專利名稱：一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用的制作方法
一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)
用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說關(guān)于一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒及 其檢測方法和應(yīng)用
背景技術(shù)：
癌癥也叫惡性腫瘤，腫瘤是指機(jī)體在各種致瘤因素作用下，局部組織的細(xì)胞異常 增生而形成的局部腫塊。癌癥病變的基本單位是癌細(xì)胞。人體細(xì)胞老化死亡后會有新生 細(xì)胞取代它，以維持機(jī)體功能，人體絕大部分細(xì)胞都可以增生，但這種增生是有限度的，而 癌細(xì)胞的增生則是無止境的，這使患者體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗。同時(shí)，癌細(xì)胞還能釋放 出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀，晚期時(shí)它轉(zhuǎn)移到全身各處生長繁殖，最后導(dǎo)致人體消 瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱及臟器功能受損等，器官功能衰竭而死亡。最近的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道Stat3是癌基因，在大部份癌癥中它具有促進(jìn)癌細(xì)胞惡變， 并促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移。STAT信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(Signal Transducer andActivator of Transcription, STAT)蛋白家族是一組可以被不同的細(xì)胞因子受體激活的相關(guān)蛋白，在細(xì) 胞因子-受體相互作用的過程中充當(dāng)載體，保持信號在細(xì)胞內(nèi)傳遞的內(nèi)在特異性。在這些 STAT蛋白當(dāng)中，STAT3由于其與腫瘤的關(guān)系較為密切。編碼STAT3的基因在人類定位于第 17號染色體(q21. 1 q21. 2)，其結(jié)構(gòu)與其他的STAT蛋白相似，具有以下幾個(gè)主要部分 (1)保守的氨基酸末端與STAT蛋白的四聚體化有關(guān)；(2)DNA連接區(qū)具有特異性針對活 性IFN- γ回文序列(GAS)元件的序列；(3) SH3結(jié)構(gòu)域位于第500 600位氨基酸，能與 富含Pro的基序(motif)結(jié)合；(4)SH2區(qū)參與受體恢復(fù)和STAT的二聚體化；(5) C-末端 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域在轉(zhuǎn)錄激活域內(nèi)的色氨酸(S727)或接近C端的酪氨酸(Y705)被磷酸化 后，STAT3即被激活。STAT3在最開始被發(fā)現(xiàn)時(shí)，僅僅是被看作是STAT家族中一個(gè)簡單的附 加成員，在炎癥反應(yīng)時(shí)IL-6的釋放反應(yīng)中，發(fā)揮作用是誘導(dǎo)一套有限的靶基因轉(zhuǎn)錄。但是 目前已知的研究結(jié)果表明，STAT3可以被許多細(xì)胞因子、生長因子和其它刺激所激活，比其 它STAT蛋白有著更為重要的生理功能。STAT3的激活與腫瘤，STAT3在細(xì)胞內(nèi)起著重要的 信號傳遞作用，負(fù)責(zé)將細(xì)胞外的信號傳遞到細(xì)胞核，通過誘導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)生物刺激的 效應(yīng)作用。細(xì)胞因子與細(xì)胞表面(或者胞漿內(nèi)的)受體結(jié)合后，受體的gpl30亞基形成二 聚體，導(dǎo)致與gpl30相連的Jak酶發(fā)生磷酸化，進(jìn)而使得STAT3分子C-末端的酪氨酸殘基 (Y705)發(fā)生磷酸化在，通過其SH2區(qū)形成二聚體而激活，并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)與靶基因的啟 動(dòng)子結(jié)合，誘導(dǎo)靶基因的轉(zhuǎn)錄。S727的色氨酸殘基發(fā)生磷酸化也可以導(dǎo)致STAT3的激活。 但對于色氨酸激酶是否存在同一性尚有一些爭議，很有可能是因?yàn)椴煌募せ钚盘枌?dǎo)致色 氨酸被ERKl、ERK2、p38、JNK和一種H-7敏感激酶中的任意一種磷酸化。絕大多數(shù)證據(jù)表 明磷酸化在STAT3激活轉(zhuǎn)錄過程中起著推動(dòng)作用，然而也有證據(jù)表明色氨酸磷酸化具有負(fù) 面作用，但是其機(jī)制還沒有明確。在發(fā)現(xiàn)STATs之后不久，就出現(xiàn)了最早的一批關(guān)于原發(fā)癌 灶和腫瘤來源細(xì)胞株當(dāng)中存在的STAT蛋白持續(xù)性酪氨酸磷酸化(即持續(xù)性活化)的報(bào)道。隨著在v-Src變形細(xì)胞內(nèi)初步發(fā)現(xiàn)組成性磷酸化的STAT3以后，已經(jīng)累積了相當(dāng)多的證據(jù) 表明活性STAT3在細(xì)胞惡變過程中起關(guān)鍵性作用。許多腫瘤來源細(xì)胞株都需要STAT蛋白 (特別是STAT3)來保持轉(zhuǎn)變后的表現(xiàn)型。成纖維細(xì)胞表達(dá)激活的STAT3后細(xì)胞發(fā)生變形， 暗示STAT3是一個(gè)癌基因。此外，大量的鼠和人類的惡性腫瘤細(xì)胞中都表現(xiàn)有活性STAT3， 包括許多頭頸部癌、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤和其它血液系統(tǒng)惡性腫瘤。隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開， 至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成(單克 隆時(shí))就能做到早期預(yù)測診斷。采用核酸原位雜交技術(shù)檢測STAT3基因，對癌癥的早期基 因水平的診斷有重要的臨床意義。STAT3基因序列號NM-003150，mRNA，4953bp在染色體 17q21. 31"，CDS 219.........2528bp。原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)是將分子生物學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)結(jié)合起 來，以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測特異性核酸分子的技術(shù)。其原理是使含 有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈 即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進(jìn)行探測，從而在細(xì) 胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種Stat3基因的原位雜交檢測試 劑盒的用途。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒。本發(fā)明的另一的目的是，提供一種Stat3基因的原位雜交檢測方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測癌癥疾病藥物中的應(yīng)用，所述 的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。 所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P中的一種。所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素 中的一種。所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，其中所述的雜交 探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種Stat3基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟a、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測a步驟得到的雜交復(fù)合體。本發(fā)明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組成。本試劑盒的核酸雜交原理是分子生物學(xué)業(yè)內(nèi)人士均熟知，具體操作步驟是標(biāo)本處理、預(yù)雜交、雜 交、免疫組化染色、鏡下進(jìn)行定量分析、結(jié)果報(bào)告，其中雜交的具體步驟包括儀器操作
1).將待測標(biāo)本放入反應(yīng)槽中；
2).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)加消化液；
3).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)后固定；
4).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)預(yù)雜交(42°C )；
5).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗；
6).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)雜交(42°C )；
7).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗；
8).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)與DIG抗體培養(yǎng)(室溫)；
9).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗，顯色；
10).取出封片鏡檢。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
1、本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
2、本發(fā)明的檢測方法操作方便、簡單，能在區(qū)級以上醫(yī)院普遍使用和推廣。
3、本發(fā)明的臨床意義是更早期跟蹤檢測癌癥發(fā)生動(dòng)態(tài)過程，以及用于癌癥預(yù)防醫(yī)
學(xué)的檢測和篩選工具。本發(fā)明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測癌胚蛋白標(biāo)志物，以及影像 醫(yī)學(xué)檢查有顯著不同。本發(fā)明可以在基因水平上檢測Stat3異常表達(dá)，在影像醫(yī)學(xué)檢查及 其它檢查未發(fā)現(xiàn)占位性癌癥病灶之前，癌癥生化指標(biāo)未產(chǎn)生異常之前，亦未形成腫塊之前， 能及早做到以上基因表達(dá)異常的信息采集，給臨床癌癥病患一個(gè)真正的預(yù)后早期診斷。這 樣才有可能實(shí)施癌癥的早期診斷、早期預(yù)防、早期治療，有可能從源頭上徹底根治癌癥惡 疾。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例中癌癥病人Stat3過量表達(dá)圖。圖2是本發(fā)明實(shí)施例中正常人Stat3圖。
具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。實(shí)施例1一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物、增效劑，其中，所 述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。雜交探針用地高辛標(biāo)記。試劑盒中的其它液體和
標(biāo)本組成如下
消化液100 μ 1/管1管/ ^ 無色透明液體
保護(hù)液100 μ 1/管1管/i^ 無色透明液體
預(yù)雜交液1300 μ 1/ ,r 2管/i^ 無色透明液體
正義雜交液10μ 1/管1管/i^ 無色透明液體
反義雜交液10μ 1/管1管/ ^ 無色透明液體
封閉液1000 u l／管l管／盒五色透明液體
堿性磷酸酶抗體 l u l／管l管／盒五色透明液體
顯色劑A175 u l／管 l管／盒黃色液體
顯色劑B320 u l／管 l管／盒五色透明液體
緩沖液工 10x 90ml／瓶l瓶／盒淺黃色或五色透明液體
緩沖液II 10x 80ml／瓶l瓶／盒淺黃色或五色透明液體
緩沖液II工10x 20m／瓶3瓶／盒淺黃色或五色透明液體
緩沖液IV 10x 90ml／瓶l瓶／盒淺黃色或五色透明液體
固定液90ml／瓶l瓶／盒五色透明液體
陽性對照標(biāo)本6片／盒
上述試劑成分說明(所有試劑購自SIGMA)
l、消化液20mg／ml蛋白酶K，100mg蛋白酶K，加DEPC一幾0 5ml；
2、保護(hù)液0．2g的glycine加入lml的l×緩沖液工；
3、預(yù)雜交液l×緩沖液II 7．5ml
50×D 3ml
10mg／ml yest七一RNA 750ul
l lmg／ml SALMON TESTES DNA 682ul
0．04M EDTA 3ml
50％formami de l 5ml
4、封閉液0．03g的bloMng(購買自羅氏公司)加入lml l×緩沖液II工；
5、10x緩沖液工(PIt7．卜7．4)
NaCl 80g
Na，[tPO。．121t，0 360g
KCl 2g
KIt，P。．2g
加三蒸水至11，并高壓滅菌；
6、10x緩沖液II(PIt7．0)
NaCl 175．3g
檸檬酸鈉88．2g
[tCl幾滴
加三蒸水至11，并高壓滅菌；
7、緩沖液II工(PIt7．9)
／riS 121．1g
NaCl 87．66g
[tCl 60ml左右
加三蒸水至11，并高壓滅菌；
8、緩沖液IV
1M／riS一[tCl(PIt9．5)／its 121．1g加[tCl 3ml左右，加水900ml，調(diào)PH至9．5，加水至11，并高壓滅菌；
IM NaCl =NaCl 58. 44 加水至 11，并高壓滅菌；0. 5M MgCl2 101. 65g MgCl2. 6H20 加水至 11，并高壓滅菌；9、固定液多聚甲醛40g加IX緩沖液I至11，稍加熱(約50_60度)攪拌至溶 解；10、顯色劑 A =NBT Ig 加 70% DMFl 1. 44ml ；11、顯色劑 B =BCIP Ig 加 100% DMF30ml。本發(fā)明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。實(shí)施例2一種Stat3基因原位雜交檢測方法及其試劑盒應(yīng)用一、標(biāo)本處理1、用IOml的離心管，裝4. 5ml淋巴細(xì)胞分離液，再將3ml抗凝血緩慢加入含有淋 巴細(xì)胞分離液(血淋巴細(xì)胞分離液=1 1.5)的離心管中，2000r/min離心IOmin ；2、吸取中間層白細(xì)胞至另一離心管中，再在此管中加入約兩倍的IX緩沖液I，混 勻，1500g/min 離心 IOmin ；3、棄上清.沉淀加入約兩倍的1 X緩沖液I，混勻，1500g/min離心IOmin ；4、棄上清，并把試管口多余的液體用擦手紙吸去。再將沉淀制成懸液，滴在玻片上 推片，自然干燥。(有條件的醫(yī)院可以用制片機(jī)制片。)3ml血，可以做4張片子；5、用40ml 4%固定液，在玻璃缸中，固定30min，再用IX緩沖液I洗5min。每缸 可以放16片；6、標(biāo)本可保存在-20°c，或繼續(xù)做實(shí)驗(yàn)。二、將試劑盒中試劑配制成使用濃度1、將IOX緩沖液I用三蒸水按1 10稀釋成IX緩沖液I ；2、將20X緩沖液II用三蒸水按1 10稀釋成2X緩沖液II ；按1 100稀釋成0. 2X緩沖液II ；按1 200稀釋成0. 1 X緩沖液II ；3、將IOX緩沖液III用三蒸水按1 10稀釋成1 X緩沖液III ；4、10X緩沖液IV用三蒸水按1 10稀釋成X緩沖液IV (取1#，2#，3#各10ml， 加水至IOOml既可)。三、實(shí)驗(yàn)步驟1、取每位待檢者標(biāo)本兩張，(另外兩張留作復(fù)查用)及陽性對照標(biāo)本兩張(每次 實(shí)驗(yàn)做一對陽性對照)；2、在玻璃缸里加消化液(消化液IOOul加IX緩沖液199.9ml，即為使用濃 度)20ml。37°C水浴預(yù)熱10分鐘。放進(jìn)16張玻片，37°C處理12min，再用1 X緩沖液I洗 5min ；3、用0. 2%的保護(hù)液(保護(hù)液Iml加IX緩沖液I99ml即為使用濃度)洗IOmin, 三蒸水洗5min，以上過程都在玻璃缸進(jìn)行。玻片自然干燥；4、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加預(yù)雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在 42°C恒溫水浴箱中3h以上；5、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)，用70%，90%，95%的乙醇各洗 2min,自然干燥；
6、將玻片放入保濕盒內(nèi)，每位病人標(biāo)本兩張，一張加正義雜交液20ul/片，另一張 加反義雜交液20ul/片，蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在42°C恒溫水浴箱中16-24h ；7、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)在42°C恒溫水浴箱中用2X緩沖液II洗兩次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 2X緩沖液II洗一次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 1 X緩沖液II洗兩次，每次15min ；8、用IX緩沖液III洗30s，取出玻片，自然干燥；9、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加0.5% 1封閉液(Iml封閉液加5ml IX緩沖液 III) IOOul/片，蓋緊保濕盒，在室溫下作用30min ；10、取出玻片，用IX緩沖液III洗30s，自然干燥；11、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加堿性磷酸酶抗體(加入1.8ml 1 X緩沖液III) IOOul/ 片，蓋緊保濕盒在室溫下作用30min ；12、取出玻片，用IX緩沖液III洗3次，每次15min;13、IX緩沖液IV洗2min，加顯色劑(顯色劑A73. 3ul，顯色劑B157. 5ul加到30ml 1 X緩沖液IV中，混勻)，室溫避光12h以上；14、用三蒸水洗5min，自然干燥，(用甘油加10%的IX緩沖液I混勻)封片鏡檢。四、結(jié)果判斷在光鏡下計(jì)數(shù)100-300個(gè)細(xì)胞，計(jì)算染上紫色細(xì)胞的百分比。陽性對照標(biāo)本加反義雜交液的應(yīng)該80%以上染上紫色。所有加正義雜交液的陰性內(nèi)對照應(yīng)無色。地高辛標(biāo)記的cDNA、RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標(biāo)記優(yōu)點(diǎn)，還克 服了生物素標(biāo)記的探針在原位雜交過程中受組織內(nèi)源性生物素干憂等缺點(diǎn))，將該雜交探 針與人體血液白細(xì)胞的待測RNA核酸進(jìn)行雜交，再用免疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察 mRNA的存在和定位，根據(jù)染色的細(xì)胞數(shù)，判斷目的基因的表達(dá)量。本發(fā)明方法是目前常用的核酸原位雜交技術(shù)，該方法通過檢測底物細(xì)胞中的 Stat3基因表達(dá)量，用來確定癌癥是否發(fā)生。臨床研究表明，Stat3基因是癌癥的特異基因， 因?yàn)镾tat3基因在正常人中不表達(dá)，唯獨(dú)在癌表達(dá)，說明癌癥已經(jīng)發(fā)生，用來確定癌癥是否 發(fā)生，或是正常。從而獲得癌癥的診斷信息。本發(fā)明實(shí)施例采樣為癌癥病人5名，正常對照組5名。抽所有待檢人的外周血 3-5毫升(分離白細(xì)胞)做原位雜交。結(jié)果表示，所有癌癥患者Stat3基因有過度表達(dá)，細(xì) 胞染色；正常對照組Stat3基因不表達(dá)，細(xì)胞無染色。具體結(jié)果請見圖1和圖2。實(shí)施例3用Stat3基因試劑盒檢測癌癥疾病與用CEA基因試劑盒檢測癌癥疾病之間平行實(shí) 驗(yàn)。為了科學(xué)評價(jià)上述基因各自在癌癥疾病的特異性、敏感性、準(zhǔn)確性。我們用平行試 驗(yàn)的方法，同時(shí)檢測上述基因的mRNA，檢測技術(shù)采用核酸原位雜交技術(shù)，用同一例癌癥疾病 患者的外周血，同時(shí)檢測Stat3基因和CEA(癌胚抗原)基因的mRNA(進(jìn)行核酸原位雜交、 免疫組化染色、鏡下記數(shù)、結(jié)果報(bào)告等均采用實(shí)施例1和實(shí)施例2的原位雜交技術(shù)的相同方 法和步驟及試劑)。發(fā)現(xiàn)Stat3基因在癌癥疾病病人中表達(dá)量比CEA基因在同一疾病病人的表達(dá)量要高。結(jié)果表明，Stat3基因?qū)Π┌Y疾病診斷的特異性、敏感性、準(zhǔn)確性比CEA基 因更好，原位雜交基因表達(dá)圖顯示，Stat3基因的表達(dá)量是70%，CEA基因的表達(dá)量是50%。 本發(fā)明的試劑盒作于癌癥疾病診斷的指標(biāo)有非常重要的臨床意義。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。SEQUENCE LISTING<110>芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司<120> 一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用<130>/<160>1<170>PatentIn version 3. 3<210>1<211>4953<212>DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400>1ggtttccggagctgcggcggcgcagactgggagggggagccgggggttccgacgtcgcag60
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一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測癌癥疾病藥物中的應(yīng)用，所述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的雜交探針序列如SEQID NO. 1所 示的RNA序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非 放射性標(biāo)記物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P 中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高 辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的試劑盒還包括增效劑，所述的 增效劑是堿性磷酸酶抗體。
8.一種Stat3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，其特征在于，所述 的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。
9.一種Stat3基因的原位雜交檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a、將權(quán)利要求8所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測a步驟得到的雜交復(fù)合體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其特征在于a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為 核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的時(shí)間為16-24小時(shí)，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo)本或 組織細(xì)胞標(biāo)本。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種Stat3(Signal Transducer and Activator ofTranscription 3，STAT3)基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還提供了一種Stat3基因原位雜交檢測方法。另外，本發(fā)明還提供了試劑盒在制備檢測癌癥疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。本發(fā)明的檢測方法操作方便、簡單，能在區(qū)級以上醫(yī)院普遍使用和推廣。
文檔編號C12Q1/68GK101993945SQ20091005618
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月10日 公開號200910056182.發(fā)明者張?jiān)聘? 裘建英 申請人:芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司