專利名稱：：甘草素制劑及其祛痰鎮(zhèn)咳應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬藥物用途，涉及甘草素制劑藥物的制備方法和新用途，具體涉及甘草素在制備治療咳嗽和痰多藥品中的應用。技術背景隨著全球經(jīng)濟的發(fā)展，工業(yè)與民用污染源不斷增加，加之環(huán)境治理不力等因素，呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，其引起的死亡率也逐年上升，目前呼吸系統(tǒng)疾病已成為人類幾大"殺手"之一。不過，這也給生產(chǎn)呼吸系統(tǒng)疾病藥物的企業(yè)創(chuàng)造了更廣闊的市場空間。作為呼吸系統(tǒng)藥物的重要組成部分，祛痰鎮(zhèn)咳藥物的市場也逐年遞增?？人院吞刀嗍呛粑到y(tǒng)疾病的主要癥狀，應用祛痰和鎮(zhèn)咳藥是對癥治療的重要手段。合理應用祛痰鎮(zhèn)咳藥不僅可以減輕病人的痛苦，并可防止并發(fā)癥的發(fā)生和原發(fā)疾病的進一步惡化。在中國藥品市場中，祛痰和鎮(zhèn)咳藥每年的市場份額約為200億元。因此，從中藥中尋找和提取鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘藥具有良好的社會效益和經(jīng)濟效益。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供甘草素在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物中的應用。所述制備以甘草素單獨或與其它活性組份或輔料配合制成，制劑中以1000粒計，含甘草素30克。初步的藥理實驗證實本發(fā)明的甘草素可以改善急、慢性咳嗽和痰多癥狀。本發(fā)明所述甘草素的英文名liquiritigenin，分子式C15H1204，分子量256，結構式本發(fā)明是以甘草素為主要活性成分，單獨或加入常規(guī)的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適于臨床上使用的劑型，如膠囊劑、片劑、口服液體劑等。本發(fā)明的另一個目的是提供甘草素在制備改善咳嗽和痰多癥狀的保健食品中的應用。甘草素來源于天然植物，因此，可以將甘草素制成保健食品，用于咳嗽和痰多癥狀的改善。甘草素(liquiritigenin)是從甘草總黃酮中分離純化獲得的一個天然藥物，屬于二氫黃酮類。至今為止尚未見有它制備成藥品和治療任何疾病或癥狀的報道。我們從甘草總黃酮中分離純化，經(jīng)四大圖譜(紅外、紫外、質譜、核磁共振)檢測，證明它為甘草素，分離純化的程度達到99%以十.。我們用其制成制劑(片劑、膠囊等)，設計了本實驗方案，選用2種鎮(zhèn)咳藥實驗動物模型和2種祛痰藥實驗動物模型對甘草素膠囊和片劑進行了鎮(zhèn)咳和祛痰的藥效學研究，發(fā)現(xiàn)甘草素的藥效明顯強于甘草黃酮，作用強度是甘草黃酮IO倍以上。本發(fā)明的甘草素來源于天然植物，原料來源豐富，制備成本低，藥物毒副作用小，為臨床治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀提供優(yōu)選藥物。圖1為制備工藝流程圖。具體實施例方式本發(fā)明結合附圖和實施例作進一步說明。實施例1一、甘草素膠囊處方及制備工藝f制成1000粒甘草素30g氫氧化鈉"g聚維酮15g葡甲胺10g微晶纖維素U5g乳糖20g共203.2g2處方依據(jù)及處方的篩選過程2.1處方依據(jù)根據(jù)藥效學試驗制訂甘草素膠囊，規(guī)格甘草素含量30mg/粒。輔料在處方中的作用氫氧化鈉增溶劑；聚維酮粘合劑；葡甲胺增溶劑；微晶纖維素稀釋劑、崩解劑；乳糖稀釋劑。將甘草素用氫氧化鈉乙醇溶液溶解，預試驗表明在甘草素完全成鹽的理論值(甘草素:氫氧化鈉=40:3.1)時并不完全溶解，稍過量的氫氧化鈉即甘草素:氫氧化鈉=40:3.2時能正好完全溶解。然后將溶液濃縮干燥至濃溶液，加入不同的稀釋劑攪拌使分散均勻，制濕顆粒，6(TC干燥，整粒，加入潤滑劑混合均勻，壓片即得。根據(jù)我們在開發(fā)甘草素片劑時的結果，聚維酮和葡甲胺分別為15mg和10mg時較適宜。賦形劑采用的是乳糖和微晶纖維素，在預試驗的基礎上采用不同處方及試驗結果見表5-1。結果表明，處方1雖然制軟材較容易，但制得的產(chǎn)品溶出度(按實際含藥量計算)略低。處方2、3和4三個處方的溶出度均較好，但從加入稀釋劑后軟材的濕潤程度看處方2較好。且處方2制得的顆粒流動性良好，膠囊裝量差異完全符合規(guī)定，因此，采用處方2作為本品的處方。表l甘草素膠囊的處方篩選1234甘草素30303030氫氧化鈉3.23.23.23.2聚維酮15151515葡甲胺10101010微晶纖維素1301159585乳糖204050乙醇適量適量適量適量流動性好較好較好稍差翁圧394.4898.1098.2499.232.2制備工藝2.2.1操作步驟在適量的乙醇中加入甘草素和氫氧化鈉，攪拌使溶解；(1)將溶液濃縮至濃溶液；(2)取乳糖、聚維酮、葡甲胺和微晶纖維素混合均勻，加入上述溶液攪拌制軟材，20目篩制濕顆粒，6(TC干燥；(3)整粒裝填入膠囊，打光；5(4)包裝、質檢即得。2.3工藝流程2.4試制一批樣品的影響因素試驗結果規(guī)格30mg/粒包裝除去外包裝，裸露放置批號0804282.5光照取膠囊除去外包裝置于表面皿中，在45001x光照條件下放置IO天，分別于第5、IO天取樣，檢查外觀、內容物性狀、溶出度、降解產(chǎn)物并測定含量，與0天比較，檢查方法見資料含量測定資料。表2樣品光照IO天的試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>樣品光照10天的試驗結果見表2。由結果可以看出光照IO天樣品降解產(chǎn)物、性狀、溶出度和含量未發(fā)生明顯改變。8.4.2高溫取膠囊除去外包裝裸露置于表面皿中，在4(TC、6(TC條件下放置IO天，分別于第5、IO天取樣，檢査外觀、內容物性狀、溶出度、降解產(chǎn)物并測定含量，與O天比較。表3高溫10天的試驗結果(批號080428)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>樣品高溫10天的試驗結果見表3。由結果可以看出樣品高溫放置10天，降解產(chǎn)物、性狀、溶出度和含量未發(fā)生明顯改變。8.4.3高濕取膠囊，除去外包裝，裸露置于表面皿中，分別在25"CRH75%、RH92.5%條件下放置10天，分別于第5、IO天取樣，檢查外觀、內容物性狀、溶出度、降解產(chǎn)物并測定含量，與0天比較。試驗結果見表4。表4樣品高濕10天的試驗結果(批號080428)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由結果可以看出高濕條件下樣品有吸濕現(xiàn)象，RH75。/。濕度下放置10天，樣品吸濕5.23%，RH92.5。/o濕度下放置10天，樣品吸濕增重26.01%。降解產(chǎn)物、溶出度和含量未發(fā)生明顯改變。二、藥效學研究參照國家食品藥品監(jiān)督管理局《新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學藥理學毒理學)》，設計了本實驗方案。選用2種鎮(zhèn)咳藥實驗動物模型、2種祛痰藥實驗動物模型和3種平喘試驗方法，對甘草素膠囊或片劑進行了平喘、鎮(zhèn)咳和祛痰方面的研究。試驗材料、方法和結果如下1.材料藥品與試劑1)枸櫞酸上?；瘜W試劑一廠，批號20070201，用蒸餾水配制成15%的濃度備用；2)磷酸可待因片青海制藥廠，批號20060615;蒸餾水配制成0.5mg/ml混懸液；3)Capsaicin(辣椒素):SigmaChemicalCompany,lot:123H78341,新鮮配制稱取Capsaicin3mg，用10Q/。乙醇lml溶解，力口10%吐溫80lml，研磨后加水至lOOml。4)地西泮注射液江蘇濟川制藥有限公司，批號20060309;5)酚紅試劑上?；瘜W試劑三廠；批號20070615;精密稱取酚紅試劑2g，加生理鹽水至80ml。由于酚紅在生理鹽水不能完全溶解，因此置超聲波洗滌器內超聲溶解30min，使酚紅顆粒均勻，配制成0.25%酚紅懸液。6)氫氧化鈉浙江蕭山化學試劑廠，批號20060726;7)carbamylcholine:SigmaChemicalCompany,1ot:08348)異丙腎上腺素上海信宜制藥業(yè)有限公司，批號200702129)甘草素膠囊自制，批號20080206;將甘草素10粒膠囊或片劑的原料藥加蒸餾水至100ml。整體試驗劑量以mg/kg表示，離體試驗以mol濃度。動物1)ICR品系小鼠，體重1822g，雌雄各半。2)Hartley品系豚鼠，體重350-500g，雌雄不拘。購于浙江大學實驗動物中心，合格證號220010014。所有的操作和實驗流程均遵守《實驗動物管理條例》。動物在實驗前均自由進食和進水。3)青蛙，體重2540g，雌雄不拘。購于市場。2、方法2.1小鼠酚紅排泌試驗[1]將2.5%酚紅置電磁攪拌器上邊混合邊注射，5。/。酚紅0.2mL/10g體重ip，30min后脫臼處死動物，分離氣管(避免分離氣管時出血)，取喉結下至肺門的主氣管，每一氣管放置一支5mL試管內，加生理鹽水1.0mL，震蕩洗滌30min后，力H1mmoL/LNaOHO.lmL，混勻后150g離心10min，取上清液于722型分光光度儀以A546nm測定酚紅含量。標準曲線繪制取4.17xl0々、8.34xl(T7、1.67xl(^g/L濃度的酚紅液在A546nm測定A值，繪制曲線。實驗結果根據(jù)酚紅標準曲線的回歸方程計算出小鼠的氣道酚紅排泌量()ag/mL)。分組共分6組，每組812只小鼠，雌雄各半。具體分組情況如下A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥B.甘草素6mg/kgC.甘草素20mg/kgD.甘草素60mg/kgE.甘草素120mg/kgF.15%氯化銨1.35mL/kgG.15M氯化銨2.10mL/kgH.15。/。氯化銨3.28mL/kgI.15。/。氯化銨6.40mL/kg給藥劑量和容積所有試驗小鼠饑餓過夜，均在注射酚紅前30min給藥一次。采用等容不等量ig。2.2青蛙食道纖毛運動實驗[2]將毀腦脊髓后的蛙固定于板上，分離口腔上腭至食道末端的粘膜，取2.5cmxl.5cm粘膜平貼于板上，加以固定，定時以任氏液濕潤粘膜表面。每只試驗的蛙食道粘膜均先用活性炭(半粒芝麻大小)測定一次2.0cm長度的運動時間，作為粘膜標本的篩選，剔除運動時間〈80s、〉150s的標本。篩選合格的粘膜標本以含受試藥物的任氏液濕潤，用同樣大小的活性炭粒再測定一次運動2.0cm長度的運動時間作為用藥后所需要的運動時間，并與加任氏液對照組比較組間顯著性差異。分組-A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水加入B.甘草素lxlO-6lxlO-3mol/L4個濃度C.陽性對照藥乙酰膽堿組lxlO力lxl(^mol/L4個濃度2.3枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽試驗分組共分5組，每組89只豚鼠，雌雄不拘。具體分組情況如下A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥B.甘草素3mg/kg9C.甘草素10mg/kgD.甘草素30mg/kgE.可待因10mg/kg篩選豚鼠用超聲波霧化器氣霧15%枸櫞酸2min后，10min內咳嗽次數(shù)在IO次以上的豚鼠作為實驗豚鼠，棄去10次以下的豚鼠。24h后給豚鼠灌胃給藥(ig)，進行藥物鎮(zhèn)咳試驗。給藥劑量和容積所有試驗豚鼠均在枸櫞酸引咳前30min給藥1次。采用等容不等量灌胃給藥(ig)。實驗步驟將豚鼠放入20xl0xl0cm體積描記盒中，用高靈敏度壓力換能器將豚鼠呼吸頻率和容積信號輸入微機Pclab生物信號采集系統(tǒng)，記錄豚鼠咳嗽次數(shù)。豚鼠放入體積描記盒穩(wěn)定lmin后，用超聲波霧化器氣霧15%枸櫞酸2min，計數(shù)自氣霧開始10min內的咳嗽次數(shù)，每一次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音和微機Pclab上見到的明顯的咳嗽記錄結合分析。2.4電刺激豚鼠喉上神經(jīng)引咳試驗分組共分5組，每組89只豚鼠，雌雄不拘。具體分組情況如下A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥B.甘草素3mg/kgC.甘草素10mg/kgD.甘草素30mgZkgE.可待因15mg/kg試驗步驟按文獻方法[2]，用25%烏拉坦按1g/kg腹腔注射麻醉豚鼠，麻醉后分離出豚鼠的喉上神經(jīng)，及進行氣管插管，用Y字型的接頭一頭與換能器相連，一頭與大氣相通。用高靈敏度壓力換能器將豚鼠呼吸頻率和容積信號通過AD、DA接口傳入微機Pclab生物信號采集系統(tǒng)(版本L1.36,MicSignStarCorp)，分別用刺激電極刺激氣管和喉上神經(jīng)，刺激參數(shù)為主周期ls，脈沖數(shù)10次，間隔10ms，波寬lms。除電壓外，其他所有參數(shù)不變，即以電壓為唯一刺激變量。刺激電壓由小加大，刺激時間為12s，兩次刺激之間至少相隔5min，記錄其刺激引咳閾值。每一次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音和微機Pclab上見到的明顯的咳嗽記錄結合分析。2.5統(tǒng)計用微機和SigmaStat統(tǒng)計軟件(Sigmastat1.01forWindows95，1992，Jandelcorporation,USA)。ED5G(95%可信限)和EC5o(95%可信限)用上?？茖W技術出版社POMS2.0版軟件計算。具體方法見結果中的表注。3結果3.1對小鼠氣道酚紅排泄的促進作用甘草素能促進小鼠氣道酚紅排泄，見表5。甘草素組ED50(95%可信限)為27.45(21.0335.83)mg/kg;氯化銨組為460.75(414.45512.22)mg/kg。表5.甘草素對小鼠氣道酚紅排泄的促進作用(5±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>3.2對蛙上腭和食道粘膜纖毛運動的增強作用甘草素和陽性對照藥乙酰膽堿組均呈劑量反應增加蛙上腭和食道纖毛運動，見表6。甘草素組EC5Q(95%可信限)為3.1xIO-4(7.0xl0-5~1.3xl(r3)mL/L;乙酰膽堿組為9.8xl(T7(1.9xl(T75.0xl(T6)mL/L。表6.甘草素對蛙上腭和食道粘膜纖毛運動的促進作用(5±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>10Id4承*46.3±6.046,51010-3$承40.1±10.353.7任氏液對照1498.8±37.5乙酰膽堿10IO.9訓±34.319.010io-870.6士27.3"128.51062.1士19.6"37.21010-648.6士13.7"50.8表注同上表3.3對豚鼠枸櫞酸引咳模型的抑制作用甘草素能抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽。甘草素IDso(95%可信限)為13.44(7.6923.49)mg.kg"。結果見表7.—表7.甘草素對枸櫞酸引起豚鼠咳嗽反應的抑制作用(n=10,5±S)組另IJ劑量給藥前咳嗽次數(shù)lOmin給藥后咳嗽次數(shù)lOmin抑制％生理鹽水對照10ml-kg—'23.5±6.124.0±7.0磷酸可待因15mg-kg—'22.5±7.88.3±6.9**63.1甘草素3.0mg-kg—23.9±8.915.6±8.934.710.0mg'kg—123.2±7.812.6±6.7*45.730.0mg.kg-124.0±5.89.8±8.4W59.2統(tǒng)計方法T-test，與生理鹽水組比較P<0.05,P<0.01。3.4對電刺激豚鼠喉上神經(jīng)引起的咳嗽的影響甘草素能抑制電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射，使引起咳嗽反射所需的閾值電壓明顯增高，見表8。甘草素ED5Q(95%可信限)為17.9(13.7~23.4)mg'kg—1?？纱駿D5。(95%可信限)為15.5(13.6~17.5)mg.kg-1。表8電刺激豚鼠喉上神經(jīng)給藥前后的閾值變化給藥前給藥后給藥前后組別n劑量刺激閾值(v)刺激閾值(v)刺激閾值％生理鹽水10ml.kg—'2.74±0.522.69±0.44012可待因67.5mg'kg一12.28±0.572.75±0.91*20.6615mg-kg—12.90±0.934.18±2.58**44.1630mg'kg—12.80±0.835.07±1.91"81.3甘草素73.0mg.kg-'2.79±0.633.08±1.71'10.4710.0mg.kg一12.78±0.963.90±1.57*40.3730.0mg.kg—'2.66±0.544.27±1.2廣60.5統(tǒng)計方法Pairedt-test;給藥前后咳嗽刺激閾值比較^PO.05,"PO.014討論與小結在本實驗中，采用了2種動物鎮(zhèn)咳試驗模型，枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和電剌激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射模型。甘草素抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應和電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射，提示甘草素具有很強的鎮(zhèn)咳作用。在本實驗中，采用了2種動物祛痰試驗模型，小鼠氣道酚紅排泄模型和蛙上腭和食道纖毛運動模型。甘草素促進小鼠氣道酚紅排泄，增強蛙上腭和食道纖毛運動，提示甘草素具有很強的祛痰作用。枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應主要通過刺激外周C纖維釋放遞質引起咳嗽反射和支氣管收縮反應，因此可歸類于外周性咳嗽模型，外周性鎮(zhèn)咳藥物對該模型有較強的抑制作用。而電剌激喉上神經(jīng)能快速傳導到咳嗽中樞，反射性引起咳嗽反應，因而把它歸類于中樞性咳嗽模型。IshiiR等曾將豚鼠的喉上神經(jīng)刺激模型用于研究一種外周鎮(zhèn)咳藥moguisteine時發(fā)現(xiàn)，可待因(中樞性和外周性混合作用)靜脈注射(0.54mg.kg'1)和腦室內注射(5~20嗎)呈劑量依賴抑制電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽，但moguisteine無論靜脈注射(4和20mg.kg")還是腦室內注射(20嗎)都不起作用，而對枸櫞酸引咳模型模型卻有非常明顯的作用，證明moguisteine的作用機制是屬于外周性的。本實驗中，我們應用這一模型對甘草素的作用部位進行了初步探討，發(fā)現(xiàn)甘草素對枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和電剌激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射模型均有明顯抑制作用。這些結果表明甘草素的鎮(zhèn)咳作用可能是中樞性的和周圍性兼顧的。權利要求1.一種甘草素在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物中的應用，所述甘草素的分子式C15H12O4，分子量256，其特征在于所述制備以甘草素單獨或與其它活性組份或輔料配合制成，制劑中以1000粒計，含甘草素30克。2.—種甘草素在制備改善咳嗽和痰多癥狀的保健食品中的應用。3.根據(jù)權利要求1所述的一種甘草素在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物中的應用，其特征在于所述制劑以甘草素為活性成分，加入常規(guī)的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑或增溶劑中的一種或多種藥物輔料制成。4.根據(jù)權利要求3所述的一種甘草素制劑，其特征在于所述制劑劑型為膠囊劑、片劑或口服液體劑。全文摘要本發(fā)明提供一種甘草素在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物和保健品中的應用。甘草素可單獨或與其它活性組份或輔料配合制備。經(jīng)過對甘草素制劑的主要藥效學的評價，證實甘草素有較強的鎮(zhèn)咳和祛痰藥效，可以改善急、慢性咳嗽和痰多癥狀。本發(fā)明的甘草素制劑可制成任何一種適于臨床上使用的劑型，如膠囊劑、片劑、口服液體劑等。甘草素來源于天然植物，原料來源豐富，制備成本低，藥物毒副作用小，適于實用，為臨床治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀提供優(yōu)選藥物。文檔編號A23L1/30GK101518523SQ200910097490公開日2009年9月2日申請日期2009年4月7日優(yōu)先權日2009年4月7日發(fā)明者吳希美,董新威,蔣俊霞,謝強敏,謝詒誠申請人:浙江大學