專利名稱：：一種釀酒酵母及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的是微生物和果酒釀造技術(shù)，特別是一種釀酒酵母菌株及該菌株的應(yīng)用。二
背景技術(shù)：
：在果酒釀造中，酵母菌是發(fā)酵的原動力，要取得發(fā)酵的高效率和優(yōu)質(zhì)的果酒產(chǎn)品，就要有優(yōu)良的生產(chǎn)菌種。能夠發(fā)酵果汁形成果酒的酵母菌種類繁多，但不同酵母菌發(fā)酵速率、產(chǎn)酒能力和生成有益的副產(chǎn)物不同，對發(fā)酵環(huán)境的適應(yīng)能力也不同。由于各種水果都具有不同特點，特別是沙棘汁又具有酸度高等特殊性，目前尚無沙棘果酒優(yōu)良酵母菌，而在沙棘果酒發(fā)酵中通常使用的葡萄酒活性干酵母，存在著發(fā)酵不徹底，沙棘果酒殘?zhí)求{、酒度低、果香淡薄等缺占。因此，篩選出適合沙棘果酒發(fā)酵用的酵母菌，突出產(chǎn)品特有的沙棘香氣，克服目前采用葡萄酒活性干酵母不適應(yīng)沙棘汁高酸的缺陷，為生產(chǎn)提供優(yōu)良的菌株，結(jié)合最佳的發(fā)酵工藝，可以獲得發(fā)酵生產(chǎn)的成功，使高檔的沙棘果酒產(chǎn)品具有廣闊的市場前景和發(fā)展?jié)摿?，具有非常重要的?jīng)濟(jì)意義、社會意義和生態(tài)效益。三
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種釀酒酵母，這種酵母菌菌株能有效適應(yīng)沙棘果酒發(fā)酵，用于克服葡萄酒^性干酵母不適應(yīng)沙棘汁高酸的缺陷，釀酒酵母(Sacc/iara/^cescwev&'ae)已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCCNo.3080。釀酒酵母(&3fcc/7flram_yc&ycewWw'ae)CGMCCNo.3080的分離源為沙棘果汁自然發(fā)酵液、沙棘果的果皮及果肉、沙棘果園土壤；其菌落特征在麥芽汁液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)管壁無膜無蹼；麥芽汁瓊脂固體培養(yǎng)基上生長的菌落為白色，奶油狀，表面平滑且有光澤，邊緣整齊。本發(fā)明的另一個目的是將釀酒酵母(&2cc/wraw_vc^cewv/wk)CGMCCNo.3080，用于以沙棘汁或沙棘果為原料的沙棘果酒的制備，生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的沙棘果酒。沙棘汁為原料，其可溶性固形物含量為6%8%;沙棘果為原料則先將沙棘果榨汁，除油后制成含可溶性固形物含量為6%8%的沙棘汁，然后再制備沙棘果酒。制備沙棘果酒工藝流程為沙棘汁—去油—調(diào)整成分—滅菌—接種—主發(fā)酵—后發(fā)酵—降酸—陳釀—澄清—過濾—殺菌—成品。流程中，調(diào)整成分的初始糖度為2023%，接種量為812%(V/V)，主.發(fā)酵溫度為2326°C。本發(fā)明具有的積極效果本發(fā)明中的釀酒酵母(&^c^ramyc"cerevWae)CGMCCNo.3080，是從沙棘果汁自然發(fā)酵液、沙棘果園土壤、沙棘果的果皮及果肉中，經(jīng)培養(yǎng)、篩選、優(yōu)化后分離得到的全新菌株，安全性優(yōu)越；該菌株能充分適應(yīng)沙棘汁較高的酸度，菌株發(fā)酵速度快，用該酵母菌生產(chǎn)的沙棘果酒，殘?zhí)堑?、酒度高、果香濃郁，酒體豐滿，具有獨特的沙棘果酒風(fēng)格。四圖1為釀酒酵母在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)；圖2為釀酒酵母營養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)(X400);圖3為釀酒酵母出芽細(xì)胞形態(tài)(X400);圖4為釀酒酵母子囊孢子形態(tài)(X400);圖5為釀酒酵母的發(fā)酵力曲線；圖6為發(fā)酵溫度與初始糖度對沙棘果酒感官質(zhì)量的響應(yīng)面圖(接種量=12%);圖7為發(fā)酵溫度與初始糖度對沙棘果酒感官質(zhì)量的等高線圖(接種量=12%);圖8為初始糖度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的響應(yīng)面圖(發(fā)酵溫度=25°C);圖9為初始糖度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的等高線圖(發(fā)酵溫度=25°C);圖10為發(fā)酵溫度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的響應(yīng)面圖(初始糖度=20%)。圖11為發(fā)酵溫度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的等高線圖(初始糖度=20%)。保藏信息菌株名稱釀酒酵母(5scc力aro/z/cescere^/Wae)CGMCCNo.3080保藏日期2009年5年31日保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏編號CGMCCNo.3080五具體實施例方式菌株名稱釀酒酵母(<Sacc//aram>^scwev^ae)CGMCCNo.3080，已經(jīng)于2009年5年31日在位于中國北京市的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)進(jìn)行了保藏，保藏號為CGMCCNo.3080。下面通過具體的實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。實施例1:釀酒酵母(&7cc/z"ramj/cescem^^e)CGMCCNo.3080的分離鑒定、生物學(xué)特性及其在沙棘果酒發(fā)酵中的應(yīng)用1、材料1.1酵母菌分離源沙棘果汁發(fā)酵液(自然發(fā)酵)、沙棘果園土壤、沙棘果的果皮及果肉。1.2試劑<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>1.4培養(yǎng)基的配制1.4.1選擇性富集培養(yǎng)基酒精度10。/。(V/V)液體麥芽汁培養(yǎng)基(加入4倍于麥芽重量6(TC的水，.在556(TC水浴鍋中保溫糖化，經(jīng)34h后，用紗布過濾，煮沸后再用脫脂棉過濾。調(diào)整糖度10%，滅菌后加酒精)。1.4.2分離培養(yǎng)基麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基。加入4倍于麥芽重量6(TC水，在556(TC水浴鍋中保溫糖化，經(jīng)34h后，用紗布過濾，煮沸后再用脫脂棉過濾，-調(diào)整糖度10%，加入1.5%2%的瓊脂，自然pH值，滅菌備用)。1.4.3酵母菌保藏用培養(yǎng)基麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基(同分離培養(yǎng)基)。1.4.4酵母膏蛋白胨葡萄糖(YPD)培養(yǎng).基酵母膏l(xiāng)g、蛋白胨2g、葡萄糖2g、蒸餾水100mL。1.4.5玉米粉瓊脂培養(yǎng)基取12.5g黃玉米粉加水300mL,攪拌均勻，60'C左右維持約1小時，用紗布過濾后，加入適量的水補足300mL，加入瓊脂，加熱使之慢慢融化，滅菌備用。1.4.6產(chǎn)子囊孢子培養(yǎng)基酵母膏0.3g、麥芽汁0.3g、蛋白胨0.5g、葡萄糖lg、瓊脂2g、蒸餾水100mL。2、釀酒酵母的分離、鑒定2.1菌株分離取適量樣品加入到已滅菌的酒精度1.0%(V/V)的液體麥芽汁培養(yǎng)基中，置于生化培養(yǎng)箱中28t:培養(yǎng)48h。每24小時鏡檢有無活菌存在，若有活菌存在，在無菌條件下，取0.10.2mL酵母富集液涂布于麥芽汁固體平皿中，然后在28'C條件下培養(yǎng)23天左右，若有菌落長出后，選擇具有典型酵母菌菌落特征的單菌落在麥芽汁固體平皿中劃線分離23次，鏡檢為純種酵母菌后接種入麥芽汁固體斜面，將分離得到的酵母菌編號，4X:冰箱保存。2.2篩選.2.2.1酵母菌一級篩選采用杜氏小管發(fā)酵法，測定各菌株產(chǎn)氣能力，比較各株酵母菌的起酵能力，初步篩選出具有優(yōu)良發(fā)酵性能的菌株。將10mL的13%麥芽汁加入帶有杜氏小管的試管中，滅菌冷卻后，以接種量lxlO〒個/mL接入酵母菌活化液，在28"C條件下，靜止發(fā)酵48h，觀察并記錄各菌株的產(chǎn)氣時間和產(chǎn)氣量，試驗重復(fù)3次。2.2.2酵母菌二級篩選采用沙棘汁發(fā)酵法，測定各株酵母菌的發(fā)酵能力。首先將沙棘汁糖度調(diào)整至20%，以接種量lxl(T個/mL接入酵母菌活化液，在28°C條件下，靜止發(fā)酵7天，采用蒸餾法測定發(fā)酵液的酒精度并進(jìn)行感官評定，試驗重復(fù)3次。2.2.3酵母菌三級篩選采用杜氏小管發(fā)酵法，測定各株酵母菌對乙醇和二氧化硫的耐性。接種量為lxl07+/mL，將酵母菌活化液分別接入含不同濃度乙醇(8%、10%、12%、14%、16%、18%、20。/。)和不同濃度二氧化硫(60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L、140mg/L、160mg/L、180mg/L、200mg/L)的13°/。麥芽汁中，接種量為1><107個/mL，在28"C條件下恒溫培養(yǎng)4天，觀察并記錄各菌株的產(chǎn)氣情況，試驗重復(fù)3次。'2.3.菌株初步鑒定2.3.1表型特征固體培養(yǎng)特征；液體培養(yǎng)特征。2.3.2生理生化鑒定(1)糖類發(fā)酵試驗該鑒定分別以葡萄糖、麥芽糖、半乳糖、乳糖和蔗糖作為碳源進(jìn)行測試。將一定量的上述糖分別加入到含有杜氏發(fā)酵管的氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，使?jié)舛冗_(dá)到5Ommol/L，將酵母菌經(jīng)活化液接種到上述培養(yǎng)基中，置于25。C條件下培養(yǎng)，一周左右，并且每天振動試管，以幫助沉淀酵母，同時檢查產(chǎn)生氣泡情況，以不含碳源的做陰性對照，4周后再觀察一次，重復(fù)3次。(2)同化碳源試驗該鑒定分別以棉籽糖、赤蘚糖醇、蔗糖、可溶性淀粉、核糖醇、D-木糖、D-甘露糖醇、纖維二糖、L-阿拉伯糖、琥珀酸、海藻糖、D-核糖、檸檬酸、l-乳糖、L-鼠李糖和肌醇作為唯一碳源進(jìn)行測試。將一定量的上述糖分別加入到含有杜氏發(fā)酵管的氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，使?jié)舛冗_(dá)到50mmol/L，過濾(0.20pm)除菌，以不含碳源的試管作為不生長的空白對照。酵母菌經(jīng)活化后分別接入到上述培養(yǎng)基中，置于25'C條件下培養(yǎng)，為，了保持培養(yǎng)結(jié)果穩(wěn)定性，使試管傾暴露最大液體麥面，而且每天振動試管，觀察混濁程度，觀察至第4周，以試管中出現(xiàn)混濁計為陽性，無混濁計為陰性，重復(fù)3次。結(jié)果觀察標(biāo)準(zhǔn)試管后襯以有黑線的卡片，觀察己生長酵母菌的混濁程度，若將黑線完全掩蓋，，結(jié)果記為+++;若能看到不連續(xù)的線段，記為++;若能看到不連續(xù)線段，記為+;若能看到整條黑線，記為一，表示酵母未生長。(3)同化氮源試驗該鑒定分別以硝酸鉀、乙胺和尸胺作為唯一氮源進(jìn)行測試，向碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加分別入硝酸鉀、乙胺、尸胺，加入量分別為0.078°/。、乙胺0.064%、尸胺0.068%，過濾(0.20pm)除菌，酵母菌經(jīng)活化后分別接入到上述培養(yǎng)基中，置于25。C培養(yǎng)1周。以不加氮源的培養(yǎng)基作為空白對照，重復(fù)三次。結(jié)果觀察標(biāo)準(zhǔn)與同化碳源測試相同，混濁程度為++或+++，則為能生長，否則不能生長。(4)無維生素生長測試將無維生素液體培養(yǎng)基經(jīng)過濾(0.2(Him)除菌，無菌操作接種己活化好的酵母菌，25'C培養(yǎng)7天觀察，為避免由于接種而混入的微量維生素而引起的誤差，可將已培養(yǎng)7天的初始培養(yǎng)液作為酵母的活化液，取少量接種到另一無維生素培養(yǎng)基試管中，'于25t:培養(yǎng)7天。結(jié)果觀察標(biāo)準(zhǔn)如碳源同化測試，如果試管中溶液呈現(xiàn)+++，為能夠合成生長所需的維生素；若為++，則為不能合成生長所需的維生素。(5)100mg/kg放線酮抗性測試溶解lg放線酮于2.5mL丙酮中，向丙酮溶液中加入6.7g氮源礎(chǔ)培養(yǎng)基，再加入含10g葡萄糖的蒸餾水，充分混勻后過濾(0,20Kim)除菌，該溶液含放線酮10,000mg/kg。取上述溶液0.05mL加入到含4.5mL無菌水的試管中，制成含100mg/kg放線酮的培養(yǎng)基。向培養(yǎng)基中接種已活化好的酵母，25'C培養(yǎng)3周。結(jié)果觀察標(biāo)準(zhǔn)同碳源同化測試。(6)37'C生長測試將活化好的酵母菌劃線接種到麥芽汁瓊脂斜面上，置于37'C培養(yǎng)24天，如果有弱生，則傳代一次，在37"C繼續(xù)培養(yǎng)，如果能生長，則表示能在37r下生長。具體結(jié)果見表l、表2、表3、表4和表5。在多次采樣基礎(chǔ)上，經(jīng)過富集培養(yǎng)和劃線分離，共分離得到酵母菌108株，按其來源進(jìn)行分類，來自土壤的酵母40株；來自沙棘果和果汁的酵母68株。酵母菌在含有杜氏小管的試管中，28'C發(fā)酵48小時，能產(chǎn)氣達(dá)到約等于杜氏小管滿體積的酵母菌有15株。將初篩得到的15株酵母菌分別接種到20%的沙棘中，于28。C發(fā)酵7天，^定其酒精度.，并進(jìn)行感官評定。發(fā)酵7天后結(jié)果為，發(fā)酵酒精度大于10%(V/V)的酵母菌有3株，酒精度在9%10%之間的有4株，在8%9%之間的有6株，低于8%的有2株。酒精度大于10%(V/V)的3株酵母菌分別是來自沙棘果園土壤的酵母菌SJY78，來自沙棘果皮的SJY64，來自沙棘果汁自然發(fā)酵液中的SJY1。這3株酵母菌中，來自沙棘果園土壤的酵母菌SJY78經(jīng)7天主發(fā)酵后的沙棘果酒酒精度為10.1%(V/V)，雖有沙棘味，但稍苦澀；而來自沙棘果皮的SJY64及來自沙棘果汁自然發(fā)酵液中的SJY1釀造的沙棘果酒酒香濃郁，較好地保持沙棘的果香，菌株SJY64經(jīng)7天主發(fā)酵后的沙棘果酒酒精度為10.3%(V/V)，菌株SJY1經(jīng)7天主發(fā)酵后酒精度可達(dá)11.4%(V/V)，而且口味獨特，典型性好，與目前工業(yè)上應(yīng)用的葡萄酒活性干酵母相比產(chǎn)酒高，所以將菌株SJY1列為目標(biāo)菌株進(jìn)行后續(xù)試驗，并送至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)進(jìn)行存活試驗與保藏，保藏號-CGMCCNo.3080。表1為篩選酵母菌的耐性試驗結(jié)果，供試菌種在耐酒精、二氧化硫及pH值的實驗結(jié)果表明，酵母菌SJY1可耐18%的酒精度，但需3.5d才能使杜氏小管產(chǎn)氣達(dá)到滿體積，可耐200mg/LS02，值得注意的是，它可耐受pH值2.5的酸度；SJY64可耐14。/。的酒精度，該條件下2d產(chǎn)氣能達(dá)到杜氏小管滿體積，它可耐160mg/LSO2，耐受pH值3.0的酸度；SJY78可耐14%的酒精度，需3d能產(chǎn)氣達(dá)到杜氏小管滿體積。它可耐140mg/LSO2，耐受pH值3.0的酸度。由此可見，酵母菌SJY1非常適合沙棘果酒酵母耐酸性強(qiáng)的要求。表1篩選酵母菌的耐性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注"+'，表示陽性反應(yīng)，"一"表示陰性反應(yīng)，"V"表示可變反應(yīng)。表3同化碳源試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注"+"表示陽性反應(yīng)，"一"表示陰性反應(yīng)，"v"表示可變反應(yīng)。表4同化氮源試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注"+"表示陽性反應(yīng)，"一"表示陰性反應(yīng)，"v"表示可變反應(yīng)'。根據(jù)對酵母形態(tài)學(xué)、有性生殖方式的觀察，發(fā)酵糖、同化碳源、同化氮源、無維生素生長、37r生長以及抗放線菌酮試驗結(jié)果，并對照J(rèn).A.巴尼特著，胡瑞卿譯《酵母菌的特征與鑒定手冊》(青島海洋大學(xué)出版社，1991)對酵母菌的描述，可以鑒定SJY1為釀酒酵母(Sflcc/zaramycascewv^/ae)。3、菌落特征在麥芽汁液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)管壁無膜無蹼；麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落為白色，奶油狀，表面平滑且有光澤，邊緣整齊。4、顯微鏡下的形態(tài)圖1提供的是釀酒酵母SJY1在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)。圖2提供的是釀酒酵母SJY1營養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)(X400),圖3提供的是釀酒酵母SJY1出芽細(xì)胞形態(tài)(X400)，如圖所示，營養(yǎng)細(xì)胞呈卵圓形，細(xì)胞大小為(3.385.81)X(4.357.74)pm，無性繁殖方式為單邊出芽或兩邊出芽。圖4提供的是釀酒酵母SJY1子囊孢子形態(tài)(X400)，在玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上未形成假菌絲。有子囊孢子形成，每個子囊含14個子囊孢子，抱子呈圓形。'5、釀酒酵母SJY1主要發(fā)酵特性鑒定5.1酵母菌的發(fā)酵力測定采用C02失重法。將活化好的菌種接入已滅菌的10%麥汁液體培養(yǎng)基中，分別在23匸、28°C、33°C、38°C，恒溫培養(yǎng)96h，每12小時定時稱重并記錄失重。以C02失重量為縱坐標(biāo)，發(fā)酵時間為橫坐標(biāo)，繪制發(fā)酵力曲線。5.2酵母菌的凝聚性測定酵母菌接種于麥芽汁液體培養(yǎng)基中，25"C培養(yǎng)5天，取培養(yǎng)液裝于離心管中以3500r/min，離心15min收集酵母細(xì)胞，用無菌水洗滌23次，棄去上清液，稱取lg菌泥于刻度離心管中，加10mL的醋酸鹽緩沖液(pH4.5)，2(TC靜置20min后，搖動離心管5min使酵母細(xì)胞重新均勻懸浮，再靜置，記錄10min時酵母細(xì)胞沉淀的毫升數(shù)。圖5提供了釀酒酵母SJY1的發(fā)酵力曲線，由圖5可知，自選釀酒酵母SJY1在第1224小時內(nèi)，發(fā)酵速度快，28"C時的平均發(fā)酵速度為0.38g/h，二氧化碳失重為9.8g，達(dá)到最大。另外，釀酒酵母SJY1的本斯值為3.4mL，說明其凝聚性強(qiáng)，有利于該沙棘果酒發(fā)酵結(jié)束后的澄清。釀酒酵母SJY1在沙棘果酒發(fā)酵中的應(yīng)用。1、材料與設(shè)備1.1材料黑龍江省農(nóng)科院漿果研究所產(chǎn)沙棘汁，沙棘汁可溶性固形物含量8%;白砂糖，食品級；自選釀酒酵母SJY1。酵母菌保藏用培養(yǎng)基麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基(同上)；酵母活化培養(yǎng)基沙棘汁加入等體積的水，調(diào)整糖度至15%。1.2主要試劑<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>1.3主要儀器<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2、實驗方法2.1沙棘果酒釀造工藝2丄1工藝流程沙棘汁—去油4調(diào)整成分—滅菌—接種—主發(fā)酵—后發(fā)酵—降酸—陳釀—澄清—過濾—殺菌4成品2丄2操作要點取沙棘汁，離心去油后，按照實驗要求調(diào)整初始糖度(此處用可溶性固形物代替含糖量)，常規(guī)滅菌后，添加80mg/L的S02，接種時按要求接入培養(yǎng)24h的菌體濃度為2.0xl08cfo/mL的釀酒酵母SJY1液。主發(fā)酵溫度25'C，發(fā)酵至殘?zhí)遣辉倜黠@降低時去除酒腳，在室溫后發(fā)酵7d后，采用2.0g/L碳酸鈣進(jìn)行降酸，然后在1518。C酒窖中陳釀30d。取出后用0.4g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)進(jìn)行澄清，過濾后進(jìn)行感官評定和理化分析。2.2釀酒酵母SJY1發(fā)酵沙棘果酒實驗設(shè)計在單因素實驗基礎(chǔ)上，選取發(fā)酵溫度(Xl)、初始糖度(x2)、接種量(x3)3因素作為考察因素，以酒樣的感官評分為因變量(Y)，設(shè)計響應(yīng)面分析實驗(見表6)，研究該釀酒酵母SJY1發(fā)酵沙棘果酒的最佳工藝參數(shù)。表6響應(yīng)面分析實驗因素編碼及水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注X產(chǎn)(x廣25)/3;X2=(x2-20)/2;X3=(xr12)/22.3沙棘果酒感官評分方法'沙棘果酒感官評分按照表7進(jìn)行。表7沙棘果酒感官評分標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2.4沙棘果酒理化指標(biāo)測定方法可溶性固形物測定手持折光儀法；酒精度測定酒精計法；還原糖測定斐林試劑法；總酸度測定酸堿滴定法；維生素C測定參考天津市疾病預(yù)防控制中心張培等人在《中國食品衛(wèi)生雜志》2008年第4期上發(fā)表的"高效液相色譜法測定保健食品和飲料中維生素C"文章方法，色譜柱ODS<:18反相色譜柱(250mmx4.6mm，5pm)，流動相0.1%草酸溶液，檢測波長262nm;總黃酮含量測定參考華南理工大學(xué)輕工與食品學(xué)院董華強(qiáng)等人在《農(nóng)業(yè)工程學(xué)報》2007年第2期上發(fā)表的"微波輔助提取多穗柯嫩葉黃酮工藝研究"文章方法，以蘆丁為標(biāo)樣，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色法。2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)采用生物統(tǒng)計SAS(8.0)統(tǒng)計軟件在計算機(jī)上進(jìn)行分析。3、結(jié)果3.1響應(yīng)面實驗結(jié)果按照表6的實驗設(shè)計，響應(yīng)面實驗結(jié)果見表8。表8響應(yīng)面分析實驗設(shè)計及結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>該模型的可靠性分析可從方差分析和確定系數(shù)兩方面考慮。表9是表3實驗結(jié)果的方差分析表，模型的P(F>Fa)=0.0010<0.01，所以回歸模型極顯著，模型確定系數(shù)為112=0.9804,失擬項P-0.6709>0.05，表明失擬不顯著，該模型是穩(wěn)定的，說明模型與實際擬合得很好。在實驗設(shè)計范圍內(nèi)，可以對沙棘果酒的釀造條件進(jìn)行有效的預(yù)測和分析。表10因子的顯著性分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表10為因子的顯著性分析表，由表可見，在一次項中，接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的影響極顯著，二次項中，初始糖度、發(fā)酵溫度的平方影響極顯著，接種量的平方影響顯著；交互項X2X,影響極顯著，X3X,，X3X2影響顯著。根據(jù)回歸方程，應(yīng)用SAS軟件繪制響應(yīng)曲面圖及其等高線圖，可以直觀地反映出各因素對響應(yīng)值影響的變化趨勢。圖6為發(fā)酵溫度與初始糖度對沙棘果酒感官質(zhì)量的響應(yīng)面圖(接種量=12%);圖7為發(fā)酵溫度與初始糖度對沙棘果酒感官質(zhì)量的等高線圖(接種量=12%);圖8為初始糖度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的響應(yīng)面圖(發(fā)酵溫度=25°C);圖9為初始糖度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的等高線圖(發(fā)酵溫度=25°C);圖IO為發(fā)酵溫度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的響應(yīng)面圖(初始糖度=20%);圖11為發(fā)酵溫度與接種量對沙棘果酒感官質(zhì)量的等高線圖(初始糖度=20%)。結(jié)合圖1圖11所示，依據(jù)回歸模型可以預(yù)測在穩(wěn)定狀態(tài)下，沙棘果酒感官評分的最高值，X!=0.128550，X2=-0.030078,X3=-0.825709,與其對應(yīng)的實際值分別為發(fā)酵溫度25.4°C，初始糖度19.9%，接種量10.3%(V/V)，在此條件下的預(yù)測感官評分為88.8分。3.2沙棘果酒理化指標(biāo)分析在最優(yōu)水平下，即發(fā)酵溫度25.4°C，初始糖度19.9%，接種量10.3%(V/V)，利用同樣的菌種、相同的原料和工藝釀制沙棘果酒后，進(jìn)行理化指標(biāo)分析沙棘果酒酒度為11.2%(V/V，20°C)，高于使用葡萄酒活性干酵母發(fā)酵的酒度，使用葡萄酒活性干酵母發(fā)酵的酒度為7.5%(V/V，20°C)。陳釀30天后的沙棘果酒中還原糖為3.5g七"；總酸含量為7.4g七"；感官評定得分為91分；維生素C含量為16.5mg，100mL—1，總黃酮的含量為2.4mg'mL—1;澄清過濾后的酒樣，酒體澄清透明，有光澤，呈金黃色，果香、酒香濃郁，酒體豐滿，具有獨特的沙棘果酒風(fēng)格。實施例2:沙棘果酒的制備原料沙棘果搾汁，除油后制成沙棘汁，沙棘汁中可溶性固形物含量6%。果酒制備工藝條件為發(fā)酵溫度23°C，初始糖度21%，接種量8%(V/V)，其它同實施例1。制備的果酒分析其理化指標(biāo)為沙棘果酒酒度為11.5%(V/V，20°C)。陳釀30天后的沙棘果酒中還原糖為4.0g丄"；總酸含量為7.4gl人感官評定得分為卯分；維生素C含量為17.0mg-100m1/1,總黃酮的含量為2.5mg'mL";陳釀、澄清、過濾后的酒樣，酒體澄清透明，有光澤，呈金黃色，果香、酒香濃郁，酒體豐滿，具有獨特的沙棘果酒風(fēng)格。實施例3:沙棘果酒的制備原料沙棘汁，可溶性固形物含量7%。果酒制備工藝條件為發(fā)酵溫度26°C，初始糖度23%，接種量12。/。V/V，其它同實施例1。制備的果酒理化分析指標(biāo)為沙棘果酒酒度為12.3%(V/V，20°C)。陳釀30天后的沙棘果酒中還原糖為4.1g丄"；總酸含量為7.6g丄"；感官評定得分為92分；維生素C含量為18.2mg'100mi;，總黃酮的含量為2.8mg'ml/1;陳釀、澄清、過濾后的酒樣，澄清透明，有光澤，呈金黃色，果香、酒香濃郁，酒體豐滿，酸甜爽口，具有獨^F的典型沙棘果酒風(fēng)格。權(quán)利要求1、一種釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCCNo.3080。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒酵母(5"acc/zaramyc"cwev/w'ae)CGMCC.No.3080，其特征在于所述的釀酒酵母(Sacc/7aram少c^cewWw'ae)CGMCCNo.3080，其菌落特征在麥芽汁液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)管壁無膜無蹼；麥芽汁瓊脂固體培養(yǎng)基上生長的菌落為白色，奶油狀，表面平滑且有光澤，邊緣整齊。3、一種權(quán)利要求1所述的釀酒酵母(&cc/2flraw少c"CGMCCNo.3080，其特征在于該釀酒酵母用于生產(chǎn)以沙棘汁或沙棘果為原料的沙棘果酒。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的釀酒酵母(&cc/2aramj;cescewv/whe)CGMCCNo.3080，用于生產(chǎn)沙棘果酒的工藝流程為沙棘汁—去油—調(diào)整成分—滅菌—接種—主發(fā)酵—后發(fā)酵—降酸—陳釀—澄清—過濾—殺菌—成品，其特征在于工藝流程中調(diào)整成分的初始糖度為2023%，接種量為812%(V/V)，主發(fā)酵溫度為2326。C。5、根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的釀酒酵母(^cc/^ram^"cweWw'^)CGMCCNo.3080，其特征在于沙棘汁中可溶性固形物含量為68%。全文摘要本發(fā)明公開了一種釀酒酵母及其應(yīng)用，涉及的是微生物和果酒釀造技術(shù)，并將該菌株用于以沙棘汁或沙棘果為原料的沙棘果酒的制備，生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的沙棘果酒。釀酒酵母菌種的分離源為沙棘果汁自然發(fā)酵液、沙棘果的果皮及果肉、沙棘果園土壤，菌落特征為在麥芽汁液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)管壁無膜無蹼；麥芽汁瓊脂固體培養(yǎng)基上生長的菌落為白色，奶油狀，表面平滑且有光澤，邊緣整齊。經(jīng)培養(yǎng)、篩選、優(yōu)化后分離得到的全新菌株，能夠充分適應(yīng)沙棘汁較高的酸度，克服葡萄酒活性干酵母不適應(yīng)沙棘汁高酸的缺陷，菌株發(fā)酵速度快，安全性優(yōu)越；用該酵母菌生產(chǎn)的沙棘果酒，殘?zhí)堑?、酒度高、果香濃郁，酒體豐滿，具有獨特的沙棘果酒風(fēng)格。文檔編號C12G3/02GK101603013SQ20091007235公開日2009年12月16日申請日期2009年6月20日優(yōu)先權(quán)日2009年6月20日發(fā)明者丹朱,李志江,楊宏志,牛廣財,王憲青,范兆軍,魏文毅申請人:牛廣財被以下專利引用(2),