專利名稱：一種誘導(dǎo)草坪草腐霉枯萎病病原菌有性世代的方法
一種誘導(dǎo)草坪草腐霉枯萎病病原菌有性世代的方法技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明是草坪草腐霉枯萎病病原菌有性世代誘導(dǎo)的方法，屬于農(nóng)業(yè) 微生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
全世界的腐霉屬(Pythium)真菌有120多種，其中能對草坪草產(chǎn)生危害的有幾十 種，中國報(bào)道有55種。由腐霉屬引起的草坪草腐霉枯萎病是一種毀滅性病害，引起根、莖和 心葉腐爛，發(fā)病條件適宜時，能在一夜之間毀壞大面積草坪，對景觀效果破壞極為嚴(yán)重。病 原菌致病種的差異可引起草坪不同器官和受侵染的程度不同，所采取的相應(yīng)的防治措施也 不盡相同。因此病原菌致病種的鑒定對于病害的預(yù)防和防治工作具有積極的指導(dǎo)作用。目前，腐霉屬間種的區(qū)分的主要依據(jù)為有性繁殖結(jié)構(gòu)和無性繁殖結(jié)構(gòu)的不同形態(tài) 特征。無性繁殖結(jié)構(gòu)主要是孢子囊等，有性繁殖結(jié)構(gòu)通過卵孢子直徑、滿器或不滿器、雄器 性態(tài)、藏卵器表層平滑或是否具刺等作為分類依據(jù)。關(guān)于草坪腐霉屬的有性態(tài)誘導(dǎo)的報(bào)道 不多，一般采用CMA、Petri液或PS液誘導(dǎo)。但一般誘導(dǎo)時間較長(CMA —般21d后形成有 性態(tài)器官，Petri液也需要48h)。徐作班等在研究番茄莖腐病病原菌時使用Petri液誘導(dǎo) 有性態(tài)，48h后能形成雄器和藏卵器。王國良等在研究草坪腐霉枯萎病菌時采用CMA培養(yǎng) 基。陸家云等以PS液作為腐霉菌有性態(tài)的誘導(dǎo)方法。以上各誘導(dǎo)方法雖然能形成有性態(tài)器官，但誘導(dǎo)時間較長，并且誘導(dǎo)液的配制也 相對繁瑣。本研究是在Petri液的基礎(chǔ)上，研究單營養(yǎng)元素對草坪腐霉枯萎病病原菌有性 世代誘導(dǎo)的影響及影響力大小。研究結(jié)果表明，采用CaCl2溶液誘導(dǎo)有性世代，不僅誘導(dǎo)數(shù) 量多、速度快，而且誘導(dǎo)溶液的配制也相對簡單，并且可伴隨有孢子囊的出現(xiàn)，這樣，省去了 無性態(tài)誘導(dǎo)的過程，大大節(jié)省了病原菌的鑒定時間，提高了鑒定效率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種草坪腐霉枯萎病菌病原有性世代誘導(dǎo)的方法。在誘導(dǎo)溶液中培養(yǎng) 草坪草腐霉枯萎病病原菌的菌絲，27°C靜止培養(yǎng)，12h后即可形成藏卵器，16h后可形成大 量藏卵器和雄器，并且伴隨有孢子囊的出現(xiàn)。病原菌的有性態(tài)和無性態(tài)結(jié)構(gòu)特征可一步完 成。發(fā)明內(nèi)容如下1.誘導(dǎo)液的配制在200ml滅菌水中加入0. 012g CaCl2,搖勻。2.誘導(dǎo)過程在配制好的CaCl2溶液中少量、多次挑取草坪腐霉枯萎病病原菌菌 絲，置27°C生化培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)。12h后可觀察有性態(tài)結(jié)構(gòu)特征。本發(fā)明中的誘導(dǎo)液配制簡單，誘導(dǎo)過程短，并且有性態(tài)和無性態(tài)器官可同時出現(xiàn)， 鑒定過程可一步完成，大大節(jié)省了誘導(dǎo)時間，提高了鑒定效率，更適宜于大量病原菌的鑒 定。
具體實(shí)施例方式1.病原菌來源采集草坪腐霉枯萎病典型病樣，采用常規(guī)的組織分離法進(jìn)行病原菌的分離。純化后置PDA試管斜面保存。2.病原菌擴(kuò)繁在PDA培養(yǎng)基上接種試管保存的病原菌，27°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48h。3.誘導(dǎo)液的配制在500ml三角瓶內(nèi)裝入200ml蒸餾水，121°C高壓滅菌25分鐘。 1/10000天平稱取CaCl2分析純0. 012g，無菌條件下置于晾涼的200ml滅菌水中，搖勻。4.病原菌接種誘導(dǎo)液無菌條件下，用接種針將擴(kuò)繁好的病原菌菌絲少量、多次 分別挑取到誘導(dǎo)液和滅菌水中(滅菌水培養(yǎng)為對照)。5.培養(yǎng)過程將接種好的誘導(dǎo)液和滅菌水置于27°C生化培養(yǎng)箱中，靜止培養(yǎng)。12h 后觀察有性態(tài)器官的形態(tài)特征。
權(quán)利要求
一種誘導(dǎo)草坪草腐霉枯萎病病原菌有性世代的方法，本發(fā)明特點(diǎn)在于應(yīng)用誘導(dǎo)液對草坪草腐霉枯萎病病原菌在一定溫度下進(jìn)行有性世代誘導(dǎo)，方法簡單、誘導(dǎo)時間短、有性態(tài)器官數(shù)量多，有性世代和無性世代可一步誘導(dǎo)成功等1.草坪草腐霉枯萎病病原菌可由采自典型病害樣本分離純化而得；2誘導(dǎo)液的配制方法在500ml三角瓶內(nèi)裝入200ml蒸餾水，121℃高壓滅菌25分鐘，1/10000天平稱取CaCl2分析純0.012g，無菌條件下置于晾涼的200ml滅菌水中，搖勻；3誘導(dǎo)過程無菌條件下，用接種針將PDA中擴(kuò)繁好的病原菌菌絲少量、多次挑取到誘導(dǎo)液中，置于27℃生化培養(yǎng)箱中，靜止培養(yǎng)，12h后觀察有性態(tài)器官的形態(tài)特征，16h有性器官數(shù)量可達(dá)到最大量；保護(hù)的范圍誘導(dǎo)液的配制方法和草坪草腐霉枯萎病病原菌有性世代的誘導(dǎo)過程。
2.草坪草腐霉枯萎病病原菌可由采自典型病害樣本分離純化而得； 2誘導(dǎo)液的配制方法在500ml三角瓶內(nèi)裝入200ml蒸餾水，121°C高壓滅菌25分鐘， 1/10000天平稱取CaCl2分析純0. 012g，無菌條件下置于晾涼的200ml滅菌水中，搖勻；
3.誘導(dǎo)過程無菌條件下，用接種針將PDA中擴(kuò)繁好的病原菌菌絲少量、多次挑取到誘 導(dǎo)液中，置于27°C生化培養(yǎng)箱中，靜止培養(yǎng)，12h后觀察有性態(tài)器官的形態(tài)特征，16h有性器 官數(shù)量可達(dá)到最大量；保護(hù)的范圍誘導(dǎo)液的配制方法和草坪草腐霉枯萎病病原菌有性世代的誘導(dǎo)過程。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域。全世界120多種腐霉屬(Pythium)真菌有55種(中國報(bào)道)對草坪草產(chǎn)生危害。不同的致病種間的差異性導(dǎo)致寄主不同器官受侵染的程度不同，因此對草坪草腐霉致病種進(jìn)行正確的鑒定分類，是采取相應(yīng)的預(yù)防和防治措施的前提。腐霉屬種的鑒定，主要依據(jù)雄器、藏卵器等有性器官和菌絲、孢子囊等無性器官的特征，所以快速誘導(dǎo)有性態(tài)為腐霉菌鑒定的關(guān)鍵。本發(fā)明應(yīng)用一定的誘導(dǎo)液，在一定的溫度下培養(yǎng)病原菌菌絲，12h后即可出現(xiàn)藏卵器，16h后可出現(xiàn)大量藏卵器和雄器，并且伴隨有孢子囊。本發(fā)明誘導(dǎo)草坪草腐霉病菌有性世代具有快速、簡便的特點(diǎn)，并且有性和無性器官誘導(dǎo)可一步完成，提高了鑒定效率。
文檔編號C12R1/645GK101906396SQ200910069110
公開日2010年12月8日 申請日期2009年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月4日
發(fā)明者劉曉琳, 劉水芳, 孫淑琴, 楊秀榮, 郝永娟 申請人:天津市植物保護(hù)研究所