專利名稱：一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法，將現(xiàn)代生物調(diào)控技 術(shù)應(yīng)用于蛹蟲草深層液體發(fā)酵，專用于富含蟲草素的蛹蟲草菌絲生產(chǎn)，屬于生物工程技 術(shù)領(lǐng)域。
二背景技術(shù)：
蛹蟲草在我國又叫北冬蟲夏草，是一種能寄生多種鱗翅目昆蟲蛹及幼蟲的蟲草菌。 蛹蟲草與冬蟲夏草在藥化和藥理上十分相似，在功能食品、醫(yī)藥和生物技術(shù)方面有很好 的實(shí)用價值。近年國內(nèi)外生產(chǎn)上市的一些名為冬蟲夏草的藥品和功能食品，相當(dāng)部分實(shí) 際都是用蛹蟲草生產(chǎn)的。蛹蟲草子實(shí)體中最主要的特征性功能成分為蟲草素，但研究表 明人工培養(yǎng)無性菌絲體中蟲草素含量很少。
目前,蛹蟲草生產(chǎn)仍以固體栽培為主，因其周期長、勞動強(qiáng)度大、占地多、生產(chǎn)效率
低，而且受環(huán)境、區(qū)域、季節(jié)、原材料、易遭病蟲害等限制，產(chǎn)量與質(zhì)量不穩(wěn)定。
隨著液體深層發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展，已對許多大型真菌進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，而液體深層發(fā)
酵技術(shù)具有生產(chǎn)工藝簡便、材料易得、占地少、周期短、所得產(chǎn)品質(zhì)量好且穩(wěn)定、生產(chǎn) 效率高、容易控制等優(yōu)點(diǎn)；同時利用深層培養(yǎng)技術(shù)在短時間內(nèi)培養(yǎng)出大量的菌絲體，既 可作為具有純度高、活力強(qiáng)、繁殖快的液體菌種，使生產(chǎn)原種和栽培種的時間大大縮短， 能使工廠大規(guī)模生產(chǎn)，為集約化、標(biāo)準(zhǔn)化創(chuàng)造有利條件，具有廣闊的前景。因此，如果 能通過液體發(fā)酵、加以調(diào)控技術(shù)獲得富含蟲草素的蟲草發(fā)酵菌粉產(chǎn)品，將會產(chǎn)生很大的 經(jīng)濟(jì)效益。
內(nèi)生真菌是一類非常特殊的真菌，它們生活在植物組織內(nèi)部，具有獨(dú)特的生物學(xué)和 遺傳學(xué)系統(tǒng)，能產(chǎn)生具有多種生物活性的新型化合物，在作為真菌誘導(dǎo)子方面具有很大 的優(yōu)勢。本發(fā)明從銀杏中分離內(nèi)生真菌，從中篩選一株對蛹蟲草生長和蟲草素積累具有 顯著促進(jìn)作用的菌株，同時結(jié)合培養(yǎng)基優(yōu)化和無機(jī)鹽誘導(dǎo)，獲得了一種能顯著提高蛹蟲 草發(fā)酵生物量和菌體中蟲草素含量的方法。
三
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵 方法，實(shí)現(xiàn)蛹蟲草發(fā)酵菌粉的規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化高效生產(chǎn)，富含特征性成分蟲草素，產(chǎn)品 質(zhì)量穩(wěn)定。
技術(shù)方案本發(fā)明所提供一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法，包
括
1)生物型誘導(dǎo)子的制備本研究室斜面保存的一株炭角菌屬銀杏內(nèi)生真菌C^tonasp.) YX-28,接種到PDA液體培養(yǎng)基中，PDA液體培養(yǎng)基為土豆200g、葡萄糖20g、 水1000mL、 pH自然，25°C、 120rpm黑暗培養(yǎng)7d。將培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次后，在冰浴 條件下于超聲波細(xì)胞破碎儀中1200W、5min(超聲時間5s、間隔時間3s)處理，lOOOOrpm 離心10min，收集上清冷凍干燥，制成20mg/mL的儲備溶液，最后經(jīng)0.22pm濾膜過濾 除菌。
2) 非生物型誘導(dǎo)子制備稱取乙酸鈉、硫酸銨，以70%甲醇水溶液溶解，配制成 濃度分別為0.07mol/L、 0.056mol/L的混合溶液，經(jīng)0.22pm濾膜過濾除菌。
3) 菌種活化將？0厶斜面保存的蛹蟲草(0^>^戸附//加^)菌種接種到液體培養(yǎng) 基(土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂lg、維生素B!0.01g、水1000ml) 中活化，黑暗條件下、2(TC、搖床120rpm振蕩培養(yǎng)5天。
4) 蛹蟲草發(fā)酵培養(yǎng)基的組成按糖蜜20g/L、玉米漿干粉10g/L、氯化鈣0.25g/L、 磷酸二氫鉀0.5g/L、磷酸氫二鉀0.5g/L稱取各組分，以水溶解。
5) 10L—級種子罐培養(yǎng)按照4)所述培養(yǎng)基配方，以7L體積計(jì)稱取所需各組分， 并按2%。比例(體積比)添加消泡劑，以2-3L水溶解后加入種子罐中，12rC蒸汽滅菌 15min，控制滅菌后培養(yǎng)基體積為罐容積的60%;培養(yǎng)基冷卻后，采用火圈接種法將活 化好的菌液按體積比10%接種到種子罐中，種子罐溫度2(TC，攪拌速率100rpm，無菌 空氣流量0.75wm，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)3天；
6) IOOL發(fā)酵罐培養(yǎng)按照4)所述培養(yǎng)基配方，以70L體積計(jì)稱取所需各組分， 并按2%。比例(體積比)添加消泡劑，以40L水溶解后加入發(fā)酵罐中，12rC蒸汽滅菌 15min，控制滅菌后培養(yǎng)基體積為罐容積的60%。培養(yǎng)基冷卻后，通過壓差法將種子罐 中的種子液由專用管道轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐中，2(TC，攪拌速率100rpm，無菌空氣流量
0. 75wm，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)96h后由補(bǔ)料口加入步驟1)中所述生物型誘導(dǎo)子過濾除 菌的銀杏內(nèi)生真菌提取物，使終濃度為120|ag/mL;繼續(xù)培養(yǎng)，120h后由補(bǔ)料口加入步 驟2)中所述非生物型誘導(dǎo)子至乙酸鈉、硫酸銨的終濃度分別為0.5mmol/L、 0.4mmol/L， 繼續(xù)培養(yǎng)至8天終止發(fā)酵。
有益效果蛹蟲草是我國名貴的中藥材之一，其所含藥用成分和多種藥效可與冬蟲 夏草相媲美，目前我國蟲草菌粉市場上還沒有蛹蟲草產(chǎn)品，已出現(xiàn)的產(chǎn)品主要是采用被 孢霉屬、蟲草頭孢、粉紅膠霉和蝙蝠蛾擬青霉，而且對于蟲草菌粉產(chǎn)品中特征性功能成 分如蟲草素等沒有明確標(biāo)示。本發(fā)明采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)，通過在農(nóng)副產(chǎn)品基質(zhì)中添 加無機(jī)鹽和內(nèi)生真菌誘導(dǎo)因子提高蛹蟲草菌株的菌絲生長量和其中特征性活性成分蟲 草素的含量，使蛹蟲草生物量和菌體中蟲草素含量比未添加誘導(dǎo)子的對照培養(yǎng)基分別增 加了 1.76倍和7.14倍，比普通的改良PDA分別增加了 2.35倍、23.25倍，大大減少了 生產(chǎn)成本、提高了產(chǎn)品質(zhì)量，為工業(yè)化生產(chǎn)提供基礎(chǔ)。 本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下
1. 采用糖蜜、玉米漿干粉等作為蛹蟲草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的主要碳、氮源，為蛹蟲草的生長提高豐富的營養(yǎng)基質(zhì)，且節(jié)約成本；
2. 在特定的發(fā)酵時間通過添加無機(jī)鹽和自制的內(nèi)生真菌提取物誘導(dǎo)子聯(lián)合作用，提高 蛹蟲草的生長量和菌絲中活性物質(zhì)的含量，既滿足了工業(yè)生產(chǎn)的要求，也符合現(xiàn)代 消費(fèi)者對食品營養(yǎng)和保健的要求。
3. 通過現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)對蛹蟲草進(jìn)行深層液體培養(yǎng)，工藝簡單、無菌操作易控制、生產(chǎn) 效率高，適合規(guī)模化生產(chǎn)。
四

圖1內(nèi)生真菌提取物對蛹蟲草生物量的影響
圖2內(nèi)生真菌提取物對菌絲體中蟲草素含量的影響
圖3硫酸銨對蛹蟲草生物量的影響
圖4硫酸銨對菌絲體中蟲草素含量的影響
圖5乙酸鈉對蛹蟲草生物量的影響
圖6乙酸鈉對菌絲體中蟲草素含量的影響
圖7大豆油濃度對菌體生長和蟲草素含量的影響
圖8攪拌速率對菌體生長和蟲草素含量的影響
圖9發(fā)酵罐通氣量對菌體生長和蟲草素含量的影響
五具體實(shí)施例方式
1.誘導(dǎo)子優(yōu)化
預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明培養(yǎng)基中糖蜜、玉米漿、氯化鈣對蛹蟲草生物量有顯著影響，在常 規(guī)的農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基組成基礎(chǔ)上，研究生物型和非生物型誘導(dǎo)子對菌絲體中蟲草素含量 的影響。
在實(shí)驗(yàn)室搖床培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，蟲草菌株在改良的PDA液體(土豆200g、葡萄糖20g、 磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂lg、維生素Bi0.01g、水1000ml)中培養(yǎng)7天可達(dá)到最大生物 量為8.69g/L，菌絲體中蟲草素含量為0.47mg/g;
以農(nóng)副產(chǎn)品為原料優(yōu)化的蛹蟲草發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:糖蜜20g/L、玉米漿干粉10g/L、 氯化鈣0.25g/L、磷酸二氫鉀0.5g/L、磷酸氫二鉀0.5g/L，水lOOOmL，在該培養(yǎng)基中， 蛹蟲草培養(yǎng)7天的生物量為11.62g/L，菌絲體中蟲草素含量為1.53mg/g; 1.1生物誘導(dǎo)子對蛹蟲草生長的影響
在研究中，我們發(fā)現(xiàn)炭角菌屬銀杏內(nèi)生真菌YX-28對蛹蟲草的生長和代謝產(chǎn)物積 累具有促進(jìn)作用。
生物型誘導(dǎo)子的制備將炭角菌屬銀杏內(nèi)生真菌YX-28 (公知公用，見參考文獻(xiàn)[[l] 劉小莉，等.一株銀杏內(nèi)生真菌YX-28的鑒定和分析，食品科學(xué)，2007， 28(6): 205-208; [2] Xiaoli Liu, et al. Antioxidant activity and phenolics of an endophytic々/鎖'a sp. from G/w一 6歸o. Food Chemistry, 2007, 105: 548-554; [3] Xiaoli Liu, et al. Antimicrobial activity of an endophyticsp.YX-28 and identification of its antimicrobial components. Applied Microbiology and Biotechnology, 2008， 78: 241-247])接種至U PDA液體培養(yǎng)基(土豆200g、葡萄糖20g、水1000mL，自然pH)中，25°C、 120rpm黑暗 培養(yǎng)7d，將培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次后，在冰浴條件下于超聲波細(xì)胞破碎儀中1200W，超 聲時間5s、間隔時間3s共處理5min， 10000rpm離心10min，收集上清冷凍干燥，制成 20mg/mL的儲備溶液，最后經(jīng)0.22pm濾膜過濾除菌，得生物型誘導(dǎo)子銀杏內(nèi)生真菌水 提物作為生物性誘導(dǎo)子。
考察添加生物性誘導(dǎo)子終濃度分別為50、 100、 120、 150、 200Pg/mL、并在不同發(fā) 酵時期添加時對結(jié)果的影響。圖1結(jié)果顯示添加內(nèi)生真菌提取物會顯著增加蛹蟲草的生 物量，而且添加時間越早作用越明顯，添加濃度為150Hg/mL能得到最大的生物量，但 更高的濃度會抑制蛹蟲草的生長；圖2結(jié)果顯示，濃度為120Pg/rnL、在發(fā)酵至96h時 添加會得到最大的蟲草素含量為3.75mg/g。綜合考慮，采用提取物添加濃度為 120Hg/mL、在發(fā)酵至96h時添加，此時能得到單位發(fā)酵體積中最大的蟲草素產(chǎn)量為 57.23mg/L。
1.2硫酸銨對蛹蟲草生長的影響
硫酸銨的添加對蛹蟲草菌絲的生長和其中蟲草素的積累具有相反的作用。發(fā)酵前期 硫酸銨的添加大大抑制了菌體的生長(圖3)，但對菌體中蟲草素的積累具有極顯著的 促進(jìn)作用(圖4)， 0 96h內(nèi)添加硫酸銨對產(chǎn)物積累的作用比較緩慢，發(fā)酵至120h時添 加則迅速增加，添加終濃度為0.4mmol/L時達(dá)最大含量為8.97mg/g，此時生物量為 17.09g/L，稍低于僅于96h添加內(nèi)生真菌提取物的水平(18.16g/L)，但單位發(fā)酵體積內(nèi) 的蟲草素總量得到了顯著增加。 1.3乙酸鈉對蛹蟲草生長的影響
圖5結(jié)果顯示，發(fā)酵前期較低濃度的乙酸鈉的添加對生物量的抑制作用不大，96h 后再添加則對蛹蟲草的生長沒有顯著影響，而對蟲草素的積累有一定的促進(jìn)作用(圖 6)，最理想的終濃度為0.5mmol/L、發(fā)酵至120h時添加。 2.發(fā)酵罐參數(shù)
為了將優(yōu)化的培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)發(fā)酵，研究中試水平上消泡劑、發(fā)酵罐攪拌速率、 通氣量對蛹蟲草菌體的生長和蟲草素積累的影響。 2.1消泡劑
目前食品工業(yè)中采用的消泡劑配料多為聚二甲基硅氧垸、二氧化硅、聚氧乙烯山梨 醇酐、單硬脂酸酯、碳酸鈣等。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用工業(yè)消泡劑對蛹蟲草菌絲體的生長有很大 抑制作用，且在發(fā)酵罐中試實(shí)驗(yàn)中用量大、消泡作用不佳。因此考慮采用食用油作為消 泡劑，本研究采用大豆油。
圖7結(jié)果顯示在攪拌速率為80rpm、通氣量為lwm時培養(yǎng)基中添加一定量的大豆 油對菌體生長有促進(jìn)作用，添加濃度為2%0時生物量達(dá)到最大，但對菌絲中蟲草素含量 沒有顯著影響。因此采用大豆油的添加量為2%。。 2.2發(fā)酵罐攪拌速率的確定
圖8結(jié)果表明低攪拌速率下菌絲體生長量增長緩慢。攪拌轉(zhuǎn)速為100rpm時，蛹蟲草菌絲體量產(chǎn)率最高，可達(dá)到19.27g/L。隨著攪拌轉(zhuǎn)速的繼續(xù)提高(120rpm)，剪切作 用力較大，菌絲易被打斷，造成細(xì)胞損傷，菌絲生物量明顯下降。菌體中蟲草素含量隨 攪拌轉(zhuǎn)速有一定變化，最大含量在100rpm條件下，因此確定發(fā)酵罐攪拌速率為100rpm。 2.3發(fā)酵罐通氣量對生物量的影響
發(fā)酵罐通氣量的大小對蛹蟲草的生長影響較大，圖9結(jié)果顯示，通氣量由0.5wm 增加到0.75wm，菌體生物量迅速提高至20.46g/L，通氣量繼續(xù)增大則生物量變化不明 顯，而且不同的通氣量對菌體中蟲草素含量的影響也不大。 3、結(jié)論
本發(fā)明專利提供一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法，在本專利 條件下進(jìn)行蛹蟲草100L發(fā)酵中試，可以達(dá)到蛹蟲草生物量為20.46 g/L，菌體中蟲草素 含量為10.93 mg/g。結(jié)果比在改良的PDA液體中培養(yǎng)所得到的生物量和蟲草素含量分 別提高了2.35倍、23.25倍；比在未添加誘導(dǎo)子的、以農(nóng)副產(chǎn)品為原料的培養(yǎng)基中所得 到的生物量和蟲草素含量分別提高了 1.76倍、7.14倍。 實(shí)施舉例-
1) 生物型誘導(dǎo)子的制備-
參照以上步驟l.l
2) 非生物型誘導(dǎo)子制備
稱取乙酸鈉、硫酸銨，以體積比70%甲醇水溶液溶解，配制成濃度分別為0.07mol/L、 0.056mol/L的混合溶液，經(jīng)0.22pm濾膜過濾除菌，得非生物型誘導(dǎo)子；
3) 蛹蟲草菌株的搖瓶培養(yǎng)活化
將蛹蟲草(Co^yce戸mito"&)菌種(市售)接種到液體培養(yǎng)基(土豆200g、葡萄糖 20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂lg、維生素Bi0.01g、水1000ml)中活化，黑暗條件下、 2CTC 、搖床120rpm振蕩培養(yǎng)5天。
4) IOL—級種子罐培養(yǎng)
稱取糖蜜140g、玉米漿干粉70g、氯化鈣1.75g、磷酸二氫鉀3.5g、磷酸氫二鉀3.5g、 大豆油35mL，以3L左右水溶解后加入10L種子罐中，調(diào)節(jié)pH為4.0，通入蒸汽滅菌， 121'C保持15min。待培養(yǎng)基冷卻后采用火圈接種法將活化好的菌液按10% (V/V)比 例接種到種子罐中，溫度2(TC，攪拌速率100rpm，通入無菌空氣，流量為0.75vvm， 保壓0.1Mpa，培養(yǎng)3天。
5) IOOL發(fā)酵罐培養(yǎng)
稱取糖蜜1400g、玉米漿干粉700g、氯化鈣17.5g、磷酸二氫鉀35g、磷酸氫二鉀 35g、大豆油350mL，以40L左右水溶解后加入100L種子罐中，調(diào)節(jié)pH為4.0，通入 蒸汽滅菌，12rC保持15min。待培養(yǎng)基冷卻后通過壓差法將種子罐中的種子液由專用 管道轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐中，20°C，攪拌速率100rpm，通入無菌空氣0.75wm，保壓0.1Mpa 培養(yǎng)。
取經(jīng)0.22pm濾膜過濾除菌的、20mg/mL銀杏內(nèi)生真菌水提物420mL，在發(fā)酵96h
7時由補(bǔ)料泵添加到發(fā)酵罐中。
取無菌的、以70%甲醇水溶液溶解的0.07mol/L乙酸鈉和0.056mol/L硫酸銨混合溶 液500mL，在發(fā)酵120 h時由補(bǔ)料泵添加到發(fā)酵罐中。
至第8天時停止發(fā)酵，放料。生物量測定蟲草培養(yǎng)物于4000rpm離心15min得 菌絲體，以去離子水洗滌3次，將菌絲體冷凍干燥至恒重，稱重。蟲草素測定采用高 效液相色譜法(劉小莉，等.蟲草發(fā)酵菌絲體中蟲草素和腺苷含量的檢測，中國衛(wèi)生檢 驗(yàn)雜志，2008， 18(12): 2507-2508)。
經(jīng)測定，在本發(fā)明條件下蛹蟲草生物量和菌體中蟲草素含量比未添加誘導(dǎo)子的對照 培養(yǎng)基分別增加了 1.76倍和7.14倍，比改良PDA分別增加了 2.35倍、23.25倍。
權(quán)利要求
1、一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法，包括1)生物型誘導(dǎo)子的制備將炭角菌屬銀杏內(nèi)生真菌(Xylaria sp.)YX-28菌株接種到PDA液體培養(yǎng)基中，PDA液體培養(yǎng)基為土豆200g、葡萄糖20g、水1000mL、pH自然，25℃、120rpm黑暗培養(yǎng)7d，將培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次后，在冰浴條件下于超聲波細(xì)胞破碎儀中1200W、超聲時間5s、間隔時間3s共處理5min，10000rpm離心10min，收集上清冷凍干燥，制成20mg/mL的儲備溶液，最后經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，得生物型誘導(dǎo)子；2)非生物型誘導(dǎo)子制備稱取乙酸鈉、硫酸銨，以體積比70％甲醇水溶液溶解，配制成濃度分別為0.07mol/L、0.056mol/L的混合溶液，經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，得非生物型誘導(dǎo)子；3)菌種活化將PDA斜面保存的蛹蟲草(Cordyceps militaris)菌種接種到液體培養(yǎng)基中活化，黑暗條件下、20℃、搖床120rpm振蕩培養(yǎng)5天，液體培養(yǎng)基為土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂1g、維生素B10.01g、水1000ml；4)蛹蟲草發(fā)酵培養(yǎng)基按糖蜜20g/L、玉米漿干粉10g/L、氯化鈣0.25g/L、磷酸二氫鉀0.5g/L、磷酸氫二鉀0.5g/L稱取各組分，以水溶解；5)10L一級種子罐培養(yǎng)按照4)所述培養(yǎng)基配方，以7L體積計(jì)稱取所需各組分，并按體積比2‰添加消泡劑，以2-3L水溶解后加入種子罐中，121℃蒸汽滅菌15min，控制滅菌后培養(yǎng)基體積為罐容積的60％；培養(yǎng)基冷卻后，采用火圈接種法將活化好的菌液按體積比10％接種到種子罐中，種子罐溫度20℃，攪拌速率100rpm，無菌空氣流量0.75vvm，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)3天；6)100L發(fā)酵罐培養(yǎng)按照4)所述培養(yǎng)基配方，以70L體積計(jì)稱取所需各組分，并按體積比2‰比例添加消泡劑，以40L水溶解后加入發(fā)酵罐中，121℃蒸汽滅菌15min，控制滅菌后培養(yǎng)基體積為罐容積的60％；培養(yǎng)基冷卻后，通過壓差法將種子罐中的種子液由專用管道轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐中，20℃，攪拌速率100rpm，無菌空氣流量0.75vvm，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)96h后由補(bǔ)料口加入步驟1)中所述生物型誘導(dǎo)子過濾除菌的銀杏內(nèi)生真菌提取物，使終濃度為120μg/mL；繼續(xù)培養(yǎng)，120h后由補(bǔ)料口加入步驟2)中所述非生物型誘導(dǎo)子至乙酸鈉、硫酸銨的終濃度分別為0.5mmol/L、0.4mmol/L，繼續(xù)培養(yǎng)至8天終止發(fā)酵。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法，其特征 在于所用消泡劑為大豆油。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發(fā)酵方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。將蛹蟲草菌種活化后，接種到一級種子罐，再進(jìn)一步擴(kuò)大到發(fā)酵罐，在發(fā)酵罐中達(dá)到一定生物量后加入生物型誘導(dǎo)子炭角菌屬銀杏內(nèi)生真菌提取液，和非生物型誘導(dǎo)子乙酸鈉、硫酸銨，促進(jìn)菌體中蟲草素的產(chǎn)生。本發(fā)明采用優(yōu)化的培養(yǎng)基有效增加蛹蟲草的菌絲生長量，并通過誘導(dǎo)子調(diào)控作用，蛹蟲草生物量和菌體中蟲草素含量比未添加誘導(dǎo)子的對照培養(yǎng)基分別增加了1.76倍和7.14倍，比普通的改良PDA分別增加了2.35倍、23.25倍。大大提高了蛹蟲草菌絲體的生產(chǎn)量和有效特征性成分的含量，有著廣闊的市場前景。
文檔編號C12P19/40GK101554121SQ200910027839
公開日2009年10月14日 申請日期2009年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月15日
發(fā)明者劉小莉, 單成俊, 周劍忠, 張麗霞, 瑩 李, 英 王, 黃開紅, 黃自蘇 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 被以下專利引用 (1),