專利名稱：：一種提高畜禽免疫力的中藥生物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種提高畜禽免疫力的中藥生物制劑及其制備方法，屬于獸藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：近年來，在畜禽生產(chǎn)中普遍存在疫苗免疫接種預(yù)防效果不好，以及用藥量逐漸加大而仍然達(dá)不到理想的治療和預(yù)防效果，這是由于長期以來大量的濫用藥物及不合理的疫苗接種而導(dǎo)致畜禽機(jī)體免疫功能下降，特別是淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞處于低迷或抑制狀態(tài)；加之近年來動(dòng)物新的疫病出現(xiàn)及舊的疫病的病原體變異和毒力增強(qiáng)。要解決這一問題，就必須采取有效手段激活免疫系統(tǒng)，提高免疫細(xì)胞的活性，以使動(dòng)物機(jī)體接種疫苗后獲得較高水平的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力。目前這一領(lǐng)域的研究非?；钴S，特別是化藥免疫增強(qiáng)劑的研究取得了較大的研究進(jìn)展，對(duì)畜禽產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展起到積極的作用。但是化學(xué)藥物免疫增強(qiáng)劑都不同程度的存在著降低機(jī)體生產(chǎn)性能，引發(fā)毒副作用和藥物殘留，危害人體健康等弊端。中草藥免疫增強(qiáng)劑具有活性剌激、營養(yǎng)、調(diào)節(jié)及抑菌、抗病毒等多重功能，當(dāng)它作用于機(jī)體的各個(gè)系統(tǒng)時(shí)，能夠使機(jī)體恢復(fù)平衡的效果。隨著我國養(yǎng)殖業(yè)集約化程度的不斷加速，特別是在追求綠色、環(huán)保、生態(tài)的浪潮推動(dòng)下，中草藥以其在提高免疫功能方面的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，在養(yǎng)殖業(yè)中得到了越來越普遍的推廣應(yīng)用。研究中草藥免疫增強(qiáng)劑對(duì)動(dòng)物免疫作用的影響，對(duì)于防治畜禽疾病，提高畜禽生產(chǎn)力，增加畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)效益具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。但是目前所用的中草藥免疫增強(qiáng)劑一般是技術(shù)含量較低的散劑，直接添加到飼料中使用，生物利用度低且適口性差，與畜牧業(yè)的發(fā)展極不相稱?，F(xiàn)代中藥發(fā)酵制藥技術(shù)是在繼承傳統(tǒng)中藥炮制學(xué)發(fā)酵法的基礎(chǔ)上，吸取了微生態(tài)學(xué)研究成果，結(jié)合現(xiàn)代生物工程發(fā)酵技術(shù)而形成的高科技中藥制藥新技術(shù)，是從中藥(天然藥物)制藥方面尋找藥物的新療效，具有很大的研究價(jià)值和市場(chǎng)開發(fā)意義。研究表明，微生物生長代謝過程中可以產(chǎn)生豐富而強(qiáng)大的酶系，可以將中藥的藥物成分分解轉(zhuǎn)化，將不能被人體或動(dòng)物體吸收的有效組分降解成小分子活性物質(zhì)，而被機(jī)體直接吸收利用，或產(chǎn)生新的活性組分，改變藥性，降低毒副作用，從而大大提高藥物療效和治療范圍。因此，把現(xiàn)代微生物技術(shù)與傳統(tǒng)中藥方劑有機(jī)結(jié)合起來，開發(fā)新型中藥生物制劑是對(duì)傳統(tǒng)中藥的一個(gè)突破，具有較高的技術(shù)水平，有利于提高我國中藥現(xiàn)代化水平。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，該制劑在有效防治畜禽免疫抑制性疾病的發(fā)生，提高幼畜幼禽成活率，促進(jìn)生長的同時(shí)，適口性好，生物利用度高。本發(fā)明的中藥生物制劑是利用微生物對(duì)中藥進(jìn)行發(fā)酵代謝后制備而成，實(shí)現(xiàn)了傳統(tǒng)中藥方劑與現(xiàn)代生物技術(shù)的有機(jī)結(jié)合。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的制備方法。3本發(fā)明還提供了包含該提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的飼料。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供一種提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，此制劑是將微生物接種到包含中藥的培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵制備而成。本發(fā)明所述的中藥包括如下組分和重量份數(shù)杜仲葉50150份、灰樹花50150份、黃芪25100份、淫羊藿25100份。其中，所述的微生物為芽孢桿菌。本發(fā)明所述的芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌和/或地衣芽孢桿菌。本發(fā)明的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，可為口服液、粉劑、片劑、顆粒劑、緩釋制劑、丸劑、微囊劑、注射劑或其他藥劑學(xué)上可接受的劑型。本發(fā)明還提供了該提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(l)制備菌種培養(yǎng)液將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，3537°C，200250rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0Xl()8^cfu/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為810%，培養(yǎng)溫度253(TC，攪拌轉(zhuǎn)速200250rpm，二級(jí)種子液活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)培養(yǎng)基的制備取配方量的中藥材，粉碎成80120目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的1030%麩皮、520%豆粕、0.11.0%硫酸銨、0.010.10%硫酸鎂、0.010.05%碳酸鈣，加水至含水量在4060%，調(diào)節(jié)pH至6.57.5，滅菌2030min;(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的510%將(1)中的菌種培養(yǎng)液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于253(TC恒溫培養(yǎng)2472h，攪拌轉(zhuǎn)速150250rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到l.OX1089cfu/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.01.2，加入藥學(xué)上常用輔料制成相應(yīng)劑型。進(jìn)一步，本發(fā)明的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的制備方法還可包括如下步驟步驟(4)得到的濃縮發(fā)酵液經(jīng)過噴霧干燥或冷凍干燥后，加入輔料制成預(yù)混劑。本發(fā)明的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑還可以直接添加到飼料中，制成包含該中藥生物制劑的飼料。本發(fā)明的原料選擇杜仲葉、灰樹花、黃芪、淫羊藿四味藥進(jìn)行組合，使得各組分功效產(chǎn)生協(xié)同作用，通過微生物發(fā)酵后使藥物更容易吸收，藥效更充分，從而能夠進(jìn)一步提高畜禽機(jī)體的免疫力，增強(qiáng)抗病能力，促進(jìn)生長。本發(fā)明的提高畜禽免疫力中藥生物制劑與傳統(tǒng)同類中獸藥比較有如下優(yōu)點(diǎn)1、傳統(tǒng)中獸藥散劑適口性差、內(nèi)服后有效成分不易從植物細(xì)胞中游離出來被機(jī)體充分吸收，生物利用度低，而煎劑在制備過程中對(duì)中藥有效成分破壞性大，降低了藥物應(yīng)有的療效。微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化中藥，反應(yīng)條件溫和，可以最大限度的保護(hù)中藥有效成分免遭破壞，同時(shí)，可使某些有效成分含量增加及產(chǎn)生新的藥物成分，從而提高藥物療4效、擴(kuò)大適應(yīng)癥、減少服用劑量；2、本發(fā)明的中藥經(jīng)過微生物代謝后制備的中藥生物制劑，可以進(jìn)一步提高畜禽免疫力和生產(chǎn)性能，有效防治畜禽免疫抑制性疾病的發(fā)生，提高幼畜幼禽成活率，促進(jìn)生長。通過以下實(shí)施例將更具體的說明本發(fā)明，但是應(yīng)理解所述實(shí)施例僅是為了說明本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明中藥生物制劑的制備中藥組成杜仲葉100份、灰樹花100份、黃芪50份、淫羊藿50份制備方法(l)將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，37°C，220rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X108、fo/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為10%，培養(yǎng)溫度3(TC，攪拌轉(zhuǎn)速220rpm，二級(jí)種子液活菌含量達(dá)到l.OX1089cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)取配方量的中藥材，粉碎成120目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的20%麩皮、10%豆粕、0.6%硫酸銨、0.05%硫酸鎂、0.02%碳酸鈣，加水至含水量在50%，調(diào)節(jié)pH至7.0，滅菌20min;(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的10%將(1)中的菌種液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于3(TC恒溫培養(yǎng)48h，攪拌轉(zhuǎn)速220rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到l.OX1089cfo/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0;(5)濃縮后的發(fā)酵液加水至300份，過濾，分裝，滅菌，即制成口服液，lml溶液相當(dāng)于原生藥lg。實(shí)施例2本發(fā)明中藥生物制劑的制備中藥組成杜仲葉70份、灰樹花60份、黃芪40份、淫羊藿30份制備方法(l)將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，36°C，230rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X108、fu/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為8%，培養(yǎng)溫度29t:，攪拌轉(zhuǎn)速230rpm，二級(jí)種子液活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)取配方量的中藥材，粉碎成100目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的15%麩皮、8%豆粕、0.4%硫酸銨、0.03%硫酸鎂、0.03%碳酸鈣，加水至含水量在45%，調(diào)節(jié)pH至7.1，滅菌25min;(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的9%將(1)中的菌種培養(yǎng)液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于28t:恒溫培養(yǎng)36h，攪拌轉(zhuǎn)速230rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2，再加入適量可溶性淀粉、糊精后混合均勻，烘干，粉碎，過篩，即制成粉劑，每lg相當(dāng)于原生藥5g。實(shí)施例3本發(fā)明中藥生物制劑的制備5中藥組成杜仲葉125份、灰樹花125份、黃芪80份、淫羊藿70份制備方法(l)將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，35°C，200rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X108、fu/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為9%，培養(yǎng)溫度3(TC，攪拌轉(zhuǎn)速200rpm，二級(jí)種子液活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)取配方量的中藥材，粉碎成90目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的25%麩皮、5%豆粕、0.8%硫酸銨、0.08%硫酸鎂、0.04%碳酸鈣，加水至含水量在40%，調(diào)節(jié)pH至6.9，滅菌25min;(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的8%將(1)中的菌種培養(yǎng)液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于3(TC恒溫培養(yǎng)24h，攪拌轉(zhuǎn)速180rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為l.l，再噴霧干燥得到固體粉末，加入適量乙醇作潤濕劑制軟材，制粒，干燥，再加入硬脂酸鎂混合均勻，壓片，即制成片劑，每片相當(dāng)于原生藥0.5g。實(shí)施例4本發(fā)明中藥生物制劑的制備中藥組成杜仲葉50份、灰樹花50份、黃芪25份、淫羊藿25份制備方法(l)將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，37°C，250rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X108、fu/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為9%，培養(yǎng)溫度28t:，攪拌轉(zhuǎn)速250rpm，二級(jí)種子液活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)取配方量的中藥材，粉碎成80目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的30%麩皮、12%豆粕、1.0%硫酸銨、0.01%硫酸鎂、0.01%碳酸鈣，加水至含水量在55%，調(diào)節(jié)pH至7.2，滅菌20min;(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的7%將(1)中的菌種培養(yǎng)液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于28t:恒溫培養(yǎng)48h，攪拌轉(zhuǎn)速250rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為l.O，噴霧干燥，再加入適量輔料玉米芯粉后混合均勻，即制備成預(yù)混劑。實(shí)施例5本發(fā)明中藥生物制劑的制備中藥組成杜仲葉150份、灰樹花150份、黃芪100份、淫羊藿100份制備方法(l)將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，36°C，210rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X108、fu/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為10%，培養(yǎng)溫度27t:，攪拌轉(zhuǎn)速210rpm，二級(jí)種子液活菌含量在l.OX1089cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)取配方量的中藥材，粉碎成100目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的12%麩皮、6%豆粕、0.5%硫酸銨、0.07%硫酸鎂、0.05%碳酸鈣，加水至含水量在60%，調(diào)節(jié)pH至6.7，滅菌30min;6(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的6%將(1)中的菌種培養(yǎng)液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于3(TC恒溫培養(yǎng)72h，攪拌轉(zhuǎn)速150rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X1089cfu/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2，再加入適量蔗糖、糊精，制軟材并過篩制粒；濕顆粒干燥、整粒，檢測(cè)，分裝，即制備成顆粒劑，每lg相當(dāng)于原生藥2g。以下通過具體試驗(yàn)例來說明本發(fā)明的藥物組合物的有益效果。試驗(yàn)例1實(shí)施例4制備的預(yù)混劑對(duì)肉雞的生產(chǎn)性能及免疫器官指數(shù)的影響。1、試驗(yàn)材料試驗(yàn)藥物本發(fā)明的預(yù)混劑、林可霉素。試驗(yàn)動(dòng)物1日齡健康商品雞300只，由北京市某養(yǎng)雞場(chǎng)提供。2、試驗(yàn)方法將300只雞隨機(jī)分為5組，每組各60只，每個(gè)組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只雞。分別飼養(yǎng)于5個(gè)雞欄中。其中l(wèi)、2、3組為本發(fā)明的預(yù)混劑組，在基礎(chǔ)日糧中分別按0.5%、0.3%、0.1%添加預(yù)混劑；4組為林可霉素組，每公斤基礎(chǔ)日糧中添加2.5mg林可霉素；5組為基礎(chǔ)日糧對(duì)照組。試驗(yàn)期為40d。各組飼養(yǎng)環(huán)境和飼養(yǎng)管理方式一致，常規(guī)免疫，試驗(yàn)前按常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食，溫度、濕度、飼料和飲水相同。試驗(yàn)期間各試驗(yàn)組疾病按常規(guī)方法治療。3、指標(biāo)檢測(cè)3.1生產(chǎn)性能檢測(cè)肉雞成活率在第40d分別統(tǒng)計(jì)各組試驗(yàn)雞的成活率、增重、飼料利用量，計(jì)算料肉比。3.2肉雞免疫器官指數(shù)的檢測(cè)選擇脾臟、法氏囊和胸腺作為免疫器官，試驗(yàn)結(jié)束以后，從每個(gè)試驗(yàn)組中隨機(jī)抽取5只雞，空腹稱重，屠宰后分離脾臟、法氏囊和胸腺，測(cè)定其重量，計(jì)算免疫器官指數(shù)(器官重g/活體重kg)。4、結(jié)果4.1生產(chǎn)性能檢測(cè)結(jié)果(見表1)。4.2免疫器官指數(shù)檢測(cè)結(jié)果(見表2)。表1本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響組別試驗(yàn)雞(只)成活數(shù)(只)成活率(％)料肉比l(高劑量組)60601001.65±0.0402(中劑量組)60601001.68±0.0383(低劑量組)605998.31.74±0.0524(林可霉素組)605591.71.76±0.0357<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表l可以看出，本發(fā)明的生物制劑能夠顯著提高肉雞的成活率，比。由此可知，本發(fā)明的中藥生物制劑能顯著促進(jìn)肉雞生長，提高增重速度率，節(jié)約飼料，提高飼料報(bào)酬。表2本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>從表2可知，法氏囊指數(shù)，本發(fā)明的中藥微生物制劑高劑量組與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.5)，中、低劑量組與對(duì)照組比較差異不顯著(P>0.5);脾臟指數(shù)高、中劑量組與對(duì)照組比較差異顯著(P〈0.5)，胸腺指數(shù)高劑量組與對(duì)照組比較，差異顯著(P<0.5)。綜上所述，本發(fā)明的中藥生物制劑有增加肉雞的免疫器官指數(shù)的作用，即能夠促進(jìn)免疫器官發(fā)育，提高機(jī)體免疫力。試驗(yàn)例2本發(fā)明的顆粒劑對(duì)依莎蛋雞產(chǎn)蛋性能和免疫功能的影響。1、試驗(yàn)動(dòng)物選擇河北某雞場(chǎng)的200日齡2400只健康的依莎蛋雞為試驗(yàn)對(duì)象。2、試驗(yàn)方法將2400只雞隨機(jī)分成3組，2個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組，每組800只，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)200只。l組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；2組在基礎(chǔ)日糧中按每只雞0.5g/次的劑量添加本發(fā)明的顆粒劑，一天2次；3組在基礎(chǔ)日糧中按每只雞0.25g/次的劑量添加本發(fā)明的顆粒劑。試驗(yàn)組和對(duì)照組在同一幢雞舍內(nèi)采用全階梯式籠養(yǎng)，自由飲水，三組蛋雞飼養(yǎng)管理完全一致。試驗(yàn)期為60天。3、產(chǎn)蛋性能測(cè)定試驗(yàn)全程每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重，觀察試驗(yàn)雞只的飲食、飲水、糞便、精神狀況，記錄死亡數(shù)。①平均蛋重(g)=每日隨機(jī)抽取5%的蛋稱重；產(chǎn)蛋率(％)=統(tǒng)計(jì)期內(nèi)的總產(chǎn)蛋數(shù)/飼養(yǎng)日內(nèi)母雞數(shù)累加X100%;死亡率(％)=死亡雞數(shù)/試驗(yàn)雞數(shù)X100%4、免疫學(xué)指標(biāo)測(cè)定與方法8，降低料肉，降低發(fā)病試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)10只蛋雞，采集血樣，采血前要求對(duì)蛋雞停食、停水12h。離心分離血清，滅菌后-2(TC保存，檢測(cè)免疫學(xué)指標(biāo)及血清總蛋白含量。①血清總蛋白(TP)含量使用試劑盒應(yīng)用雙縮脲法進(jìn)行測(cè)定；②血清免疫球蛋白(IgG)用免疫比濁法測(cè)定；③外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率用MTT比色分析法檢測(cè)；新城疫抗體滴度用血球凝集抑制試驗(yàn)(HI)測(cè)定。5、數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)確定差異顯著性。6、試驗(yàn)結(jié)果表3本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表3可知試驗(yàn)2組和3組蛋重比對(duì)照組平均蛋重分別增加15.63%和11.62%，產(chǎn)蛋率分別提高了7.62%和3.32%，死亡率下降100%，說明本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)蛋雞有提高產(chǎn)蛋性能及降低死亡率的作用，從而提高經(jīng)濟(jì)效益。表4本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)蛋雞血清總蛋白和免疫學(xué)指標(biāo)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表4可知1)試驗(yàn)2組血清總蛋白的含量最高，與對(duì)照組比較，差異顯著(P<0.05)，試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較，差異不顯著(P>0.05);2)OD57。值顯示試驗(yàn)2組的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于試驗(yàn)1組和對(duì)照組(P<0.05);3)試驗(yàn)2、3組的IgG水平較對(duì)照組均有所提高，但組間差異不顯著(PX).05);4)試驗(yàn)2、3組的新城疫HI滴度均高于對(duì)照組，2組與對(duì)照組比差異顯著(P〈0.05)。這表明蛋雞的日糧中按每只雞添加0.5g本發(fā)明的中藥生物制劑可提高血清免疫球蛋白(IgG)的含量，顯著提高血清總蛋白含量、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和新城疫抗體效價(jià)，說明本發(fā)明的中藥生物制劑能夠提高蛋雞的細(xì)胞免疫和體液免疫水平，從而增強(qiáng)雞的特異性免疫功能。試驗(yàn)例3本試驗(yàn)例是按實(shí)施例2的方法制備的粉劑對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能和免疫力的影響。1、材料與方法1.1材料試驗(yàn)動(dòng)物30日齡健康斷奶仔豬。試驗(yàn)藥物本發(fā)明的粉劑、金霉素原粉。1.2方法1.2.1動(dòng)物分組選擇45頭體重6kg左右健康斷奶仔豬，預(yù)試5天，逐頭稱重，按體重隨機(jī)分成3組，每組3個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)期為60天。3個(gè)試驗(yàn)組分別為l組在基礎(chǔ)日糧中按5g/kg添加本發(fā)明的粉劑；2組在基礎(chǔ)日糧中按20mg/kg添加金霉素；3組為對(duì)照組，飼料中基礎(chǔ)日糧中不添加任何藥物。每日喂料3次，自由飲水，其它管理按常規(guī)方法進(jìn)行。表5基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平日糧組成(%)營養(yǎng)指標(biāo)營養(yǎng)水平玉米63消化能(MJ.kg—"13.23豆粕25粗蛋白(％)18.0魚粉2賴氨酸(％)1.0麩皮6鈣(％)0.86預(yù)混料4總磷(％)0.721.2.2生產(chǎn)性能測(cè)定每天記錄試驗(yàn)豬的食欲、精神、糞便、發(fā)病等情況，記錄每組每天的采食量。分別于正式試驗(yàn)開始的第l天、試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，早晨每頭空腹稱重，計(jì)算日增重、日采食量、料重比，斷奶仔豬的腹瀉情況，計(jì)算腹瀉發(fā)生率。1.2.3免疫指標(biāo)測(cè)定及方法1.2.3.1血樣采集飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，從每個(gè)組每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選擇仔豬2頭，公母各半，共18頭。仔豬絕食24h(自由飲水)后，采集血樣并分離血清，超低溫保存，備用。1.2.3.2測(cè)定項(xiàng)目及方法測(cè)定血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白(IgA，IgM，IgG)和補(bǔ)體(C^，Q)的含量。其中，血清總蛋白(TP)采用雙縮脲法進(jìn)行測(cè)定；血清白蛋白(ALB)采用溴甲酚綠法；血清球蛋白(GLOB)為總蛋白與白蛋白差值；血清免疫球蛋白(IgA，IgM，IgG)和補(bǔ)體(C3，Q)的含量采用免疫比濁法測(cè)定。101.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)確定差異顯著性。2、結(jié)果與分析表6本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表7本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)斷奶仔豬腹瀉和成活率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由表6和表7可知，本發(fā)明制劑組的仔豬日增重比抗生素組、對(duì)照組分別提高10.18%和23.92%，料重比分別降低9.95%和17.03%，腹瀉率降低49.62%和79.88%，成活率比對(duì)照組提高13.3%。這充分說明本發(fā)明的中藥生物制劑能夠提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，有效提高仔豬的抗病力，減少仔豬腹瀉的發(fā)生，同時(shí)提高飼料利用率，降低養(yǎng)殖成本。表8本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>同列數(shù)字后附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05)，不同的相鄰字母表示差異顯著(P〈0.05)，不同的相間字母表示差異極顯著(P〈0.01)。下同表9本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)仔豬免疫指標(biāo)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從表8和9可以看出，(l)與抗生素組、對(duì)照組相比較，添加本發(fā)明的中藥生物制劑組的總蛋白含量分別提高20.16%(P<0.05)、28.36%(P<0.05);球蛋白含量分別提高23.64%(P<0.05)、37.14%(P<0.05);白蛋白含量分別提高24.87%(P<0.05)、32.23%(P<0.05)。(2)與抗生素組相比較，添加本發(fā)明的中藥生物制劑組免疫球蛋白IgG、IgA、IgM分別提高2.76%(P<0.05)、16.67%(P<0.05)、20.25%(P<0.05);與對(duì)照組相比較，分別提高49.56%(P<0.01)、40.0%(P<0.05)、33.80%(P<0.01)。(3)與抗生素組相比較，添加本發(fā)明的中藥生物制劑組補(bǔ)體Q、Q分別提高32.14%(P<0.01)、50.0%(P<0.01);與對(duì)照組相比較，分別提高48.0%(P<0.05)、38.46%(P<0.05)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的中藥生物制劑能顯著提高豬體內(nèi)非特異性抗體水平，改善豬體免疫功能，增強(qiáng)豬的抵抗力，有利于斷奶仔豬的生長發(fā)育，減少疾病的發(fā)生。試驗(yàn)例4本試驗(yàn)例是按實(shí)施例1的方法制備的口服液對(duì)肉羊增重的試驗(yàn)。選擇健康4月齡小尾寒羊60只，隨機(jī)分為4組，每組15只。I組為對(duì)照組，II為低劑量組，每天每只羊灌服本發(fā)明的口服液0.5ml，每天l次；III為中劑量組，每天每只羊灌服本發(fā)明的口服液0.8ml，每天l次；IV為高劑量組，每天每只羊灌服本發(fā)明的口服液l.Oml，每天1次；連續(xù)用藥60天。通過飼養(yǎng)試驗(yàn)，觀察小尾寒羊的體增重和料肉比。結(jié)果表明試驗(yàn)過程中未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)，各試驗(yàn)組羊精神狀態(tài)良好。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各試驗(yàn)組平均體重比對(duì)照組分別提高了7.43%、10.62%和11.40%;各試驗(yàn)組平均日增重比對(duì)照組提高了22.09%、41.57%和48.45%，試驗(yàn)III、IV組平均日增重與對(duì)照組比較均達(dá)顯著水平(P〈0.05)。結(jié)果顯示本發(fā)明的中藥生物制劑能夠促進(jìn)肉羊的增重，并且能加快肉羊的育肥速度。試驗(yàn)例5本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)小白鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響1、試驗(yàn)方法將40只昆明系小白鼠分成4組，每組10只，13組分別按8g/kg、4g/kg、2g/kg灌胃給予本發(fā)明的中藥生物制劑，4組為空白對(duì)照組，給予同等劑量的生理鹽水，連續(xù)用藥7天。停藥后12h每鼠腹腔注射0.4ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%雞紅細(xì)胞，812h后將動(dòng)物脫頸椎處死，仰位固定于鼠板。消毒腹部，剪開皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水或阿氏液22.5ml，輕揉腹部lmin，然后抽取腹腔液lml滴涂于干凈載玻片上，每片0.2ml，共2片，放在墊有濕紗布的搪瓷盒中，置于37t:孵箱中溫育30min，取出玻片，投入生12理鹽水中漂洗，以除去未貼片的細(xì)胞。晾干，以丙酮-甲醇(l:1)固定5min，再用4%姬母薩-瑞特氏染色液染色35min，用蒸餾水漂洗，晾干。在油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)。吞噬率=C吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞)X100X;吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞。2、試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見表IO。從表可知本發(fā)明中藥生物制劑能夠增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能，小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)、吞噬率顯著提高，高劑量組、中劑量組與對(duì)照組比較，差異顯著。表10本發(fā)明的中藥生物制劑對(duì)小白鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*P<0.5與對(duì)照組比較試驗(yàn)例6本試驗(yàn)例是按實(shí)施例3的方法制備的片劑對(duì)仔兔增重及成活率的影響試驗(yàn)。選用河北省赤城縣某種兔場(chǎng)的150只斷奶仔兔，分成2組，每組75只。1組為試驗(yàn)組，每天每只仔兔灌服本發(fā)明的片劑2片；2組為對(duì)照組。連續(xù)用藥60天，兩組仔兔飼養(yǎng)方式相同。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組日均增重提高22.41X(P〈0.01)，飼料轉(zhuǎn)化率提高17.37%(P<0.05)，死亡率下降6.66%(P<0.05)，這表明本發(fā)明的中藥生物制劑具有增強(qiáng)斷奶仔兔的抵抗力，顯著提高斷奶仔兔的成活率，促生長的作用。權(quán)利要求一種提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，其特征在于是將微生物接種到包含中藥的培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵制備而成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，其特征在于所述的中藥包括如下組分和重量份數(shù)杜仲葉50150份、灰樹花50150份、黃芪25100份、淫羊藿25100份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，其特征在于所述微生物為芽孢桿菌。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，其特征在于所述的芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌和/或地衣芽孢桿菌。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑，其特征在于所述的制劑為口服液、粉劑、片劑、顆粒劑、緩釋制劑、丸劑、微囊劑、注射劑或其他藥劑學(xué)上可接受的劑型。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)制備菌種培養(yǎng)液將芽孢桿菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，3537°C，200250rpm搖床培養(yǎng)生產(chǎn)一級(jí)種子液，當(dāng)活菌含量達(dá)到1.0X108^cfu/ml時(shí)轉(zhuǎn)接到二級(jí)種子液發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為810%，培養(yǎng)溫度2530°C，攪拌轉(zhuǎn)速200250rpm，二級(jí)種子液活菌含量達(dá)到1.0Xl()8"cfu/ml時(shí)，停止培養(yǎng)，備用；(2)培養(yǎng)基的制備取配方量的中藥材，粉碎成80120目的藥材細(xì)粉，裝入發(fā)酵罐中，加入占中藥重量的1030%麩皮、520%豆粕、0.11.0%硫酸銨、0.010.10%硫酸鎂、0.010.05%碳酸鈣，加水至含水量在4060%，調(diào)節(jié)pH至6.57.5，滅菌2030min;(3)冷卻后，按發(fā)酵物總重量的510%將(1)中的菌種培養(yǎng)液接入到(2)的培養(yǎng)基中，于253(TC恒溫培養(yǎng)2472h，攪拌轉(zhuǎn)速150250rpm，當(dāng)活菌含量達(dá)到l.OX1089cfu/ml時(shí)停止發(fā)酵；(4)將成熟的固態(tài)發(fā)酵物用乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濾液精制，發(fā)酵液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.01.2，加入藥學(xué)上常用輔料制成相應(yīng)劑型。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的制備方法，其特征在于還可進(jìn)一步包括如下步驟步驟(4)得到的濃縮發(fā)酵液經(jīng)過噴霧干燥或冷凍干燥后，加入輔料制成預(yù)混劑。8.—種包含權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)所述的提高畜禽免疫力的中藥生物制劑的飼料。全文摘要本發(fā)明涉及一種提高畜禽免疫力的中藥生物制劑及其制備方法。本發(fā)明將傳統(tǒng)中藥方劑與現(xiàn)代微生物技術(shù)相結(jié)合制備一種中藥生物制劑，該制劑是以中藥杜仲葉、灰樹花、黃芪、淫羊藿為原料，粉碎后加入麩皮、豆粕、硫酸銨、硫酸鎂、碳酸鈣及水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，加入一定比例的菌種培養(yǎng)液，進(jìn)行發(fā)酵，成熟的固態(tài)發(fā)酵物加入乙醇進(jìn)行浸提，分離，過濾，濃縮，制備成各種劑型。經(jīng)微生物發(fā)酵代謝后所制備的中藥生物制劑，能夠顯著提高畜禽機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高畜禽的生產(chǎn)性能，有效防治免疫抑制性疾病。文檔編號(hào)C12P1/04GK101690743SQ20091009356公開日2010年4月7日申請(qǐng)日期2009年9月30日優(yōu)先權(quán)日2009年9月30日發(fā)明者叢日剛,劉瀾,劉鈞,張俊儒,楊秀玉,田玲,莫云,葛代興,葛冰,鄧?yán)?黃建茹申請(qǐng)人:北京大北農(nóng)動(dòng)物保健科技有限責(zé)任公司;北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司