryzae)例如ATCC11490;青霉屬(Penicillium)粗糙脈包菌(N.crassa)、里氏木霉(Trichodermareesei)例如NRRL15709、ATCC13631、56764、56765、56466、56767和綠色木霉(Trichodermaviride)例如ATCC32098和32086。可以使用的P-葡糖苷酶優(yōu)選例包括以下e-葡糖苷酶，其來(lái)自棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)(Kawaguchi等人，1996，Gene173:287-288)、Aspergilluskawachi(Iwashita等人，1999，Appl.Environ.Microbiol.65:5546-5553)、米曲霉(Aspergillusoryzae)(W02002/095014)、雙氮纖維單胞菌(Cellulomonasbiazotea)(Wong等人，1998，Gene207:79-86)、繩狀青霉(Penicilliumfuniculosum)(W0200478919)，扣囊復(fù)膜孢酵母(Saccharomycopsisfibuligera)(Machida等人，1988，Appl.Environ.Microbiol.54:3147-3155)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)(Wood等人，2002，Nature415:871-880)，和里氏木霉P_葡糖苷酶1(美國(guó)專利No.6，022，725)、里氏木霉P_葡糖苷酶3(美國(guó)專利No.6，982，159)、里氏木霉P-葡糖苷酶4(美國(guó)專利No.7，045，332)、里氏木霉P_葡糖苷酶5(美國(guó)專利No.7，005，289)、里氏木霉P-葡糖苷酶6(USPN20060258554)和里氏木霉P_葡糖苷酶7(USPN20040102619)。在一些實(shí)施方案中，可以通過(guò)表達(dá)編碼P-葡糖苷酶的基因來(lái)生產(chǎn)P-葡糖苷酶。例如，P-葡糖苷酶可分泌到細(xì)胞外隙，例如，通過(guò)革蘭氏陽(yáng)性生物(如芽胞桿菌屬(Bacillus)和放線菌屬(Actinomycetes))或真核宿主(例如木霉屬、曲霉屬、酵母屬(Saccharomyces)和畢赤酵母屬(Pichia))。應(yīng)當(dāng)理解，在一些實(shí)施方案中，與天然水平相比，重組微生物中的P-葡糖苷酶可以過(guò)量表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，如果利用宿主細(xì)胞來(lái)進(jìn)行P-葡糖苷酶表達(dá)，則細(xì)胞可被遺傳修飾來(lái)減少細(xì)胞內(nèi)源性的一種或多種蛋白質(zhì)的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞可包含一個(gè)或多個(gè)天然基因，特別是編碼分泌蛋白的基因，該基因已缺失或已失活。例如，一個(gè)或多個(gè)編碼蛋白酶的基因(例如編碼天冬氨酰蛋白酶的基因，見(jiàn)Berka等人，Gene199086:153-162和USP6，509，171)或編碼纖維素酶的基因可被缺失或滅活。在一個(gè)實(shí)施方案中，木霉屬物種(Trichodermasp.)宿主細(xì)胞可以是這樣的里氏木霉宿主細(xì)胞，其在cbhl、cbh2、和egll、egl2基因中包含滅活缺失，如W005/001036所述。例如，編碼P_葡糖苷酶的核酸可存在于木霉屬物種宿主細(xì)胞的核基因組中，或可存在于在木霉宿主細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒中。P-葡糖苷酶可依原樣使用或P-葡糖苷酶可被純化。此處使用的術(shù)語(yǔ)"依原樣"是指發(fā)酵產(chǎn)生的酶制品不經(jīng)歷或經(jīng)歷極少的回收和/或純化。例如，細(xì)胞一旦分泌P-葡糖苷酶到細(xì)胞培養(yǎng)基中，含有P-葡糖苷酶的細(xì)胞培養(yǎng)基就可以使用。可選地，P-葡糖苷酶可用任何方便的方法從細(xì)胞培養(yǎng)基中回收，例如，通過(guò)沉淀、離心、親和、過(guò)濾或本領(lǐng)域任意其他已知方法，包括ChenH、Hayn.M、Esterbauer，H.〃Purificationandcharacterizationoftwoextracellularb-glucosidasesfromTrichodermareesei〃，BiochimicaetBiophysicaActa,1992，1121，54-60。例如，可以應(yīng)用親和層析(Tilbeurgh等人，(1984)FEBSLett.16:215)、離子交換層析法(Goyal等人，(1991)Biores.Technol.36:37、Fliess等人，(1983)Eur.J.A卯l.Microbiol.Biotechnol.17:314、Bhikhabhai等人，(1984)J.Appl.Biochem.6:336和Ellouz等人，(1987)Chromatography396:307)(所述離子交換層析法包括使用有高分辨能力材料的離子交換(Medve等人，(1998)J.Chromatogr即hyA808:153))、疏水相互作用層析(Tomaz禾口Queiroz，(1999)J.ChromatographyA865:123)、兩相分配(Brumbauer等人，(1999)Bios印aration7:287)、乙醇沉淀、反向HPLC、在二氧化硅上的層析或在陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(如DEAE)上的層析、層析聚焦、硫酸銨沉淀或使用例如S印hadexG-75的凝膠過(guò)濾。在一些實(shí)施方案中，使用P-葡糖苷酶可不進(jìn)行從細(xì)胞培養(yǎng)基其他組分的純化。在一些實(shí)施方案中，例如細(xì)胞培養(yǎng)基可以被濃縮，然后使用而不進(jìn)行蛋白從細(xì)胞培養(yǎng)基組分的進(jìn)一步純化，或被使用而不進(jìn)行任何其它修飾。P-葡糖苷酶是從微生物得到時(shí)，可以使用本領(lǐng)域中眾所周知的回收方法來(lái)回收酶。例如，從細(xì)胞培養(yǎng)基中通過(guò)常規(guī)方法回收酶，所述方法包括并不限于離心、過(guò)濾、提取、噴霧干燥、蒸發(fā)或沉淀。在一些實(shí)施方案中，可以使用純化的P-葡糖苷酶。此處使用的術(shù)語(yǔ)"純化的P-葡糖苷酶"表示這樣的P-葡糖苷酶，其不含有從其中獲取所述P-葡糖苷酶的生物的其他組分。P-葡糖苷酶可被純化，其中只存在少量其他蛋白質(zhì)。此處使用的術(shù)語(yǔ)"純化"也表示其他組分的去除，特別是存在于P-葡糖苷酶來(lái)源細(xì)胞的其他酶。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶可以是"基本純的"，也就是說(shuō)，不含有來(lái)自生產(chǎn)該酶的微生物的其他組分。P-葡糖苷酶可通過(guò)許多本領(lǐng)域已知方法進(jìn)行純化，這些方法包括并不限于層析法(例如離子交換、親和、疏水、層析聚焦和大小排阻)、電泳方法(如制備性等電聚焦)、區(qū)分溶解度(如硫酸銨沉淀)或提取。在一些實(shí)施方案中，|3_葡糖苷酶至少是25%純，優(yōu)選至少50%純，更優(yōu)選至少75%純，甚至更優(yōu)選至少90%純，最優(yōu)選至少95%純，甚至最優(yōu)選至少99%純，其如SDS-PAGE所測(cè)定的。P-葡糖苷酶也可以從商業(yè)來(lái)源得到。適合在本發(fā)明中使用的商用P-葡糖苷酶制品的例子，包括如N0V0ZYMTM188(來(lái)自黑曲霉的P_葡糖苷酶)、土壤桿菌屬物種(Agrobacteriumsp)和Thermatogamaritime,其可從Megazyme(MegazymeInternationalIrelandLtd.，BrayBusinessPark，Bray，Co.Wicklow，愛(ài)爾蘭)獲得。13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶通常包含13-葡糖苷酶和全纖維素酶制品。然而，應(yīng)當(dāng)理解P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物可通過(guò)重組方法生產(chǎn)。例如，在有能力產(chǎn)生全纖維素酶的微生物中表達(dá)P-葡糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，|3_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶。還提供了包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物，該組合物中含有超過(guò)10%的e-葡糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中將纖維素物質(zhì)水解為可溶性糖所需的全纖維素酶制品的量通過(guò)P-葡糖苷酶被減少。P-葡糖苷酶通常以與全纖維素酶制品的量有關(guān)的量存在于組合物中。在一些實(shí)施方案中，組合物包含全纖維素酶制品和e-葡糖苷酶，其中按重量重量比例(如蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)比例)，以與全纖維素酶制品的量有關(guān)的量存在e-葡糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中P-葡糖苷酶的量相對(duì)于總蛋白質(zhì)范圍在大于10%到90%之間，例如，相對(duì)于總蛋白質(zhì)樣在11%到90%、15%到85%、20%到80%、25%到75%、30%到70%、35%到65%、40%到60%、45%到55%和50%。在一些實(shí)施方案中，組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中例如，P-葡糖苷酶的量相對(duì)于總蛋白質(zhì)占大于10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%或更多。如上所述，在一些實(shí)施方案中，組合物通常包含P-葡糖苷酶和全纖維素酶制品。如此處所用的短語(yǔ)"全纖維素酶制品"是指天然存在和非天然存在的含有纖維素酶的組合物。"天然存在"的組合物是通過(guò)天然存在的來(lái)源生產(chǎn)的組合物，該組合物含有一種或多種纖維二糖水解酶類(lèi)型、一種或多種內(nèi)切葡聚糖酶類(lèi)型和一種或多種P-葡糖苷酶組分，其中這些組分的每一種都以來(lái)源生產(chǎn)的比例得到。天然存在的組合物是這樣一種組合物，其產(chǎn)生于纖維素分解酶方面未經(jīng)修飾的生物，從而組分酶的比例并未從天然生物產(chǎn)生的比例發(fā)生改變。"非天然存在"的組合物包含那些組合物，其產(chǎn)生是通過(guò)(1)以天然存在的比例或非天然存在(也就是改變了的)比例來(lái)組合組分纖維素分解酶，或(2)修飾生物以過(guò)量表達(dá)或不足表達(dá)一種或多種纖維素分解酶，或(3)修飾生物以致至少一種纖維素分解酶被缺失。相應(yīng)地，在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品可缺失多種EG和/或CBH中的一種或多種、和/或P_葡糖苷酶。例如，EG1可單獨(dú)缺失或與其他EG和/或CBH組合被缺失?！銇?lái)說(shuō)，全纖維素酶制品包括酶，該酶包括并不限于(i)內(nèi)切葡聚糖酶(EG)或1，4-P-d-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(EC3.2.1.4)，(ii)外切葡聚糖酶，其包括l，4-13-d-葡聚糖葡聚糖水解酶(又已知為纖維糊精酶(cellodextrinases))(EC3.2.1.74)和1，4-|3-d-葡聚糖纖維二糖水解酶(外切纖維二糖水解酶，CBH)(EC3.2.1.91)和(iii)P_葡糖苷酶(BG)或13-葡萄糖苷葡糖水解酶(EC3.2.1.21)。在本公開(kāi)內(nèi)容中，全纖維素酶制品可來(lái)自任何可用于纖維素物質(zhì)水解的微生物。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品是絲狀真菌全纖維素酶。"絲狀真菌"包括亞門(mén)真菌和藻屬的所有絲狀形式。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品是支頂孢屬、曲霉屬、裸孢殼屬(Emericella)、鐮孢屬、腐質(zhì)霉屬、毛霉菌屬、毀絲霉屬、脈孢菌屬、青霉屬、柱霉屬(Scytalidium)、梭孢殼屬、彎頸霉屬或木霉屬物種的全纖維素酶。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品是棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillusawamori)、臭曲霉(Aspergillusfoetidus)、日本曲霉(Aspergillusjaponicus)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉或米曲霉的全纖維素酶。在另一方面，全纖維素酶制品是桿包狀鐮包(Fusariumbactridioides)、Fusariumcerealis、Fusariumcrookwellense、大刀嫌抱(Fusariumculmorum)、禾本禾斗嫌抱(Fusariumgraminearum)、禾赤嫌抱(Fusariumgrami皿m)、異抱嫌抱(Fusariumheterosporum)、Fusariumneg皿di、尖嫌抱(Fusariumoxysporum)、多枝嫌抱(Fusariumreticulatum)、粉紅嫌抱(Fusariumroseum)、接骨木嫌抱(Fusariumsambuci皿m)、膚色嫌抱(Fusariumsarcochroum)、擬分枝抱嫌抱(Fusariumsporotrichioides)、硫色嫌刀菌(Fusariumdulphureum)、Fusariumtorulosum、Fusariumtrichothecioides或Fusariumvenenatum的全纖維素酶。在另一方面，全纖維素酶制品是特異腐質(zhì)酶(Humicolainsolens)、Humicolala皿ginosa、米黑毛霉(Mucormiehei)、Myceliophthorathermophila、粗糖脈包菌(Neurosporacrassa)、產(chǎn)紫青霉(Penicilliumpurpuroge皿m)、繩狀青霉(PeniciIliumf皿iculosum)、Scytalidiumthermophilum或太瑞斯梭抱殼(Thielaviaterrestris)的全纖維素酶。在另一方面，全纖維素酶制品是Trichodermaharzia皿m、康寧木霉(Trichodermakoningii)、Trichoderma1ongibrachiatum、里氏木霉(Trichodermareesei)，如RL—P37(Sheir—Neiss等人，A卯l.Microbiol.Biotechnology,20(1984)第46-53頁(yè)；MontenecourtB.S.，Can.，1-20，1987)、QM9414(ATCCNo.26921)、NRRL15709、ATCC13631、56764、56466、56767或綠色木霉如ATCC32098和32086的全纖維素酶。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品是里氏木霉RutC30的全纖維素酶，其可從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)如里氏木霉ATCC56765中得到。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶是繩狀青霉，其可從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心如繩狀青霉ATCC號(hào)10446得到。全纖維素酶制品也可從商業(yè)來(lái)源得到。適合用于本發(fā)明的商用纖維素酶制品的例子，包括例如CELLUCLAST(可從NovozymesA/S得到)以及LAMINEX、IndiAge和Primafast(可從GenencorDivision,DaniscoUS.Inc得到)。在本公開(kāi)內(nèi)容中，全纖維素酶制品可來(lái)自本領(lǐng)域已知的任意微生物培養(yǎng)方法，導(dǎo)11致能夠水解纖維素物質(zhì)的酶的表達(dá)。發(fā)酵可包括在實(shí)驗(yàn)室或工業(yè)發(fā)酵罐中的搖瓶培養(yǎng)、小或大規(guī)模發(fā)酵，如連續(xù)、分批、補(bǔ)料分批或固態(tài)發(fā)酵，其在允許纖維素酶表達(dá)或分離的條件下、于合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行。通常，微生物在細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基適合用于產(chǎn)生能夠水解纖維素物質(zhì)的酶。培養(yǎng)運(yùn)用本領(lǐng)域已知方法，在含有碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽的合適的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中發(fā)生。本領(lǐng)域已知適合生長(zhǎng)和纖維素酶生產(chǎn)的合適的培養(yǎng)基、溫度范圍和其他條件。作為非限制性的例子，通過(guò)里氏木霉生產(chǎn)纖維素酶的正常溫度范圍是24t:到28t:。通常，全纖維素酶制品以發(fā)酵生產(chǎn)的樣子使用，不進(jìn)行或極少進(jìn)行回收和/或純化。例如，一旦纖維素酶由細(xì)胞分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中，就可以使用含有纖維素酶的細(xì)胞培養(yǎng)基。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品含有發(fā)酵物質(zhì)的未分級(jí)分離的成分，包括細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞外酶和細(xì)胞?？蛇x地，全纖維素酶制品可用任何方便的方法加工，如，通過(guò)沉淀、離心、親和、過(guò)濾或本領(lǐng)域已知的任何其他方法。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品例如可以被濃縮，然后不經(jīng)進(jìn)一步純化而被使用。在一些實(shí)施方案中，全纖維素酶制品含有降低細(xì)胞活力或殺死細(xì)胞的化學(xué)劑。在一些實(shí)施方案中，使用本領(lǐng)域已知方法裂解或透化處理細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含全纖維素酶制品和|3-葡糖苷酶，其中全纖維素酶的量相對(duì)于總蛋白質(zhì)范圍在少于90%到10%，例如，相對(duì)于總蛋白質(zhì)89%到10%、85%到15%、80%到20%、75%到25%、65%到30%、60%到35%、65%到40%、60%到45%、55%到50%。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含全纖維素酶制品和|3-葡糖苷酶，其中全纖維素酶制品相對(duì)于總蛋白質(zhì)的濃度例如小于90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、70%、69%、68%、67%、66%、65%、64%、63%、62%、61%、60%、59%、58%、57%、56%、55%、54%、53%、52%、51%、50%、49%、48%、47%、46%、45%、44%、43%、42%、41%、40%、39%、38%、37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%。在一些實(shí)施方案中，13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中P-葡糖苷酶的量在總蛋白質(zhì)的10%到90%范圍內(nèi)，并且全纖維素酶包含總蛋白質(zhì)的少于90%到10%，例如，P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的11%而全纖維素酶占89%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的12%而全纖維素酶占88%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的13%而全纖維素酶占87%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的14%而全纖維素酶占86%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的15%而全纖維素酶占85%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的16%而全纖維素酶占84%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的17%而全纖維素酶占83%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的18%而全纖維素酶占82%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的19%而全纖維素酶占81%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的20%而全纖維素酶占80%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的21%而全纖維素酶占79%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的22%而全纖維素酶占78%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的23%而全纖維素酶占77%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的24%而全纖維素酶占76%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的25%而全纖維素酶占75%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的1226%而全纖維素酶占74%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的27%而全纖維素酶占73%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的28%而全纖維素酶占72%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的29%而全纖維素酶占71%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的30%而全纖維素酶占70%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的31%而全纖維素酶占69%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的32%而全纖維素酶占68%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的33%而全纖維素酶占67%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的34%而全纖維素酶占66%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的35%而全纖維素酶占65%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的36%而全纖維素酶占64%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的37%而全纖維素酶占63%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的38%而全纖維素酶占62%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的39%而全纖維素酶占61%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的40%而全纖維素酶占60%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的41%而全纖維素酶占59%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的42%而全纖維素酶占58%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的43%而全纖維素酶占57%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的44%而全纖維素酶占56%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的45%而全纖維素酶占55%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的46%而全纖維素酶占54%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的47%而全纖維素酶占53%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的48%而全纖維素酶占52%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的49%而全纖維素酶占51%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的50%而全纖維素酶占50%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的51%而全纖維素酶占49%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的52%而全纖維素酶占48%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的53%而全纖維素酶占47%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的54%而全纖維素酶占46%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的55%而全纖維素酶占45%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的56%而全纖維素酶占44%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的57%而全纖維素酶占43%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的58%而全纖維素酶占42%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的59%而全纖維素酶占41%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的60%而全纖維素酶占40%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的61%而全纖維素酶占39%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的62%而全纖維素酶占38%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的63%而全纖維素酶占37%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的64%而全纖維素酶占36%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的65%而全纖維素酶占35%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的66%而全纖維素酶占34%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的67%而全纖維素酶占33%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的68%而全纖維素酶占32%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的69%而全纖維素酶占31%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的70%而全纖維素酶占20%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的71%而全纖維素酶占29%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的72%而全纖維素酶占28%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的73%而全纖維素酶占27%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的74%而全纖維素酶占26%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的75%而全纖維素酶占25%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的76%而全纖維素酶占24%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的77%而全纖維素酶占23%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的78%而全纖維素酶占22%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的79%而全纖維素酶占21%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的80%而全纖維素酶占20%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的81%而全纖維素酶占19%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的82%而全纖維素酶占18%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的83%而全纖維素酶占17%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的84%而全纖維素酶占16%、P_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的85%而全纖維素酶占15%、13-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的86%而全纖維素酶占14%、|3_葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的87%而全纖維素酶占13%、P-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的88%而全纖維素酶占12%、|3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的89%而全纖維素酶占11%、！3-葡糖苷酶占總蛋白質(zhì)的90%而全纖維素酶占10%。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含全纖維素酶制品和e-葡糖苷酶，其中重量重量比例上e-葡糖苷酶的量大致等于全纖維素酶制品的量。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中重量重量比例上|3-葡糖苷酶的量大致是全纖維素酶制品量的50%。如上所述，|3_葡糖苷酶通常以與全纖維素酶制品的量有關(guān)的量存在于組合物中。在一些實(shí)施方案中，組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中P-葡糖苷酶存在的量在酶的活性基礎(chǔ)上與全纖維素酶制品的量相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物特征在于P-葡糖苷酶活性與全纖維素酶制品活性之間的關(guān)系。在一些實(shí)施方案中，組合物包含全纖維素酶制品和P-葡糖苷酶，其中P-葡糖苷酶的活性和全纖維素酶制品的活性按照酶活性的比例提供。上面提到的酶的活性比例與13-葡糖苷酶和全纖維素酶制品各自的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定條件有關(guān)。13-葡糖苷酶的活性和全纖維素酶制品的活性可用本領(lǐng)域已知方法測(cè)定。在這一背景下，可使用以下條件。P-葡糖苷酶的活性可用本領(lǐng)域已知的任何方法測(cè)定，如Chen，H.、Hayn，M.禾口Esterbauer，H〃，Purificationandcharacterizationoftwoextracellularb-glucosidasesfromTrichodermareesei〃，BiochimicaetBiophysicaActa,1992，1121,54-60所述的測(cè)定方法。lpNPG表示，50。C(122°F)和pH4.8下，1ymol硝基酚在10分鐘內(nèi)從對(duì)位-硝基苯基-B-D-吡喃葡萄糖苷中釋放出來(lái)。全纖維素酶制品的纖維素酶活性可用羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose,CMC)作為底物來(lái)測(cè)定。全纖維素酶活性的測(cè)定，在CMC活性方面來(lái)測(cè)量。這個(gè)方法測(cè)量由作用于CMC的酶混合物所產(chǎn)生的還原端的產(chǎn)生，其中1個(gè)單位是釋放1ymol產(chǎn)物/分鐘的酶量(Ghose，T.K，MeasurementofCellulseActivities,Pure&Appl.Chem.59，第257-268頁(yè)，1987)。通常，|3-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含了范圍在約0.5到25pNPG/CMC單位的酶活性比例。在一些實(shí)施方案中，酶活性比例是從大約1到20pNPG/CMC單位，或從大約1.5到15pNPG/CMC單位，或從大約2到10pNPG/CMC單位，或從大約2.5到8pNPG/CMC單位，從大約3到7pNPG/CMC單位，或從大約3.5到6.5pNPG/CMC單位，或從大約4到6pNPG/CMC單位，或從大約4.5到5.5pNPG/CMC單位，或從大約5到6pNPG/CMC。特別適合的是，例如大約5.5pNPG/CMC單位的比例。6.2方法除了以上所述的|3_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物，也提供了此處所述組合物的使用方法。在一般方面，本教導(dǎo)涉及水解纖維素物質(zhì)。這些方法通常包括將纖維素物質(zhì)與13_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶接觸，并在足以影響纖維素物質(zhì)水解并從而生成產(chǎn)物的條件下，將纖維素物質(zhì)和P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶維持在一起。在一些實(shí)施方案中，提供了將纖維素轉(zhuǎn)化為葡萄糖的方法。通常，與單獨(dú)的全纖維素酶制品相比，13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物有大約相等或更好的特異性性能。此處所述方法通常比單獨(dú)使用全纖維素酶的同等方法更加成本有效。在特定實(shí)施方案中，與其他單獨(dú)使用全纖維素酶的同等方法相比，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶和此處所述方法需要較少的全纖維素酶蛋白質(zhì)來(lái)水解纖維素物質(zhì)。例如使用糖化作用測(cè)定，與單獨(dú)使用全纖維素酶的同等方法相比，主題方法將水解纖維素物質(zhì)所需的全纖維素酶的量減少了大約一半。在特定實(shí)施方案中，與其他單獨(dú)使用全纖維素酶的同等方法相比，P_葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶和此處所述方法需要更少的全纖維素酶活性來(lái)水解纖維素物質(zhì)。例如使用糖化作用測(cè)定，與單獨(dú)使用全纖維素酶的同等方法相比，主題方法將水解纖維素物質(zhì)所需的全纖維素酶活性減少了大約一半。此處提供了減少水解纖維素物質(zhì)所需的全纖維素酶制品量的方法，該方法通過(guò)添加有效量的P-葡糖苷酶，則水解所述纖維素物質(zhì)所需的所述全纖維素酶制品量減少。在一些實(shí)施方案中，與單獨(dú)的所述全纖維素酶制品相比，13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶有大約相等或更好的特異性性能。通常，在重量重量比例上e-葡糖苷酶的量大于全纖維素酶量的10%。在一些實(shí)施方案中，e-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值大于0.61pNPG/CMC單位。本領(lǐng)域已知檢測(cè)水解纖維素物質(zhì)所需全纖維素酶的減少的方法，例如糖化作用測(cè)定。在一些實(shí)施方案中，提供了減少水解纖維素物質(zhì)所需的全纖維素酶制品量的方法，該方法是通過(guò)添加有效量的P-葡糖苷酶，其中，P-葡糖苷酶減少了在5(TC下大于48小時(shí)之內(nèi)水解超過(guò)30%纖維素物質(zhì)所需的全纖維素酶的量。還提供了水解纖維素物質(zhì)的方法，該方法包括將纖維素物質(zhì)與有效量的13_葡糖苷酶和全纖維素酶組合物接觸，其中P-葡糖苷酶的量減少了水解纖維素物質(zhì)所需的全纖維素酶組合物的量。在一些實(shí)施方案中，在重量重量比例上e-葡糖苷酶的量大于全纖維素酶量的io%。在一些實(shí)施方案中，在重量重量比例上其中的e-葡糖苷酶的量小于全纖維素酶量的80%。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值大于0.61pNPG/CMC單位。13-葡糖苷酶通常在量上與全纖維素酶制品的量相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，13_葡糖苷酶以在重量重量比例(如蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)比例)上與全纖維素酶制品的量相關(guān)的量存在。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶的量相對(duì)于總蛋白質(zhì)范圍在大于10%到90%，例如，相對(duì)于總蛋白質(zhì)樣為11%到90%、15%到85%、20%到80%、25%到75%、30%到70%、35%到65%、40%到60%、45%到55%和50%。在一些實(shí)施方案中，P-葡糖苷酶的量相對(duì)于總蛋白質(zhì)大于例如10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%或更多。在一些實(shí)施方案中，方法中P-葡糖苷酶的量，以P-葡糖苷酶活性和全纖維素酶制品活性間關(guān)系的方式提供。在一些實(shí)施方案中，方法中P-葡糖苷酶活性的量，按照與全纖維素酶制品酶活性相關(guān)的酶活性來(lái)提供。一般來(lái)說(shuō)，P-葡糖苷酶與全纖維素酶制品的酶活性之比是在約0.5到25pNPG/CMC單位的范圍中。在一些實(shí)施方案中，酶活性之比是從大約1到20pNPG/CMC單位，或從約1.5到15pNPG/CMC單位，或從大約2到10pNPG/CMC單位，或從大約2.5到8pNPG/CMC單位，從大約3到7pNPG/CMC單位，或從大約3.5到6.5pNPG/CMC單位，或從大約4到6pNPG/CMC單位，或從大約4.5到5.5pNPG/CMC單位，或從大約5到156pNPG/CMC。特別合適的是例如大約5.5pNPG/CMC單位的比例。此處所述的組合物可以以下有效量添加從固體的大約O.001到10.0%wt.，更優(yōu)選從固體的大約0.025%到4.0%wt.，以及最優(yōu)選從固體的約0.005%到5.0%wt.。在本公開(kāi)內(nèi)容的方法中，纖維素物質(zhì)可以是任何含有纖維素的材料。纖維素物質(zhì)可以包括但不限于纖維素和半纖維素。在一些實(shí)施方案中，纖維素物質(zhì)包括但不限于生物質(zhì)、草質(zhì)材料、農(nóng)業(yè)殘?jiān)?、林業(yè)殘?jiān)?、城市固體廢物、廢紙、以及紙漿和紙的殘?jiān)?。在一些?shí)施方案中，纖維素物質(zhì)包括木材、木漿、造紙污泥、紙漿廢流、刨花板、玉米稈、玉米纖維、米(rice)、紙和紙漿加工廢棄物、木本或草本植物、果漿(fruitpulp)、蔬菜槳(vegetablepulp)、浮石、酒粕(distillersgrain)、草、稻殼、甘蔗渣、棉、黃麻、大麻、亞麻、竹、劍麻、蕉麻、稿稈、玉米芯、酒粕、葉、麥秸稈、椰毛、藻類(lèi)、柳枝稷，和它們的混合物。纖維素物質(zhì)可依原樣使用或可用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法進(jìn)行預(yù)處理。這樣的預(yù)處理包括化學(xué)、物理和生物的預(yù)處理。例如，物理預(yù)處理技術(shù)可無(wú)限制包括研磨、破碎、蒸煮/蒸汽爆破、輻照和熱水流裂解(hydrothermolysis)的多種類(lèi)型?；瘜W(xué)預(yù)處理技術(shù)可無(wú)限制包括稀酸、堿、有機(jī)溶劑、氨、二氧化硫、二氧化碳以及pH控制的熱水流裂解。生物預(yù)處理技術(shù)可無(wú)限制包括應(yīng)用溶解木質(zhì)素的微生物。本公開(kāi)內(nèi)容的方法可用于單糖、二糖和多糖的生產(chǎn)，這些糖類(lèi)作為微生物的化學(xué)或發(fā)酵原料，用于產(chǎn)生有機(jī)產(chǎn)品、化學(xué)品和燃料、塑料及其他產(chǎn)物或中間體。特別是，加工殘?jiān)?干燥的酒粕、來(lái)自釀造的酒糟(spentgrain)、甘蔗渣等)的價(jià)值可通過(guò)纖維素或半纖維素的部分或完全溶解而增加。除了乙醇，從纖維素和半纖維素還可生產(chǎn)的一些化學(xué)品包括丙酮、醋酸鹽、甘氨酸、賴氨酸、有機(jī)酸(如乳酸)、l，3-丙二醇、丁二醇、甘油、乙二醇、糖醛、聚羥基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoate)、cis、順-黏康酸、動(dòng)物飼料和木糖。本教導(dǎo)的各方面可根據(jù)下述的例子中得到進(jìn)一步的理解，這些例子不應(yīng)解釋為限制本教導(dǎo)的范圍。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，很明顯的是，可以對(duì)本材料和方法進(jìn)行許多改變而不背離本教導(dǎo)。7.實(shí)施例實(shí)施例7.1糖化作用測(cè)定的材料和方法用于該測(cè)定的全纖維素酶和P-葡糖苷酶如下里氏木霉全纖維素酶，其作為L(zhǎng)AMINEXBG從美國(guó)Genencor可獲得；里氏木霉RUT-C30全纖維素酶(ATCCNo.56765);里氏木霉BGL1(CEL3A)(見(jiàn)美國(guó)專利No.6，022，725);里氏木霉BGL3(CEL3B)(見(jiàn)美國(guó)專利No.6，982，159)和里氏木霉BGL7(CEL3E)(見(jiàn)USPN20040102619)。所有酶在pH5的50mM醋酸鈉中稀釋到期望濃度。除微晶纖維素(Avicel)夕卜，測(cè)定中所有底物都在使用前得到期望百分比的固體。PCS和甘蔗渣混合，以容許向微量滴定板精確移液。使用的底物材料預(yù)處理的玉米稈PCS和甘蔗渣由美國(guó)能源部國(guó)家可再生能源實(shí)驗(yàn)室(U.S.D印artmentofEnergyNationalRenewableEnergyLaboratory,NREL)以稀硫酸進(jìn)行預(yù)處理，洗滌并調(diào)至pH5。酸預(yù)處理玉米桿(PCS)是56%纖維素、4%半纖維素和29%木質(zhì)素。酸預(yù)處理蔗渣(APB)是53%纖維素，3%半纖維素和31%木質(zhì)素。微晶纖維素(純的結(jié)晶纖維素)加入平板中，然后在pH5下用50慮醋酸鈉稀釋至大約7%(7mgs/ml)。PASC(磷酸溶脹纖維素，純的，無(wú)定形纖維素)，在pH5下在50mM醋酸鈉中稀釋至0.5%PASC。酶的用量基于總蛋白質(zhì)，總蛋白質(zhì)用BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒(PierceCat.No.23225)或縮二脲法測(cè)量?？偯赣眉虞d(loading)是20mg蛋白質(zhì)/克纖維素。隨后應(yīng)用了全纖維素酶制品對(duì)P-葡糖苷酶的幾個(gè)比例，如50:50的比例是10mg/g全纖維素酶制品和10mg/gP-葡糖苷酶。每孔150微升底物用重復(fù)性移液器(r印eaterpipette)加載到平底的96孔微量滴定板中。20微升適當(dāng)稀釋的酶溶液加在頂部。PASC情況下，酶先加入板中。用鋁板密封器蓋上板，置于37或5(TC的培養(yǎng)箱中(伴隨搖動(dòng))，進(jìn)行時(shí)間在表格l中說(shuō)明。通過(guò)向每個(gè)孔添加100iUpH10的lOOmM甘氨酸來(lái)終止反應(yīng)。伴隨徹底混合，令其內(nèi)容物通過(guò)Millipore96孔過(guò)濾板(0.45ym，PES)進(jìn)行過(guò)濾。將濾液稀釋到含有100y1pH10的10mM甘氨酸的板中，產(chǎn)生的可溶性糖的量用HPLC測(cè)量。所有Agilent1100系列的HPLC都配備著脫灰/保護(hù)柱(Biorad#125-0118)和基于Aminexlead的碳水化合物(carbohydrate)柱(AminexHPX-87P)。移動(dòng)相是水，流速0.6ml/min。對(duì)于搖瓶實(shí)驗(yàn)，將稀酸預(yù)處理的玉米稈加至500ml搖瓶中，從而初始水解將含有7%纖維素。用400微升四環(huán)素和300微升環(huán)己酰胺阻止微生物生長(zhǎng)。最終水解物工作體積用緩沖液(PH4.8的0.1M檸檬酸鈉)加至100ml。最后，以20mg蛋白質(zhì)/克纖維素的恒定總蛋白質(zhì)加載來(lái)添加酶，隨后緊密地蓋上每個(gè)搖瓶，將其置入搖床/培養(yǎng)箱。每一次酶加載均在37和5(TC下運(yùn)行，一式兩份，在200rpm下運(yùn)行72小時(shí)。產(chǎn)生的可溶性糖如上所述用HPLC進(jìn)行測(cè)量。實(shí)施例7.2在PASC底物上的全纖維素酶和P_葡糖苷酶1的糖化作用測(cè)定在1%PASC上實(shí)施微量滴定板糖化作用測(cè)定，其中使用含有和不含BGL1的里氏木霉全纖維素酶制品。圖l顯示了使用里氏木霉全纖維素酶LAMINEXBG和BGL1在1%PASC上的微量滴定板糖化作用測(cè)定。圖l(a)顯示了針對(duì)含有和不含BGL1的全纖維素酶的給定劑量作圖的總％轉(zhuǎn)化率(conversion)，圖l(b)顯示了相同總蛋白質(zhì)加載下，全纖維素酶單獨(dú)和全纖維素酶連同BGL1所產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖相對(duì)量。圖1(a)顯示出，將10mg/gBGL1添加到10mg/g全纖維素酶中，與20mg/g全纖維素酶相比，將同樣或更多的纖維素轉(zhuǎn)化為可溶性糖。也就是說(shuō)，約一半的全纖維素酶可用P-葡糖苷酶代替，得到與單獨(dú)的全纖維素酶相比，具有同等或更好的特異性性能的酶混合物。此外，以等量蛋白質(zhì)加載時(shí)，全纖維素酶P-葡糖苷酶混合物的產(chǎn)物具有比單獨(dú)的全纖維素酶的產(chǎn)物更高的葡萄糖/纖維二糖比例。以BGL1替換約一半的全纖維素酶制品并不影響總糖化率。使用本領(lǐng)域已知方法，將CBH2啟動(dòng)子下具有乙酰胺酶(amdS)選擇性的編碼里氏木霉BGL1的多核苷酸，用電穿孔轉(zhuǎn)化里氏木霉全纖維素酶的生產(chǎn)菌株。穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子生長(zhǎng)一周，以SDS-PAGE評(píng)估所述轉(zhuǎn)化子的BGL1的表達(dá)水平。相對(duì)于總纖維素酶蛋白質(zhì)顯示高BGL1表達(dá)(總蛋白質(zhì)的約50%)的那些轉(zhuǎn)化子被測(cè)試了對(duì)磷酸溶脹纖維素的活性。結(jié)果顯示，與不曾轉(zhuǎn)化來(lái)過(guò)量表達(dá)BGL1的里氏木霉全纖維素酶相比，一些表達(dá)BGL1的轉(zhuǎn)化子有同等或更高的特異性性能。實(shí)施例7.3全纖維素酶和13_葡糖苷酶1在微晶纖維素、預(yù)處理玉米稈(PCS)和甘蔗渣上的糖化作用測(cè)定圖1所述添加BGL1所發(fā)現(xiàn)的效應(yīng)，并不是PASC底物(其為純的無(wú)定形纖維素)獨(dú)有的。用其他纖維素物質(zhì)(微晶纖維素(Avicel)、稀酸預(yù)處理的玉米稈(PCS)和稀酸預(yù)處理的甘蔗渣)也觀察到相似的效應(yīng)。圖2顯示了如PASC上所述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所述實(shí)驗(yàn)在7%纖維素固體的微晶纖維素上實(shí)施。圖2顯示了使用里氏木霉全纖維素酶LAMINEXBG和BGL1在7X微晶纖維素上的微量滴定板糖化作用測(cè)定。圖2(a)顯示了針對(duì)含有和不含BGL1的全纖維素酶的給定劑量作圖的總％轉(zhuǎn)化率。圖2(b)顯示了相同總蛋白質(zhì)加載下全纖維素酶單獨(dú)和全纖維素酶連同BGL1產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖相對(duì)量。類(lèi)似于PASC，用BGL1替換約一半的全纖維素酶制品并不改變總X轉(zhuǎn)化率。附加的P-葡糖苷酶增加了纖維二糖對(duì)葡萄糖的比值，但該效應(yīng)并不像用PASC那樣明顯，因?yàn)樵谖⒕Юw維素上全纖維素酶單獨(dú)產(chǎn)生高得多的葡萄糖對(duì)纖維二糖的比值。PCS和蔗渣的結(jié)果，在總轉(zhuǎn)化率和葡萄糖對(duì)纖維二糖的比值上都與用微晶纖維素觀察到的類(lèi)似(圖3和圖4)。圖3顯示了用里氏木霉全纖維素酶LAMINEXBG和BGL1在7%纖維素的PCS上的微量滴定板糖化作用測(cè)定(a)針對(duì)含有和不含BGL1的全纖維素酶的給定劑量繪制了總％轉(zhuǎn)化率；(b)相同總蛋白質(zhì)加載下全纖維素酶單獨(dú)和全纖維素酶連同BGL1產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖相對(duì)量。在7%PCS上的全纖維素酶對(duì)BGL1的多種比值也在搖瓶中被測(cè)試。搖瓶數(shù)據(jù)與微量滴定板中觀察到的良好相關(guān)(數(shù)據(jù)未出示)。圖4是顯示用木霉屬全纖維素酶和木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶1在7%甘蔗渣上的微量滴定板糖化作用測(cè)定結(jié)果的圖表，其中顯示了總百分比轉(zhuǎn)化率(A)和所產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量(B)和通過(guò)增加P-葡糖苷酶量的百分比轉(zhuǎn)化率(C)。實(shí)施例7.4.絲狀真菌全纖維素酶和13-葡糖苷酶在預(yù)處理玉米稈上的糖化作用測(cè)定為查明添加13-葡糖苷酶的效應(yīng)是否為所述里氏木霉菌株全纖維素酶所獨(dú)有，將7X纖維素固體的PCS的實(shí)驗(yàn)用RutC30(另一種里氏木霉全纖維素酶)重復(fù)進(jìn)行。圖5顯示用RutC30全纖維素酶和BGL1在7%纖維素的PCS上的微量滴定板糖化作用測(cè)定(a)針對(duì)含有和不含BGL1的RutC30全纖維素酶的給定劑量繪制了總X轉(zhuǎn)化率；(b)相同總蛋白質(zhì)加載下，RutC30全纖維素酶單獨(dú)和Rutc30全纖維素酶連同BGL1所產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖的相對(duì)量。以同等的蛋白質(zhì)，RutC30全纖維素酶水解的纖維素不會(huì)如LaminexBG二者任一那么多(圖3)。當(dāng)約四分之一或一半RutC30全纖維素酶蛋白質(zhì)被BGL1代替時(shí)，％轉(zhuǎn)化率大于等量的RutC30全纖維素酶單獨(dú)(圖5)。在這一情形下，P-葡糖苷酶的添加可用于減少達(dá)到特定轉(zhuǎn)化率所需的酶總劑量。實(shí)施例7.5全纖維素酶和純化的13_葡糖苷酶1在PACS和預(yù)處理玉米稈(PCS)上的糖化作用測(cè)定圖6顯示了用里氏木霉全纖維素酶LAMINEXBG和純化的BGL1于1%PASC上的微量滴定板糖化作用測(cè)定(a)針對(duì)含有和不含BGL1的里氏木霉全纖維素酶和BGL1的給定劑量繪制總％轉(zhuǎn)化率；以及(b)相同總蛋白質(zhì)加載下，里氏木霉全纖維素酶和BGLl所產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖相對(duì)量。圖7顯示了用里氏木霉全纖維素酶LAMINEXBG和純化的BGL1于7%纖維素的PCS上的微量滴定板糖化作用測(cè)定(a)針對(duì)含有和不含BGL1的里氏木霉全纖維素酶的給定劑量繪制總％轉(zhuǎn)化率；和(b)相同總蛋白質(zhì)加載下，里氏木霉全纖維素酶單獨(dú)和里氏木霉全纖維素酶連同BGL1所產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖相對(duì)量。用1%PASC或7%PCS作底物時(shí)(圖6和圖7)，來(lái)自BGLl和全纖維素酶的大約50:50的混合物的％轉(zhuǎn)化率，現(xiàn)在高于等量全纖維素酶單獨(dú)。對(duì)于PCS和PASC上時(shí)，15mg/g里氏木霉全纖維素酶和5mg/gBGLl的混合物也產(chǎn)生了比20mg/g里氏木霉全纖維素酶更高的轉(zhuǎn)化率。和用未純化的BGLl—樣，葡萄糖/纖維二糖的比例隨純化BGLl的添加而增高，在PASC上時(shí)可見(jiàn)到更加顯著的差異。實(shí)施例7.6全纖維素酶和13-葡糖苷酶3或13-葡糖苷酶7在微晶纖維素、預(yù)處理玉米稈(PCS)和甘蔗渣上的糖化作用測(cè)定向上述全纖維素酶添加13-葡糖苷酶的益處并不限于BGLl。也在微量滴定板糖化作用測(cè)定中在PASC和PCS上測(cè)試了和全纖維素酶一起的兩種其他里氏木霉13-葡糖苷酶，BGL3禾卩BGL7。圖8顯示了用里氏木霉全纖維素酶LaminexBG和已純化BGL3于1%PASC上的微量滴定板糖化作用測(cè)定。(a)針對(duì)含有和不含BGL3的里氏木霉全纖維素酶的給定劑量繪制了總％轉(zhuǎn)化率。(b)相同總蛋白質(zhì)加載下里氏木霉全纖維素酶單獨(dú)和里氏木霉全纖維素酶連同BGL3所產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖相對(duì)量。向全纖維素酶添加等部分的純化的BGL3對(duì)于PASC具有與用BGLl所觀察到的相似但稍微不明顯的效應(yīng)(圖6a)。盡管改善超過(guò)了10mg/g全纖維素酶單獨(dú)，但是10mg/g里氏木霉全纖維素酶和10mg/gBGL3的混合物并不像BGLl的情況中所觀察到的那樣產(chǎn)生與20mg/g里氏木霉全纖維素酶相等的轉(zhuǎn)化率(圖6a)。但15mg/g里氏木霉全纖維素酶和5mg/gBGL3的混合確實(shí)產(chǎn)生了優(yōu)于相同總蛋白加載的單獨(dú)的里氏木霉全纖維素酶的性能益處，雖然再一次地，這并不是像用BGLl所見(jiàn)的益處那樣明顯。用BGL3代替約一半的里氏木霉全纖維素酶總蛋白質(zhì)也增加了葡萄糖對(duì)纖維二糖的比值，雖然總糖稍低(圖8b)。對(duì)于7X纖維素的PCS效果類(lèi)似。用BGL3代替約一半總蛋白質(zhì)產(chǎn)生了相似但不是更高的纖維素到可溶性糖的百分比轉(zhuǎn)化率(圖9a);結(jié)果類(lèi)似但與用BGLl所見(jiàn)相比不夠明顯(圖7a)。葡萄糖對(duì)纖維二糖的比值也下降了，但纖維二糖的濃度降低也更少。這并不令人驚奇，因?yàn)镻CS上生產(chǎn)的總纖維二糖低于PASC的。將另一種里氏木霉P-葡糖苷酶BGL7，也以和BGLl和BGL3同樣的方式在1%PASC上測(cè)試。圖11顯示了使用里氏木霉全纖維素酶LaminexBG和純化的BGL7于1%PASC上的微量滴定板糖化作用測(cè)定。針對(duì)含有和不含BGL7的里氏木霉全纖維素酶的給定劑量繪制了總％轉(zhuǎn)化率。雖然從添加大量BGL7上存在一些改善(圖IO)，該改善并不像用BGL1和BGL7中所見(jiàn)那樣明顯(圖6a、7a)。在相等的蛋白質(zhì)基礎(chǔ)上，沒(méi)有下述BGL7和里氏木霉全纖維素酶的混合物，所述混合物產(chǎn)生比全纖維素酶單獨(dú)更高的特異性性能。實(shí)施例7.7全纖維素酶活性和13-葡糖苷酶活性表l顯示木霉屬全纖維素酶(WC)和P-葡糖苷酶l的活性單位比例。將微量滴定板糖化作用測(cè)定中的酶加載從mg總蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為活性單位，這是通過(guò)乘以活性單位/mg蛋白質(zhì)。里氏木霉全纖維素酶14CMCU/mg(見(jiàn)BerlinA.、MaximenkoV.、GilkesN.禾口SaddlerJ.〃Optimizationofenzymecomplexesforlignocellulosehydrolysis"Biotechnol.Bioeng.2007，97(2)，287-296)，而B(niǎo)GLl的活性用pNPG測(cè)定法測(cè)量(77pNPGU/mg)。表1列出了以wt:wt為基礎(chǔ)的木霉屬全纖維素酶對(duì)BGLl的比值，伴有底物中每克纖維素加載的相應(yīng)活性單位。將PNPGU/g值除以CMCU/g值產(chǎn)生了存在于混合物中的pNPG/CMC活性比，所述比獨(dú)立于底物或酶加載。19<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>權(quán)利要求減少水解纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶制品量的方法，該方法通過(guò)添加有效量的β-葡糖苷酶來(lái)形成β-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中水解所述纖維素物質(zhì)所需要的所述全纖維素酶制品的量被減少。2.權(quán)利要求l的方法，其中與所述全纖維素酶制品單獨(dú)相比，P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶有大約相等或更好的特異性性能。3.權(quán)利要求i的方法，其中按重量重量比e-葡糖苷酶的量大于全纖維素酶量的10%。4.權(quán)利要求l的方法，其中P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值大于0.61pNPG/CMC單位。5.權(quán)利要求1的方法，其中按重量重量比e-葡糖苷酶的量少于全纖維素酶制品量的80%。6.權(quán)利要求l的方法，其中P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值小于22pNPG/CMC單位。7.權(quán)利要求1的方法，其中按重量重量比e-葡糖苷酶的量大致等于全纖維素酶的8.權(quán)利要求1的方法，其中13_葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值約為5.5pNPG/CMC單位。9.權(quán)利要求1的方法，其中所述全纖維素酶制品包含一種或多種纖維二糖水解酶和內(nèi)切葡聚糖酶。10.權(quán)利要求l的方法，其中！3-葡糖苷酶降低了水解超過(guò)30%纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶量。11.權(quán)利要求l的方法，其中P-葡糖苷酶降低了在5(TC在大約48小時(shí)內(nèi)水解超過(guò)30%纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶的量。12.權(quán)利要求1的方法，其中全纖維素酶制品是木霉屬全纖維素酶。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述木霉屬全纖維素酶是全肉湯配制物。14.權(quán)利要求l的方法，其中e-葡糖苷酶是木霉屬P-葡糖苷酶。15.權(quán)利要求14的方法，其中木霉屬P_葡糖苷酶選自BGL1、BGL3、BGL4、BGL5、BGL6和BGL7以及其任意組合。16.水解纖維素物質(zhì)的方法，其包括將纖維素物質(zhì)與有效量的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶接觸，所述P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶與全纖維素酶單獨(dú)相比，包含大約相等或更好的特異性性能。17.權(quán)利要求16的方法，其中e-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含按重量重量比相對(duì)于全纖維素酶大于10%的e-葡糖苷酶。18.權(quán)利要求16的方法，其中13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含大于0.61pNPG/CMC單位的P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值。19.權(quán)利要求16的方法，其中e-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含按重量重量比相對(duì)于全纖維素酶少于80%的P-葡糖苷酶。20.權(quán)利要求16的方法，其中13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含大于O.61pNPG/CMC單位的P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值。21.權(quán)利要求16的方法，其中13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含大約小于22pNPG/CMC單位的13-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值。22.權(quán)利要求16的方法，其中e-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含按重量重量比大致等于全纖維素酶的量的P-葡糖苷酶的量。23.權(quán)利要求16的方法，其中13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含約為5.5pNPG/CMC單位的P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值。24.權(quán)利要求16的方法，其中P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含一種或多種纖維二糖水解酶和內(nèi)切葡聚糖酶。25.權(quán)利要求16的方法，其中P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含P-葡糖苷酶的量來(lái)降低水解超過(guò)30%纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶的量。26.權(quán)利要求16的方法，其中P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含P-葡糖苷酶的量來(lái)降低在5(TC大約48小時(shí)內(nèi)水解超過(guò)30%纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶的量。27.權(quán)利要求16的方法，其中e-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含木霉屬全纖維素酶。28.權(quán)利要求16的方法，其中所述木霉屬全纖維素酶是全肉湯配制物。29.權(quán)利要求16的方法，其中P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含木霉屬P-葡糖苷酶。30.權(quán)利要求16的方法，其中P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶包含選自BGL1、BGL3、BGL4、BGL5、BGL6和BGL7的木霉屬P-葡糖苷酶。31.P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其包含大于10%的P-葡糖苷酶。32.P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其包含的P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值大于0.61pNPG/CMC單位。33.e-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其包含按重量重量比大于全纖維素酶量的10%的e-葡糖苷酶的量。34.P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其包含有效量的P-葡糖苷酶，其中所述13-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶具有與全纖維素酶制品相比大約相等或更好的特異性性能。35.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中按重量重量比P-葡糖苷酶的量少于全纖維素酶量的80%。36.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中按重量重量比P-葡糖苷酶的量與全纖維素酶的量大致相等。37.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值大于0.61pNPG/CMC單位。38.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值小于22pNPG/CMC單位。39.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中P-葡糖苷酶活性對(duì)全纖維素酶活性的比值約為5.5pNPG/CMC單位。40.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中所述全纖維素酶制品包含一種或多種纖維二糖水解酶和內(nèi)切葡聚糖酶。41.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中全纖維素酶制品是木霉屬全纖維素酶。42.權(quán)利要求34的e-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中所述木霉屬全纖維素酶是全肉湯配制物。43.權(quán)利要求34的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中e-葡糖苷酶是木霉屬|(zhì)3-葡糖苷酶。44.權(quán)利要求43的P-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶，其中木霉屬P-葡糖苷酶選自BGL1、BGL3、BGL4、BGL5、BGL6和BGL7。全文摘要本發(fā)明提供β-葡糖苷酶增強(qiáng)的絲狀真菌全纖維素酶組合物。還提供了用β-葡糖苷酶增強(qiáng)的全纖維素酶組合物水解纖維素物質(zhì)的方法。本發(fā)明還提供了通過(guò)添加有效量的β-葡糖苷酶來(lái)減少水解纖維素物質(zhì)所需要的全纖維素酶量的方法。文檔編號(hào)C12P19/14GK101796195SQ200880106102公開(kāi)日2010年8月4日申請(qǐng)日期2008年9月4日優(yōu)先權(quán)日2007年9月7日發(fā)明者E·A·拉雷納斯,M·K·福達(dá)拉申請(qǐng)人:丹尼斯科美國(guó)公司