專利名稱：一種抗生素殘留檢測(cè)系統(tǒng)及其容器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速、靈敏、便捷的檢測(cè)食品中抗生素殘留的系統(tǒng)及其容器，屬于微生物化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
1949年美國(guó)首次發(fā)現(xiàn)抗生素對(duì)畜禽有促生長(zhǎng)作用，此后，許多國(guó)家將抗生素廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)，我國(guó)在20世紀(jì)50年代開始將抗生素作為飼料添加劑，其在防治動(dòng)物疾病方面起到十分顯著的作用，取得了明顯的經(jīng)濟(jì)效益。但抗生素的不規(guī)范使用導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)藥物的滯留、蓄積，并以殘留的方式進(jìn)入人體內(nèi)和生態(tài)系統(tǒng)，給人類健康和環(huán)境帶來(lái)危害。隨著世界各國(guó)對(duì)食品安全性的重視加強(qiáng)，美國(guó)、歐盟等國(guó)家已相繼頒布一系列法律，禁止或限制抗生素的使用。牛奶是人們尤其是嬰幼兒的主要營(yíng)養(yǎng)食品，牛奶中殘留抗生素會(huì)危害飲用者身體健康。
牛奶"無(wú)抗"在國(guó)際上是一個(gè)雷打不動(dòng)的硬性市場(chǎng)準(zhǔn)入指標(biāo)。在歐美國(guó)家，"有抗奶"及其制品嚴(yán)禁在市場(chǎng)上銷售。2008年，農(nóng)業(yè)部頒發(fā)了《無(wú)公害牛奶標(biāo)準(zhǔn)》，把"無(wú)抗"列入其中，表明有關(guān)部門對(duì)"無(wú)抗奶"開始重視起來(lái)。
最近在國(guó)家新頒布的GB/T 4789.27-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)鮮乳中抗生素殘留檢驗(yàn)中更是嚴(yán)格的規(guī)定了生鮮牛乳中的抗生素殘留限量，并且取消了 "無(wú)抗奶"的名稱，進(jìn)一步指向了牛奶行業(yè)中的"有抗奶"的檢測(cè)。
目前市場(chǎng)上出現(xiàn)的一些牛奶抗生素檢測(cè)儀，其造價(jià)成本高，不適合家庭、個(gè)人的廣泛使用。也有文獻(xiàn)報(bào)道將微生物方法與儀器分析方法相結(jié)合，用嗜熱脂肪芽孢桿菌作為指示菌，通過(guò)"阻抗分析儀"的自動(dòng)檢測(cè)、分析，根據(jù)DT時(shí)間的產(chǎn)生，判斷牛奶中抗生素的殘留情況，但該方法尚在研究中，還未產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性產(chǎn)品?，F(xiàn)在市場(chǎng)上的抗生素快速檢測(cè)試劑盒大多是國(guó)外進(jìn)口的設(shè)備與試劑，可以檢測(cè)內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類抗生素，但其成本很高，其他國(guó)產(chǎn)試劑盒也只能檢測(cè)內(nèi)酰胺類抗生素，可檢測(cè)的抗生素品種較少，因此，必須尋找快速、準(zhǔn)確、低成本的檢測(cè)技術(shù)，且可以檢測(cè)常用的抗生素品種，用來(lái)檢測(cè)牛奶中的抗生素是否超標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種檢測(cè)牛奶中抗生素的系統(tǒng)及其容器，可方便、快速地對(duì)市場(chǎng)上銷售的各種牛奶中是否含有抗生素進(jìn)行檢測(cè)，在2.5-3小時(shí)內(nèi)檢査出牛奶中所含的抗生素濃度是否超
過(guò)歐盟牛奶中抗生素要求最大殘留量(MRL)?？蓹z測(cè)e-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、
氨基配糖類、磺胺類及其它種類的抗生素共37種。本發(fā)明采用的技術(shù)方案
本發(fā)明提供一種用于盛放檢測(cè)培養(yǎng)基的容器，其開口端覆蓋著一層金屬薄膜，可以保持微生物的穩(wěn)定性、活性，還可防止交叉污染。
其中檢測(cè)培養(yǎng)基中接種有檢測(cè)微生物和指示劑，微生物的生長(zhǎng)使培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化， 若樣品中存在的抗生素濃度高于檢測(cè)限，.微生物的生長(zhǎng)受到抑制，培養(yǎng)基不發(fā)生顏色變化。
本發(fā)明對(duì)牛奶中抗生素濃度的檢測(cè)，是通過(guò)以下過(guò)程實(shí)現(xiàn)的
首先確定所需微孔數(shù)量，用刀沿微孔外側(cè)劃開金屬薄膜，取下所需數(shù)量，剩余的微孔板 需立即放回塑料袋中密封以防止微孔干結(jié)，并于4 8'C下儲(chǔ)存。
然后將要使用的微孔條安放到另一個(gè)空板架上，剝開微孔上的金屬薄膜，在每個(gè)微孔中 加入100)al待測(cè)牛奶樣品。
用粘膠薄膜或酶標(biāo)板條帽小心地密封微孔條，將其垂直放入已經(jīng)預(yù)熱至65'C的水浴或培 養(yǎng)器中培養(yǎng)2.5h。
從微孔底面觀察判定結(jié)果
陰性結(jié)果微孔顯示綠到黃色；陽(yáng)性結(jié)果微孔顯示藍(lán)到紫色；若微孔顯示為綠到藍(lán)色 則為未知結(jié)果，表明抗生素濃度在檢測(cè)限附近，仍需繼續(xù)培養(yǎng)0.5h后再判定結(jié)果。
本發(fā)明的適用范圍快速檢測(cè)各種牛奶中抗生素濃度是否超過(guò)歐盟牛奶中抗生素要求最
大殘留量(MRL),操作簡(jiǎn)單、快捷，檢測(cè)靈敏度高，無(wú)需專業(yè)人員操作，可以廣泛用于現(xiàn)
場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè)，'便于百姓在家庭中自行使用，也可用于工商執(zhí)法、食品安全、 市場(chǎng)的快速檢測(cè)。
圖表說(shuō)明
圖l盛放檢測(cè)培養(yǎng)基的容器示意圖。 表l本發(fā)明可檢測(cè)的抗生素種類
表2本發(fā)明對(duì)各抗生素的檢測(cè)限與歐盟標(biāo)準(zhǔn)的最大殘留量比較.
具體實(shí)施例方式
檢測(cè)培養(yǎng)基制備的實(shí)施方式
實(shí)施例1
葡萄糖 5g/L .
蛋白胨 10g/L 瓊脂 4g/L .純水 1L 溴甲酚紫 0.01g/L
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然后接入濃度為105cfu/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬薄 膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。 實(shí)施例2
4葡萄糖 蛋白胨 瓊脂 純水
溴甲酚紫
5g/L
10g/L
4g/L
0.05g/L
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然后接入濃度為107cfii/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬薄 膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然后接入濃度為107cfu/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬 薄膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。 檢測(cè)實(shí)施方式 實(shí)施例l
如

圖1所示的一種盛放檢測(cè)培養(yǎng)基的容器，主要由以下組件組成
容器開口端101，容器封閉端102，檢測(cè)培養(yǎng)基103，金屬薄膜104。 將配制好的培養(yǎng)基裝入容器中，培養(yǎng)基體積約占容器體積的1/3，滅菌后，接入一定濃度 的嗜熱脂肪芽孢桿菌，用金屬薄膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。 實(shí)施例2
本發(fā)明不能直接檢測(cè)酸奶等酸性物質(zhì)，如果檢測(cè)酸性物質(zhì)，應(yīng)先將pH值調(diào)整至7.0 7.2 范圍內(nèi)再進(jìn)行檢測(cè)。其他的檢測(cè)步驟如下-
1. 確定所需微孔數(shù)量，用刀沿微孔外側(cè)劃開金屬薄膜，取下所需數(shù)量，剩余的微孔板需 立即放回塑料袋中密封以防止微孔干結(jié)，并于4 8'C下儲(chǔ)存。
2. 將要使用的微孔條安放到另一個(gè)空板架上，剝開微孔上的金屬薄膜，在每個(gè)微孔中加 入100^1待測(cè)牛奶樣品。
3. 用粘膠薄膜或酶標(biāo)板條帽小心地密封微孔條，將其垂直放入已經(jīng)預(yù)熱至65'C的水浴 或培養(yǎng)器中培養(yǎng)2.5h。
4. 從微孔底面觀察判定結(jié)果-陰性結(jié)果綠-黃色； 陽(yáng)性結(jié)果藍(lán)-紫色；
實(shí)施例3
葡萄糖 蛋白胨 瓊脂 純水
溴甲酚紫
O.lg/L
5g/L
10g/L
4g/L未知結(jié)果綠-藍(lán)色，抗生素濃度在試劑盒的檢測(cè)限附近，需繼續(xù)培養(yǎng)0.5h判定結(jié)果。 本發(fā)明可檢測(cè)的抗生素種類見表1:
抗生素種類
青霉素G氨芐西林阿莫西林苯甲異噁唑青霉素
鄰氯青霉素頭孢氨芐頭孢哌酮頭孢拉丁
頭孢匹林頭孢噻呋頭孢唑林乙氧萘(胺)青霉素
雙氯青霉素磺胺噻唑磺胺地索辛磺胺二甲瞎咬
磺胺嘧啶土霉素四環(huán)素氯四環(huán)素
泰樂(lè)菌素新霉素鏈霉素慶大霉素
雙氫鏈霉素卡那霉素林肯霉素甲氧芐氨嘧啶
氨苯砜
表1
實(shí)施例3
使用本發(fā)明的檢測(cè)系統(tǒng)，可以對(duì)食品中的e-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基配
糖類、磺胺類及其它種類的抗生素的殘留進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限如表2所示；
抗生素種類 e-內(nèi)酰胺類MRL (ppb)檢測(cè)限 (卯b) 本發(fā)明產(chǎn)品同類其他產(chǎn)品擾生素種類MRL Cppb )檢測(cè)限 (ppb) 本發(fā)明產(chǎn) 同類其他產(chǎn) 品 品
青霉素G4氨芐西林43 3
阿莫西林433苯甲異噁唑青霉 素3015 10
鄰氯青霉素303040頭孢氨芐10040 40
頭孢哌酮502020100
頭孢匹林101010io ioo
頭孢唑林502020頭孢噻啶-75
乙氧萘(胺)青霉素302020雙氯青霉素3010 5
磺胺類
摘胺噻唑1005030磺咹—甲叫A-'柳100 〗50
鍾柳磺妝地'々十l(X>50 10(1磺胺嘧啶 四環(huán)素類
氯四環(huán)素 大環(huán)內(nèi)酡類
鶴錄, 氨基配糖類 新霉素
卡麟素
其他抗生素 林i'.霉素
甲砜霉素
100
100
100
100
150
150
.幼
50
100
免 卿
鄰暨 柳 t鎖
1W) 50
750
100 5W
150
長(zhǎng)檢i
130
實(shí)驗(yàn)范W內(nèi)
750
鏈每索
大觀霉素
氨苯砜 新生萆紊
100
咖
50
200
10 0
■
700
實(shí)船范鬧內(nèi) 尖檢出
實(shí)驗(yàn)范IUl'J
人w出
700
實(shí)驗(yàn)范口I'J 夫檢出
表2
根據(jù)上表的檢測(cè)限與歐盟給出的最大殘留量比較，本發(fā)明產(chǎn)品的檢測(cè)精度可以滿足歐盟 標(biāo)準(zhǔn)，并且對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和氨基配糖類抗生素的檢測(cè)精度有顯著的提高，均高于現(xiàn)有 的檢測(cè)產(chǎn)品。且，使用本發(fā)明生產(chǎn)的產(chǎn)品其成本低于市場(chǎng)上的同類產(chǎn)品。
最后，應(yīng)當(dāng)指出，以上實(shí)施例僅是本發(fā)明較有代表性的例子。顯然，本發(fā)明的方案并不 限于上述的實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接 導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種快速檢測(cè)食品中抗生素殘留的檢測(cè)系統(tǒng)，由接種在檢測(cè)培養(yǎng)基中的檢測(cè)微生物及檢測(cè)指示劑組成，其特征在于，所述檢測(cè)微生物為嗜熱脂肪芽孢桿菌，所述指示劑為溴甲酚紫。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種快速檢測(cè)食品中抗生素殘留的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，所述的 檢測(cè)微生物的濃度為105-107cfU/ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種快速檢測(cè)食品中抗生素殘留的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，所述的 溴甲酚紫的濃度為0.01-0.1g/L。
4. 一種用于盛放檢測(cè)培養(yǎng)基的容器，該容器由開口端和封閉端組成，所述封閉端盛有檢測(cè)培 養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基占到容器總體積的1/3~1/2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用于盛放檢測(cè)培養(yǎng)基的容器，其特征在于所述容器開口端采用 金屬薄膜封閉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速、靈敏、便捷的檢測(cè)食品中抗生素殘留的系統(tǒng)及其容器，屬于微生物化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。該檢測(cè)系統(tǒng)由接種在檢測(cè)培養(yǎng)基中的檢測(cè)微生物和檢測(cè)指示劑組成。本發(fā)明還提供一種用于盛放檢測(cè)培養(yǎng)基的容器，該容器由開口端和封閉端組成，所述封閉端盛有檢測(cè)培養(yǎng)基，開口端用金屬薄膜封閉。使用本發(fā)明可以快速、準(zhǔn)確、低成本的檢測(cè)食品中的抗生素殘留。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK101659984SQ20091009155
公開日2010年3月3日 申請(qǐng)日期2009年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月27日
發(fā)明者桑華春, 衛(wèi) 田 申請(qǐng)人:北京智云達(dá)科技有限公司