專利名稱：一種山藥糖蛋白及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種山藥糖蛋白及其制備方法，屬于植物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
山藥為薯蕷科多年生草藤本植物。我國華北、西北、華東和華中 地區(qū)都有種植，資源較豐富。山藥根莖是我國著名的傳統(tǒng)藥材。《本 草綱目》記載"山藥性溫味甘平無毒、健脾胃、益肺腎、止泄瘌， 化痰涎，潤皮毛"。據(jù)現(xiàn)代文獻(xiàn)報(bào)道，山藥含淀粉、甘露聚糖、糖蛋 白多酚氧化酶、多巴胺、山藥堿、麥角甾醇、e-谷甾醇、尿囊素、 植酸、氨基酸等。具有極高的營養(yǎng)和藥用價(jià)值。而目前關(guān)于山藥糖蛋 白的制備過程中采用二次超濾制備工藝尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。
山藥中的糖蛋白是重要活性成分之一，山藥糖蛋白具有預(yù)防心血 管脂肪沉淀、保持血管彈性、防止動(dòng)脈粥樣硬化以及抗腫瘤、增強(qiáng)免 疫功能等作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種山藥糖蛋白制品及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案
一種山藥糖蛋白制品
本發(fā)明的山藥糖蛋白的分子量為10000 40000Da 。
其中蛋白質(zhì)質(zhì)量百分含量為50% 90%，糖的質(zhì)量百分含量 為10% 50%;
一種山藥糖蛋白的制備方法，根據(jù)原料的不同采用不同的制備方
法，采用新鮮的山藥，其制備方法包括以下制備步驟(1) 、原料的制備取新鮮山藥，洗靜、去皮，切成10cm長的小塊；
(2) 、浸提在步驟(1)所獲得的山藥原料中先加入山藥質(zhì)量1 5
倍的0.1 4.0%NaCl溶液、用搗碎機(jī)粉碎后再加入山藥質(zhì)量5 15倍的0.1 4.0。/oNaCl溶液、攪均，在35 5(TC下浸提1 3 h， 浸提液以4000 8000r/min，離心10 20min，收集上清液；
在濾渣中再加入山藥質(zhì)量5 15倍的0.1 4.0NaCl寧液后， 在35 50。C下浸提1 3 h，浸提液以4000 8000r/min，離心10 20min，收集上清液，與上述獲得的上清液一起合并；
(3) 、濃縮將步驟(2)獲得的合并后的上清液減壓濃縮至原體積
的1/10 1/40，濃縮過程控制壓力為-0.08 -0.1Mpa，溫度為 40~45°C;
(4) 、萃取在步驟(3)獲得的濃縮液中加入濃縮液0.5 2倍體積
的氯仿和正丁醇混合液，置于水浴振蕩器30 40°C， 50 100r/m， 振蕩10min，以4000 8000r/min，離心10 20min，吹集上層 清液，再在上層清液中加入濃縮液0.5 2倍體積的氯仿和正丁 醇混合液，再置于水浴振蕩器30 40°C， 50~100r/m,振蕩10 min，以4000 8000r /min，離心10 20min，收集最終上層清 液；
其中氯仿與正丁醇混合液按體積比為4: 1配置；
(5) 、醇析向步驟(4)獲得的最終上清液中加90 95%食用酒精，
使溶液中的酒精終濃度為70 8 5 %，醇析24h，以4000 8000r /min，離心10 20min，收集沉淀； .
(6) 、兩次超濾將步驟(5)中獲得的沉淀用0.1 4.0MNaCl溶液
溶解，溶解液用截留相對(duì)分子量為50000Da超濾膜進(jìn)行超濾， 收集截留液；濾過液再用截留相對(duì)分子量為10000Da超濾膜進(jìn)
6行超濾，直到截留液濃縮至原溶解液體積的1/5 1/50，收集截 留液；
超濾過程控制溫度為15 40°C，壓力為0.1 0.5Mpa; (7)、冷凍干燥將步驟(6)中獲得的截留液進(jìn)行冷凍干燥，控制 溫度-20 -35。C， 30 60Pa抽真空冷凍1 2h;將溫度升到-5 -l(TC，保持5 20h，溫度再升到30 4(TC保持5 10 h，即得 本發(fā)明的山藥糖蛋白制品。 ' 一種山藥糖蛋白的制備方法，根據(jù)原料的不同采用不同的制備方 法，采用干的山藥，其制備方法包括以下制備步驟
(1) 、原料的制備稱取山藥干片，粉碎，粒度為60-80目；
(2) 、浸提在步驟(1)所獲得的山藥原料中先加入山藥質(zhì)量20
40倍的0.1 4.0% NaCl溶液，攪勻，在35 5(TC下，以浸 提1 3h，浸提液以4000 8000r/min，離心10 20min，收 集上清液；
在濾渣中再加入山藥質(zhì)量10 40倍的0.2 2.0% NaCl 溶液后，在35 5(TC浸提1 3 h，浸提液以4000 8000r/min， 離心10 20min，收集上清液，與上述收集的上清液一起合并；；
(3) 、濃縮將步驟(2)獲得的合并上清液減壓濃縮至原體積的1/10
1/40;過程控制壓力為-0.08 -0.1Mpa，溫度為40 45°。；
(4) 、萃取在步驟(3)獲得的濃縮液中加入濃縮液0.2 2倍體積
的氯仿和正丁醇混合液后，置于水浴振蕩器30 40°C， 50國100r/m，振蕩10min，以4000 8000r/min，離心10 20min， 收集上層清液，再在上層清液中加入濃縮液0.2 2倍體積的氯 仿和正丁醇混合液，置于水浴振蕩器30 4(TC， 50 100r/m，振 蕩10min，以4000 8000r/min，離心10 20min，收集最終上層清液；
其中氯仿與正丁醇混合液按體積比為4: l配置；
(5) 、醇析向步驟(4)獲得的最終上清液中加90 95%食用酒精，
使溶液中的酒精終濃度為65 8 5%，靜置24h ，以4000 8000r/min，離心10 20min，收集沉淀；
(6) 、兩次超濾將步驟(5)中獲得的沉淀用0.2 2.0%NaCl溶液
溶解，溶解液進(jìn)行超濾，用截留相對(duì)分子量為50000Da超濾膜， 收集濾過液，將濾過液再用截留相對(duì)分子量為10000Da超濾膜 進(jìn)行超濾，直到截留液濃縮至原溶解液體積的1/5 1/50; 超濾過程控制溫度為10 4(TC，壓力為0.1 0.5Mpa;
(7) 、冷凍干燥將步驟(6)中獲得的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，控制
溫度-20 -35t:， 30 60Pa抽真空冷凍1 2h;將溫度升到-5 -l(TC，保持10 20h,溫度再升到30 4(TC保持5 10h，即得 本發(fā)明的山藥糖蛋白制品。 本發(fā)明的山藥原料為河南生產(chǎn)。
本發(fā)明的有益效果 ' 目前山藥糖蛋白的提取通常采用水提取，醇沉淀、層析分離，再 蒸發(fā)濃縮、千燥。用二次超濾操作實(shí)現(xiàn)分離與濃縮同步，使工藝操作 簡便，避免了用層析分離需要對(duì)糖蛋白洗脫液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，節(jié)省能 耗，本發(fā)明提供的山藥糖蛋白制品具有預(yù)防血管硬化、增強(qiáng)免疫力等 功能。可用于功能性食品和保健藥品。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步闡述，但并不限制本發(fā)明。 山藥糖蛋白制品的分子量的測(cè)定方法SDS-PAGE電泳。.
實(shí)施例1一種新鮮山藥糖蛋白的制備
(1) 、取新鮮山藥500g，洗靜、去皮，切成10cm長的小塊；
(2) 、在步驟(1)獲得的山藥塊中加入500mL的0.5。/。NaCl溶液、
用搗碎機(jī)粉碎再加入4500m L的0.6%NaCl溶液、攪均后倒入 提取容器，在40'C下浸提取2 h，獲得浸提液。
(3) 、將步驟(2)獲得的浸提液以5 000r/min，離心1 5 min，收集
上清液；
濾渣中再加入10000m L的0.6%NaCl溶液，在4(TC下浸 提取2 h，浸提液以5000r/min，離心1 5 min，收集上清夜， 與上述上清液合并。
(4) 、將步驟(3)合并的上清液減壓濃縮至150mL。加入氯仿與
正丁醇按體積比為4: 1的氯仿和正丁醇混合液150mL，置 于水浴振蕩器35°C， 80r/min振蕩10 min，以8000r /min，離 心15min，收集上層清液；
再在上層清液中加入氯仿與正丁醇按體積比為4: 1的氯 仿和正丁醇混合液125m L ，置于水浴振蕩器35°C ， 80r,min振 蕩10min，以8000r/min，離心15min，收集最終上層清液。
(5) 、向步驟(4)獲得的最終上清液中加450mL95。/。食用酒精，靜
置24h，以5000r/min，離心15min，收集沉淀；
(6) 、將步驟(5)中獲得的沉淀用0.6%NaCl溶液溶解，溶解液進(jìn)
行超濾，用截留相對(duì)分子量為50000Da超濾膜，收集濾過液； 濾過液再用截留相對(duì)分子量為10000Da超濾膜進(jìn)行超濾， 保留截留液，并使其超濾濃縮至15ml，得到濃縮液，超濾條 件控制溫度為3(TC，壓力為0.3mp。 .
(7)、將步驟(6)獲得的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，控制溫度-30
9°C, 50Pa抽真空冷凍2h;將溫度升到-8。C，保持12 h，溫度再 升到35'C保持8h，即得本發(fā)明的山藥糖蛋白制品。 實(shí)施例2
一種干山藥糖蛋白的制備
(1) 、稱取100g山藥干片，粉碎后，過80目篩。
(2) 、在步驟(1)獲得的山藥中加入3000ml的0.5。/。NaCl溶液，攪
勻，在45"C下，浸提1.5h，獲得浸提液。
(3) 、將步驟(2)獲得的浸提液以4000r/min，離心20min，收集上
清液；
濾渣中再加入2000ml的0.5%NaCl在45。C下浸提2 h，浸 提液以4000r/min，離心20min，收集上清液，并與上述上清 液合并。
(4) 、將步驟(3)獲得的合并上清液減壓濃縮至150ml，加入氯仿
與正丁醇按體積比為4: 1的氯仿和正丁醇混合液200ml，置 于水浴振蕩器30 40。C振蕩，80r/min ， 10min，以8000r/min， 離心10min，收集上層清液，在上層清液中再加入氯仿與正丁 醇按體積比為4: 1的氯仿和正丁醇混合液200ml，置于水浴 振蕩器40°C ， 80r/min，振蕩10 min，以8000r /min，離心10min， 收集最終上層清液。
(5) 、向步驟(4)獲得的最終上清液中加500ml95。/。食用酒精，靜
置24h24h，以8000r/min，離心10min,收集沉淀。
(6) 、將步驟(5)中獲得的沉淀用0.5%NaCl溶解，溶解液進(jìn)行超
濾，用截留相對(duì)分子量為50000Da超濾膜，收集濾過液；
濾過液再用截留相對(duì)分子量為10000Da超濾膜進(jìn)行超濾， 保留截留液，并使其超濾濃縮至15ml。超濾過程控制溫度為30°C，壓力為0.3mp。 (7)、將步驟(6)獲得的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，控制溫度-35。C， 55Pa 抽真空冷凍lh;將溫度升到-l(TC，保持10h，溫度再升到30 'C保持10h，即得本發(fā)明的山藥糖蛋白制品。 通過SDS-PAGE電泳分析獲得的山藥糖蛋白制品，其分子量 分別為13000 Da和38000 Da。
其中分子量為13000 Da的糖蛋白制品中蛋白質(zhì)質(zhì)量百分含 量為86.1%，糖的質(zhì)量百分含量為13.9%;
其中分子量為38000 Da的糖蛋白制品中蛋白質(zhì)質(zhì)量百分含 量為84.6%，糖的質(zhì)量百分含量為15.4%。 以上所述內(nèi)容僅為本發(fā)明構(gòu)思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技 術(shù)方案所作的任何等效變換，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1、一種山藥糖蛋白的制備方法，根據(jù)原料的不同采用不同的制備方法，采用新鮮的山藥，其特征在于其制備方法包括以下制備步驟(1)、原料的制備取新鮮山藥，洗靜、去皮，切成10cm長的小塊；(2)、浸提在步驟(1)所獲得的山藥原料中先加入山藥質(zhì)量1～5倍的0.1～4.0％NaCl溶液、用搗碎機(jī)粉碎后再加入山藥質(zhì)量5～15倍的0.1～4.0％NaCl NaCl溶液、攪均，在35～50℃下浸提1～3h，浸提液以4000～8000r/min，離心10～20min，收集上清液；在濾渣中再加入山藥質(zhì)量5～15倍的0.1～4.0％NaCl溶液后，在35～50℃下浸提1～3h，浸提液以4000～8000r/min，離心10～20min，收集上清液，與上述獲得的上清液一起合并；(3)、濃縮將步驟(2)獲得的合并后的上清液減壓濃縮至原體積的1/10～1/40，濃縮過程控制壓力為-0.08～-0.1Mpa，溫度為40～45℃；(4)、萃取在步驟(3)獲得的濃縮液中加入濃縮液0.5～2倍體積的氯仿和正丁醇混合液，置于水浴振蕩器30～40℃振蕩50-100r/m，10min，以4000～8000r/min，離心10～20min，收集上層清液；再在上層清液中加入濃縮液0.5～2倍體積的氯仿和正丁醇混合液，再置于水浴振蕩器30～40℃，50-100r/m，振蕩10min，以4000～8000r/min，離心10～20min，收集最終上層清液；其中氯仿與正丁醇混合液按體積比為4∶1配置；(5)、醇析向步驟(4)獲得的最終上清液中加90～95％食用酒精，使溶液中的酒精終濃度為70～85％，醇析24h，以4000～8000r/min，離心10～20min，收集沉淀；(6)、兩次超濾將步驟(5)中獲得的沉淀用0.1～4.0％NaCl溶解，溶解液用截留相對(duì)分子量為50000Da超濾膜進(jìn)行超濾，收集截留液；濾過液再用截留相對(duì)分子量為10000Da超濾膜進(jìn)行超濾，直到截留液濃縮至原溶解液體積的1/5～1/50，收集截留液；超濾過程控制溫度為15～40℃，壓力為0.1～0.5Mpa；(7)、冷凍干燥將步驟(6)中獲得的截留液進(jìn)行冷凍干燥，控制溫度-20～-35℃，30～60Pa抽真空冷凍1～2h；將溫度升到-5～-10℃，保持5～20h，溫度再升到30～40℃保持5～10h，即得本發(fā)明的山藥糖蛋白制品。
2、 一種山藥糖蛋白的制備方法，根據(jù)原料的不同采用不同的制備方 法，采用干的山藥，其特征在于其制備方法包括以下制備步驟(1) 、原料的制備稱取山藥干片，粉碎，粒度為60 80目；(2) 、浸提在步驟(1)所獲得的山藥原料中先加入山藥質(zhì)量20 40倍的0.1 4.0% NaCl溶液，攪勻，在35 5(TC下，浸提 1 3h，浸提液以4000 8000r/min，離心10 20min，收集上清液；在濾渣中再加入山藥質(zhì)量10 40倍的0.2 2.0% NaCl 溶液后，在35 5(TC浸提1 3 h，浸提液以4000 8000r/min， 離心10 20min，收集上清液，與上述收集的上清液一起合并；(3) 、濃縮:將步驟(2)獲得的合并上清液減壓濃縮至原體積的1/10 1/40;過程控制壓力為-0.08 -0.1Mpa，溫度為40 45'C;(4) 、萃取在步驟(3)獲得的濃縮液中加入濃縮液0.2 2倍體積的氯仿和正丁醇混合液后，置于水浴振蕩器30 40°C， 50國100r/m振蕩10min，以4000 8000r/min，離心10 20min，收集上層清液；再在上層清液中加入濃縮液0.2 2倍體積的氯 仿和正丁醇混合液，置于水浴振蕩器30 40°C， 50-100r/m振 蕩10min，以4000 8000r/min，離心10 20min，收集最終上 層清液；其中氯仿與正丁醇混合液按體積比為4: l配置；.(5) 、醇析向步驟(4)獲得的最終上清液中加90 95%食用酒精，使溶液中的酒精終濃度為65 8 5%，靜置24h ，以4000 8000r/min，離心10 20min，收集沉淀；(6) 、兩次超濾將步驟(5)中獲得的沉淀用0.2 2.0。/。NaCl溶解，溶解液進(jìn)行超濾，用截留相對(duì)分子量為50000Da超濾膜，收集 濾過液，將濾過液再用截留相對(duì)分子量為10000Da超濾膜進(jìn)行 超濾，直到截留液濃縮至原溶解液體積的1/5 1/50;超濾過程控制溫度為10 40°C，壓力為O.l-O.SMpa'-OX 冷凍干燥將步驟(6)中獲得的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，控制 溫度-20 -35°。， 30 60Pa抽真空冷凍1 2h;將溫度升到-5 -l(TC，保持5 20h，溫度再升到30 4(TC保持5 10 h，即得 本發(fā)明的山藥糖蛋白制品。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的一種山藥糖蛋白的制備方法，其特征在于其所獲得的山藥糖蛋白的分子量為10000 40000Da;其中蛋白質(zhì)質(zhì)量百分含量為50% 90%，糖的質(zhì)量百分含量 為10°/。 50%; '
4、 如權(quán)利要求1或2所述的一種山藥糖蛋白的制備方法，其特征在 于其所獲得的山藥糖蛋白制品具有預(yù)防血管硬化及增強(qiáng)免疫力功 能，可應(yīng)用于功能性食品和保健藥品。
全文摘要
本發(fā)明公開一種山藥糖蛋白及其制備方法，屬于植物化學(xué)領(lǐng)域。即山藥經(jīng)原料制備、浸提、濃縮、萃取、醇析、兩次超濾、冷凍干燥等步驟獲得山藥糖蛋白，所獲得的山藥糖蛋白的分子量為10000～40000Da，總含量為50％～90％。由于本發(fā)明采用兩次超濾操作實(shí)現(xiàn)分離與濃縮同步，使工藝操作簡便，避免了用層析分離需要對(duì)糖蛋白洗脫液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，節(jié)省能耗。本發(fā)明提供的山藥糖蛋白制品具有預(yù)防血管硬化、增強(qiáng)免疫力等功能，可用于功能性食品和保健藥品。
文檔編號(hào)A23L1/305GK101575367SQ20091005206
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2009年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月26日
發(fā)明者呂玉濤, 管世敏, 海 邵, 龔鋼明 申請(qǐng)人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院