專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物化學(xué)
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，是關(guān)于提高酶的活性的技術(shù)。具體講是涉及一種金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：眾所周知，作為具有生物活性的蛋白質(zhì)一酶的固定是傳感器技術(shù)中至關(guān)重要的因素之一。蛋白質(zhì)在固體表面的固定有多種技術(shù)，如物理吸附、共價(jià)作用和電聚合作用等[J.D.Zhang,M.L.Feng,HiroyasuTachikawa，所oe/e"r肌2007,22,3036]。生物酶分子的化學(xué)方法固定通常步驟較多、耗時(shí)，而且生物活性損失較多。物理方法固定生物酶分子則具有操作相對(duì)簡(jiǎn)便、快速、生物活性保持較好的特點(diǎn)。作為重要的生物酶之一的葡萄糖氧化酶(GOD)，人們研究的比較多，通常采用物理吸附和化學(xué)方法來(lái)固定。利用物理吸附固定GOD的研究中，主要有兩種模式，(1)利用層層自組裝的方法把GOD和帶相反電荷的聚電解質(zhì)通過(guò)靜電作用組裝到聚苯乙烯顆粒上[F.Caruso,C.Schtiler,丄fl"gmw'r2000，16,9595]。(2)在電極表面利用靜電作用使帶正電的GOD和碳納米管的帶負(fù)電的羧基作用進(jìn)行層層自組裝。利用化學(xué)方法固定GOD的研究中，有人把GOD通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)的方式，將其固定在金納米顆粒上，來(lái)研究固定酶的活性和穩(wěn)定性。這種方法中，金納米顆粒首先和巰基羧酸作用，巰基化的金納米顆粒表面帶有羧基，羧基和GOD表面的氨基通過(guò)與化學(xué)偶聯(lián)，形成酰胺鍵，實(shí)現(xiàn)GOD在金納米顆粒表面的固定。GOD固定后可以用于制備各種葡萄糖生物傳感器[K.M.Manesha,H.T.Kimb，P.Santhosh，etal.，所o"ra.所oe/ecfro".2008,23.771]，這在生物傳感器和生物
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中得到了廣泛的應(yīng)用。固定酶的實(shí)際應(yīng)用依賴(lài)于它們?cè)诓煌瑮l件下的穩(wěn)定性，其中熱穩(wěn)定性是影響其實(shí)際應(yīng)用范圍的一個(gè)重要指標(biāo)。如何提高酶的熱穩(wěn)定性，對(duì)于酶的實(shí)際應(yīng)用具有重要意義。金納米棒顆粒(GNRs)由于其與眾不同的電學(xué)和光學(xué)性質(zhì)，因而在生物技術(shù)和納米
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，如生物成像、生物傳感器、癌癥治療等方面的研究受到了人們的關(guān)注。靜電沉積生物酶技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便的突出優(yōu)點(diǎn)，因此受到人們的青睞。人們利用靜電作用，層層沉積有機(jī)聚合體保護(hù)的普魯士藍(lán)納米顆粒和GOD，得到含有多層GOD的膜，并用來(lái)制備葡萄糖傳感器。首先，帶正電的聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDADMAC)和帶負(fù)電的聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)交替吸附在3-巰基-l-丙烷磺酸修飾的金電極表面，形成穩(wěn)定超薄的多層膜，使得PSS處于最外層。然后，再交替吸附PDADMAC保護(hù)的普魯士藍(lán)納米顆粒和帶負(fù)電的GOD，這樣就得到了金納米顆粒和GOD復(fù)合膜。有人把GOD固定在多壁碳納米管和聚電解質(zhì)包覆的電鍍納米纖維膜制備了一種新型葡萄糖傳感器(D.Lan,B.X.Li,Z.J.Zhang2008，24.940.)。具有可變的大小和形狀的金納米顆粒具有基于幾何形狀而特有的光學(xué)、電學(xué)和催化性質(zhì)，所以人們?cè)陔妼W(xué)、光學(xué)特別是生物技術(shù)和納米
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，對(duì)此投入了大量的工作。金納米棒顆粒(GNRs)具有兩個(gè)不同的共振吸收帶橫向共振吸收帶長(zhǎng)約520nm，縱向共振吸收帶一般長(zhǎng)度大于600nm。這使得GNRs在生物和化學(xué)傳感器方面以及納米生物
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具有廣泛的應(yīng)用前景。但是，由于GNRs表面特別是平直面的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)雙層不容易被生物分子取代，因而限制了GNRs作為生物傳感器的應(yīng)用。因此，GNRs的表面修飾是實(shí)現(xiàn)其應(yīng)用不可或缺的前提。最近，利用通用的層層吸附方法來(lái)制備聚電解質(zhì)包覆的GNRs己有報(bào)道[A.Gole，C.J.Murphy,C/綴M血2005,17,1325.]，這表明聚電解質(zhì)是一種修飾GNRs的有效包覆試劑。到目前為止，尚未公開(kāi)有關(guān)于用聚電解質(zhì)修飾的GNRs有效的包覆固定GOD技術(shù)信息的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于利用金納米棒(GNRs)和用聚電解質(zhì)包覆的葡萄糖氧化酶(GOD)之間的靜電吸附作用，提出一種金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，是基于葡萄糖氧化酶與金納米棒顆粒之間的靜電吸附作用復(fù)合而成，包括歩驟如下1)取金納米顆粒進(jìn)行離心分離處理，將分離出的沉淀物分散至l一10mM的十六垸基三甲基溴化銨溶液中，形成表面覆有十六垸基三甲基溴化銨吸附層的帶正電的金納米棒顆粒；2)在步驟1)的溶液中加入l一20g/L含有l(wèi)一20mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)溶液，將該溶液置于30。C的恒溫容器內(nèi)反應(yīng)作用lh后，在所述的十六烷基三甲基溴化銨吸附層表面復(fù)合一帶負(fù)電的聚電解質(zhì)層；3)在步驟2)的溶液中加入l一20g/L含l一20mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)溶液，該溶液繼續(xù)置于30°C的恒溫容器內(nèi)反應(yīng)作用lh，在所述帶負(fù)電的聚電解質(zhì)層表面再?gòu)?fù)合一帶正電的聚電解質(zhì)層；然后進(jìn)行離心分離處理，獲得同時(shí)具有三個(gè)吸附層的帶有正電的金納米棒顆粒；4)將葡萄糖氧化酶以lmg/mL的濃度溶解在磷酸鹽緩沖溶液中，將步驟3)所得的金納米棒顆粒與所述磷酸鹽緩沖溶液以1:1——1:10的質(zhì)量比混合，仍在30°C的恒溫容器內(nèi)再反應(yīng)作用lh，進(jìn)行離心處理并洗滌后，將其沉淀物分散至所述緩沖溶液中，再次進(jìn)行離心處理，分離出的沉淀物再次分散至所述磷酸鹽緩沖溶液中，然后在4°C的環(huán)境下保存，得到所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒。上述步驟2)中帶負(fù)電的聚電解質(zhì)選用聚苯乙烯磺酸鈉、聚丙烯酸或聚丙烯酸鹽中任一種。上述步驟3)中帶正電的聚電解質(zhì)選用聚乙烯亞胺、聚烯丙基氯化銨、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚合-4-乙烯吡啶或聚合-2-乙烯吡啶溶液中任一種。上述步驟3)中的磷酸鹽緩沖溶液由磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉組成，該緩沖溶液的pH值為7.0，濃度為10mM。上述的恒溫容器為恒溫振蕩器。上述的離心處理所用的設(shè)備為通用設(shè)備，離心條件設(shè)定為轉(zhuǎn)速為8000rpm，離心時(shí)間為10min。本發(fā)明基于GOD和帶正電的聚電解質(zhì)包覆的GNRs之間的靜電吸附作用成功制備了新型的GNRs/GOD復(fù)合顆粒，其獲得的有益效果如下1、本發(fā)明用到的GNRs是在CTAB這種表面活性劑溶液中通過(guò)種子生長(zhǎng)法制備的，由于被覆CTAB雙層，所以制得的GNRs是帶正電的。接著，制得的CTAB包覆的金納米棒分別與帶負(fù)電的PSS和帶正電的PDADMAC作用，得到帶正電的PDADMAC包覆的金納米棒。最后，帶正電的PDADMAC包覆的金納米棒與負(fù)電性的GOD在磷酸鹽緩沖液(10mM,pH=7.0)中作用得到GNRs/GOD復(fù)合顆粒，其制備方法簡(jiǎn)便。2、利用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)定了游離GOD以及GNRs/GOD復(fù)合顆粒的活性并進(jìn)行了比較后，可以得知游離的GOD溶液在90。C時(shí)僅約有22。/。的相對(duì)活性，而GNRs/GOD復(fù)合顆粒在同樣的條件下則保持有45%的活性；即GNRs/GOD復(fù)合顆粒在90。C的條件下，仍然可以保持大約39%的相對(duì)活性；由此可見(jiàn)，本發(fā)明制備的GNRs/GOD復(fù)合顆粒不僅比游離的GOD而且比其他固定的GOD或其他納米顆粒復(fù)合體系都具有增強(qiáng)的活性和突出的熱穩(wěn)定性。3、本發(fā)明復(fù)合顆粒因其具有突出的熱穩(wěn)定性，將GOD固定在平面基體、聚苯乙烯納米顆粒和圓形的其他納米顆粒上都會(huì)得到較好的效果，這表明GOD可以適用的范圍是很寬的。4、利用本發(fā)明制備成功的GNRs/GOD復(fù)合顆粒為其他生物酶和蛋白質(zhì)分子的固定提供了一種實(shí)用模型，同時(shí)對(duì)建立在酶催化反應(yīng)基礎(chǔ)上，構(gòu)建新型納米反應(yīng)器件，具有重要的借鑒意義，具有廣闊的應(yīng)用前景。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，是基于葡萄糖氧化酶與金納米棒顆粒之間的靜電吸附作用復(fù)合而成；包括步驟如下-1)取金納米顆粒進(jìn)行離心分離處理，將分離出的沉淀物分散至l一10mM的十六烷基三甲基溴化銨溶液中，形成表面覆有十六垸基三甲基溴化銨吸附層的帶正電的金納米棒顆粒；2)在步驟1)的溶液中加入l一20g/L含有l(wèi)一20mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)溶液，將該溶液置于30。C的恒溫容器內(nèi)反應(yīng)作用lh后，在所述的十六垸基三甲基溴化銨吸附層表面復(fù)合一帶負(fù)電的聚電解質(zhì)層；3)在步驟2)的溶液中加入l一20g/L含1一20mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)溶液，該溶液繼續(xù)置于30°C的恒溫容器內(nèi)反應(yīng)作用lh，在所述帶負(fù)電的聚電解質(zhì)層表面再?gòu)?fù)合一帶正電的聚電解質(zhì)層；然后進(jìn)行離心分離處理，獲得同時(shí)具有三個(gè)吸附層的帶有正電的金納米棒顆粒；4)將葡萄糖氧化酶以lmg/mL的濃度溶解在磷酸鹽緩沖溶液中，將步驟3)所得的金納米棒顆粒與所述磷酸鹽緩沖溶液以1:1——1:10的質(zhì)量比混合，仍在30。C的恒溫容器內(nèi)再反應(yīng)作用lh，進(jìn)行離心處理并洗滌后，將其沉淀物分散至所述緩沖溶液中，再次進(jìn)行離心處理，分離出的沉淀物再次分散至所述磷酸鹽緩沖溶液中，然后在4°C的環(huán)境下保存，得到所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒。其中，步驟l)中金納米棒顆粒的制備，步驟如下A、制備金納米晶種，在5mL0.2M的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、5mL0.5mM的氯金酸溶液(HAuCU)和0.6mL新制備的10mM冰的硼氫化鈉NaBH4溶液混合，并強(qiáng)烈攪拌2min。溶液的顏色由深黃色變?yōu)樽攸S色，表明晶種溶液的生成，5h后可使用此晶種溶液制備金納米棒。B、在反應(yīng)器中，將75mL0.2MCTAB加入到1.5mL4mM的硝酸銀溶液和75mL1mM的HAuCU的混合液中，輕微混合溶液后，將1.05mL0.10M的抗壞血酸(AA)加入到溶液中并持續(xù)混勻；再將180(iL步驟A生成的晶種溶液加入到所述混合液中以誘發(fā)金納米棒的生長(zhǎng)，反應(yīng)持續(xù)24h以保證其生長(zhǎng)完全。C、步驟B反應(yīng)完全后，用離心機(jī)對(duì)該金納米棒顆粒進(jìn)行離心處理，將其分離出的沉淀物分散至l一10mM的CTAB溶液中，即成為本發(fā)明所需用的表面覆有CTAB—層吸附層且?guī)д姷慕鸺{米棒顆粒。上述的步驟2)中帶負(fù)電的聚電解質(zhì)可選用聚苯乙烯磺酸鈉、聚丙烯酸或聚丙烯酸鹽中任一種；最佳選用聚苯乙烯磺酸鈉。上述的步驟3)中帶正電的聚電解質(zhì)可選用聚乙烯亞胺、聚烯丙基氯化銨、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚合-4-乙烯吡啶或聚合-2-乙烯吡啶溶液中任一種，最佳選用聚二烯丙基二甲基氯化銨。上述的步驟4)中所用的磷酸鹽緩沖溶液由磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉組成，該緩沖溶液的pH值為7.0，濃度為10mM。本發(fā)明的方法中所用的恒溫容器釆用恒溫振蕩器；離心處理所用的離心機(jī)為通用設(shè)備，其工作條件設(shè)定轉(zhuǎn)速為8000rpm，離心時(shí)間為10min。以下通過(guò)具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明的制備方法作進(jìn)一步的說(shuō)明實(shí)例1:步驟l):制備金納米顆粒；取金納米晶種與5mL0.2M的CTAB、5mL0.5mM的HAuClt溶液和0.6mL新制備的10mM冰的硼氫化鈉(NaBH4)溶液混合，并強(qiáng)烈攪拌2min。溶液的顏色由深黃色變?yōu)樽攸S色，表明晶種溶液的生成，5h后可使用此晶種溶液制備金納米顆粒。在反應(yīng)器中，75mL0.2MCTAB加入到1.5mL4mM的硝酸銀溶液和75mL1mM的HAuCl4的混合液中，輕微混合溶液后，1.05mL0.10M的抗壞血酸(AA)加入到溶液中并持續(xù)混勻。最后180nL的晶種溶液加入到混合液中以誘發(fā)金納米棒的生長(zhǎng)，反應(yīng)持續(xù)24h以保證其生長(zhǎng)完全。反應(yīng)完全后，用離心機(jī)對(duì)該金納米顆粒進(jìn)行離心處理，沉淀物分散在1mM的CTAB溶液中，形成表面覆有CTAB吸附層且?guī)д姷慕鸺{米棒顆粒。歩驟2):將步驟1制備的金納米棒顆粒用離心機(jī)進(jìn)行離心處理，沉淀物分散在2mM的CTAB溶液中。先加入1g/L含有l(wèi)mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)溶液一聚苯乙烯磺酸鈉，在預(yù)定溫度為30。C的恒溫振蕩器中反應(yīng)作用lh后，用通用離心機(jī)進(jìn)行離心處理，沉淀物分散在等體積的水中，在表面覆有CTAB吸附層且?guī)д姷慕鸺{米棒顆粒表面再?gòu)?fù)合一層陰離了；步驟3):在步驟2)的溶液中加入lg/L含lmM的NaCl的的帶正電的聚電解質(zhì)溶液一聚乙烯亞胺，繼續(xù)在預(yù)定溫度為30°C的恒溫振蕩器中反應(yīng)作用lh，再經(jīng)離心機(jī)進(jìn)行離心處理，離心處理后的沉淀物再次分散至等體積的磷酸鹽緩沖溶液中洗滌，再次進(jìn)行離心分離，獲得在表面既復(fù)合有一層陰離子又復(fù)合一層陽(yáng)離子的金納米棒顆茅v。步驟4):將葡萄糖氧化酶溶解在由磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉混合而成的磷酸鹽緩沖溶液中，得到lmg/mL濃度的的葡萄糖氧化酶溶液，再將歩驟3)離心洗滌處理后得到的金納米棒顆粒與葡萄糖氧化酶溶液以1:1的質(zhì)量比混合，在預(yù)定溫度為30°C的恒溫振蕩器中作用lh。經(jīng)過(guò)吸附作用后用離心機(jī)進(jìn)行離心處理，離心后的沉淀物再分散在上述的磷酸鹽緩沖溶液中，并保存在4。C的環(huán)境中，得到所述耐熱的金納米棒/葡萄糖氧化酶(GNRs/GOD)復(fù)合顆粒。上述步驟2)-步驟4)中的離心處理采用通用的離心設(shè)備，其工作條件設(shè)定為轉(zhuǎn)速為8000rpm、時(shí)間為10min。采用帶有控溫器件的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，利用比色法，測(cè)定實(shí)例1得到的GNRs/GOD復(fù)合顆粒和游離GOD在不同溫度條件下的相對(duì)活性，見(jiàn)表1所示<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備GNRs與GNRs/GOD復(fù)合顆粒的方法基本與實(shí)例1相同；不同點(diǎn)在于步驟1得到的GNRs進(jìn)行離心處理，其沉淀物分散至3mM的十六垸基三甲基溴化銨(CTAB)中后，先加入5g/L含7mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)-聚丙烯酸溶液，在GNRs表面復(fù)合一層陰離子；再加入6g/L含8mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)-聚乙烯亞胺溶液，在表面復(fù)合有陰離子的金納米棒顆粒表面再?gòu)?fù)合-層陽(yáng)離子，然后進(jìn)行離心處理；步驟3)中將步驟2)離心洗滌處理后的沉淀顆粒與葡萄糖氧化酶以1:3的質(zhì)量比混合，然后進(jìn)行離心處理。采用帶有控溫器件的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，利用比色法，測(cè)定實(shí)例2得到的GNRs/GOD復(fù)合顆粒和游離GOD在不同溫度條件下的相對(duì)活性，見(jiàn)表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)例3:制備GNRs與GNRs/GOD復(fù)合顆粒的方法基本與實(shí)例1相同；不同點(diǎn)在于步驟1得到的GNRs進(jìn)行離心處理，其沉淀物分散至5mM的十六垸基三甲基溴化銨(CTAB)中后，先加入10g/L含11mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)-聚丙烯酸溶液，在GNRs表面復(fù)合一層陰離子；再加入11g/L含12mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)-聚二烯丙基二甲基氯化銨，在表面復(fù)合有陰離子的金納米棒顆粒表面再?gòu)?fù)合一層陽(yáng)離子，然后進(jìn)行離心處理；步驟3)中將步驟2)離心洗滌處理后的沉淀顆粒與葡萄糖氧化酶以1:5的質(zhì)量比混合，然后進(jìn)行離心處理。釆用帶有控溫器件的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，利用比色法，測(cè)定實(shí)例3得到的GNRs/GOD復(fù)合顆粒和游離GOD在不同溫度條件下的相對(duì)活性，見(jiàn)表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)例4:制備GNRs與GNRs/GOD復(fù)合顆粒的方法基本與實(shí)例1相同；不同點(diǎn)在于步驟1得到的GNRs進(jìn)行離心處理，其沉淀物分散至7mM的十六垸基三甲基溴化銨(CTAB)中后，先加入14g/L含15mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)-聚丙烯酸鹽溶液，在GNRs表面復(fù)合一層陰離子；再加入15g/L含16mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)-聚合-4-乙烯吡啶，在表面復(fù)合有陰離子的金納米棒顆粒表面再?gòu)?fù)合一層陽(yáng)離子，然后進(jìn)行離心處理；步驟3中將步驟2離心洗滌處理后的沉淀顆粒與葡萄糖氧化酶以l:8的質(zhì)量比混合，然后進(jìn)行離心處理。采用帶有控溫器件的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，利用比色法，測(cè)定實(shí)例4得到的GNRs/GOD復(fù)合顆粒和游離GOD在不同溫度條件下的相對(duì)活性，見(jiàn)表4。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)例5:制備GNRs與GNRs/GOD復(fù)合顆粒的方法基本與實(shí)例1相同；不同點(diǎn)在于步驟1)得到的GNRs進(jìn)行離心處理，其沉淀物分散至10mM的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)中后，先加入20g/L含20mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)-聚丙烯酸鹽溶液，在GNRs表面復(fù)合一層陰離子；再加入20g/L含20mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)-聚合-2-乙烯吡啶，在表面復(fù)合有陰離子的金納米棒顆粒表面再?gòu)?fù)合一層陽(yáng)離子，然后進(jìn)行離心處理；步驟3)中將步驟2)離心洗滌處理后的沉淀顆粒與葡萄糖氧化酶以1:10的質(zhì)量比混合，然后進(jìn)行離心處理。采用帶有控溫器件的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，利用比色法，測(cè)定實(shí)例5得到的GNRs/GOD復(fù)合顆粒和游離GOD在不同溫度條件下的相對(duì)活性，見(jiàn)表5。表5\溫度(。<:)體系^^^^^2030405060708090游離GOD83.198.210092.977.358.843.720.2GNRs/GOD86.297.510095.381.266.448.939.2對(duì)表l、表2、表3、表4、表5上述實(shí)例的相對(duì)活性測(cè)定的說(shuō)明(i)不同溫度下，游離GOD的相對(duì)活性定義為Ai,46()/Amax。其中A,為40。C條件下，GOD與底物葡萄糖顯色反應(yīng)后，在460nm處的吸光度值；Ai,n為不同溫度條件下，GOD與底物葡萄糖顯色反應(yīng)后，在460nm處的吸光度值。(ii)不同溫度下，GNRs/GOD復(fù)合顆粒的相對(duì)活性定義為(A,,46Q-A^q)/(A醒-Ai，q,柳)其中An肌為40°C下，GNRs/GOD與底物葡萄糖顯色反應(yīng)后，在460nm處的吸光度值；A,，46。為在不同溫度條件下，GNRs/GOD與底物葡萄糖顯色反應(yīng)后，在460nm處的吸光度值；AiA46G為不同溫度條件下，帶正電的聚電解質(zhì)權(quán)利要求1、一種金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，是基于葡萄糖氧化酶與金納米棒顆粒之間的靜電吸附作用復(fù)合而成，包括步驟如下1)取金納米顆粒進(jìn)行離心分離處理，將分離出的沉淀物分散至1-10mM的十六烷基三甲基溴化銨溶液中，形成表面覆有十六烷基三甲基溴化銨吸附層的帶正電的金納米棒顆粒；2)在步驟1)的溶液中加入1-20g/L含有1-20mM的NaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)溶液，將該溶液置于30℃的恒溫容器內(nèi)反應(yīng)作用1h后，在所述的十六烷基三甲基溴化銨吸附層表面復(fù)合一帶負(fù)電的聚電解質(zhì)層；3)在步驟2)的溶液中加入1-20g/L含1-20mM的NaCl的帶正電的聚電解質(zhì)溶液，該溶液繼續(xù)置于30℃的恒溫容器內(nèi)反應(yīng)作用1h，在所述帶負(fù)電的聚電解質(zhì)層表面再?gòu)?fù)合一帶正電的聚電解質(zhì)層；然后進(jìn)行離心分離處理，獲得同時(shí)具有三個(gè)吸附層的帶有正電的金納米棒顆粒；4)將葡萄糖氧化酶以1mg/mL的濃度溶解在磷酸鹽緩沖溶液中，將步驟3)所得的金納米棒顆粒與所述磷酸鹽緩沖溶液以1∶1——1∶10的質(zhì)量比混合，仍在30℃的恒溫容器內(nèi)再反應(yīng)作用1h，進(jìn)行離心處理并洗滌后，將其沉淀物分散至所述緩沖溶液中，再次進(jìn)行離心處理，分離出的沉淀物再次分散至所述磷酸鹽緩沖溶液中，然后在4℃的環(huán)境下保存，得到所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于步驟2)所述帶負(fù)電的聚電解質(zhì)為聚苯乙烯磺酸鈉或聚丙烯酸或聚丙烯酸鹽中任一種。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于步驟3)所述帶正電的聚電解質(zhì)為聚乙烯亞胺或聚烯丙基氯化銨或聚二烯丙基二甲基氯化銨或聚合-4-乙烯吡啶或聚合-2-乙烯吡啶溶液中任一種。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于歩驟3)所述的磷酸鹽緩沖溶液由磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉組成，該緩沖溶液的pH值為7.0，濃度為10mM。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于所述恒溫容器為恒溫振蕩器。6、根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于所述離心處理設(shè)定轉(zhuǎn)速為8000rpm，離心時(shí)間為10min。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種耐熱的金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒的制備方法。是基于葡萄糖氧化酶與金納米棒顆粒之間的靜電吸附作用復(fù)合而成；具體步驟為1)制備金納米棒顆粒，并將其進(jìn)行離心處理，其沉淀物分散放入CTAB溶液中，得到表面覆有陽(yáng)離子的金納米棒顆粒；2)在步驟1)的溶液中先后加入1-20g/L含1-20mMNaCl的帶負(fù)電的聚電解質(zhì)溶液和帶正電的聚電解質(zhì)溶液，在金納米棒顆粒表面上先后再?gòu)?fù)合陰離子層和陽(yáng)離子層，然后進(jìn)行離心處理；3)將步驟2)離心洗滌處理后的沉淀顆粒與葡萄糖氧化酶以1∶1-1∶10的質(zhì)量比混合反應(yīng)后獲得。其制備方法簡(jiǎn)便，得到的金納米棒/葡萄糖氧化酶復(fù)合顆粒具有突出的熱穩(wěn)定性，并擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。文檔編號(hào)C12N11/14GK101608181SQ200910084929公開(kāi)日2009年12月23日申請(qǐng)日期2009年6月1日優(yōu)先權(quán)日2009年6月1日發(fā)明者騰丁,馬占芳申請(qǐng)人:首都師范大學(xué)