專利名稱：網(wǎng)織紅細胞快速染色液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細胞染色液。
背景技術(shù)：
目前對網(wǎng)織紅細胞的檢查主要一是新亞甲藍染色法新亞甲藍鹽水溶液 是一種非熒光超活性染料，可以沉淀網(wǎng)織紅細胞內(nèi)殘存的RNA,試劑穩(wěn)定，為 WH0推薦方法，但因新亞甲藍染料需要進口，且價格昂貴，國內(nèi)實驗室極少應(yīng) 用；二是煌焦油藍鹽水溶液法是國內(nèi)常用染色法 一般使用2%煌焦油藍染 色液，染色液與血液比例一般為1: 1,染色時間為20~30分鐘，用Miller 窺盤法或18° x4扇形窺盤法計數(shù)1000個紅細胞中的網(wǎng)織紅細胞，以百分比 表示，煌焦油藍染色法操作簡單方便，成本低，但因其染料沉渣多，易褪色， 染色時間長，背景不清晰，并且易受變性珠蛋白小體、HbH包涵體干擾，對實 驗的精密度和準確度影響很大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種網(wǎng)織紅細胞快速染色液。
本發(fā)明的目的是通過如下方式實現(xiàn)的 一種網(wǎng)織紅細胞快速染色液，由 下列重量百分比的組分組成
煌焦油藍0.5-1.5% 枸櫞酸鈉0.2-0.6% 瑞氏快速染液0.5-1.5% 甲醇2.5-4.5% 生理鹽水92-96%。
本發(fā)明具有如下的有益效果，該染色液具有染色時間短、沉渣極少、視 野清晰、背景明亮、不易褪色、有效期長、準確度高、精密度好，有效期長 的特點。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明
3取煌焦油藍1.0g、枸櫞酸鈉O. 4g、瑞氏快速染液O. 8ml、甲醇5. Oml、 生理鹽水94. 2ml。
將上述組分物充分溶解，配成的網(wǎng)織紅細胞快速染色液，有效期5年。 該方法的機理如下煌焦油藍(Brilliant cresyl blue)是一種活體染 色劑，溶于甲醇、丙酮、冰乙酸和水，不溶于苯和乙醚，最大吸收波長622nm。 分子式為C17H21C1N40，分子量為332.83; RNA是由一個一個核苷酸 (nucleotide)頭尾相連而形成的，平均長度大約為2000個核苷酸，單個
核苷酸是由含氮有機堿(稱堿基)、戊糖(即五碳糖)和磷酸三部分構(gòu)成的， RNA分子的功能多樣，種類較多，主要有信使RNA、核蛋白體RNA、轉(zhuǎn)運RNA、 小核RNA及核不均一 RNA等。具有堿性著色基團(帶正電荷)的煌焦油藍可 與網(wǎng)織紅細胞RNA的磷酸基(帶負電荷)結(jié)合，使RNA膠體間的負電荷減少 而發(fā)生凝縮，形成藍色的點狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。枸櫞酸鈉是一種優(yōu)質(zhì)抗凝 劑，主要作用是使網(wǎng)織紅細胞染色時血液不凝固，紅細胞散在分布，并使各 種細胞能充分著色。瑞氏快速染液主要由堿性染料美藍(Methvlem blue)和 酸性染料伊紅(EostmY)組成。美藍通常為氯鹽是堿性的，美藍的中間產(chǎn) 物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊 紅鈉鹽相反。伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部 分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。它是一種快速的血涂片染色劑，沒有染料 沉渣，主要作用是使網(wǎng)織紅細胞染色時紅細胞能著色；因所加瑞氏快速染液 份量較少，白細胞不能著色；使網(wǎng)織紅細胞染色具有沉渣極少、視野清晰、 背景明亮的特點。甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態(tài)，并增 加細胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由于甲醇吸附染色液 中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)，此外甲醇還有一定的防腐作用；因
此甲醇有使網(wǎng)織紅細胞迅速著色，不易褪色，并且有使試劑穩(wěn)定，不長細菌 的作用。
權(quán)利要求
1、一種網(wǎng)織紅細胞快速染色液，由下列重量百分比的組分組成煌焦油藍0.5-1.5％枸櫞酸鈉0.2-0.6％瑞氏快速染液0.5-1.5％甲醇2.5-4.5％生理鹽水92-96％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種網(wǎng)織紅細胞快速染色液，由下列重量百分比的組分組成煌焦油藍0.5-1.5％、枸櫞酸鈉0.2-0.6％、瑞氏快速染液0.5-1.5％、甲醇2.5-4.5％、生理鹽水92-96％。本發(fā)明具有如下的有益效果，該染色液具有染色時間短、沉渣極少、視野清晰、背景明亮、不易褪色、有效期長、準確度高、精密度好的特點。
文檔編號C12Q1/04GK101671719SQ20091004453
公開日2010年3月17日 申請日期2009年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月14日
發(fā)明者劉志賢 申請人:湘潭市第一人民醫(yī)院