專利名稱：：血漿中動(dòng)力學(xué)被改善的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請要求基于日本專利申請2007-256063號(2007年9月28日申請)的優(yōu)先權(quán)，將其公開的全部內(nèi)容包括附圖及表作為參照引入本說明書。本發(fā)明涉及改善磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的血漿中(血中)動(dòng)力學(xué)的方法，含有血漿中動(dòng)力學(xué)被改善的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成分的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：由于抗體在血漿中的穩(wěn)定性高、副作用少，所以將其作為藥品使用備受矚目。在多種抗體的同種型中，大量IgG同種型的治療用抗體已經(jīng)上市，目前也有多種治療用抗體正處于開發(fā)中(非專利文獻(xiàn)1、非專利文獻(xiàn)2、非專利文獻(xiàn)3)。已知磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體通過對肝癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒性來顯示抗腫瘤效果(專利文獻(xiàn)1)。還已知結(jié)合有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體與細(xì)胞毒性物質(zhì)的藥物結(jié)合抗體對肝癌、卵巢癌、黑素瘤等發(fā)揮抗腫瘤效果(非專利文獻(xiàn)4)。另外，作為第二代治療用抗體的制作技術(shù)，還開發(fā)了增強(qiáng)效應(yīng)子功能等的技術(shù)。例如已知一種通過氨基酸取代來增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)的技術(shù)，所述氨基酸取代是將構(gòu)成IgG同種型抗體(以下稱作IgG抗體)的Fc區(qū)的氨基酸取代為其他不同的氨基酸(非專利文獻(xiàn)5)。由巖藻糖轉(zhuǎn)運(yùn)體缺失的CH0細(xì)胞產(chǎn)生的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體中，巖藻糖不與結(jié)合有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的結(jié)合糖鏈中的支鏈結(jié)合，該磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體與在其結(jié)合糖鏈的支鏈中含有巖藻糖的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體相比，ADCC活性顯著地增大，認(rèn)為作為治療用抗體的抗腫瘤效果高(專利文獻(xiàn)2)。進(jìn)而，除上述增強(qiáng)效應(yīng)子功能等技術(shù)之外，還報(bào)道了通過對構(gòu)成抗體的Fc區(qū)的氨基酸進(jìn)行氨基酸取代來增加或減少抗體的血漿中半衰期的技術(shù)(非專利文獻(xiàn)6、非專利文獻(xiàn)7)。通過將延長抗體的血漿中半衰期的技術(shù)用于治療用抗體，可以期待被給與的治療用抗體的給與量的減少和給與間隔的延長，進(jìn)而可以提供一種低成本、便利性高的治療用抗體。具體而言，可以通過對構(gòu)成IgG抗體的Fc區(qū)的氨基酸進(jìn)行氨基酸取代來延長血漿中半衰期，所述氨基酸取代產(chǎn)生IgG抗體對已知作為IgG抗體的補(bǔ)救受體的新生兒Fc受體(neonatalFcreceptor)的親和性提高的效果。另外，還已知通過對構(gòu)成抗體恒定區(qū)的CH1、CH2、CH3各區(qū)進(jìn)行改組(shuffling)來延長血漿中半衰期的技術(shù)(非專利文獻(xiàn)8)。但是，由于IgG抗體恒定區(qū)的氨基酸序列在人體中保存，所以對構(gòu)成恒定區(qū)的氨基酸進(jìn)行導(dǎo)入的具有上述人工氨基酸取代的抗體可能會(huì)引起在人體內(nèi)顯示出如免疫原性(抗原性)之類的副作用。因此，優(yōu)選僅有少量的氨基酸進(jìn)行了氨基酸取代。作為對構(gòu)成IgG抗體可變區(qū)(也被稱作V區(qū))的氨基酸進(jìn)行氨基酸取代的技術(shù)，報(bào)道了下述技術(shù)，包括人源化技術(shù)(非專利文獻(xiàn)9)，構(gòu)成用于增強(qiáng)結(jié)合活性的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的氨基酸經(jīng)氨基酸取代而引起親和力成熟(affinitymaturation)(非專利文獻(xiàn)10)，構(gòu)成構(gòu)架區(qū)(FR)的氨基酸經(jīng)氨基酸取代而引起物理化學(xué)的穩(wěn)定性提高(非專利文獻(xiàn)11)。即，與構(gòu)成恒定區(qū)(也被稱作C區(qū))的氨基酸的氨基酸取代不同，構(gòu)成可變區(qū)的氨基酸的氨基酸取代是為了增強(qiáng)抗體對抗原的結(jié)合活性等功能和提高穩(wěn)定性等特性而通常采用的方法。由于構(gòu)成人源化抗體CDR的氨基酸序列來自于人以外的動(dòng)物種類的氨基酸序列，所以認(rèn)為通過對該序列中的氨基酸進(jìn)行人工氨基酸取代與其他區(qū)域序列中的氨基酸取代相比，產(chǎn)生免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)低。另外，對于構(gòu)成人源化抗體FR的氨基酸序列進(jìn)行人工氨基酸取代，如果取代的結(jié)果得到的構(gòu)成FR的氨基酸序列與Kabat數(shù)據(jù)庫(http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/kabat/)及IMGT數(shù)據(jù)庫(http://imgt.cines.fr/)等中公開的多種構(gòu)成人抗體FR的氨基酸序列中的任一種相同，則認(rèn)為由該取代產(chǎn)生免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)小。進(jìn)而，從Kabat數(shù)據(jù)庫及IMGT數(shù)據(jù)庫等中公開的多種構(gòu)成人抗體FR的氨基酸序列中再次選擇與取代的結(jié)果得到的構(gòu)成FR的氨基酸序列非常相似的人抗體序列，由此可以降低免疫原性(專利文獻(xiàn)3)。另一方面，僅已知上述提高IgG抗體的血漿中半衰期的方法是利用構(gòu)成作為恒定區(qū)一部分的Fc區(qū)的氨基酸進(jìn)行氨基酸取代的方法，至今為止尚未報(bào)道通過構(gòu)成可變區(qū)的氨基酸的氨基酸取代來提高IgG抗體的血漿中半衰期的方法，認(rèn)為所述可變區(qū)中由上述氨基酸取代引起的免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)小。作為上述理由，可以舉出認(rèn)為IgG抗體的血漿中半衰期在很大程度上依賴于對作為IgG抗體的補(bǔ)救受體的新生兒Fc受體的結(jié)合和抗原依賴性的消失(非專利文獻(xiàn)12)，可變區(qū)的功能和特性不會(huì)對血漿中半衰期產(chǎn)生很大影響。另外，報(bào)道了下述技術(shù)通過將IgG抗體進(jìn)行琥珀?；瘉韺gG抗體進(jìn)行陰離子化，使其等電點(diǎn)(Pi)降低的技術(shù)(非專利文獻(xiàn)13)；或者通過用多胺修飾IgG抗體來對IgG抗體進(jìn)行陽離子化，使其pi升高的技術(shù)(非專利文獻(xiàn)14)，但經(jīng)修飾的IgG抗體的血漿中半衰期均未增大，其血漿中半衰期反而縮短。即，無法實(shí)現(xiàn)利用上述IgG抗體的化學(xué)修飾而改變其Pi來延長IgG抗體的血漿中半衰期。非專利文獻(xiàn)1JaniceM.Reichert,ClarkJ.Rosensweig,LauraB.Faden,andMatthewC.Dewitz,Monoclonalantibodysuccessesintheclinic,NatureBiotechnology(2005)23，1073-8；非專禾lj文獻(xiàn)2:PavlouAK.BelseyMJ.,Thetherapeuticantibodiesmarketto2008,EurJPharmBiopharm.(2005)59(3)，389-96非專利文獻(xiàn)3:JaniceM.ReichertandViiaE.Valge-Archer,Developmenttrendsformonoclonalantibodycancertherapeutics,Nat.Rev.DrugDisc.(2007)6,349-356#專禾ljJC4:AlbinaNesterova,PaulJ.CarterandLeiaM.Smith,GlypicanGlypican_3asaNovelTargetforanAntibody3asaNovelTargetforanAntibody-DrugConjugate,AACRAbstractNo.656(2007),LosAngeles,CAAprill,4-18##iK5:KimSJ.，ParkY.，HongHJ.，Antibodyengineeringforthedevelopmentoftherapeuticantibodies,MolCells(2005)20(1),17-29非專利文獻(xiàn)6:HintonPR.，XiongJM.，JohlfsMG.，TangMT.，KellerS.，TsurushitaN.,AnengineeredhumanIgGlantibodywithlongerserumhalf-life,JImmunol.(2006)176(1),346-567:GhetieV.，PopovS.，BorvakJ.，RaduC.，MatesoiD.，MedesanC.，OberRJ.，WardES.，IncreasingtheserumpersistenceofanIgGfragmentbyrandommutagenesis,Nat.Biotechnol.(1997)15(7)，637-40非專利文獻(xiàn)8:ZuckierLS.，ChangCJ.，ScharffMD.，MorrisonSL.，Chimerichuman-mouseIgGantibodieswithshuffledconstantregionexonsdemonstratethatmultipledomainscontributetoinvivohalf-life，CancerRes.(1998)58(17)，3905-8非專利文獻(xiàn)9:TsurushitaN.，HintonPR.，KumarS.，Designofhumanizedantibodies:fromanti-TactoZenapax，Methods(2005)36(1)，69-83非專利文獻(xiàn)10:RajpalA.，BeyazN.，HaberL，CappuccilliG.，YeeH.，BhattR.R.，TakeuchiT.，LernerRA.，CreaR.，Ageneralmethodforgreatlyimprovingtheaffinityofantibodiesbyusingcombinatoriallibraries，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2005)102(24)，8466-71非專利文獻(xiàn)11:EwertS.，HoneggerA.，PluckthunA.，Stabi1ityimprovementofantibodiesforextracellularandintracellularapplications:CDRgraftingtostableframeworksandstructure-basedframeworkengineering，Methods(2004)34(2)，184-99非專禾丨J文獻(xiàn)12:LoboED.，HansenRJ.，BalthasarJP.，Antibodypharmacokineticsandpharmacodynamics,JPharmSci.(2004)93(11)，2645-68非專禾Ij文獻(xiàn)13:YamasakiY，SumimotoK，NishikawaM，YamashitaF，YamaokaK，HashidaM，TakakuraY.，Pharmacokineticanalysisofinvivodispositionofsuccinylatedproteinstargetedtolivernonparenchymalcellsviascavengerreceptorsimportanceofmolecularsizeandnegativechargedensityforinvivorecognitionbyrece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發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是鑒于上述情況而完成的，本發(fā)明的目的在于提供控制磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的血漿中半衰期的方法，血漿中半衰期被控制的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體及含有其作為有效成分的藥物組合物，以及它們的制備方法。本發(fā)明的進(jìn)一步的目的在于通過控制具有細(xì)胞毒性的抗體的血漿中半衰期來控制該抗體的細(xì)胞毒性的方法，細(xì)胞毒性被控制的抗體及含有其作為有效成分的藥物組合物，以及它們的制備方法。本發(fā)明人等對控制以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期的方法進(jìn)行了深入研究。結(jié)果，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)可以通過改變在構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的可變區(qū)及恒定區(qū)的氨基酸殘基中露出在該抗體分子表面的氨基酸殘基并控制抗體分子的表面電荷，來控制以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期。具體而言，在構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的可變區(qū)及恒定區(qū)的氨基酸殘基中，鑒定特定的氨基酸殘基，所述特定的氨基酸殘基以不影響抗體對抗原的結(jié)合活性等抗體所具有的功能和結(jié)構(gòu)的方式控制抗體分子表面的電荷，從而控制以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期。進(jìn)而，本發(fā)明人等確認(rèn)了如上所述地控制血漿中半衰期的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體實(shí)際上保持對抗原的結(jié)合活性。進(jìn)而，本發(fā)明人等確認(rèn)了通過控制以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期，以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的發(fā)揮細(xì)胞毒性的抗體所具有的對癌細(xì)胞的腫瘤增殖抑制效果增大，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明涉及通過改變露出在以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體表面的氨基酸殘基來控制該抗體的血漿中半衰期的方法，通過改變氨基酸殘基而得到的血漿中半衰期被控制的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體，含有該抗體作為有效成分的藥物組合物，以及上述藥物組合物的制備方法。更具體而言，[1]一種血漿中動(dòng)力學(xué)被控制的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的制備方法，所述制備方法包括下述各階段(a)將保持編碼磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的核酸的宿主細(xì)胞在該核酸表達(dá)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，其中，所述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體具有被改變的氨基酸序列，通過所述氨基酸序列的改變使能露出在抗體表面的至少一個(gè)氨基酸殘基的電荷改變，(b)從該宿主細(xì)胞的培養(yǎng)物中回收磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體；[2]如[1]所述的方法，其中，上述血漿中動(dòng)力學(xué)的控制是指血漿中半衰期、血漿中平均滯留時(shí)間、血漿中清除率中的任一參數(shù)增加或減少；[3]如[1]所述的方法，其中，氨基酸殘基電荷的改變是通過氨基酸取代而進(jìn)行的；[4]如[1]所述的方法，其中，能夠露出在上述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體表面的氨基酸殘基位于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體中的FcRn結(jié)合區(qū)之外的區(qū)域；[5]如[4]所述的方法，其中，上述FcRn結(jié)合區(qū)包含F(xiàn)c區(qū)；[6]如[4]所述的方法，其中，上述FcRn結(jié)合區(qū)包含Kabat編號中的EU序號為250、253、310、311、314、428、435、436的氨基酸殘基；[7]如[1]所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為IgG抗體；[8]如[1][7]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述電荷被改變的氨基酸殘基為重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)中的氨基酸殘基；[9]如[8]所述的方法，其特征在于，上述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含來自人以外的動(dòng)物的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)、來自人的構(gòu)架區(qū)(FR)及人恒定區(qū)的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，氨基酸殘基電荷的改變是從抗體的CDR或FR中的能夠露出在抗體表面的至少一個(gè)氨基酸殘基取代為具有與該氨基酸殘基不同的電荷的氨基酸殘基；如[9]所述的方法，其特征在于，上述氨基酸殘基的電荷的改變?yōu)?1)序列號1表示的重鏈可變區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(a)作為第43號氨基酸殘基的Q取代為K、(b)作為第52號氨基酸殘基的D取代為N、(c)作為第107號氨基酸殘基的Q取代為R、及/或(2)序列號7表示的輕鏈可變區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(d)作為第17號氨基酸殘基的E取代為Q、(e)作為第27號氨基酸殘基的Q取代為R、(f)作為第105號氨基酸殘基的Q取代為R；如[9]所述的方法，其特征在于，上述氨基酸殘基的電荷的改變?yōu)?1)序列號1表示的重鏈可變區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(a)作為第19號氨基酸殘基的K取代為T、(b)作為第43號氨基酸殘基的Q取代為E、(c)作為第62號氨基酸殘基的Q取代為E、(d)作為第63號氨基酸殘基的K取代為S、(e)作為第65號氨基酸殘基的K取代為Q、(f)作為第66號氨基酸殘基的G取代為D、及/或(2)序列號7表示的輕鏈可變區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(g)作為第24號氨基酸殘基的R取代為Q、(h)作為第27號氨基酸殘基的Q取代為E、(i)作為第79號氨基酸殘基的K取代為T、(j)作為第82號氨基酸殘基的R取代為S、(k)作為第112號氨基酸殘基的K取代為E;如[11]所述的方法，其特征在于，還包括以下的改變序列號31表示的重鏈恒定區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(a)作為第151號氨基酸殘基的H取代為Q、(b)作為第157號氨基酸殘基的K取代為Q、(c)作為第238號氨基酸殘基的R取代為Q、(d)作為第239號氨基酸殘基的D取代為E、(e)作為第241號氨基酸殘基的L取代為M、(f)作為第302號氨基酸殘基的Q取代為E；[13]如[9][12]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為與其Fc區(qū)結(jié)合的巖藻糖含量降低的抗體；[14]一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，所述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體是根據(jù)[1][13]中任一項(xiàng)所述的方法制備得到的；[15]一種血漿中動(dòng)力學(xué)被控制的抗體的制備方法，所述制備方法包括下述各階段(a)將保持編碼抗體的核酸的宿主細(xì)胞在該核酸表達(dá)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，其中，該抗體具有被改變的氨基酸序列，通過所述氨基酸序列的改變使位于抗體中的FcRn結(jié)合區(qū)之外的恒定區(qū)的氨基酸殘基的電荷改變，(b)從該宿主細(xì)胞的培養(yǎng)物中回收抗體；[16]如[15]所述的方法，其中，上述血漿中動(dòng)力學(xué)的控制是指血漿中半衰期、血漿中平均滯留時(shí)間、血漿中清除率中任一參數(shù)的增加或減少；[17]如[15]所述的方法，其中，氨基酸殘基的電荷的改變是通過氨基酸取代而進(jìn)行的；[18]如[17]所述的方法，其中，抗體為IgG抗體；[19]如[18]所述的方法，其中，抗體為IgGl；[20]如[17]所述的方法，其特征在于，上述氨基酸殘基的電荷的改變?yōu)閷gGl抗體的一個(gè)或一個(gè)以上的氨基酸殘基取代為與IgG4抗體對應(yīng)的一個(gè)或一個(gè)以上的氨基酸殘基；[21]如[15][20]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述FcRn結(jié)合區(qū)包含Kabat編號中的EU序號為250、253、310、311、314、428、435、436的氨基酸殘基；[22]如[20]所述的方法，其特征在于，上述氨基酸殘基的電荷的改變是指序列號31表示的重鏈恒定區(qū)中的以下任一種或一種以上的取代；(a)作為第151號氨基酸殘基的H取代為Q、(b)作為第157號氨基酸殘基的K取代為Q、(c)作為第238號氨基酸殘基的R取代為Q、(d)作為第239號氨基酸殘基的D取代為E、(e)作為第241號氨基酸殘基的L取代為M、(f)作為第302號氨基酸殘基的Q取代為E；[23]如[15][22]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，抗體為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體；[24]一種包含來自人以外的動(dòng)物的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)、來自人的構(gòu)架區(qū)(FR)及人恒定區(qū)的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的穩(wěn)定化方法，所述穩(wěn)定化方法包括下述各階段(a)將保持編碼磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的核酸的宿主細(xì)胞在該核酸表達(dá)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，其中，該磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體具有被改變的氨基酸序列，所述氨基酸序列的改變是指通過改變至少一個(gè)氨基酸殘基而引起Tm值增大，(b)從該宿主細(xì)胞的培養(yǎng)物中回收抗體；[25]如[24]所述的方法，其特征在于，氨基酸殘基存在于其重鏈或輕鏈的FR1區(qū)及/或FR2區(qū)；[26]如[25]所述的方法，其特征在于，將重鏈FR2區(qū)的氨基酸殘基取代為VH4亞類的FR2區(qū)的氨基酸殘基；[27]如[25]所述的方法，其特征在于，將輕鏈FR2區(qū)的氨基酸殘基取代為VK3亞類的FR2區(qū)的氨基酸殘基；[28]如[24][27]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，上述氨基酸殘基的改變?yōu)?1)對序列號1表示的構(gòu)成重鏈可變區(qū)的氨基酸殘基進(jìn)行以下任一種或一種以上的取代；(a)作為第37號氨基酸殘基的V取代為I、(b)作為第40號氨基酸殘基的A取代為P、(c)作為第48號氨基酸殘基的M取代為I、(d)作為第51號氨基酸殘基的L取代為I、及/或(2)對序列號7表示的構(gòu)成輕鏈可變區(qū)的氨基酸殘基進(jìn)行以下任一種或一種以上的取代；(e)作為第42號氨基酸殘基的L取代為Q、(f)作為第48號氨基酸殘基的S取代為A、(g)作為第50號氨基酸殘基的Q取代為R；[29]一種細(xì)胞毒性被控制的抗體的制備方法，所述制備方法包括下述各階段(a)將保持編碼抗體的核酸的宿主細(xì)胞在該核酸表達(dá)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，其中，該抗體具有被改變的氨基酸序列，通過所述氨基酸序列的改變使能夠露出在具有細(xì)胞毒性的抗體表面的至少一個(gè)氨基酸殘基的電荷發(fā)生改變，(b)從該宿主細(xì)胞的培養(yǎng)物中回收抗體；[30]如[29]所述的方法，其中，氨基酸殘基的電荷的改變是通過氨基酸取代而進(jìn)行的；[31]如[29]所述的方法，其中，能夠露出在上述抗體表面的氨基酸殘基位于抗體中的FcRn結(jié)合區(qū)之外的區(qū)域；[32]如[31]所述的方法，其中，上述FcRn結(jié)合區(qū)包含F(xiàn)c區(qū)；[33]如[31]所述的方法，其中，上述FcRn結(jié)合區(qū)包含Kabat編號中的EU序號為250、253、310、311、314、428、435、436的氨基酸殘基；[34]如[29]所述的方法，其中，抗體為IgG抗體；[35]如[29][34]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述電荷被改變的氨基酸殘基為恒定區(qū)的氨基酸殘基；[36]如[29][34]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述電荷被改變的氨基酸殘基為重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)的氨基酸殘基；[37]如[36]所述的方法，其特征在于，上述抗體為包含來自人以外的動(dòng)物的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)、來自人的構(gòu)架區(qū)(FR)及人恒定區(qū)的抗體，氨基酸殘基的電荷的改變是指從抗體的CDR或FR中的能夠露出在抗體表面的至少一個(gè)氨基酸殘基取代為具有與該氨基酸殘基不同的電荷的氨基酸殘基；[38]如[37]所述的方法，其特征在于，上述氨基酸殘基的電荷的改變?yōu)?1)序列號1表示的重鏈可變區(qū)中以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(a)作為第19號氨基酸殘基的K取代為T、(b)作為第43號氨基酸殘基的Q取代為E、(c)作為第62號氨基酸殘基的Q取代為E、(d)作為第63號氨基酸殘基的K取代為S、(e)作為第65號氨基酸殘基的K取代為Q、(f)作為第66號氨基酸殘基的G取代為D、及/或(2)序列號7表示的輕鏈可變區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代；(g)作為第24號氨基酸殘基的R取代為Q、(h)作為第27號氨基酸殘基的Q取代為E、(i)作為第79號氨基酸殘基的K取代為T、(j)作為第82號氨基酸殘基的R取代為S、(k)作為第112號氨基酸殘基的K取代為E；[39]如[38]所述的方法，其特征在于，進(jìn)一步包括以下的改變序列號31表示的重鏈恒定區(qū)中的以下任一種或一種以上發(fā)生取代，(a)作為第151號氨基酸殘基的H取代為Q，(b)作為第157號氨基酸殘基的K取代為Q，(c)作為第238號氨基酸殘基的R取代為Q，(d)作為第239號氨基酸殘基的D取代為E，(e)作為第241號氨基酸殘基的L取代為M，(f)作為第302號氨基酸殘基的Q取代為E；[40]如[36]所述的方法，其特征在于，上述抗體為包含來自人以外的動(dòng)物的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)、來自人的構(gòu)架區(qū)(FR)及人恒定區(qū)的抗體，氨基酸殘基的電荷的改變是指將在抗體恒定區(qū)中的能夠露出在抗體表面的至少一個(gè)氨基酸殘基取代為具有與該氨基酸殘基不同的電荷的氨基酸殘基；[41]如[40]所述的方法，其特征在于，所述取代為序列號31表示的重鏈恒定區(qū)中的以下任一種或一種以上的取代；(a)作為第151號氨基酸殘基的H取代為Q、(b)作為第157號氨基酸殘基的K取代為Q、(c)作為第238號氨基酸殘基的R取代為Q、(d)作為第239號氨基酸殘基的D取代為E、(e)作為第241號氨基酸殘基的L取代為M、(f)作為第302號氨基酸殘基的Q取代為E；[42]如[37][41]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，抗體為與上述抗體的Fc區(qū)結(jié)合的巖藻糖含量降低的抗體；[43]一種抗體，所述抗體是根據(jù)[29][42]中任一項(xiàng)所述的方法制備得到的；[44]如[43]所述的抗體，所述抗體為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體；[45]一種抗體，所述抗體包含重鏈可變區(qū)及/或輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)進(jìn)行了下述取代，(1)在序列號1表示的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中進(jìn)行以下任一種或一種以上的取代(a)作為第19號氨基酸殘基的K取代為T、(b)作為第43號氨基酸殘基的Q取代為E、(c)作為第62號氨基酸殘基的Q取代為E、(d)作為第63號氨基酸殘基的K取代為S、(e)作為第65號氨基酸殘基的K取代為Q、(f)作為第66號氨基酸殘基的G取代為D，所述輕鏈可變區(qū)進(jìn)行了下述取代，(2)在序列號7表示的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中進(jìn)行以下任一種或一種以上的取代(g)作為第24號氨基酸殘基的R取代為Q、(h)作為第27號氨基酸殘基的Q取代為E、(i)作為第79號氨基酸殘基的K取代為T、(j)作為第82號氨基酸殘基的R取代為S、(k)作為第112號氨基酸殘基的K取代為E；[46]如[45]所述的抗體，其中，包含序列號3表示的重鏈可變區(qū)及序列號9表示的輕鏈可變區(qū)；[47]如[45]所述的抗體，其中，包含序列號5表示的重鏈可變區(qū)及序列號11表示的輕鏈可變區(qū)；[48]如[45]所述的抗體，其中，包含序列號27表示的重鏈可變區(qū)及序列號28表示的輕鏈可變區(qū)；[49]如[45]所述的抗體，其中，包含序列號27表示的重鏈可變區(qū)及序列號29表示的輕鏈可變區(qū)；[50]如[45][49]中任一項(xiàng)所述的抗體，所述抗體具有人抗體的恒定區(qū)；[51]如[50]所述的抗體，其中，上述恒定區(qū)包含序列號32或序列號33表示的序列；[52]一種抗體，所述抗體包含重鏈可變區(qū)及/或輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)進(jìn)行了下述取代，(1)在序列號1表示的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中進(jìn)行以下任一種或一種以上的取代(a)作為第43號氨基酸殘基的Q取代為K、(b)作為第52號氨基酸殘基的D取代為N、(c)作為第107號氨基酸殘基的Q取代為R，所述輕鏈可變區(qū)進(jìn)行了下述取代，18(2)在序列號7表示的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中進(jìn)行以下任一種或一種以上的取代(d)作為第17號氨基酸殘基的E取代為Q、(e)作為第27號氨基酸殘基的Q取代為R、(f)作為第105號氨基酸殘基的Q取代為R；[53]如[52]所述的抗體，其中，包含序列號4表示的重鏈可變區(qū)及序列號10表示的輕鏈可變區(qū)；[54]如[52]所述的抗體，其中，包含序列號6表示的重鏈可變區(qū)及序列號12表示的輕鏈可變區(qū)；[55]如[52][54]中任一項(xiàng)所述的抗體，所述抗體具有人抗體的恒定區(qū)；[56]一種抗體，其中，序列號31表示的重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列中具有以下任一種或一種以上的取代(a)作為第151號氨基酸殘基的H取代為Q、(b)作為第157號氨基酸殘基的K取代為Q、(c)作為第238號氨基酸殘基的R取代為Q、(d)作為第239號氨基酸殘基的D取代為E、(e)作為第241號氨基酸殘基的L取代為M、(f)作為第302號氨基酸殘基的Q取代為E；[57]一種抗體，所述抗體包含序列號33表示的重鏈恒定區(qū)；[58]如[45][57]中任一項(xiàng)所述的抗體，所述抗體是與上述抗體的Fc區(qū)結(jié)合的巖藻糖含量降低的抗體；[59]一種組合物，所述組合物含有[45][58]中任一項(xiàng)所述的抗體及藥學(xué)上允許的載體；[60]一種癌癥治療劑，所述癌癥治療劑含有[45][58]中任一項(xiàng)所述的抗體作為有效成分；[61]如[60]所述的癌癥治療劑，其中，所述癌癥為肝癌；[62]一種核酸，所述核酸編碼構(gòu)成[45][58]中任一項(xiàng)所述的抗體的多肽；[63]一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞保持[62]所述的核酸；[64]如[63]所述的宿主細(xì)胞，其中，宿主細(xì)胞為巖藻糖轉(zhuǎn)運(yùn)體缺失的動(dòng)物細(xì)胞、巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶缺失的動(dòng)物細(xì)胞或改變復(fù)合糖支鏈(complexbranchedsugarchain)修飾的動(dòng)物細(xì)胞；[65]一種抗體的制備方法，所述制備方法包括將[63]或[64]所述的宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的步驟；及從細(xì)胞培養(yǎng)物中回收多肽的步驟。[圖1]圖1為Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的由DSC(差示掃描量熱計(jì))測定得到的圖表。[圖2]圖2為高pi等電點(diǎn)電泳中的HOLO抗體及Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的電泳圖。泳道1及4表示ρI標(biāo)志物的電泳圖，泳道2表示HOLO抗體的電泳圖、泳道3表示Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的電泳圖。數(shù)字表示pi標(biāo)志物分子的pi值，箭頭表示該P(yáng)i值的標(biāo)志物分子的電泳遷移率。[圖3]圖3為低pi等電點(diǎn)電泳中的HOLO抗體及Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的電泳圖。泳道1及4表示pi標(biāo)志物的電泳圖，泳道2表示HOLO抗體的電泳圖，泳道3表示Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的電泳圖。數(shù)字表示pi標(biāo)志物分子的pi值，箭頭表示該P(yáng)l值的標(biāo)志物分子的電泳遷移率。[圖4]圖4為表示利用使用了H15L4抗體及HOLO抗體的競爭性ELISA得到的對作為抗原的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的結(jié)合親和性的圖。黑色菱形表示HOLO抗體的結(jié)合親和性，灰色四邊形表示H15I4抗體的結(jié)合親和性。[圖5]圖5為表示利用使用了Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及HOLO抗體的競爭性ELISA得到的對作為抗原的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的結(jié)合親和性的圖。黑色菱形表示HOLO抗體的結(jié)合親和性，灰色四邊形表示Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的結(jié)合親和性。[圖6]圖6為表示利用使用了Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體及HOLO抗體的競爭性ELISA得到的對作為抗原的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的結(jié)合親和性的圖。黑色菱形表示HOLO抗體的結(jié)合親和性，灰色四邊形表示Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的結(jié)合親和性。[圖7]圖7表示HOLO抗體、Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體在人肝癌移植小鼠模型中的抗腫瘤效果。圖7A表示以5mg/kg的給與量對該模型給與各受試抗體時(shí)HOLO抗體、Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及HSpdl.8LSpdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體在人肝癌移植小鼠模型中的抗腫瘤效果。黑色菱形表示媒介物的給與效果，黑色三角形表示Hspdl.SLspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的給與效果，白色空心圓表示Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的投與效果，及黑色四邊形表示HOLO抗體的給與效果。圖7B表示以lmg/kg的給與量對該模型給與各受試抗體時(shí)HOLO抗體、Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體在人肝癌移植小鼠模型中的抗腫瘤效果。黑色菱形表示媒介物的給與效果，黑色三角形表示Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的給與效果，白色空心圓表示Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的給與效果，及黑色四邊形表示HOLO抗體的給與效果。[圖8]圖8表示HOLO抗體、Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體在人肝癌移植小鼠模型中的抗體血漿中濃度。圖8A表示以5mg/kg的給與量對該模型給與各受試抗體時(shí)HOLO抗體、Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體在人肝癌移植小鼠模型中的被給與的抗體的血漿中濃度。黑色三角形表示Hspdl.SLspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的血漿中濃度，白色空心圓表示Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的血漿中濃度，及黑色四邊形表示HOLO抗體的血漿中濃度。圖8B表示以lmg/kg的給與量對該模型給與各受試抗體時(shí)HOLO抗體、Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體及Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體在人肝癌移植小鼠模型中的抗腫瘤效果。黑色三角表示Hspdl.SLspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體的血漿中濃度，白色空心圓表示Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體的血漿中濃度，及黑色四邊形表示HOLO抗體的血漿中濃度。[圖9]圖9表示各受試抗體對人肝癌細(xì)胞株H印G2細(xì)胞產(chǎn)生的ADCC活性。黑色三角表示由Hspdl.8Lspdl.6(Hdl.8Ldl.6)抗體產(chǎn)生的ADCC活性，白色空心圓表示由Hspu2.2Lspu2.2(Hu2.2Lu2.2)抗體產(chǎn)生的ADCC活性，及黑色四邊形表示由HOLO抗體產(chǎn)生的ADCC活性。[圖10]圖10為表示利用使用了HOLO抗體、Hdl.8Ldl.6抗體、pH7pL14抗體及pH7pL16抗體的競爭性ELISA得到的對作為抗原的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的結(jié)合親和性的圖。黑色圓形表示HOLO抗體的結(jié)合活性，白色空心圓表示Hdl.8Ldl.6抗體的結(jié)合活性，黑色四邊形表示pH7pL14抗體的結(jié)合活性，及白色空心四邊形表示pH7pL16抗體的結(jié)合活性。[圖11]圖11表示HOLO抗體、pH7pL14抗體及pH7pL16抗體的人肝癌移植小鼠模型中的抗腫瘤效果。*表示HOLO抗體的抗腫瘤效果、白色空心圓表示Hdl.8Ldl.6抗體的抗腫瘤效果、黑色四邊形表示pH7pL14抗體的抗腫瘤效果、及白色空心四邊形表示pH7pL16抗體的抗腫瘤效果。[圖12]圖12表示HOLO抗體、Hdl.8Ldl.6抗體、pH7pL14抗體、pH7pL16抗體及pH7M85pL16在小鼠中的抗體血漿中濃度。*表示HOLO抗體在小鼠中的抗體的血漿中濃度，白色空心圓表示Hdl.8Ldl.6抗體在小鼠中的抗體的血漿中濃度，黑色四邊形表示pH7pL14抗體在小鼠中的抗體的血漿中濃度，白色空心四邊形表示pH7pL16抗體在小鼠中的抗體的血漿中濃度，及黑色三角表示pH7M85pL16抗體在小鼠中的抗體的血漿中濃度。[圖13]圖13表示HOLO抗體、Hdl.8Ldl.6抗體、pH7pL14抗體、pH7pL16抗體對人肝癌細(xì)胞株H印G2細(xì)胞產(chǎn)生的ADCC活性。黑色圓形表示由HOLO抗體產(chǎn)生的ADCC活性，白色空心圓表示由Hdl.8Ldl.6抗體產(chǎn)生的ADCC活性，黑色四邊形表示由pH7pL14抗體產(chǎn)生的ADCC活性，及白色空心四邊形表示由pH7pL16抗體產(chǎn)生的ADCC活性。[圖14]圖14為表示利用使用了HOLO抗體、H0M85L0抗體、pH7pL16抗體及pH7M85pL16抗體的競爭性ELISA得到的對作為抗原的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的結(jié)合親和性的圖。黑色三角形表示HOLO抗體產(chǎn)生的結(jié)合活性，黑色四邊形表示H0M85L0抗體產(chǎn)生的結(jié)合活性，*表示pH7pL16抗體產(chǎn)生的結(jié)合活性，及白色空心菱形表示pH7M85pL16抗體產(chǎn)生的結(jié)合活性。[圖15]圖15表示pH7pL16抗體及pH7M85pL16抗體對人肝癌細(xì)胞株H印G2細(xì)胞產(chǎn)生的ADCC活性。白色空心四邊形表示由pH7pL16抗體產(chǎn)生的ADCC活性，黑色三角形表示由pH7M85pL16抗體產(chǎn)生的ADCC活性。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供對以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)進(jìn)行控制的方法。作為本發(fā)明的方法的優(yōu)選實(shí)施方式，包括改變能夠露出在以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體表面的至少一個(gè)氨基酸殘基的電荷的方法。即，改變以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的氨基酸殘基的電荷，使其等電點(diǎn)(pi)變化，由此可以控制該抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)。血漿中動(dòng)力學(xué)被控制的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體與未被控制的抗體相比，其對癌細(xì)胞可以發(fā)揮更優(yōu)異的抗腫瘤活性。多種抗體的同種型中，IgG抗體由于其分子量非常大，所以它的主要代謝途徑不是利用腎排泄的途徑。已知由于具有Fc區(qū)作為其分子的一部分的IgG抗體通過在血管等內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的新生兒Fc受體(FcRn)的補(bǔ)救途徑進(jìn)行再循環(huán)，所以具有長的生物體內(nèi)半衰期。認(rèn)為IgG抗體主要通過內(nèi)皮細(xì)胞中的代謝途徑被代謝(非專利文獻(xiàn)16)。S卩，認(rèn)為通過被內(nèi)皮細(xì)胞非特異性攝取的IgG抗體與FcRn結(jié)合，IgG抗體被再循環(huán)，而無法結(jié)合的IgG抗體被代謝。其Fc部分被改變使其對FcRn的結(jié)合性降低的IgG抗體的血漿中半衰期變短。相反地為了提高對FcRn的結(jié)合性而改變構(gòu)成IgG抗體的Fc區(qū)的氨基酸殘基，由此可以延長IgG抗體的血漿中半衰期(非專利文獻(xiàn)16及非專利文獻(xiàn)29)。如上所述，現(xiàn)有IgG抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)的控制方法如下進(jìn)行通過改變構(gòu)成Fc區(qū)的氨基酸殘基來改變對FcRn的結(jié)合性。作為上述氨基酸殘基，具體而言可以舉出基于Kabat編號的氨基酸殘基的H250，H253，H310，H311，H314，H428，H435，H436。除此之外，作為其改變對象，還可以舉出間接作用于IgG抗體與FcRn之間相互作用的氨基酸殘基的H254，H255，H257，H288，H296，H307，H309，H315，H415，H433。上述氨基酸殘基分別對應(yīng)例如序列號30中的第130、133、190、191、194、308、315,316號氨基酸殘基，以及第134、135、137、168、176、187、189、195、295、313號氨基酸殘基；及序列號31中的第133、136、193、194、197、311、318、319號氨基酸殘基，以及第137、138、140、171、179、190、192、198、298、316號氨基酸殘基。但是，如下述實(shí)施例所示，表明在本發(fā)明中以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期在很大程度上依賴于pi。即，表明可以以不改變下述氨基酸殘基的方式控制以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期，所述氨基酸殘基是構(gòu)成FcRn結(jié)合區(qū)的氨基酸殘基，其改變可能引起獲得免疫原性，具體而言是基于Kabat編號的氨基酸殘基的H250、H253、H310、H311、H314、H428、H435、H436和H254、H255、H257、H288、H296、H307、H309、H315、H415、H433等。另外，意外的令人驚奇的結(jié)果是除上述H250、H253、H310、H311、H314、H428、H435、H436和H254、H255、H257、H288、H296、H307、H309、H315、H415、H433等氨基酸殘基之外的改變，產(chǎn)生Pl值降低的效果，同時(shí)從對FcRn的結(jié)合性的觀點(diǎn)考慮也產(chǎn)生一定效果。本發(fā)明人等不希望被特定的理論所束縛，目前如下考慮。認(rèn)為向內(nèi)皮細(xì)胞的非特異性的IgG抗體的攝取速度依賴于帶有負(fù)電荷的細(xì)胞表面與IgG抗體的物理化學(xué)的電荷相互作用。因此，認(rèn)為通過降低(升高)IgG抗體的pi使電荷相互作用減小(增大)，引起其向內(nèi)皮細(xì)胞的非特異性攝取減少(增大)，結(jié)果可以通過減少(增大)內(nèi)皮細(xì)胞中的代謝來控制血漿中動(dòng)力學(xué)。需要說明的是，此處所謂電荷相互作用的減小是指用斥力表示的庫侖力的增大。認(rèn)為由于抗體與內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞表面負(fù)電荷之間的電荷相互作用是物理化學(xué)的相互作用，所以該相互作用不主要依賴于構(gòu)成抗體的氨基酸序列本身。因此，本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)的血漿中動(dòng)力學(xué)的控制方法不僅適用于特定抗體或磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，還可以廣泛適用于任意抗體或磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。使用IgG抗體作為本發(fā)明的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體時(shí)，只要是IgG型抗體分子即可，可以為任意亞型，也可以為雙特異性的IgG抗體。本發(fā)明的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體為雙特異性抗體時(shí)，該抗體還可以對該抗體結(jié)合的抗原(為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的情況下為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子)和除該抗原之外的抗原的表位特異性結(jié)合。例如作為除該抗原之外的抗原，為了募集NK細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞、LAK細(xì)胞等，所以可以優(yōu)選利用與上述細(xì)胞特異性結(jié)合的表面抗原。利用下述雙特異性抗體對膽管癌發(fā)揮由LAK細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞毒性，所述雙特異性抗體是由識(shí)別作為腺癌相關(guān)抗原的MUCl的抗體MUSEll和識(shí)別LAK細(xì)胞表面抗原的抗體0KT3制作得到的(非專利文獻(xiàn)17)?？梢詢?yōu)選使用本發(fā)明提供的血漿中動(dòng)力學(xué)被改善的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體來代替上述識(shí)別MUCl的抗體MUSE11。另外，作為本發(fā)明提供的雙特異性的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體，還可以優(yōu)選使用識(shí)別結(jié)合有該抗體的抗原(為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的情況下為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子)的不同表位的抗體。另外，即使為抗體分子，在為如scFv和Fab之類以腎排泄為其主要代謝途徑的低分子抗體的情況下，也無法如上所述通過Pl來控制其抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)。但是，本發(fā)明只要為不以腎排泄為主要代謝途徑的Fc結(jié)合蛋白質(zhì)即可，可以使用任意抗體分子型。例如可以舉出SCFv-FC、dAb-FC、FC融合蛋白質(zhì)等。由于這些分子的主要代謝途徑不是利用腎排泄的代謝，所以可以根據(jù)本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)的方法通過改變Pl來控制上述分子的血漿中動(dòng)力學(xué)。本發(fā)明可以適用的抗體分子也可以為抗體樣分子?？贵w樣分子是指通過與靶分子結(jié)合發(fā)揮功能的分子(非專利文獻(xiàn)18)，例如可以舉出DARPins、Affibody、Avimer等。本發(fā)明中“血漿中動(dòng)力學(xué)被控制”是指將構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的氨基酸在改變前與改變后的抗體血漿中動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較，血漿中動(dòng)力學(xué)向所期望的方向改變。即，期望延長以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期時(shí)，“血漿中動(dòng)力學(xué)的控制”是指延長該抗體的血漿中半衰期。期望縮短以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中半衰期時(shí)，“血漿中動(dòng)力學(xué)的控制”是指縮短該抗體的血漿中半衰期。本發(fā)明中以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)是否向所期望的方向改變，即血漿中動(dòng)力學(xué)是否如所期望那樣地被控制，例如可以通過采用小鼠、大鼠、兔、犬、猴等進(jìn)行動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)，進(jìn)行適當(dāng)評價(jià)。另外，更具體而言，本發(fā)明中的“血漿中半衰期的延長”或“血漿中半衰期縮短”可以通過除如血漿中半衰期之類參數(shù)之外，血漿中平均滯留時(shí)間或血漿中清除率等任一種參數(shù)來把握(《藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)踐的分析》(南山堂))。例如可以根據(jù)體內(nèi)動(dòng)力學(xué)分析軟件WinNonlin(Pharsight)附帶的說明書，進(jìn)行非房室(Noncompartmental)分析，由此利用上述參數(shù)適當(dāng)評價(jià)本發(fā)明提供的“血漿中動(dòng)力學(xué)的控制”。本發(fā)明中“能夠露出在表面的氨基酸殘基”通常是指位于構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的多肽表面的氨基酸殘基?！拔挥诙嚯谋砻娴陌被釟埢笔侵钙鋫?cè)鏈能夠與溶劑分子(通常多指水分子)接觸的氨基酸殘基，無需其全部側(cè)鏈均與溶劑分子接觸，即使在其側(cè)鏈的一部分與溶劑分子接觸的情況下，也規(guī)定該氨基酸殘基為位于表面的氨基酸殘基。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過使用了市售軟件的同源建模等，制作多肽和抗體的同源模型?；谠撏茨Ｐ停梢赃m當(dāng)選擇位于構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的多肽表面的氨基酸殘基作為“位于多肽表面的氨基酸殘基”。本發(fā)明中“能夠露出在表面的氨基酸殘基”沒有特別限定，但優(yōu)選位于以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體中的FcRn結(jié)合區(qū)之外的氨基酸殘基。上述FcRn結(jié)合區(qū)可以優(yōu)選舉出例如Fc區(qū)，更具體而言可以舉出由基于Kabat編號的氨基酸殘基的H250，H253，H310,H311,H314,H428,H435,H436中的一個(gè)以上的氨基酸殘基構(gòu)成的區(qū)域。除此之外，還可以舉出間接作用于IgG抗體與FcRn之間的相互作用的氨基酸殘基如H254，H255，H257，H288，H296，H307,H309,H315，H415，H433作為其改變對象。上述氨基酸殘基分別對應(yīng)例如序列號30中的第130、133、190、191、194、308、315、316號氨基酸殘基，以及第134、135、137、168、176、187、189、195、295、313號氨基酸殘基；及序列號31中的第133、136、193、194、197、311、318、319號氨基酸殘基，以及第137、138、140、171、179、190、192、198、298、316號氨基酸殘基。根據(jù)本發(fā)明，以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體中應(yīng)改變電荷的氨基酸殘基優(yōu)選為構(gòu)成抗體的重鏈(也稱作H鏈)可變區(qū)或輕鏈(也稱作L鏈)可變區(qū)的氨基酸殘基。作為該可變區(qū)，具體而言可以舉出互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)、構(gòu)架區(qū)(FR)。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，抗體可變區(qū)中的表面氨基酸殘基可以通過采用同源建模等制作得到的同源模型進(jìn)行適當(dāng)選擇。即，可以從基于Kabat編號的氨基酸殘基如H1、H3、H5、H8、H10、H12、H13、H15、H16、H19、H23、H25、H26、H39、H42、H43、H44、H46、H68、H71、H72、H73、H75、H76、H81、H82b、H83、H85、H86、H105、H108、H110、H112中適當(dāng)選擇抗體可變區(qū)中的表面氨基酸殘基。例如序列號1表示的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈FR中，可以舉出以第1、3、5、8、10、12、13、15、16、19、23、25、26、39、42、43、44、46、69、72、73、74、76、77、82、85、87、89、90、107、110、112、114號氨基酸殘基作為表面氨基酸，但本發(fā)明并不限定于此。另外，重鏈CDR中的表面氨基酸殘基可以根據(jù)同樣的同源模型進(jìn)行選擇。S卩，基于Kabat編號的氨基酸殘基如H97基本露出在全部抗體的表面。例如，序列號1表示的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈CDR中的第101號絲氨酸與該氨基酸殘基對應(yīng)。作為序列號1表示的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈CDR中的其他氨基酸殘基，可以優(yōu)選舉出第52、54、62、63、65、66號氨基酸殘基。在輕鏈FR中，可以從基于Kabat編號的氨基酸殘基如Ll、L3、L7、L8、L9、Ll1、Ll2、L16、L17、L18、L20、L22、L38、L39、L41、L42、L43、L45、L46、L49、L57、L60、L63、L65、L66、L68、L69、L70、L74、L76、L77、L79、L80、L81、L85、L100、L103、L105、L106、L107中適當(dāng)選擇抗體可變區(qū)中的表面氨基酸殘基。例如可以舉出以序列號7表示的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體1、3、7、8、9、11、12、16、17、18、20、22、43、44、45、46、48、49、50、54、62、65、68、70、71、73、74、75、79、81、82、84、85、86、90、105、108、110、111、112作為表面氨基酸，但本發(fā)明并不限定于此。另外，輕鏈CDR中的表面氨基酸殘基可以通過采用與確定重鏈CDR中的表面氨基酸殘基的同源模型同樣的同源模型進(jìn)行選擇。作為序列號7表示的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的輕鏈CDR中的氨基酸殘基，可以優(yōu)選舉出第24、27、33、55、59號氨基酸殘基。本發(fā)明提供的方法中的氨基酸殘基的“改變”具體而言是指將原有氨基酸殘基取代為其他氨基酸殘基，使原有氨基酸殘基缺失，附加新的氨基酸殘基等，優(yōu)選是指將原有氨基酸殘基取代為其他氨基酸殘基。即，本發(fā)明中的“氨基酸殘基的電荷的改變”優(yōu)選是指氨基酸取代。為了對本發(fā)明提供的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體進(jìn)行上述“氨基酸殘基的電荷的改變”，例如優(yōu)選將選自序列號1表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈可變區(qū)中第19、43、52、54、62、63、65、66、107號氨基酸殘基中的至少一個(gè)氨基酸殘基的電荷改變。另外，例如優(yōu)選將選自序列號7表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的輕鏈可變區(qū)中第17、24、27、33、55、59、79、82、105、112號氨基酸殘基中的至少一個(gè)氨基酸殘基的電荷改變。只要能夠獲得作為目標(biāo)的血漿中動(dòng)力學(xué)的控制效果，則無需改變上述氨基酸殘基中除該電荷被改變的氨基酸殘基之外的氨基酸殘基，但可以進(jìn)行適當(dāng)改變使之具有與被適當(dāng)改變的氨基酸殘基同種的電荷或不具有電荷。已知在氨基酸中存在帶有電荷的氨基酸。通常，作為帶有正電荷的氨基酸(正電荷氨基酸)，已知賴氨酸⑷、精氨酸(R)、組氨酸(H)。作為帶有負(fù)電荷的氨基酸(負(fù)電荷氨基酸)，已知天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)等。已知除此之外的氨基酸為不具有電荷的氨基酸。作為上述“被改變的氨基酸殘基”，優(yōu)選從包含在以下(a)或(b)中任一組中的氨基酸殘基中適當(dāng)選擇，但并不特別限定于所述氨基酸。(a)谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)(b)賴氨酸⑷、精氨酸(R)、組氨酸(H)需要說明的是，在原有(改變前)氨基酸殘基已經(jīng)具有電荷的情況下，改變其使之成為不具有電荷的氨基酸殘基也是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式之一。即，作為本發(fā)明中的改變，可以舉出(1)從具有電荷的氨基酸取代為不具有電荷的氨基酸；(2)將具有電荷的氨基酸取代為具有與該氨基酸相反電荷的氨基酸；(3)從不具有電荷的氨基酸取代為具有電荷的氨基酸。在本發(fā)明中，優(yōu)選改變構(gòu)成抗體的氨基酸殘基使以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的等電點(diǎn)(Pl)變化。另外，存在多個(gè)被改變的氨基酸殘基時(shí)，用于改變的氨基酸殘基中可以含有少量不具有電荷的氨基酸殘基。作為本發(fā)明提供的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體中的“氨基酸殘基的電荷的改變”的優(yōu)選例，可以舉出以下改變。作為增加Pi值的改變，例如可以進(jìn)行序列號ι表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈可變區(qū)中Q43K、D52N、Q107R中的至少一個(gè)的取代，特別優(yōu)選改變?yōu)樾蛄刑?或序列號6表示的氨基酸序列。另外，例如可以進(jìn)行序列號7表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的輕鏈可變區(qū)中E17Q、Q27R、Q105R中的至少一個(gè)的取代，特別優(yōu)選改變?yōu)樾蛄刑?0或序列號12表示的氨基酸序列。另一方面，作為減小Pl值的改變，可以進(jìn)行序列號1表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈可變區(qū)中K19T、Q43E、G62E、K63S、K65Q、G66D中的至少一個(gè)的取代，特優(yōu)選改變?yōu)樾蛄刑?、序列號5、序列號27表示的氨基酸序列。另外，例如可以進(jìn)行序列號7表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的輕鏈可變區(qū)中R24Q、Q27E、K79T、R82S、K112E中的至少一個(gè)的取代，特別優(yōu)選改變?yōu)樾蛄刑?、序列號11、序列號28或序列號29表示的氨基酸序列。進(jìn)而，作為減小Pl值的改變，可以舉出重鏈恒定區(qū)中基于Kabat編號特定的氨基酸殘基如H268、H274、H355、H356、H358、H419中的至少一個(gè)的取代。上述取代例如可以舉出以下取代作為優(yōu)選例，即，序列號31表示的重鏈恒定區(qū)的將作為第151號氨基酸殘基的H取代為Q、將作為第157號氨基酸殘基的K取代為Q、將作為第238號氨基酸殘基的R取代為Q、將作為第239號氨基酸殘基的D取代為E、將作為第241號氨基酸殘基的L取代為M、將作為第302號氨基酸殘基的Q取代為E等中的一種或一種以上的取代。上述取代的結(jié)果構(gòu)筑人抗體的IgGl恒定區(qū)與IgG4恒定區(qū)的嵌合體。即，通過該取代，可以不影響被改變的抗體的免疫原性地制作具有所期望Pl的抗體。本發(fā)明中用于改變的氨基酸殘基的數(shù)量沒有特別限定，例如改變抗體的可變區(qū)時(shí)，為了不降低對抗原的結(jié)合活性或者為了提高免疫原性，優(yōu)選改變用于實(shí)現(xiàn)作為目標(biāo)的被控制的血漿中動(dòng)力學(xué)所需最低限的氨基酸殘基。另外，還可以優(yōu)選適當(dāng)組合引起對抗原的結(jié)合活性增大的氨基酸殘基的改變、和引起免疫原性降低的氨基酸殘基的改變。可以采用公知的方法對抗體的抗原結(jié)合活性進(jìn)行測定。例如可以采用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法)、EIA(酶免疫測定法)、RIA(放射免疫測定法)或熒光免疫法等。一般的教科書如"AntibodiesALaboratoryManual.EdHarlow,DavidLane,ColdSpringHarborLaboratory,1988”中記載了上述方法。作為測定抗體對細(xì)胞的結(jié)合活性的方法，例如可以舉出AntibodiesALaboratoryManual.(EdHarlow,DavidLane,ColdSpringHarborLaboratory,1988)中的359-420頁中記載的方法。即，可以根據(jù)以細(xì)胞作為抗原的ELISA或FACS(熒光激活細(xì)胞分選術(shù))的原理進(jìn)行評價(jià)。在ELISAformat中，通過比較由酶反應(yīng)產(chǎn)生的信號水平，定量評價(jià)抗體對細(xì)胞的結(jié)合活性。即，將受試抗體加到固定化有各過量表達(dá)的細(xì)胞的ELISA板上，利用識(shí)別受試抗體的酶標(biāo)志抗體，檢測與細(xì)胞結(jié)合的抗體?；蛘咴贔ACS中，制備受試抗體的稀釋系列，確定抗體對各過量表達(dá)的細(xì)胞的結(jié)合效價(jià)(titer)，由此可以比較其對細(xì)胞的結(jié)合活性。可以通過FACSformat測定在細(xì)胞表面上表達(dá)的抗原與對應(yīng)于該抗原的抗體之間的結(jié)合，所述細(xì)胞不與ELISA板等載體結(jié)合并懸浮于緩沖液等中。作為用于上述測定的流式細(xì)胞儀，例如可以舉出FACSCantoTMII，F(xiàn)ACSAriaTM,FACSArrayTM,FACSVantageTMSE,FACSCaliburTM(以上BDBiosciences)和EPICSALTRAHyPerSort,CytomicsFC500，EPICSXL-MCLADC,EPICSXLADC,CellLabQuanta/CellLabQuantaSC(以上BeckmanCoulter)等。作為受試磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體對抗原的結(jié)合活性的優(yōu)選測定方法之一例，可以舉出使表達(dá)磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的細(xì)胞與受試抗體反應(yīng)，用識(shí)別受試抗體的經(jīng)FITC標(biāo)記的二抗對細(xì)胞進(jìn)行染色后，采用FACSCalibur(BD)進(jìn)行測定，利用CELLQUEST軟件(BD)解析其熒光強(qiáng)度的方法。根據(jù)本方法，用特異性識(shí)別受試抗體的經(jīng)FITC標(biāo)志的二抗對表達(dá)磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的細(xì)胞表面上的與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3結(jié)合的受試抗體進(jìn)行染色后，采用FACSCalibur進(jìn)行測定，此時(shí)利用CELLQUEST軟件解析其熒光強(qiáng)度，將根據(jù)上述方法得到的幾何平均值(受試Ge0-Mean值)與利用對照抗體得到的對照Ge0-Mean值進(jìn)行比較，由此可以進(jìn)行判斷。求出Ge0-Mean(幾何平均值)的計(jì)算式記載在CELLQUEST軟件用戶指南(BDbiosciences公司)中。另外，為了不增加給與了抗體的人的體內(nèi)免疫原性，被改變的氨基酸序列優(yōu)選為人序列(來自人的天然抗體中發(fā)現(xiàn)的序列)，但本發(fā)明并不限定于此。進(jìn)而，在除使等電點(diǎn)改變而進(jìn)行導(dǎo)入的改變之外的位置可以優(yōu)選導(dǎo)入突變，使改變后多個(gè)FR(FR1、FR2、FR3、FR4)分別成為人序列。如上所述地將各FR取代為人序列的方法在非專利文獻(xiàn)25中被報(bào)道。另外，為了改變抗體的等電點(diǎn)，也可以改變成其他的人FR使各FR的電荷變化(例如也可以將FR3與其他的人FR交換，使抗體的等電點(diǎn)降低)。上述人源化方法在非專利文獻(xiàn)26中被報(bào)道。另外，在通過僅改變表面電荷無法實(shí)現(xiàn)作為目標(biāo)的被控制的血漿中動(dòng)力學(xué)的情況下，通過反復(fù)進(jìn)行表面電荷的改變和血漿中動(dòng)力學(xué)的評價(jià)，能夠適當(dāng)取得顯示出作為目標(biāo)的被控制的血漿中動(dòng)力學(xué)的所期望的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體。非專利文獻(xiàn)16中表明，將抗E，P-選擇蛋白抗體的嵌合抗體(IgG4)如chimericEP5C7.g4與人源化抗體(IgG4)如HuEP5C7.g4的獼猴中的血漿中動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較，二者的血漿中動(dòng)力學(xué)等同。另外，非專利文獻(xiàn)19中表明，將抗CD154抗體的嵌合型抗體如ch5d8與人源化抗體如Hu5c8的短尾猴中的血漿中動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較，二者的血漿中動(dòng)力學(xué)等同。非專利文獻(xiàn)20中表明，嵌合抗體cCC49與人源化抗體HuCC49的小鼠中的血漿中動(dòng)力學(xué)等同。另外，非專利文獻(xiàn)21及非專利文獻(xiàn)22中，表明在小鼠的評價(jià)中小鼠抗體與人源化抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)·分布等同，由于小鼠Fc及人Fc均與小鼠FcRn交差反應(yīng)，所以認(rèn)為同一嵌合抗體與同一人源化抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)·分布等同。如上述例子所示，具有相同CDR的嵌合抗體與人源化抗體之間的血漿中動(dòng)力學(xué)等同。即，在根據(jù)非專利文獻(xiàn)7等中舉出的公知方法進(jìn)行人源化的情況下，與嵌合抗體相比，血漿中動(dòng)力學(xué)等同，無法利用公知方法制作血漿中動(dòng)力學(xué)被控制的人源化抗體。相對于此，利用本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)的方法，對以嵌合磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的嵌合抗體進(jìn)行人源化時(shí)，除通過對能夠露出在該嵌合抗體表面的氨基酸殘基進(jìn)行改變之外，改變該嵌合抗體的pi，由此可以制作與該嵌合抗體相比血漿中動(dòng)力學(xué)被控制的(即，延長其血漿中半衰期，或者短縮其血漿中半衰期)以人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人源化抗體。為了控制血漿中動(dòng)力學(xué)，能夠露出在用于以人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人源化抗體表面的氨基酸的改變可以與抗體的人源化同時(shí)進(jìn)行，或者使用以人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人源化抗體作為起始材料，改變能夠露出在其表面的氨基酸殘基，由此進(jìn)一步改變?nèi)嗽椿贵w的Pl。非專利文獻(xiàn)23中記載了利用相同人抗體的FR序列進(jìn)行人源化的3種人源化抗體trastuzumab>bevacizumab>pertuzumab的血漿中動(dòng)力學(xué)基本等同。艮口，利用相同F(xiàn)R序列進(jìn)行人源化時(shí)，血漿中動(dòng)力學(xué)基本等同。根據(jù)本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)的方法，除上述人源化步驟之外，對能夠露出在以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體表面的氨基酸殘基進(jìn)行改變，除此之外改變抗體的pl，由此可以控制以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體血漿中濃度。另外，本發(fā)明的方法還可以適用于人抗體。對能夠露出在由人抗體文庫和產(chǎn)生人抗體的小鼠等制作得到的以人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人抗體表面的氨基酸殘基進(jìn)行改變，除此之外，改變?nèi)丝贵w的pl，由此可以制作與最初制作的人抗體的血漿中動(dòng)力學(xué)相比，其血漿中動(dòng)力學(xué)被控制的(即，延長其血漿中半衰期，或者短縮其血漿中半衰期)以人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人抗體。通過減小抗體所具有的pi值，延長抗體的血漿中半衰期。已知與之相反地通過增大抗體的Pl值，短縮血漿中半衰期，提高抗體的組織遷移性(非專利文獻(xiàn)27及28)。但是，該抗體由于免疫原性增加，此外對細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)在化活性也增大，所以為了適用于下述抗體需要進(jìn)一步改良，所述抗體通過細(xì)胞毒性等機(jī)制產(chǎn)生抗癌效果，因?yàn)閷?xì)胞內(nèi)的內(nèi)在化活性是發(fā)揮ADCC和CDC活性等活性的障礙。即，對于通過細(xì)胞毒性等機(jī)制產(chǎn)生抗癌效果的抗體來說，所述細(xì)胞毒性是由于對細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)在化活性是發(fā)揮ADCC和CDC活性等活性的障礙，尚不清楚究竟抗體Pl值的增加還是減小會(huì)引起腫瘤抑制效果的增強(qiáng)。在本發(fā)明中，制作其Pl值減小的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的改變抗體和其pi值增加的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的改變抗體，比較研究二者的抗腫瘤效果，由此驗(yàn)證何種改變會(huì)引起高的腫瘤抑制效果。結(jié)果令人驚奇的是pl值減小的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體對肝癌發(fā)揮更優(yōu)異的效果。本發(fā)明中的“磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體”中包含下述抗體如上所述將氨基酸殘基的電荷被改變的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體用作起始材料，通過構(gòu)成該磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的氨基酸殘基的取代、缺失、附加及/或插入等得到的其氨基酸序列被進(jìn)一步改變的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。另外，本發(fā)明中的“磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體”中還包含通過氨基酸殘基的取代、缺失、附加及/或插入、或嵌合化和人源化等，將氨基酸序列被改變的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體用作起始材料，得到的構(gòu)成該磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的氨基酸殘基的電荷被進(jìn)一步改變的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。作為以提高本發(fā)明提供的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的特性為目的的改變示例，優(yōu)選舉出以提高抗體的穩(wěn)定性為目的的改變(以下，稱作穩(wěn)定性的改變)。水溶液中的抗體在天然狀態(tài)與失活變性狀態(tài)兩種狀態(tài)之間被平衡化。如熱力學(xué)第二法則(AG=ΔΗ-TAS)所示，天然狀態(tài)的穩(wěn)定性依賴于體系的吉布斯自由能的變化AG、及其細(xì)分如焓的變化ΔΗ(歸因于多肽鏈中的疏水性相互作用和氫鍵等的變化)與熵的變化AS(歸因于溶劑化作用與立體結(jié)構(gòu)自由度的變化)的平衡。正值A(chǔ)G是指蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)比蛋白質(zhì)的變性狀態(tài)更穩(wěn)定，AG顯示出較大的正值時(shí)，蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)的穩(wěn)定性進(jìn)一步增大。為了使蛋白質(zhì)變性，需要破壞有助于其穩(wěn)定化的力。例如通過將蛋白質(zhì)溶液露出在高溫下，立體結(jié)構(gòu)的自由度增大，削弱有助于蛋白質(zhì)穩(wěn)定化的因素，由此會(huì)引起蛋白質(zhì)的熱變性，但在上述情況下，-TAS項(xiàng)支配變性。由蛋白質(zhì)的熱變性導(dǎo)致的折疊(unfolding)蛋白質(zhì)的ΔΗ可以如本說明書中記載的實(shí)施例中具體記載地那樣，利用DSC(differentialscarmingcalorimetry差示掃描量熱測定法)直接進(jìn)行測定。蛋白質(zhì)的熱變性過程中的DSC曲線以夾著被稱作變性中點(diǎn)(Tm)的受試蛋白質(zhì)中固有的溫度的方式形成吸熱峰。通過對該峰進(jìn)行積分，可以得到變性焓變化。通常，Tm值是熱穩(wěn)定性的指標(biāo)之一。也可以通過DSC測定蛋白質(zhì)產(chǎn)生熱變性時(shí)的熱容變化(ACp)。隨著熱變性產(chǎn)生的熱容變化主要?dú)w因于蛋白質(zhì)以天然狀態(tài)存在時(shí)未露出在分子表面的氨基酸殘基隨著蛋白質(zhì)的變性而露出于溶劑分子中，結(jié)果引起水合。如上所述，本發(fā)明提供的方法中的氨基酸殘基的“改變”具體而言是指將原有氨基酸殘基取代為其他氨基酸殘基，使原有氨基酸殘基缺失，附加新的氨基酸殘基等，但優(yōu)選是指將原有氨基酸殘基取代為其他氨基酸殘基。即，為了改變本發(fā)明中的抗體穩(wěn)定性，優(yōu)選采用利用氨基酸取代進(jìn)行的改變。對構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的氨基酸殘基進(jìn)行穩(wěn)定性的改變，結(jié)果抗體的上述Tm值增大。即，上述Tm值優(yōu)選用作對以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體進(jìn)行了穩(wěn)定性改變的指標(biāo)。為了對本發(fā)明提供的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體進(jìn)行上述“穩(wěn)定性的改變”，例如優(yōu)選將選自序列號1表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的重鏈可變區(qū)中第37、40,48,51號氨基酸殘基中的至少一個(gè)氨基酸殘基進(jìn)行改變。另外，例如優(yōu)選將選自序列號7表示的構(gòu)成人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的輕鏈可變區(qū)中第2、25、42、48、50、83、84號氨基酸殘基中的至少一個(gè)氨基酸殘基進(jìn)行改變。上述氨基酸殘基中，除進(jìn)行了該穩(wěn)定性改變的氨基酸殘基之外的氨基酸殘基只要可以得到所期望的Tm值即可，無需對其進(jìn)行改變，但可以適當(dāng)改變使之具有與用于適當(dāng)改變的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的Tm值同等程度的Tm值，或具有其以上的Tm值。穩(wěn)定性的改變可以通過將用于改變的構(gòu)成以人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的各氨基酸殘基隨機(jī)改變而實(shí)現(xiàn)。另外，還可以通過將用于改變的構(gòu)成以人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人源化抗體的氨基酸序列的一部分取代為下述氨基酸序列來進(jìn)行穩(wěn)定性的改變，所述氨基酸序列為構(gòu)成高Tm值的已知抗體的氨基酸序列，并且從與用于該改變的以人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的人源化抗體的氨基酸序列的一部分與抗體的立體結(jié)構(gòu)有關(guān)的觀點(diǎn)考慮為相對應(yīng)的序列。被取代的氨基酸殘基的位置沒有限定，但可以優(yōu)選改變FR中的氨基酸殘基。另外，也可以為CDR中的氨基酸殘基，只要不伴有對抗原的結(jié)合活性降低即可，可以進(jìn)行適當(dāng)改變。另外，被改變的氨基酸殘基的數(shù)量沒有特別限定，也可以通過將FR的特定片段取代為所期望的片段來進(jìn)行。該片段的取代可以通過改變?nèi)縁R中FR1、FR2、FR3、FR4各片段，或者將一個(gè)或一個(gè)以上各片段的改變進(jìn)行組合來進(jìn)行。改變FR片段時(shí)，可以舉出以重鏈或輕鏈的FR2為優(yōu)選例。例如可以舉出以下改變作為優(yōu)選的具體例，所述改變包括將具有序列號1表示的VHlb亞類的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體重鏈的FR2改變?yōu)閂H4亞類的氨基酸殘基的改變，即將第37號纈氨酸取代為異亮氨酸的V37I，同樣地進(jìn)行A40P、M48I、L51I的改變。另外，例如可以舉出以下述改變作為優(yōu)選的具體例，所述改變包括將具有序列號7表示的VK2亞類的人源化磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體輕鏈的FR2區(qū)改變?yōu)閂K3亞類的改變，即L42Q、S48A、Q50R的改變，進(jìn)而相當(dāng)于改變FRl的生殖系細(xì)胞序列的V2I的改變。構(gòu)成以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體的氨基酸殘基的取代、缺失、附加及/或插入、以及人源化、嵌合化等氨基酸序列的改變均可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法適當(dāng)進(jìn)行。同樣地制作本發(fā)明提供的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體作為重組抗體時(shí)，可以適當(dāng)進(jìn)行構(gòu)成抗體的可變區(qū)及恒定區(qū)的氨基酸殘基的取代、缺失、附加及/或插入。本發(fā)明中的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的抗體也可以優(yōu)選使用小鼠抗體、人抗體、大鼠抗體、兔抗體、山羊抗體、駱駝抗體等來自任何動(dòng)物的抗體。進(jìn)而，也可以優(yōu)選使用例如嵌合抗體，其中人源化抗體等其氨基酸序列被取代的以磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為代表的改變的抗體。另外，也可以優(yōu)選使用結(jié)合了各種分子的抗體修飾物?！扒逗峡贵w”是指組合來自不同動(dòng)物的序列制作得到的抗體。例如可以優(yōu)選舉出由小鼠抗體的重鏈、輕鏈可變區(qū)與人抗體的重鏈、輕鏈恒定區(qū)構(gòu)成的抗體。嵌合抗體的制作方法是公知的。例如將編碼抗體可變區(qū)的DNA與編碼人抗體恒定區(qū)的DNA以符合讀框的方式(in-frame)進(jìn)行融合，將得到的重組DNA參入通常使用的表達(dá)載體中。可以通過培養(yǎng)導(dǎo)入了該載體的宿主細(xì)胞，從其培養(yǎng)液中適當(dāng)取得或分離嵌合抗體。人源化抗體也被稱作重構(gòu)(reshaped)人抗體，是從人以外的哺乳動(dòng)物、例如小鼠等分離得到的抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR:complementarydeterminingregion)與人抗體構(gòu)架區(qū)(FR:frameworkregion)連結(jié)而得到的抗體。編碼人源化抗體的DNA序列可以通過將多個(gè)寡核苷酸用作模板的重疊PCR反應(yīng)進(jìn)行合成。重疊PCR反應(yīng)的材料、其實(shí)施方法記載在W098/13388等中。編碼本發(fā)明的人源化抗體可變區(qū)的DNA通過重疊PCR由多個(gè)寡核苷酸得到，所述寡核苷酸以使之具有互相重疊的核苷酸序列的方式被制作，將上述DNA與編碼人抗體恒定區(qū)的DNA以符合讀框方式進(jìn)行連結(jié)，使之形成密碼子序列。然后，將上述被連結(jié)的DNA插入表達(dá)載體中使該DNA表達(dá)，將其導(dǎo)入宿主內(nèi)。用于鑒定CDR的方法是公知的(Kabatetal.，SequenceofProteinsofImmunologicalInterest(1987),NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md.Chothiaetal.,Nature(1989)342，877)。另外，上述通常的基因重組方法也是公知的(參見歐洲專利申請發(fā)明者井川智之,倉持太一,桔達(dá)彥,白巖宙丈,石黑敬弘,角田浩行申請人:中外制藥株式會(huì)社