專利名稱：用于治療胃腸道紊亂和促進(jìn)腸道發(fā)育及成熟的脂質(zhì)組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及胃腸道疾病和紊亂以及腸道發(fā)育和成熟的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
新生兒的充足的營養(yǎng)對于適度成長以及避免與營養(yǎng)缺乏有關(guān)的并發(fā)癥而言是必 不可少的。新生兒的營養(yǎng)需求隨著代謝狀況、早產(chǎn)的程度以及影響胃腸道、肺部和心臟系統(tǒng) 的疾病而改變。嬰兒可能患有數(shù)種可在輕度的不適到嚴(yán)重威脅生命的疾病之間變動(dòng)的消化系統(tǒng) 的紊亂。早產(chǎn)發(fā)生率的提高，外加高度發(fā)展的技術(shù)所產(chǎn)生的改善的生存率，導(dǎo)致更加需要 開發(fā)創(chuàng)新性的且成本有效的針對新生兒階段及以后的生活中的早產(chǎn)兒的治療方法。早產(chǎn)兒 沒有獲得通常在懷孕晚期生長的腸道成熟度，并且往往伴隨著不成熟的胃腸道以及胃腸道 疾病和紊亂而出生。US2003/0072865描述了包含脂質(zhì)成分的嬰兒配方奶粉，其中棕櫚酸殘基所占比例 超過甘油三酸酯中存在的全部脂肪酸殘基的10%，從而減少了便秘、腹部不適和腸胃問題。導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞成熟的出生后階段出現(xiàn)在動(dòng)物的生命早期形態(tài)發(fā)生和細(xì)胞分化 產(chǎn)生了上皮以用于消化吸收初乳和乳汁成分；粘膜的增厚因絨毛和隱窩的生長所致而發(fā)生。新生兒的上皮結(jié)構(gòu)和胃腸道功能在斷奶前突然改變以適應(yīng)從進(jìn)食乳汁到進(jìn)食固 體食物的變化。盡管新生兒的腸道成熟一直是深入研究的主題，不過在成熟階段引發(fā)主要 的生化變化和形態(tài)變化的因素仍然所知甚少。新生兒的腸道中具有極不成熟的細(xì)胞襯里。 腸上皮細(xì)胞之間的連接不夠緊密，刷狀緣和粘液層未能充分發(fā)育。由于粘膜屏障不夠致密， 新生兒具有較大的感染傳染病和發(fā)生過敏的風(fēng)險(xiǎn)。因此，需要可保護(hù)其免受環(huán)境的侵?jǐn)_的 腸屏障的腸道成熟和分化。在生命過程中，腸上皮細(xì)胞必須發(fā)揮不同的作用，包括典型的消化吸收功能、維持 抵御有害的抗原和細(xì)菌的屏障、以及分泌水和電解質(zhì)以保持適當(dāng)?shù)那粌?nèi)內(nèi)容物的粘度和沖 洗有害成分。腸道的發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化在對象的整個(gè)生命歷程中都是極為重要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種脂質(zhì)組合物用于制備營養(yǎng)、藥物或保健品組合物或功能性食品、 用于預(yù)防和治療胃腸道疾病和紊亂、以及用于促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的應(yīng)用，所 述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯 其中Ri、R2和R3可以為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或?；?，其中所述酰基選自 由飽和、單不飽和和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸殘基的含量為所 述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15% 約55%。本發(fā)明還設(shè)想了一種用于治療具有胃腸道疾病或紊亂，或具有胃腸道疾病或紊亂 的增加的風(fēng)險(xiǎn)的對象，并促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的方法，所述方法包括對所述對 象施用下述脂質(zhì)組合物，所述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯 其中，禮、R2和R3可以為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或?；渲兴鲺；x 自由飽和、單不飽和和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸殘基的含量為 所述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15% 約55%。


為理解本發(fā)明和了解本發(fā)明在實(shí)際情況中如何進(jìn)行實(shí)施，將參照附圖通過僅僅非 限制性的實(shí)例的方式描述實(shí)施方式，圖中圖1圖解了飲食治療對喂養(yǎng)2周后的大鼠粘膜重量的影響。各值為平均值士SEM。 制備飲食A (包含富含高含量的sn-2位的棕櫚酸的油)，飲食B (包含具有高含量棕櫚酸的 標(biāo)準(zhǔn)植物油混合物)和飲食C(包含具有低含量棕櫚酸的油)?！?p < 0. 05飲食A或飲食B對飲食C卞p < 0. 05飲食A對飲食B圖2圖解了飲食治療對喂養(yǎng)2周后的大鼠的微觀腸外觀的影響。各值為平均值 士 SEM。制備飲食A (包含富含高含量的sn-2位的棕櫚酸的油)，飲食B (包含具有高含量棕 櫚酸的標(biāo)準(zhǔn)植物油混合物)和飲食C(包含具有低含量棕櫚酸的油)。 §p < 0. 05飲食A或飲食B對飲食C卞p < 0. 05飲食A對飲食B圖3圖解了飲食治療對喂養(yǎng)2周后的大鼠的腸上皮細(xì)胞增殖的影響。用山羊抗 BrdU抗體檢測結(jié)合到增殖的空腸和回腸隱窩細(xì)胞的5-BrdU。使用光顯微術(shù)測定來自每只 大鼠的每切片10個(gè)良好取向的、縱向隱窩中的標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目。各值為平均值士SEM。制 備飲食A (包含富含高含量的sn-2位的棕櫚酸的油)，飲食B(包含具有高含量棕櫚酸的標(biāo) 準(zhǔn)植物油混合物)和飲食C(包含具有低含量棕櫚酸的油)?！?p < 0. 05飲食A或飲食B對飲食C 圖4 用跨上皮電阻(TEER)測定法評估Caco-2細(xì)胞單層在用脂肪共混物7 (富含 高含量的sn-2位的棕櫚酸的油)和作為對比的LP0(具有低含量的棕櫚酸的油)溫育后的 匯合和分化。(A)用10 ii M的不同油或?qū)φ沼蜏赜?天和9天的細(xì)胞的TEER值測定結(jié)果。(B) 7天與9天之間的TEER值的差值表示Caco-2細(xì)胞的匯合和分化的額外增加。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)組合物用于制備營養(yǎng)、藥物或保健品組合物或功能性食 品、用于預(yù)防和治療胃腸道疾病和紊亂、以及用于促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的應(yīng)用， 所述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯 其中，禮、R2和R3可以為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或酰基，其中所述?；x 自由飽和、單不飽和和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸殘基的含量為 所述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15% 約55%。用于本發(fā)明的脂質(zhì)組合物通常包含式I的所述甘油三酸酯的混合物。這樣的混合 物包含兩種以上的式I的甘油三酸酯。本發(fā)明還設(shè)想了一種用于治療具有胃腸道疾病或紊亂，或具有胃腸道疾病或紊亂 的增加的風(fēng)險(xiǎn)的對象，并促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的方法，所述方法包括對所述對 象施用下述脂質(zhì)組合物，所述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯
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rl2"2其中，禮、&和民可以為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或酰基，其中所述?；x 自由飽和、單不飽和和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸殘基的含量為 所述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15% 約55%。本發(fā)明還設(shè)想了一種用于預(yù)防對象的胃腸道疾病或紊亂的方法，所述方法包括對 所述對象施用下述脂質(zhì)組合物，所述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯
7 其中，禮、&和民可以為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或?；?，其中所述?；x 自由飽和、單不飽和和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸殘基的含量為 所述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15% 約55%。本發(fā)明的組合物旨在治療或預(yù)防對象的胃腸道疾病和紊亂，并用于促進(jìn)腸道發(fā) 育、成熟、適應(yīng)和分化。此處使用的術(shù)語“對象”應(yīng)當(dāng)理解為涵蓋任何哺乳動(dòng)物，包括而不限于人、寵物 (如貓、狗)和家畜(如母牛、山羊、綿羊)。所述對象可處于其生命周期中的發(fā)育或成熟的 任何階段。該對象可以是且不限于新生兒、早產(chǎn)兒和足月兒、幼兒、少兒、青少年、成人或老
年對象。此處使用的嬰兒可以是任何嬰兒，例如但不限于新生兒、早產(chǎn)兒和足月兒、易受不 成熟胃腸道影響的小早產(chǎn)兒、具有極低出生重(VLBW)或超低出生重(ELBW)的嬰兒，特別是 那些具有壞死性小腸結(jié)腸炎及其他疾病的增大的風(fēng)險(xiǎn)的嬰兒。此處使用的組合物可以是但不限于是營養(yǎng)組合物(例如嬰兒配方奶粉)、保健品 組合物(例如膳食補(bǔ)充劑)、功能性食品、醫(yī)療食品或藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，用于本發(fā)明的脂質(zhì)組合物由天然來源、合成來源或半合成來 源制備。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，所述天然來源是植物來源、動(dòng)物來源或微生物來源中 的任一種。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)組合物的制造包括酶催化。此處使用的營養(yǎng)組合物可以是任何營養(yǎng)組合物，包括但不限于人乳脂肪替代品、 嬰兒配方奶粉、乳制品、冰淇淋、餅干、豆制品、烘培食品、糕點(diǎn)和面包、沙司、湯、預(yù)制食品、 冷凍食品、調(diào)味品、甜食、油脂、人造黃油、涂抹物、餡料、谷物、即食產(chǎn)品、嬰兒食品、幼兒食 品、棒狀食品、小吃、糖果和巧克力制品。此處使用的功能性食品可以是任何功能性食品，包括但不限于乳制品、冰淇淋、餅 干、豆制品、烘培食品、糕點(diǎn)和面包、沙司、湯、預(yù)制食品、冷凍食品、調(diào)味品、甜食、油脂、人造 黃油、涂抹物、餡料、谷物、即食產(chǎn)品、飲料和搖混飲料、嬰兒食品、棒狀食品、小吃、糖果和巧 克力制品。此處使用的保健品組合物可以是任何保健品，其可以為任何可視為食物或食物的 一部分并提供醫(yī)學(xué)或健康益處(包括預(yù)防和治療疾病)的物質(zhì)。這樣的保健品組合物包括 但不限于食品添加劑、食品增補(bǔ)劑、膳食補(bǔ)充劑、如蔬菜等基因改造食物、草藥制品，以及如 谷物、湯和飲料等加工食品，刺激物功能性食品、醫(yī)療食品和藥用食品。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，藥物或保健品組合物是劑量遞送形式。本發(fā)明的組合物的適宜的施用途徑是口服、含服和舌下施用或經(jīng)飼管施用。在特 定的實(shí)施方式中，所述化合物是口服施用。組合物施用的準(zhǔn)確劑量和規(guī)則必然取決于要實(shí)現(xiàn)的治療效果(例如，胃腸道紊亂 的治療)，并且可隨著具體配方、施用途徑、以及要施用組合物的各對象的年齡和狀況而改
8變。本發(fā)明因此還提供混合有藥學(xué)上可接受的助劑以及可選的其他治療劑的用于本 發(fā)明的藥物組合物。所述助劑就與該組合物的其他組分相容而言必須是“可接受的”，并且 不損害其受體。在一個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物還包含至少一種藥學(xué)活性劑。所述組合物可以由藥學(xué)領(lǐng)域的任何公知方法制備。該方法包括使各成分與任意助 劑結(jié)合的步驟。助劑也稱為配合成分，包括本領(lǐng)域中常規(guī)的那些，例如載體、填料、粘合劑、 稀釋劑、分解質(zhì)、潤滑劑、著色劑、調(diào)味劑、抗氧化劑和潤濕劑。適宜口服施用的藥物組合物可提供為不連續(xù)的劑量單位，例如丸劑、片劑、糖衣藥 丸或膠囊，或者為粉末或顆粒，或者為溶液或懸浮液。所述組合物可提供于單位劑量或多劑量容器，例如密封小瓶和安瓿中，可在存儲 于使用前僅需要加入無菌液態(tài)載體(如水)的冷凍干燥(凍干)狀態(tài)下。本發(fā)明還提供根據(jù)本發(fā)明用于制備用于本發(fā)明的組合物的商品化包，如食用脂肪 源或食物制品，其包括(a)腸內(nèi)施用至對象時(shí)可預(yù)防或治療消化系統(tǒng)紊亂，和/或促進(jìn)腸道 發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的脂肪源；(b)可選的可食用的生理學(xué)可接受的蛋白、碳水化合物、 維生素、礦物質(zhì)、氨基酸、核苷和活性或非活性添加劑中的至少一種；(c)可選的用于運(yùn)送 (a)和(b)中所限定的成分的至少一種可食用的生理學(xué)可接受的載體或稀釋劑；(d)用于混 合(a)、(b)和/或(c)中所限定的成分的單元和容器；和(e)使用說明書，例如但不限于存 儲條件、制備以供施用的脂肪源或食物制品的說明、所需的稀釋、劑量、施用的頻率等等。根據(jù)本發(fā)明的商品化包還包括即用型的本發(fā)明的脂肪源和使用說明書。劑量通常 按照主治醫(yī)師和其他醫(yī)務(wù)人員所知的良好的醫(yī)療實(shí)踐根據(jù)對象的年齡、體重、性別和狀況 而確定。此處使用的胃腸道疾病或紊亂應(yīng)當(dāng)理解為涵蓋胃食管反流(GER)、胃食管反流病 (GERD)、壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、高膽紅素血癥、炎性腸疾病(例如但不限于克羅恩病和 潰瘍性結(jié)腸炎)、短腸綜合征、腸切面或切口、腸道再吻合術(shù)、潰瘍、例如用于治療腸粘連和 腸梗阻的外科干預(yù)。此處使用的術(shù)語“腸”應(yīng)當(dāng)理解為包括由胃延伸至肛門的消化道的部分。在人和 其他哺乳動(dòng)物中，腸由兩部分構(gòu)成小腸(在人類中進(jìn)一步細(xì)分為十二指腸、空腸和回腸) 和大腸(在人類中進(jìn)一步細(xì)分為盲腸和結(jié)腸)。其他哺乳動(dòng)物還可有更為復(fù)雜的腸道。此處使用的促進(jìn)腸道發(fā)育應(yīng)當(dāng)理解為包括促進(jìn)下述過程或下述過程的一部分， 即增強(qiáng)、提高、生長、支持或推進(jìn)?；某墒斓纳掀ぜ?xì)胞的形成。此處使用的促進(jìn)腸道成熟應(yīng)當(dāng)理解為包括促進(jìn)下述過程或下述過程的一部分， 即增強(qiáng)、提高、生長、支持或推進(jìn)腸上皮細(xì)胞和腸段的分化過程。腸道(腸段)的發(fā)育和成熟均可以通過腸粘膜參數(shù)(例如但不限于腸周長、腸重 量和粘膜重量)和通過組織學(xué)變化(例如但不限于絨毛高度和隱窩深度)來測定。此處使用的促進(jìn)腸道適應(yīng)應(yīng)當(dāng)理解為包括下述的任何生理變化，即借助這些變 化，小腸的吸收能力得到增強(qiáng)、提高、生長、支持或推進(jìn)，包括但不限于襯里中存在的絨毛的 擴(kuò)大或延長、小腸直徑的增大以及食物通過小腸時(shí)的蠕動(dòng)或運(yùn)動(dòng)的減緩。此處使用的促進(jìn)腸道分化應(yīng)當(dāng)理解為包括預(yù)分化細(xì)胞變成?；?xì)胞類型的過程。例如，在腸道分化的情況中，位于隱窩底部附近的多能性干細(xì)胞隨后分化為以下四種主要 細(xì)胞類型之一吸收性腸上皮細(xì)胞、杯形細(xì)胞、帕內(nèi)特細(xì)胞和腸內(nèi)分泌細(xì)胞。GER(胃食管反流)是一種胃內(nèi)的液體內(nèi)容物逆向噴射的紊亂。這些液體內(nèi)容物沒 有向下噴射進(jìn)入腸道，而是向上噴射進(jìn)入食道。在嬰兒中，造成GER的主要原因是食管下括 約肌的不成熟。當(dāng)反流損害到食道時(shí)，則稱為GERD。GERD(胃食管反流病)是食道中具有由異常的反流造成的慢性癥狀或粘膜損害的 紊亂。這通常是由于食道與胃之間的屏障的暫時(shí)性或永久性變化所造成的。GERD在具有未 成熟或尚未充分發(fā)育的胃腸道的嬰兒中更為明顯。高膽紅素血癥很常見，在絕大多數(shù)情況中屬于良性問題。顏色通常產(chǎn)生于皮膚中 未結(jié)合的、非極性、脂溶性膽紅素色素的積累。未結(jié)合的膽紅素在血清中含量升高的毒性作 用通過幾個(gè)因素而增強(qiáng)，例如，游離的脂肪酸，其減少了膽紅素在循環(huán)時(shí)的滯留。NEC是主要影響早產(chǎn)兒的胃腸道疾?。黄渖婕耙鹉c(腸道)或腸的一部分的毀 壞的感染和炎癥。NEC是住院早產(chǎn)兒中最為常見的和嚴(yán)重的胃腸道紊亂。研究表明NEC的風(fēng)險(xiǎn)隨著嬰兒出生的提前而增大，并且母乳喂養(yǎng)的嬰兒的該風(fēng)險(xiǎn) 低于奶粉喂養(yǎng)的嬰兒。NEC通常發(fā)生在開始進(jìn)行喂乳之后。早產(chǎn)兒的腸道不成熟，因而對于血流的變化敏 感，容易感染。NEC的確切原因仍未知，不過存在幾種理論。據(jù)認(rèn)為，早產(chǎn)兒的腸道組織因過少的 氧氣或血流而弱化，當(dāng)開始喂養(yǎng)后，食物流經(jīng)腸道時(shí)產(chǎn)生的增加的壓力使得通常存在于腸 道內(nèi)的細(xì)菌入侵并損害腸組織壁。嬰兒不能夠連續(xù)喂養(yǎng)，并且如果細(xì)菌繼續(xù)蔓延通過腸道壁且有時(shí)進(jìn)入血流則嬰兒 開始生病。因?yàn)閶雰旱纳眢w系統(tǒng)是不成熟的，因而即便快速治療NEC，也還可能有嚴(yán)重的并發(fā)癥。其他因素似乎也會增加NEC的發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)。一些專家認(rèn)為嬰兒奶粉配方的組成、奶 粉的遞送速率或腸道內(nèi)粘膜的不成熟都可能造成NEC。炎性腸疾病(IBD)是一組大腸和小腸的炎性疾病。IBD的主要類型是克羅恩病和 潰瘍性結(jié)腸炎。潰瘍性結(jié)腸炎是大腸的炎性疾病。在潰瘍性結(jié)腸炎中，腸道的內(nèi)襯或粘膜 發(fā)炎(意味著腸壁的襯里紅腫)，并發(fā)展成潰瘍，即開放性疼痛傷口。炎性腸疾病(IBD)可 導(dǎo)致例如但不限于血便、便潛血、體重減輕、血痢、身體活動(dòng)減少、嚴(yán)重貧血、結(jié)腸長度縮短 和肛周損傷等癥狀。克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎的區(qū)別在于其涉及的腸的區(qū)域，其主要影響 小腸的最后一部分(稱為末端回腸)和大腸的一部分。不過，克羅恩病并不限于這些區(qū)域， 而可以侵害消化道的任何一部分?？肆_恩病造成的發(fā)炎比潰瘍性結(jié)腸炎所造成的發(fā)炎更深 地延伸進(jìn)入腸壁的層?？肆_恩病通常傾向于涉及整個(gè)腸壁，而潰瘍性結(jié)腸炎只影響腸的襯 里。短腸綜合征(SBS)是手術(shù)移除小腸導(dǎo)致的吸收不良紊亂，或罕見地是由于大部分 腸的完全的功能障礙導(dǎo)致的。大多數(shù)病例是后天的，不過一些兒童出生時(shí)即具有先天性短 腸。SBS通常不會發(fā)展，除非個(gè)體缺失了超過三分之二的小腸。此處使用的外科干預(yù)應(yīng)當(dāng)理解為包括用于例如診斷和/或治療損傷、畸形或疾病 的干預(yù)。這些干預(yù)可涉及胃腸道中的手術(shù)或處理，例如但不限于腸切面或切口和腸道再吻合術(shù)。所述腸切面或切口可以為用銳器，例如外科手術(shù)時(shí)用到的銳器等切割腸道時(shí)造成的 切口或傷口。腸道再吻合術(shù)是身體內(nèi)兩個(gè)導(dǎo)管之間的連接。外科吻合術(shù)涉及謹(jǐn)慎地連接器官的 兩個(gè)導(dǎo)管或中空部分；例如，已經(jīng)移除了部分腸道并將剩下的游離端聚集縫合的情況。腸粘連是可使腸襻彼此連接、或腸與其他腹內(nèi)器官連接、或腸與腹壁連接的纖維 組織帶。這些帶可拉拖腸段使其移位，而且可能堵塞食物的通道。粘連是腸梗阻的主要原 因。粘連可在出生時(shí)即存在(先天性)，也可能在腹部手術(shù)或炎癥后形成。腸梗阻指的是小腸或大腸的部分或全部的機(jī)械性或非機(jī)械性阻塞。一歲以下的嬰 兒最有可能患上因胎糞性腸梗阻、腸扭轉(zhuǎn)和腸套疊導(dǎo)致的腸梗阻。胎糞性腸梗阻，即無法順 利進(jìn)行出生后的第一次糞便排泄(胎糞)，這是一種新生兒的紊亂。還可能發(fā)生在極低出生 重(VLBW)的嬰兒中。在胎糞性腸梗阻中，異常的胎糞必須通過灌腸劑或者利用外科手術(shù)除 去。腸扭轉(zhuǎn)是小腸或大腸的扭曲，這可能會切斷腸的血液供給，導(dǎo)致組織壞死(壞疽)。在 腸套疊中，腸道進(jìn)行自身疊縮，就象無線電天線折疊起來一樣。這種情況在三個(gè)月至九個(gè)月 大的兒童身上最為常見，不過也可見于更大一些的兒童?；加心c套疊的男孩是女孩的幾乎 兩倍。脂肪源用于制備用于本發(fā)明的組合物(如嬰兒配方奶粉)。該組合物，例如嬰兒 配方奶粉，還可包含其他成分，例如但不限于蛋白質(zhì)源、碳水化合物源、礦物質(zhì)、維生素、核 苷、氨基酸和可選的載體、稀釋劑、添加劑或賦形劑中的至少一種，所有這些成分都是可食 用的。此處用于制備用于本發(fā)明的組合物(如嬰兒配方奶粉)的脂肪共混物可以為但不 限于任何脂肪源，例如在W005/036987中所公開的那些，其包含脂肪濃縮物(也稱為脂肪基 質(zhì))。用于本發(fā)明的脂肪共混物可以是任何包含可食用脂肪源的膳食成分。在特定的實(shí)施 方式中，脂肪共混物是基于合成的甘油三酸酯(可通過化學(xué)方式和酶促方式制造)的那些 脂肪共混物，其模擬了人乳脂肪的甘油三酸酯組成。在一個(gè)實(shí)施方式中，該脂肪基質(zhì)(以及 脂肪共混物)在式I的甘油三酸酯的sn-2位包含高水平的棕櫚酸(例如至少30% )，并在 式I的甘油三酸酯的sn-Ι和sn-3位包含高水平的不飽和脂肪酸(例如，sn_l和sn-3位的 全部脂肪酸的至少50%)。非限制性實(shí)例是名為Li (Enzymotec Ltd.，Migdal HaEmeq, Israel)的混合物。 由于脂肪共混物是通過混合脂肪基質(zhì)與其他油而制備，因此脂肪共混物的脂肪酸 組成產(chǎn)生自脂肪基質(zhì)以及與脂肪基質(zhì)混合的其他油的脂肪酸組成。用于本發(fā)明的嬰兒配方奶粉可以是人乳脂肪組合物的替代品，其包含由至少25% 的脂肪基質(zhì)和至多75%的至少一種植物油所構(gòu)成的脂肪共混物。用于制備用于本發(fā)明的混合物的植物油的非限制性實(shí)例是豆油、棕櫚樹油、卡諾
11拉油、椰子油、棕櫚仁油、向日葵油、玉米油和菜籽油，以及其他的植物油脂及其混合物。此處使用的術(shù)語“脂質(zhì)”涉及脂肪和脂肪樣化合物，這些物質(zhì)基本不溶于水，包括 但不限于甘油三酸酯、留醇、脂肪酸等等。此處使用的術(shù)語“?；鄙婕氨硎緸開C( = 0)R的有機(jī)基團(tuán)，其中R選自所述脂肪 酸殘基中的飽和、單不飽和和多不飽和的C4 C28脂肪族殘基。此處使用的術(shù)語“脂肪酸”涉及具有較長的非支化脂肪族尾(鏈)的羧酸，其或者 是飽和的，或者是不飽和的，具有一個(gè)不飽和鍵(單不飽和脂肪酸)或兩個(gè)以上不飽和鍵 (多不飽和脂肪酸)。可用于本發(fā)明的飽和脂肪酸的非限制性實(shí)例包括丁酸(Butanoicacid(丁酸)， C4:0)、己酸(Hexanoic acid (己酸)，C6:0)、辛酸(Octanoic acid (辛酸)，C8:0)、癸酸 (Decanoic acid(癸酸)，C10:0)、月桂酸(Dodecanoic acid(十二燒酸)，C12:0)、肉豆蔻 酸(Tetradecanoic acid(十四燒酸)，C14:0)、棕櫚酸(Hexadecanoic acid(十六燒酸)， C16:0)、硬脂酸(Octadecanoic acid(十八燒酸)，C18:0)、花生酸(Eicosanoic acid(二十 燒酸)，C20 0)、山崳酸(Docosanoic acid ( 二十二烷酸)，C22 0)?？捎糜诒景l(fā)明的不飽和脂肪酸的非限制性實(shí)例包括肉豆蔻腦酸(ω-5，C14:l)、 棕櫚油酸(ω-7, C16:l)、油酸(ω-9, C18:l)、亞油酸(ω-6, C18:2)、α -亞麻酸(ω-3, C18:3)、花生四烯酸(ω-6, C20:4)、二十碳五烯酸(ω-3, C20:5)、芥酸(ω-9, C22:l)和 二十二碳六烯酸(ω-3，C22:6)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，R2是飽和脂肪酸殘基。在另一個(gè)實(shí)施方式中，飽和脂 肪酸殘基選自C14-C18飽和脂肪酸殘基。在又一個(gè)實(shí)施方式中，飽和脂肪酸殘基是棕櫚酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方式中，全部棕櫚酸殘基的含量為組合物中的全部脂肪酸殘基的約 15% 約40%。在另一個(gè)實(shí)施方式中，全部棕櫚酸殘基的含量為組合物中的全部脂肪酸殘 基的約15% 約33%。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，R1和R3均為H。在一個(gè)實(shí)施方式中，在甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘基的至少13% 是棕櫚酸殘基。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘基的至 少15%是棕櫚酸殘基。在又一個(gè)實(shí)施方式中，在甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘 基的至少18%是棕櫚酸殘基。在再一個(gè)實(shí)施方式中，在甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂 肪酸殘基的至少22%是棕櫚酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方式中，組合物中的全部棕櫚酸殘基的至少30%鍵合在甘油三酸酯骨 架的sn-2位。在另一個(gè)實(shí)施方式中，全部棕櫚酸殘基的至少33%鍵合在甘油三酸酯骨架的 sn-2位。在又一個(gè)實(shí)施方式中，全部棕櫚酸殘基的至少38%鍵合在甘油三酸酯骨架的sn-2 位。在再一個(gè)實(shí)施方式中，全部棕櫚酸殘基的至少40%鍵合在甘油三酸酯骨架的sn-2位。在本發(fā)明的另外的實(shí)施方式中，R1和R3是不飽和脂肪酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方式中，在甘油三酸酯骨架的sn-Ι位和sn-3位的全部脂肪酸殘基的 至少50%是不飽和的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在甘油三酸酯骨架的sn-Ι位和sn-3位的全 部脂肪酸殘基的至少70%是不飽和的。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述不飽和脂肪酸殘基選自由 油酸、亞油酸、亞麻酸和鱈烯酸組成的組。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在sn-Ι位和sn-3位的不飽和脂肪酸殘基的至少35%是油酸殘基。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在sn-Ι位和 sn-3位的不飽和脂肪酸殘基的至少40%是油酸殘基。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在sn-Ι位和sn-3位的不飽和脂肪酸殘基的至少4%是 亞油酸殘基。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在sn-Ι位和sn-3位的不飽和脂肪酸殘基的至 少6%是亞油酸殘基。在第一實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)組合物由以下成分組成全部脂肪酸的0% 10%的C8:0脂肪酸；全部脂肪酸的0% 10%的ClO :0脂肪酸；全部脂肪酸的0% 22%的C12:0脂肪酸；全部脂肪酸的0% 15%的C14:0脂肪酸；全部脂肪酸的15% 55%的C16:0脂肪酸；其中至少30%在sn-2位；全部脂肪酸的 7%的C18:0脂肪酸；全部脂肪酸的20% 75%的C18:1脂肪酸；全部脂肪酸的2% 40%的C18:2脂肪酸；全部脂肪酸的0% 8%的C18:3脂肪酸；其他脂肪酸存在的水平為全部脂肪酸的不到8%。在第二實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)組合物由以下成分組成全部脂肪酸的5% 15%的C12:0脂肪酸；全部脂肪酸的2% 10%的C14:0脂肪酸；全部脂肪酸的17% 25%的C16:0脂肪酸；其中至少40%在sn-2位；全部脂肪酸的2% 5%的C18:0脂肪酸；全部脂肪酸的28% 45%的C18:l脂肪酸；全部脂肪酸的5% 20%的C18:2脂肪酸；全部脂肪酸的 3%的C18:3脂肪酸；其他脂肪酸存在的水平為全部脂肪酸的不到5%。還設(shè)想了所述第一和第二實(shí)施方式的所有可能的組合。例如全部脂肪酸的0% 22%的C12:0脂肪酸(來自第一實(shí)施方式)可以組合下述全部脂肪酸的2% 10%的C14:0脂肪酸；全部脂肪酸的20% 25%的C16:0脂肪酸；全部脂肪酸的2% 5%的C18:0脂肪酸；全部脂肪酸的28% 45%的C18:1脂肪酸；全部脂肪酸的5% 20%的C18:2脂肪酸；全部脂肪酸的1 % 3 %的C18 3脂肪酸；其他脂肪酸存在的水平為全部脂肪酸的 不到5%。應(yīng)當(dāng)理解，此處提供的化合物可包含手性中心。該手性中心可以為(R)或(S)構(gòu) 型，也可以是其任何混合物。因此，此處提供的化合物可以是光學(xué)純的，或者是立體異構(gòu)的 或非對映異構(gòu)的混合物，如外消旋或非外消旋混合物。實(shí)施例在下列實(shí)施例中進(jìn)一步描述本發(fā)明，這些實(shí)施例不以任何方式限制所要保護(hù)的本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1組合物表1詳述了幾種富含高含量的sn-2位的棕櫚酸的脂肪基質(zhì)(下稱“脂肪基質(zhì)”) 的含量。表2詳述了幾種脂肪源(下稱“脂肪共混物”)的含量，所述脂肪源包含用于本發(fā) 明的脂肪基質(zhì)1、7、8、9、10或11。脂肪基質(zhì)可占適用于本發(fā)明所用的配方奶粉的脂肪共混物的約30% 約83%。這些脂肪源的制備基本上如W005/036987中所述。
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實(shí)施例2嬰兒配方奶粉
嬰兒配方奶粉包含了模擬人乳脂肪組成的脂肪基質(zhì)和另外的油脂(即脂肪共混 物)，制備如下通過混合脂肪基質(zhì)和其他油制備脂肪部分。將油與嬰兒配方奶粉的其他各成分 (蛋白質(zhì)、碳水化合物、礦物質(zhì)、維生素及其他)混合在一起。使?jié){料通過壓力均質(zhì)器以獲得 穩(wěn)定的乳化液。隨后將均質(zhì)化的產(chǎn)物在噴霧干燥器中進(jìn)行干燥，從而獲得最終產(chǎn)物。其他 的添加劑可加至該干燥粉末中以獲得最終制劑。將如上所述通過混合脂肪基質(zhì)與其他的油脂而制得的脂肪部分進(jìn)一步混合其他 的營養(yǎng)物(如蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和碳水化合物)，以得到向嬰兒提供也存在于人乳中 的主要營養(yǎng)物的食品產(chǎn)品。使用壓力均質(zhì)器對營養(yǎng)物和脂肪進(jìn)行均質(zhì)化并噴霧干燥，以得 到均勻的粉末。將該粉末進(jìn)而再分散在水中(每60ml水約9g粉末)，從而得到即喂型配 方。該即喂型配方的脂肪含量為每IOOml約3. 5g，這相當(dāng)于人乳的脂肪含量，其為30g/L 40g/L。表3顯示脂肪共混物11的脂肪酸組成，該共混物包含本發(fā)明的脂肪基質(zhì)(30% )， 并混合/共混有用于產(chǎn)生本發(fā)明所用的嬰兒配方奶粉所用的脂肪源的其他油脂。表4顯示 包含表3的脂肪源的嬰兒配方奶粉的成分及性質(zhì)的詳細(xì)情況。由于脂肪共混物是通過混合 脂肪基質(zhì)與其他的油而制備，因此共混物的脂肪酸組成產(chǎn)生自脂肪基質(zhì)和與脂肪基質(zhì)混合 的其他油的脂肪酸組成。表3 所有的數(shù)字表示％ (重量/重量)，除了限定為％的比率。C16:0表示全部棕櫚酸 含量。sn-2位的C16:0表示全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％。所述比率表示 全部棕櫚酸中的sn-2位棕櫚酸的％ {(全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％ /3) / (全部棕櫚酸的％ )}X100。表 4 可以控制脂肪的水平和準(zhǔn)確的組成以得到設(shè)計(jì)為模擬不同哺乳期的嬰兒配方奶粉。表5顯示了脂肪共混物12的脂肪酸組成，所述共混物包含本發(fā)明的脂肪基質(zhì)，其 混合了用于產(chǎn)生本發(fā)明所用的嬰兒配方奶粉所用的脂肪源的其他油脂。表 5 所有的數(shù)字表示％ (重量/重量)，除了限定為％的比率。C16:0表示全部棕櫚酸 含量。sn-2位的C16:0表示全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％。所述比率表示 全部棕櫚酸中的sn-2位棕櫚酸的％ {(全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％ /3) / (全部棕櫚酸的％ )}X100。實(shí)施例3脂肪共混物對胃腸道(GI)耐受性和腸道成熟的影響本發(fā)明的脂肪基質(zhì)和脂肪共混物對GI耐受性和腸道成熟的影響通過下列動(dòng)物 模型的臨床研究進(jìn)行檢驗(yàn)(i)早產(chǎn)大鼠(Ito Y et al, Intestinalmicrocirculatory dysfunction during the development of experimentalnecrotizing enterocolitis Pediatric Research 2007),禾口(ii)新生大鼠模型(Dvorak B,Epidermal growth factor reduces the development of necrotizingenterocolitis in a neonatal rat model,Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002)，兩種均代表早產(chǎn)兒模型。研究包括三組動(dòng)物，這三組動(dòng)物接受的配方的區(qū)別僅在于其脂肪組成，主要是棕 櫚酸含量的不同。一組施用標(biāo)準(zhǔn)大鼠乳替代品(模擬大鼠乳)，第二組施用下述大鼠乳替代 品，該替代品包含的棕櫚酸含量為全部脂肪酸的約8%，其中約10%在甘油三酸酯的sn-2 位，第三組施用下述大鼠乳替代品，該替代品包含脂肪共混物1 (參見表2)，其含有的全部 棕櫚酸脂肪含量為脂肪酸的約20%，其中約50%在甘油三酸酯的sn-2位。用該配方喂養(yǎng) 所有組三個(gè)月，在基線處和在研究期間大約每個(gè)月通過詳盡已知的GI耐受性和一般健康 對其GI耐受性進(jìn)行檢驗(yàn)。此外，研究對象的腸道成熟通過在研究結(jié)束時(shí)的組織學(xué)檢測進(jìn)行 檢驗(yàn)。通過調(diào)查表的統(tǒng)計(jì)分析和組織學(xué)檢測確定，第一組和第三組的動(dòng)物表現(xiàn)出比第二組 更好的GI耐受性和腸道成熟。通過調(diào)查表的統(tǒng)計(jì)分析和組織學(xué)檢測確定，第三組的動(dòng)物顯 示出比第一組甚至更好的GI耐受性和腸道成熟。實(shí)施例4 基于脂肪共混物6的飲食對斷奶后大鼠的腸道生長、發(fā)育和成熟的影響通過動(dòng)物模型研究來探討脂肪共混物(參見表2)對增強(qiáng)腸道生長、發(fā)育和成熟的 功效。用富含高含量的sn-2位棕櫚酸的飲食(脂肪共混物6)喂養(yǎng)的動(dòng)物與使用包含類似 濃度的棕櫚酸或者低濃度的棕櫚酸的相似飲食喂養(yǎng)的動(dòng)物進(jìn)行比較。研究設(shè)計(jì)由 Harlan Laboratories (Rehovot, Israel)得到 60 只 21 日齡、剛剛斷奶且體重 為40g 50g的雄性Sprague-Dawley大鼠。將大鼠隨機(jī)分配，接受三種不同飲食中的一種(參見表6和7)；提供的飲食的區(qū) 別僅在于其脂肪含量不同1.飲食A:具有含21%棕櫚酸(其中48%在sn-2位酯化)的油的飲食(包含脂 肪共混物6 (參見表2))；2.飲食B 具有含22%棕櫚酸(其中13%在sn-2位酯化)的油的飲食；3.飲食C 具有含8%棕櫚酸(其中11%在sn-2位酯化)的油的飲食。研究分兩階段進(jìn)行1.在第一階段中，飲食治療施用一周。將大鼠隨機(jī)分配至三組中的一組，各組包括
2212只大鼠。2.在第二階段中，飲食治療施用兩周。將大鼠隨機(jī)分配至三組中的一組，各組包括 8只大鼠。在給喂的第八天或第十五天之后，麻醉動(dòng)物并將其殺死，移除小腸并分成三段 十二指腸、近端空腸和末端回腸。小腸各段用于大體病理學(xué)、形態(tài)學(xué)和組織學(xué)檢測，這些檢 測可顯示研究動(dòng)物的腸道成熟度。飲食所有的飲食在營養(yǎng)物含量方面均相同，區(qū)別僅在于油的類型不同(表6和7)。表6 補(bǔ)充油的脂肪酸組成(全部脂肪酸的％ ) 所有的數(shù)字表示％ (重量/重量)，除了限定為％的比率。C16:0表示全部棕櫚酸 含量。sn-2位的C16:0表示全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％。所述比率表示 全部棕櫚酸中的sn-2位棕櫚酸的％ {(全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％ /3) / (全部棕櫚酸的％ )} X 100。sn-2位的全部飽和脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸表示全部sn_2 位的飽和脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％。表7:飲食組成 食物消耗在喂養(yǎng)期間，體重和未消耗食物每周稱重兩次。計(jì)算食物攝入，并以克每天表示。 對應(yīng)于攝取的食物的量計(jì)算能量和脂肪的攝入。腸道大體病理學(xué)和形態(tài)學(xué)分析移除小腸并將其分為三段十二指腸、近端空腸和末端回腸。稱重各段，然后計(jì)算 每cm腸長的重量。打開各段；在三個(gè)不同點(diǎn)測定每一段的腸周長，然后求算平均腸周長。 刮除粘膜并稱重。腸道和粘膜重量以mg/cm腸長/IOOg體重表示。組織學(xué)變化的分析由空腸和回腸的剩余物準(zhǔn)備組織學(xué)切片。用于組織學(xué)的腸道沿著系膜對向部的邊緣(antimesenteric border)剪開，并 用冰鹽水洗滌。緊靠特賴茨韌帶末端的近端空腸部分和回盲交界處附近的末端回腸部分 在5%的福爾馬林中固定24小時(shí)，用無水酒精洗滌，并包埋在石蠟中。以標(biāo)準(zhǔn)化方式準(zhǔn)備 5ym的橫切片，然后用蘇木精和曙紅染色。使用Image Pro Plus 4圖像分析軟件(Media Cybernetics, Baltimore, Maryland, USA)測定絨毛高度和隱窩深度，并用μπι表示。腸上皮細(xì)胞的增殖使用以試劑盒形式提供的生物素化的單克隆抗-BrdU抗體(ZymedLaboratories， Inc, San Francisco, CA)評估隱窩細(xì)胞的增殖。在殺死動(dòng)物之前2小時(shí)，腹膜內(nèi)注射濃度為lml/100g體重的標(biāo)準(zhǔn)5-溴脫氧尿苷(5-BrdU)標(biāo)記試劑(Cat. No. 00-0103, Zymed Laboratories, Inc，San Francisco, CA)。將組織切片(5 μ m)脫蠟，用二甲苯和梯度酒精 再水合。將切片在檸檬酸鹽緩沖液中加熱10分鐘，用變性溶液預(yù)處理20分鐘，用封閉液溫 育10分鐘。將各段用生物素化的單克隆抗-BrdU抗體染色60分鐘，然后用抗生蛋白鏈菌 素_過氧化物酶處理10分鐘。通過用DUB混合物溫育各段3分鐘 5分鐘得到BRDU陽性 顯色。增殖指數(shù)確定為每10個(gè)隱窩中對于BrdU染色顯陽性的隱窩細(xì)胞的比率(Shamir et al. ,2005,Digestive Diseasesand Sciences,Vol. 50, No.7pp.1239-1244 and Sukhotnik et al.，2008DigDis Sci. ；Vol 53(5) :1231_9)。結(jié)果能量攝取、食物和脂肪攝取在所有動(dòng)物中，在兩周的時(shí)間內(nèi)食物攝取明顯增加，各試驗(yàn)組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著
性差異。腸道粘膜參數(shù)飲食治療對于腸道粘膜參數(shù)的影響在腸道的遠(yuǎn)端和近端是不同的。測試的腸道粘 膜參數(shù)是腸周長、腸重量和粘膜重量。這些參數(shù)顯示腸道組織的生理發(fā)育。在近端腸道中在近端腸道(空腸和十二指腸)中，喂養(yǎng)一周后，來自飲食A組的大鼠相比于飲食 C組表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著更高的腸重量和粘膜重量(表8)。應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)的是，飲食C中棕櫚 酸的去除產(chǎn)生了粘膜發(fā)育不全的初步跡象，該跡象在飲食治療2周后更為明顯。喂養(yǎng)2周 后，來自A組的大鼠與飲食B和飲食C的動(dòng)物相比表現(xiàn)出空腸中腸重量增加的趨勢。用飲 食A喂養(yǎng)的動(dòng)物的粘膜重量明顯高于用飲食C喂養(yǎng)的動(dòng)物的粘膜重量(ρ = 0. 027)(圖1， 表8)。在回腸中在回腸中，喂養(yǎng)一周后飲食A與飲食B之間不存在腸重量及粘膜重量的差異。不 過，接受飲食A和飲食B的大鼠相比于飲食C的動(dòng)物表現(xiàn)出更高的粘膜重量(表8)。喂養(yǎng) 2周后，飲食A產(chǎn)生了比飲食C更高的腸重量和粘膜重量。此外，飲食A的大鼠顯示出比飲 食B組更高的回腸粘膜重量。(ρ = 0.048)(表8)。表8 飲食治療對腸道粘膜參數(shù)的影響 圖1顯示飲食治療兩周后飲食A相比于飲食B和飲食C具有對粘膜重量的整體提 高效果。腸和粘膜重量以mg/cm腸長/IOOgr體重(BW)表示。微觀變化一周后，給喂飲食C相比于其他組產(chǎn)生了明顯縮短的回腸絨毛(表9)。那些效果 在喂養(yǎng)兩周后增強(qiáng)；飲食A相比于飲食B和飲食C產(chǎn)生了明顯更大的微觀變化(圖2，表 9)。用飲食A喂養(yǎng)的動(dòng)物相比于飲食B的動(dòng)物顯示出空腸中(P = 0. 028)和回腸中(P = 0.018)更高的絨毛，以及相比于飲食C動(dòng)物的回腸中(P = O. 033)更高的絨毛。飲食A的 動(dòng)物相比于飲食B和飲食C還顯示出空腸中顯著更深的隱窩(分別為P = 0.015、0. 0016)， 和相比于飲食B和C的回腸中顯著更深的隱窩(分別為P = O. 024、0. 04)。另外，組織學(xué)和 微觀參數(shù)測定結(jié)果之間顯示出明顯的相關(guān)性。
表9飲食治療對于微觀變化的影響
圖2顯示飲食治療兩周后飲食A相比于飲食B和C具有對微觀腸外觀的整體改善 效果。腸上皮細(xì)胞增殖在空腸中用飲食A喂養(yǎng)動(dòng)物一周后產(chǎn)生了與用飲食B和C喂養(yǎng)動(dòng)物相比細(xì)胞增殖的顯著增 加，用飲食B喂養(yǎng)動(dòng)物與用飲食C喂養(yǎng)大鼠相比增加了細(xì)胞增殖。僅用飲食A喂養(yǎng)大鼠兩 周后，相比于飲食C大鼠顯示出明顯更大的空腸增殖指數(shù)(P = 0. 036)(圖3，表10)。在回腸中在喂養(yǎng)一周后，飲食A組相比于飲食C組產(chǎn)生了強(qiáng)烈的腸上皮細(xì)胞的增殖刺激 (表 10)。在喂養(yǎng)二周后，飲食A組產(chǎn)生了強(qiáng)烈的回腸中腸上皮細(xì)胞的增殖刺激(表10)。用 飲食A喂養(yǎng)的動(dòng)物相比于飲食B和飲食C動(dòng)物顯示出顯著更大的回腸的增殖指數(shù)(分別為 P = O. 0004,0. 0001)(圖3，表10)。應(yīng)當(dāng)注意，相比于其他組，用飲食C喂養(yǎng)得到了最低的 回腸腸上皮細(xì)胞增殖率(表10)。表10飲食治療對腸上皮細(xì)胞增殖的影響 因此，采用飲食A的治療產(chǎn)生了在第一周飲食治療后檢測到的增強(qiáng)的腸道發(fā)育和 成熟，并在兩周的治療后變得更為顯著。絨毛高度的明顯增加被視為該組動(dòng)物中吸收表面 積增大的重要指標(biāo)。通過形態(tài)測定證實(shí)的隱窩細(xì)胞的增多以及個(gè)體細(xì)胞的過度生長，這是 經(jīng)歷增加的細(xì)胞增殖和/或修復(fù)的組織的特征。飲食C中棕櫚酸的去除使得空腸尤其是回腸中產(chǎn)生發(fā)育不全的變化。這些變化在 飲食治療一周后顯現(xiàn)，并在飲食治療2周后增多，其突出了去除棕櫚酸的有害影響。另外， 用低棕櫚酸飲食喂養(yǎng)的大鼠顯示出腸上皮細(xì)胞增殖的下降，這可視為腸細(xì)胞質(zhì)量下降和粘 膜發(fā)育不全的主要機(jī)制。腸細(xì)胞更新的動(dòng)態(tài)過程受到隱窩細(xì)胞增殖率、沿隱窩-絨毛軸的移動(dòng)、腸上皮細(xì) 胞分化和細(xì)胞經(jīng)凋亡死亡等因素的影響。給喂飲食A之后細(xì)胞增殖的顯著增加伴隨著細(xì)胞 凋亡增加的趨勢，表明腸道生長時(shí)細(xì)胞的更新加速?？傊吆康拇罅吭趕n-2位結(jié)合的棕櫚酸是斷奶后大鼠的腸道生長的重要因 素。飲食A相比于包含標(biāo)準(zhǔn)植物油與具有高含量棕櫚酸或低含量棕櫚酸的組合物混合的混 合物的飲食產(chǎn)生了顯著增強(qiáng)的腸道發(fā)育、生長和成熟。顯著增強(qiáng)的腸道發(fā)育、生長和成熟在 飲食治療1周后顯現(xiàn)，并在飲食治療2周后加強(qiáng)。飲食A相比于其他飲食還產(chǎn)生更大的對 于腸上皮細(xì)胞增殖和更新的刺激效果。鈣皂形成的減少是高度認(rèn)可和已知的富含在sn-2位酯化的棕櫚酸的油和具 有低含量棕櫚酸的油的有益效果(Koo et al.，2006，Journal ofAmerican college of Nutrition, Vol 25,No 2 pp 117-122)。該效果在這些油中是相似的，并已知?dú)w因于減少了 與食物消化有關(guān)的不適和癥狀。由于飲食A(在以上實(shí)例中)相比于飲食C對于腸道發(fā)育和成熟顯示出優(yōu)異的且 明顯不同的效果，因此顯然這些增強(qiáng)腸道發(fā)育和成熟的效果并不涉及減少鈣皂形成的效 果，也與其無關(guān)。實(shí)施例5 脂肪共混物對Caco-2細(xì)胞增殖和分化的影響在Caco-2細(xì)胞中檢驗(yàn)脂肪共混物對于組織培養(yǎng)物中的增殖和分化的影響。在許 多定性和定量研究中Caco-2細(xì)胞系一直用于作為體外腸上皮細(xì)胞模型。細(xì)胞在緊密連接 的滲透性插入物上生長，并實(shí)現(xiàn)了許多小腸上皮細(xì)胞的形態(tài)和功能特征(Artursson P.， Karlsson J.，1991，Biochem. Biophys. Res. Commun.，Vol 175,880—885)。該細(xì)胞模型體系展示了本發(fā)明的脂肪補(bǔ)充物通過細(xì)胞增殖和旁路滲透性對于腸道成熟的積極作用。研究設(shè)計(jì)Caco-2 細(xì)胞，源自人直腸癌，由 ATCC(American Type CultureCollection, ATCC Number HTB-37)提供。細(xì)胞在CaC0-2Gr0wth Medium中在無菌條件下增殖。在處理之前將細(xì)胞繼代培養(yǎng) 兩次。細(xì)胞培養(yǎng)物在37士 1°C、5士0. 5% CO2和95士5%的濕度下在塑料瓶(NUNC)中溫育。 Caco-2細(xì)胞分化和成熟通過細(xì)胞匯合和旁路轉(zhuǎn)運(yùn)評估。匯合和旁路轉(zhuǎn)運(yùn)在接種于聚酯膜插入物上的Caco-2細(xì)胞中測定匯合和旁路轉(zhuǎn)運(yùn)。在接種后7天 和9天通過跨上皮電阻(TEER)測定的評估來測定薄膜插入物上的細(xì)胞單層的匯合和旁路 轉(zhuǎn)運(yùn)。TEER測定已被普遍確立為最方便、可靠和非破壞性的用于體外評估和監(jiān)測上皮組織 培養(yǎng)物的生長的方法。細(xì)胞單層的匯合是腸道成熟度的模型，通過TEER的增大確定。使用 Millicell-ERS(Millipore)電極在包含2 μ M的測試物的生長培養(yǎng)基中在細(xì)胞溫育的過程 中測定TEER。(i)含有低棕櫚酸含量(全部脂肪酸的8%，其中約10%在sn-2位)的油補(bǔ)充物 (LP0-參見表11)。(ii)含有高棕櫚酸含量(全部脂肪酸的20%，其中約50%在sn-2位)的脂肪共 混物7 (參見表2)。表11 最終檢測濃度稀釋之前的補(bǔ)充油和脂肪共混物的脂肪酸組成(全部脂肪酸 的％ ) 所有的數(shù)字表示％ (重量/重量)，除了限定為％的比率。C16:0表示全部棕櫚酸 含量。sn-2位的C16:0表示全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％。所述比率表示 全部棕櫚酸中的sn-2位棕櫚酸的％ {(全部sn-2位的脂肪酸中的sn-2位棕櫚酸的％ /3) / (全部棕櫚酸的％ )}X100。結(jié)果匯合參數(shù)接種后七天，存在LPO油時(shí)Caco-2細(xì)胞的TEER值為233士59 Ω/cm2。額外再 經(jīng)過兩天之后，即接種9天后，Caco-2細(xì)胞的TEER值增加了 119.4Q/cm2(圖4B)，達(dá)到 352. 5士37 Ω/cm2 (圖4A)。在存在脂肪共混物7時(shí)，接種后七天Caco-2細(xì)胞的TEER值為 330士 11 Ω/cm2，額外再經(jīng)過兩天之后，該值為389士26Q/cm2(圖4A)，即增加了 59. 2 Ω / cm2(圖4B)。對照細(xì)胞的TEER測定結(jié)果顯示出在接種7天和9天后相應(yīng)地為325士 12 Ω / cm2和432士 11 Ω/cm2 (圖4A)；總增加為107. 2 Ω/cm2,即，超過了存在脂肪共混物7時(shí)的情 況(圖4B)。隨著層增長率飽和接近全單層，LPO油中的變化為最高，表明其是三種油中差 異最小的。結(jié)論體外模型顯示，脂肪共混物7的溫育未干擾Caco-2細(xì)胞的增殖和分化，這與 采用具有低含量棕櫚酸的油的溫育情況相反。該結(jié)果表明，脂肪共混物7促進(jìn)了腸道發(fā)育 和更快的成熟，而具有低含量棕櫚酸的油干擾了腸道的發(fā)育。實(shí)施例6 飲食中棕櫚酸的含量對于動(dòng)物模型中短腸綜合征的恢復(fù)和治療的影響通過動(dòng)物模型研究來調(diào)查具有不同棕櫚酸含量的飲食對于預(yù)防和治療短腸綜合 征以及改善腸道成熟和適應(yīng)的效果。研究設(shè)計(jì)將采用再吻合術(shù)進(jìn)行腸橫切或進(jìn)行部分小腸切除后的動(dòng)物隨機(jī)分配至僅在棕櫚 酸含量上不同的飲食組中的一組。喂養(yǎng)一段時(shí)間后，將動(dòng)物殺死，研究腸道的組織學(xué)參數(shù)和 腸上皮細(xì)胞的增殖與凋亡。研究分兩階段進(jìn)行1.在第一階段中，在誘發(fā)短腸綜合征之前和之后施用飲食治療，并監(jiān)測不同飲食 對于由該綜合征恢復(fù)的效果。2.在第二階段中，在誘發(fā)短腸綜合征之后施用飲食治療，并監(jiān)測不同飲食對于改 善腸道適應(yīng)由綜合征恢復(fù)的效果。
30
飲食所有的飲食在營養(yǎng)物含量方面均相同，區(qū)別僅在于棕櫚酸的含量不同1.飲食I 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的至少33%在sn-2位酯化。2.飲食II 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化3.飲食III 具有含大約8%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化。操作麻醉動(dòng)物并進(jìn)行手術(shù)；由正中切口打開腹部。在經(jīng)歷部分小腸切除的動(dòng)物中，進(jìn) 行75%的切除，保留弓形血管，留下5cm的近端空腸和IOcm的遠(yuǎn)端回腸。通過首尾相連 的單層吻合術(shù)恢復(fù)腸道的連貫。在經(jīng)歷采用再吻合術(shù)進(jìn)行腸切除的動(dòng)物中，將腸道經(jīng)分開 并進(jìn)行再吻合，而不經(jīng)切除。剖腹術(shù)后，所有的動(dòng)物在手術(shù)后的第一個(gè)24小時(shí)給喂飲水 (Sukhotnik et al. ,2004, Pediatr Surg Int Vol 20(4) :235_239)。食物消耗喂養(yǎng)期間，手術(shù)前后稱重體重和未消耗食物。計(jì)算食物攝入，并以克每天表示。對 應(yīng)于攝取的食物的量計(jì)算能量和脂肪的攝入。研究表明，早期用飲食I喂養(yǎng)動(dòng)物產(chǎn)生了由短腸綜合征恢復(fù)的改善。此外，誘發(fā)短 腸綜合征之后給喂飲食I的動(dòng)物產(chǎn)生了總腸壁和粘膜重量的增大，和更好的短腸綜合征的 恢復(fù)率，如腸道切除/誘發(fā)之后的粘膜適應(yīng)的改善所示。接受飲食I的動(dòng)物相比于接受其 他飲食的動(dòng)物來說在剩下的腸道中具有更大的粘膜增生反應(yīng)以及更大的對于腸道再生長 的刺激效果。實(shí)施例7 飲食中的棕櫚酸含量對于預(yù)防和治療動(dòng)物模型的壞死性小腸結(jié)腸炎 (NEC)的效果在缺氧-低溫-配方奶粉喂養(yǎng)的早產(chǎn)動(dòng)物模型研究中調(diào)查具有不同棕櫚酸含量的 飲食對于預(yù)防和治療壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)的效果。研究設(shè)計(jì)動(dòng)物隨機(jī)分配至僅在棕櫚酸含量上不同的飲食組中的一組。研究分兩階段進(jìn)行1.在第一階段中，喂養(yǎng)一段時(shí)間后，動(dòng)物經(jīng)歷由缺氧-低溫法進(jìn)行的NEC誘發(fā)，并 監(jiān)測不同飲食對于NEC的發(fā)生和嚴(yán)重程度以及生存率的效果。2.在第二階段中，誘發(fā)NEC之后施用飲食治療，并監(jiān)測不同飲食對于改善腸道恢 復(fù)的效果。NEC誘發(fā)步驟通過下列步驟發(fā)展實(shí)驗(yàn)性NEC 新生的幼犬，從2小時(shí)齡起，然后每12小時(shí)，在封 閉的透明塑料室中呼吸100%氮?dú)?0秒以經(jīng)歷缺氧，然后在4°C受冷10分鐘以經(jīng)歷低溫。飲食所有的飲食在營養(yǎng)物含量方面均相同，區(qū)別僅在于棕櫚酸的含量不同。1.飲食I 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的至少33%在sn-2位
31酯化。2.飲食II 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化3.飲食III 具有含大約8%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化。分析為研究NEC的發(fā)生和嚴(yán)重程度，采用測試飲食的第一次喂養(yǎng)于24小時(shí)齡開始。幼 犬隨機(jī)分配至僅在棕櫚酸含量上不同的飲食組中的一組。動(dòng)物自出生起經(jīng)口胃管飼喂。 所有的幼犬均每小時(shí)觀察NEC的臨床跡象，如腹脹、呼吸窘迫和嗜睡。出生后96小時(shí)，或 者出現(xiàn)疾病跡象時(shí)，幼犬經(jīng)斷頭來實(shí)施安樂死(Travadi et al.，2006，Pediatr Res. Vol 60(2) 185-9) 0安樂死之后，處理動(dòng)物的腸道組織，并檢驗(yàn)損害(NEC)的大體和組織學(xué)評 分。為研究飲食對于腸道恢復(fù)的影響，誘發(fā)NEC后用不同的飲食喂養(yǎng)動(dòng)物。腸上皮細(xì) 胞遷移(重建)和增殖是腸道損傷恢復(fù)的關(guān)鍵因素，對其進(jìn)行研究。為研究不同飲食對于腸上皮細(xì)胞的增殖和遷移的影響，殺死動(dòng)物前18小時(shí)腹膜 內(nèi)施用溴脫氧尿苷，使腸道經(jīng)歷溴脫氧尿苷免疫組織化學(xué)(Feng J，Besner GE.，2007，J Pediatr Surg. Vol ；42(1) :214_20)。研究表明，早期用飲食I喂養(yǎng)動(dòng)物降低了 NEC的發(fā)生和嚴(yán)重程度。此外，對感染了 NEC疾病的臨床跡象的動(dòng)物給喂飲食I能夠預(yù)防整體腸道完整性的損害或粘膜的缺失。接 受飲食I的動(dòng)物相比于接受其他飲食的動(dòng)物顯示出較少的NEC深度病理改變。高含量sn-2位棕櫚酸保護(hù)腸道免于NEC的能力部分是由于其保持腸上皮細(xì)胞遷 移和增殖的能力所致。實(shí)施例8 飲食中的棕櫚酸含量對于預(yù)防和治療動(dòng)物模型的炎性腸疾病的影響在動(dòng)物模型研究中調(diào)查具有不同棕櫚酸含量的飲食對于預(yù)防和治療諸如克羅恩 病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)等炎性腸疾病的影響。研究設(shè)計(jì)在動(dòng)物飲用水中給喂葡聚糖硫酸鈉(DSS)而使其感染炎性腸疾病，將這些動(dòng)物隨 機(jī)分配至僅在棕櫚酸含量上不同的飲食組中的一組。研究分兩階段進(jìn)行1.在第一階段中，飲食治療一段時(shí)間后，將DSS添加至動(dòng)物的飲用水中，監(jiān)測不同 飲食對于預(yù)防或減少炎性腸疾病的發(fā)生或嚴(yán)重程度的效果。2.在第二階段中，在動(dòng)物的飲用水中施用DSS后進(jìn)行飲食治療，研究不同飲食對 于改善由炎性腸疾病恢復(fù)的效果。飲食所有的飲食在營養(yǎng)物含量方面均相同，區(qū)別僅在于棕櫚酸含量的不同。1.飲食I 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的至少33%在sn-2位酯化。2.飲食II 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化
3.飲食III 具有含大約8%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化。炎性腸疾病的誘發(fā)在嚙齒動(dòng)物的引用水中施用DSS廣泛用作UC的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，這是因?yàn)檫@會導(dǎo)致急性 和慢性結(jié)腸炎，并且與人類UC具有相同的臨床及組織病理學(xué)特征。DSS是硫酸鹽化的聚合 物，其以劑量相關(guān)方式誘發(fā)片狀粘膜損傷。其還誘發(fā)炎癥，首先通過對上皮細(xì)胞的直接毒性 作用，由此導(dǎo)致嚴(yán)重結(jié)腸炎的感染(Vicario et al，2007，J Nutr. ；Vol 137(8) 1931-7)。食物消耗喂養(yǎng)期間，稱重體重和未消耗食物。計(jì)算食物攝入，并以克每天表示。對應(yīng)于攝取 的食物的量計(jì)算能量和脂肪的攝入。分析對于預(yù)防性的研究，將動(dòng)物隨機(jī)分配至不同的飲食。喂養(yǎng)一段時(shí)間后，各組隨機(jī) 分成兩個(gè)試驗(yàn)組，一組在飲用水中接受DSS，另一組僅接受自來水，通過測定在腸道炎癥反 應(yīng)中涉及的一些介體(如白細(xì)胞三烯B(4) (LTB (4))、腫瘤壞死因子α (TNF α )和一氧化 氮(NO)等)的生成，監(jiān)測炎性腸疾病的發(fā)生和嚴(yán)重程度(Camuesco D，2005，J Nutr. Vol ； 135(4) :687-94)。對于治療性的研究，將炎性腸疾病的幸存?zhèn)€體隨機(jī)分配至飲食組，并用不同飲食 喂養(yǎng)。在治療一段時(shí)間后，監(jiān)測動(dòng)物的臨床表現(xiàn)(體重減輕、血痢、身體活動(dòng)減少、嚴(yán)重貧 血、結(jié)腸長度縮短和肛周損傷)(Kishimoto S, 2000, Dig Dis Sci. Vol ；45(8) 1608-16) 殺死動(dòng)物，通過組織病理學(xué)表現(xiàn)(病理病變記分)和粘膜茸毛的高度(VH)、隱窩 深度(CD)、總粘膜重量、溴脫氧尿苷(BrdU)結(jié)合、細(xì)胞增殖指數(shù)以及作為腸道適應(yīng)性生長 的尺度的全厚DNA和蛋白含量的分析評估腸道適應(yīng)(Evans ME, 2005, JPEN J Parenter Enteral Nutr. Vol ；29 (5) :315_20)。研究表明，早期用飲食I喂養(yǎng)動(dòng)物降低了炎性腸疾病的發(fā)生。此外，在誘發(fā)炎性腸 疾病之后用飲食I喂養(yǎng)動(dòng)物首先減少了結(jié)腸粘膜中發(fā)生的事件(上皮粘膜屏障的損壞和 較高的中性粒細(xì)胞的浸潤)，其次降低了伴有腹瀉和結(jié)腸粘膜病變的嚴(yán)重結(jié)腸炎的發(fā)作。在 用飲食I喂養(yǎng)動(dòng)物之后顯示出粘膜功能和炎癥的總體正向變化。實(shí)施例9 棕櫚酸含量對動(dòng)物模型的短腸綜合征相關(guān)的能量攝取的影響在動(dòng)物模型研究中調(diào)查具有不同棕櫚酸含量的飲食對于短腸綜合征相關(guān)的能量 吸收、熱量攝取和脂肪吸收不良的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)將通過部分小腸切除誘發(fā)短腸綜合征的動(dòng)物隨機(jī)分配至僅在棕櫚酸含量上不同 的飲食組中的一組。喂養(yǎng)后，監(jiān)測不同飲食對于脂肪吸收不良和腸道吸收的影響。通常認(rèn) 為胃腸道癥狀得到改善時(shí)，由飲食獲得的能量的量得到提高。操作麻醉動(dòng)物并進(jìn)行手術(shù)；由正中切口打開腹部。在經(jīng)歷部分小腸切除的動(dòng)物中，進(jìn) 行75%的切除，保留弓形血管，留下5cm的近端空腸和IOcm的遠(yuǎn)端回腸。通過首尾相連 的單層吻合術(shù)恢復(fù)腸道的連貫。在經(jīng)歷采用再吻合術(shù)進(jìn)行腸切除的動(dòng)物中，將腸道分開 并進(jìn)行再吻合，而不經(jīng)切除。剖腹術(shù)后，所有的動(dòng)物在手術(shù)后的第一個(gè)24小時(shí)給喂飲水(Sukhotniket al. ,2004, Pediatr Surg Int Vol 20(4) :235_239)。食物消耗喂養(yǎng)期間，手術(shù)前后稱重體重和未消耗食物。計(jì)算食物攝入，并以克每天表示。分析確定糞便中的能量損失和糞便中的能量來源。飲食治療后，收集糞便樣品，以作為食物記錄。分析糞便的總能量、總氮、脂肪含量 和脂肪酸的濃度。測試總熱量排泄。通過對凍干糞便樣品進(jìn)行彈道式量熱法(Miller PS, Payne PR. 1959, A ballistic bombcalorimeter. Br. J Nutr ；Vol 13 :501_8)，測定每克糞 便樣品的能量含量。(Murphy et al. , 1991,Archives of Disease in Childhood ；Vol 66 495-500)飲食所有的飲食在營養(yǎng)物含量方面均相同，區(qū)別僅在于棕櫚酸含量的不同。1.飲食I 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的至少33%在sn-2位酯化。2.飲食II 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化3.飲食III 具有含大約8%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化。研究表明，飲食I改善了短腸綜合征中的持續(xù)的脂肪吸收不良和能量攝取，并減 少了糞便能量排出。此外，誘發(fā)短腸綜合征后使動(dòng)物接受飲食I獲得了更好的短腸綜合征的恢復(fù)率。實(shí)施例10 飲食中的棕櫚酸含量對于預(yù)防動(dòng)物模型中與炎性腸疾病有關(guān)的腸道 通透性變化的影響在動(dòng)物模型研究中調(diào)查具有不同棕櫚酸含量的飲食對于預(yù)防與如克羅恩病(CD) 和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)等炎性腸疾病有關(guān)的腸道通透性改變的影響。研究設(shè)計(jì)在動(dòng)物飲用水中給喂葡聚糖硫酸鈉(DSS)而使其感染炎性腸疾病，將這些動(dòng)物隨 機(jī)分配至僅在棕櫚酸含量上不同的飲食組中的一組。給喂DSS后施用飲食治療，利用來自 腸道的細(xì)菌脂多糖(LPS)滲漏，通過檢驗(yàn)施加腸道載入之后的血液中的LPS水平來研究不 同飲食對于腸道通透性的影響。飲食所有的飲食在營養(yǎng)物含量方面均相同，區(qū)別僅在于棕櫚酸含量的不同。1.飲食I 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的至少33%在sn-2位酯化。2.飲食II 具有含至少15%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化3.飲食III 具有含大約8%棕櫚酸的油的飲食，棕櫚酸中的約10%在sn-2位酯 化。炎性腸疾病的誘發(fā)
在嚙齒動(dòng)物的引用水中施用DSS廣泛用作UC的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，這是因?yàn)檫@會導(dǎo)致急性 和慢性結(jié)腸炎，并且與人類UC具有相同的臨床及組織病理學(xué)特征。DSS是硫酸鹽化的聚合 物，其以劑量相關(guān)方式誘發(fā)片狀粘膜損傷。其還誘發(fā)炎癥，首先通過對上皮細(xì)胞的直接毒性 作用，由此導(dǎo)致嚴(yán)重結(jié)腸炎的發(fā)展(Vicario et al，2007，J Nutr. ；Vol 137(8) 1931-7)。食物消耗喂養(yǎng)期間，稱重體重和未消耗食物。計(jì)算食物攝入，并以克每天表示。對應(yīng)于攝取 的食物的量計(jì)算能量和脂肪的攝入。分析將炎性腸疾病的幸存?zhèn)€體隨機(jī)分配至飲食組，并用不同飲食喂養(yǎng)。在治療一段時(shí) 間后，監(jiān)測動(dòng)物的臨床表現(xiàn)(體重減輕、血痢、身體活動(dòng)減少、嚴(yán)重貧血、結(jié)腸長度縮短和肛 周損傷)(Kishimoto S,2000,Dig Dis Sci. Vol ；45(8) 1608-16)，并進(jìn)行腸道通透性試驗(yàn)。腸道通透性試驗(yàn)為評估不同飲食對于腸道通透性的影響，通過檢驗(yàn)施加腸道載入之后的血液中的 細(xì)菌脂多糖(LPS ；大腸桿菌血清型0111:B4 ;Sigma-AldriCh)的水平，利用來自腸道的LPS 滲漏。LPS灌喂給動(dòng)物。載入LPS后30分鐘，殺死動(dòng)物，收集血液以用于通過使用鱟變形細(xì)胞 溶解物(LAL)試劑盒(BioWhittaker，Walkersville，MD)的內(nèi)毒素檢驗(yàn)進(jìn)行分析(Lambert et al. ,2003,J Pharmacol Exp Ther.Vol 305(3) :880_6)。誘發(fā)炎性腸疾病之后用飲食I喂養(yǎng)動(dòng)物能夠避免增大的腸道通透性。飲食I的給 喂相比于飲食II和飲食III可引起血漿內(nèi)毒素水平的降低。該結(jié)果顯示，用飲食I喂養(yǎng)的動(dòng) 物的腸道能夠在從炎性腸疾病恢復(fù)期間使屏障功能的下降恢復(fù)。
權(quán)利要求
一種脂質(zhì)組合物用于制備營養(yǎng)、藥物或保健品組合物或功能性食品、用于預(yù)防和治療胃腸道疾病和紊亂、以及用于促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的應(yīng)用，所述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯其中，R1、R2和R3為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或?；渲兴鲺；x自由飽和脂肪酸殘基、單不飽和脂肪酸殘基和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸殘基的含量為所述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15％～約55％。FPA00001153550400011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，R2是飽和脂肪酸殘基。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中，所述飽和脂肪酸殘基選自C14-C18飽和脂肪酸殘基。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中，所述飽和脂肪酸殘基是棕櫚酸殘基。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述全部棕櫚酸殘基的含量為所述組合物中的全 部脂肪酸殘基的約15% 約40%。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中，所述全部棕櫚酸殘基的含量為所述組合物中的全 部脂肪酸殘基的約15% 約33%。
7.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，和R3均為H。
8.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘基 的至少13%是棕櫚酸殘基。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中，所述甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘基 的至少15%是棕櫚酸殘基。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中，所述甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘基 的至少18%是棕櫚酸殘基。
11.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其中，所述甘油三酸酯骨架的sn-2位的全部脂肪酸殘 基的至少22%是棕櫚酸殘基。
12.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，全部棕櫚酸殘基的至少30%鍵合在所述甘油三酸 酯骨架的sn-2位。
13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其中，所述組合物中的全部棕櫚酸殘基的至少33%鍵 合在所述甘油三酸酯骨架的sn-2位。
14.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其中，全部棕櫚酸殘基的至少38%鍵合在所述甘油三 酸酯骨架的sn-2位。
15.如權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其中，全部棕櫚酸殘基的至少40%鍵合在所述甘油三 酸酯骨架的sn-2位。
16.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，隊(duì)和R3是不飽和脂肪酸殘基。
17.如權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其中，所述甘油三酸酯骨架的sn-1位和sn-3位的全部 脂肪酸殘基的至少50%是不飽和的。
18.如權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其中，所述甘油三酸酯骨架的sn-1位和sn-3位的全部脂肪酸殘基的至少70%是不飽和的。
19.如權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其中，所述不飽和脂肪酸殘基選自由油酸、亞油酸、亞 麻酸和鱈烯酸組成的組。
20.如權(quán)利要求19所述的應(yīng)用，其中，sn-1位和sn-3位的所述不飽和脂肪酸殘基的至 少35%是油酸殘基。
21.如權(quán)利要求20所述的應(yīng)用，其中，sn-1位和sn-3位的所述不飽和脂肪酸殘基的至 少40%是油酸殘基。
22.如權(quán)利要求21所述的應(yīng)用，其中，sn-1位和sn-3位的所述不飽和脂肪酸殘基的至 少4%是亞油酸殘基。
23.如權(quán)利要求22所述的應(yīng)用，其中，sn-1位和sn-3位的所述不飽和脂肪酸殘基的至 少6%是亞油酸殘基。
24.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述脂質(zhì)由以下成分組成 全部脂肪酸的0% 10%的〔8:0脂肪酸；全部脂肪酸的0% 10%的C10:0脂肪酸； 全部脂肪酸的0% 22%的C12:0脂肪酸； 全部脂肪酸的0% 15%的(14:0脂肪酸；全部脂肪酸的15% 55%的C16:0脂肪酸；其中至少30%在sn-2位；全部脂肪酸的 7%的C18:0脂肪酸；全部脂肪酸的20% 75%的C18:1脂肪酸；全部脂肪酸的2 % 40 %的C18 2脂肪酸；全部脂肪酸的0% 8%的C18:3脂肪酸；其他脂肪酸存在的水平為全部脂肪酸的不到8%。
25.如權(quán)利要求24所述的應(yīng)用，其中，所述脂質(zhì)由以下成分組成 全部脂肪酸的5% 15%的C12:0脂肪酸；全部脂肪酸的2% 10%的C14:0脂肪酸；全部脂肪酸的17% 25%的C16:0脂肪酸；其中至少40%在sn-2位；全部脂肪酸的2% 5%的C18:0脂肪酸；全部脂肪酸的28% 45%的C18:1脂肪酸；全部脂肪酸的5% 20%的C18:2脂肪酸；全部脂肪酸的 3%的C18:3脂肪酸；其他脂肪酸存在的水平為全部脂肪酸的不到5%。
26.如權(quán)利要求1 25中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，所述脂質(zhì)組合物由天然來源、合成 來源或半合成來源制備。
27.如權(quán)利要求26所述的應(yīng)用，其中，所述天然來源是植物來源、動(dòng)物來源或微生物來 源中的任一種。
28.如權(quán)利要求26所述的應(yīng)用，其中，所述脂質(zhì)組合物的制造包括酶催化。
29.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述營養(yǎng)組合物選自人乳脂肪替代品、嬰兒配方 奶粉、乳制品、冰淇淋、餅干、豆制品、烘培食品、糕點(diǎn)和面包、沙司、湯、預(yù)制食品、冷凍食品、 調(diào)味品、甜食、油脂、人造黃油、涂抹物、餡料、谷物、即食產(chǎn)品、嬰兒食品、幼兒食品、棒狀食品、小吃、糖果和巧克力制品。
30.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述藥物或保健品組合物是劑量遞送形式。
31.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述功能性食品選自乳制品、冰淇淋、餅干、豆制 品、烘培食品、糕點(diǎn)和面包、沙司、湯、預(yù)制食品、冷凍食品、調(diào)味品、甜食、油脂、人造黃油、涂 抹物、餡料、谷物、即食產(chǎn)品、飲料和搖混飲料、嬰兒食品、幼兒食品、棒狀食品、小吃、糖果和 巧克力制品。
32.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述藥物組合物還包含至少一種藥學(xué)活性劑。
33.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，所述胃腸道疾病或紊亂選自由胃食管反 流(GER)、胃食管反流病(GERD)、壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、高膽紅素血癥、炎性腸疾病、克 羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、短腸綜合征、腸切面或切口、腸道再吻合術(shù)、潰瘍、用于治療腸粘連 和腸梗阻的外科干預(yù)組成的組。
34.一種用于治療或預(yù)防具有胃腸道疾病或紊亂或具有胃腸道疾病或紊亂的增加的風(fēng) 險(xiǎn)的對象的狀況，并促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的方法，所述方法包括對所述對象施 用下述脂質(zhì)組合物，所述脂質(zhì)組合物包含至少一種下式I的甘油三酸酯 其中，禮、R2和R3為相同或不同，各自獨(dú)立地選自H或酰基，其中所述酰基選自由飽和 脂肪酸殘基、單不飽和脂肪酸殘基和多不飽和脂肪酸殘基構(gòu)成的組，并且其中全部棕櫚酸 殘基的含量為所述組合物中的全部脂肪酸殘基的約15% 約55%。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述組合物是在權(quán)利要求1 32的任一項(xiàng)中所 限定的組合物。
36. 如權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述對象是嬰兒。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述嬰兒是早產(chǎn)兒或足月兒。
38.如權(quán)利要求34 37中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述胃腸道疾病或紊亂選自由胃 食管反流(GER)、胃食管反流病(GERD)、壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、高膽紅素血癥、炎性腸疾 病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、短腸綜合征、腸切面或切口、腸道再吻合術(shù)、潰瘍、用于治療腸 粘連和腸梗阻的外科干預(yù)組成的組。
全文摘要
本發(fā)明提供一種脂質(zhì)組合物用于制備營養(yǎng)、藥物或保健品組合物或功能性食品、用于預(yù)防和治療胃腸道疾病和紊亂、以及用于促進(jìn)腸道發(fā)育、成熟、適應(yīng)和分化的應(yīng)用。
文檔編號A23L1/29GK101896073SQ200880119951
公開日2010年11月24日 申請日期2008年10月2日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月9日
發(fā)明者察弗拉·科恩, 法比亞納·巴·約瑟夫, 蓋·本·德羅爾, 耶爾·里夫席茲 申請人:酶學(xué)技術(shù)有限公司