專利名稱：生物發(fā)酵工程雙項(xiàng)深培養(yǎng)液體菌種的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種好氣菌種和厭氣菌種的液體培養(yǎng)方法，特別是一種改進(jìn)了振動(dòng)、 通氣、循環(huán)，攪拌發(fā)酵方法的食用菌、藥用菌、農(nóng)用菌、工業(yè)用菌的液體菌種的培養(yǎng)方法和裝置。目前多種好氣菌生產(chǎn)，特別是食用菌生產(chǎn)，栽培用菌種的獲得，普遍采用多級(jí)固體 擴(kuò)大培養(yǎng)方法，但該方法操作繁瑣，勞動(dòng)強(qiáng)度大，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)20-25天，菌齡不一致且易 衰老，生產(chǎn)成本也相當(dāng)高昂，近年來，已開始將工業(yè)發(fā)酵液體培養(yǎng)好氣菌的方法使用到食用 菌栽培，播種用菌種的獲得，用液體菌種栽培平菇、風(fēng)尾菇、金頂磨菇等，已能使出菇時(shí)間大 為縮短，與固體菌種相比，液體菌種具有接種方便、菌齡一致以及生長(zhǎng)快等優(yōu)點(diǎn)。目前多種有益的厭氧氣菌，大多數(shù)是用固體培養(yǎng)方法來培養(yǎng)，但是用量大時(shí)，無法 滿足生產(chǎn)需要，用液體培養(yǎng)菌種，不僅速度快，菌種的質(zhì)量和產(chǎn)量都比固體菌種好。
背景技術(shù)：
培養(yǎng)液體菌種所需設(shè)備設(shè)資多，技術(shù)要求高，用量不太大的液體菌種可以用搖床 來生產(chǎn)，瓶中的液體菌種量只能占容量的五分之一，若要獲得大量液體菌種，還必須用發(fā)酵罐。1、對(duì)比文獻(xiàn)見附圖1提供了這種食用菌培養(yǎng)的工藝流程，投資額都在幾十萬(wàn)元到 幾百萬(wàn)元以上，工廠小不僅產(chǎn)值少，而且效率也低，加之食用菌栽培具季節(jié)性，即使大型液 體培養(yǎng)菌種工廠，經(jīng)濟(jì)效益也不佳，并且一大罐菌種在幾噸以上，生產(chǎn)一旦不慎，菌種就會(huì) 污染變質(zhì)。日本、西歐和臺(tái)灣地區(qū)的食用菌產(chǎn)量都很大，發(fā)酵技術(shù)也先進(jìn)，但至今未建有大 規(guī)模生產(chǎn)液體食用菌種的工廠。2、對(duì)比文獻(xiàn)見附圖2提供了一種小型的通氣發(fā)酵培養(yǎng)的工藝流程，這種工藝流程 和裝置投資額需在幾十元到幾百元左右。到現(xiàn)在為止，還是沒有實(shí)際應(yīng)用到生產(chǎn)中來，原因 是這套裝置見附圖3在一級(jí)時(shí)還可以，但是到二、三級(jí)時(shí)發(fā)酵瓶或罐就出問題了，由于發(fā)酵 瓶或罐二級(jí)、三級(jí)液體量大了，通氣大時(shí)，液體容易揮發(fā)，培養(yǎng)液會(huì)濃縮，菌種所需營(yíng)養(yǎng)會(huì)變 濃，這樣就會(huì)影響菌種的質(zhì)量，但自然產(chǎn)量就會(huì)下降，氣量小時(shí)培養(yǎng)液不會(huì)受影響，但是攪 拌不了，培養(yǎng)液中的菌種會(huì)停止生長(zhǎng)或死亡，這就是它的不足之處。3、文獻(xiàn)中關(guān)于厭氧氣菌種的培養(yǎng)方法，目前還是按教課書的厭氧菌種的分離和培 養(yǎng)技術(shù)，主要是用銅柱系統(tǒng)除氧，再應(yīng)用(享蓋特厭氧滾管裝置培養(yǎng))本技術(shù)有材料說明 (無附圖)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是改進(jìn)原有的好氣菌種和厭氧氣菌種的液體菌種培養(yǎng)方法，并設(shè)計(jì) 了一套(振動(dòng)小氣量通氣、攪拌、接種器連接為一體、經(jīng)恒溫發(fā)酵箱培養(yǎng)的裝置)簡(jiǎn)化為一 體化裝置。本發(fā)明的技術(shù)特征是1、振動(dòng)通氣過濾、發(fā)酵裝置和注入發(fā)酵瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液和管道經(jīng)常規(guī)滅菌處理后，進(jìn)行無菌操作而聯(lián)結(jié)成多級(jí)密封管道系統(tǒng)，采用滅菌棉花球過濾的 小氣量恒溫、深層通氣、振動(dòng)、攪拌、循環(huán)、培養(yǎng)。2、先用銅柱除氧系統(tǒng)除氧，除氧后配制的培養(yǎng)液注入發(fā)酵瓶或罐內(nèi)，經(jīng)常規(guī)滅菌 處理后進(jìn)行真空泵抽空箱抽真空，經(jīng)無菌操作采用恒溫發(fā)酵箱(恒溫、振動(dòng)循環(huán))培養(yǎng)。四、發(fā)明內(nèi)容


下面結(jié)合

詳細(xì)敘述本發(fā)明的實(shí)施技術(shù)方案1、附圖4是合乎本發(fā)明主題的工藝流程示意圖2、附圖5是合乎本發(fā)明主題的裝置示意圖參照附圖5，按已知配方配制好培養(yǎng)液，并注入發(fā)酵瓶或罐(1) (2) (3)(容量可以 為0. 5升、5升、15升)使培養(yǎng)液占據(jù)發(fā)酵瓶或罐，容積的五分之一以上，最佳為十分之七。 瓶口安上打有穿過進(jìn)、排氣及采樣玻璃管用孔的橡皮塞(4) (5) (6)帶有球形膨大內(nèi)腔的 進(jìn)、排氣用玻璃管(7) (8) (9) (10) (11) (12) (13) (14)并在球形內(nèi)腔內(nèi)以1. 2-1. 5克/立方 厘米的密度，均勻充填滿普通的未脫脂的潔凈棉花，供抽樣檢驗(yàn)和擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)級(jí)間密封連 通的玻璃或金屬質(zhì)分叉多通管(14) (15) (16) (17)和優(yōu)質(zhì)橡皮管及必要時(shí)起啟閉作用的管 夾(18) (19) (20) (21) (22) (23) (24) (25) (26) (27) (28)將上述(1)-(33)裝置及培養(yǎng)液作常 規(guī)滅菌處理(所謂的常規(guī)滅菌，是指經(jīng)常用的普遍性的滅菌方法，有立式、臥式高壓蒸氣滅 菌鍋，經(jīng)1.2公斤/平方厘米，30分鐘滅菌處理。市面有售不作

)然后在火焰上 作無菌操作，至少應(yīng)關(guān)閉(22) (24) (28)處的前提下聯(lián)結(jié)成如附圖5所示的多級(jí)密封管道系 統(tǒng)。為了使培養(yǎng)液中的菌種處于所要求的最佳生長(zhǎng)溫度，將盛有培養(yǎng)液的發(fā)酵瓶或罐，置于 能進(jìn)行溫度控制的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，本實(shí)施方案中具體采用了一個(gè)能自動(dòng)調(diào)溫的電子數(shù)控 發(fā)酵箱，它具有正負(fù)溫差準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。(市面有售不作

)進(jìn)行無菌操作，將選定的固體斜面菌種接種到第一級(jí)發(fā)酵瓶或罐(1)的培養(yǎng)液 中，關(guān)閉(19) (20) (22) (23)處，開通(18) (21)處，調(diào)節(jié)發(fā)酵箱內(nèi)的溫度，使培養(yǎng)液中的菌 種處于要求的最佳生長(zhǎng)溫度下，靜止培養(yǎng)1-2天后，啟動(dòng)小氣量通氣裝置(34)這種裝置可 以是利用電磁作用，根據(jù)機(jī)械原理來實(shí)現(xiàn)吸、排氣功能的，以發(fā)酵瓶或罐中每升培養(yǎng)液獲得 0. 1-0. 15升/分的小氣流，使空氣沿進(jìn)氣管(7) (8)經(jīng)滅菌處理的棉花球過濾后送入培養(yǎng) 的液體底部不超過1厘米處，進(jìn)行小氣量通氣培養(yǎng)，這種電磁泵，就是養(yǎng)金魚用的氣泵，市 面有售(不作

)，這時(shí)候必須啟動(dòng)(35)振動(dòng)器，根據(jù)機(jī)械原理，振動(dòng)器是由上部 裝帶有雙突輪的電動(dòng)機(jī)，中部用8-12條長(zhǎng)度相同大小一樣規(guī)格的彈簧，下部為固定座架構(gòu) 成，通電后電動(dòng)機(jī)經(jīng)裝有上下頭突輪的主軸，根據(jù)慣性定律，工作時(shí)使彈簧作用，使上部產(chǎn) 生平穩(wěn)、有序的振動(dòng)，使培養(yǎng)液起到很好的循環(huán)作用。經(jīng)雙項(xiàng)機(jī)械工作培養(yǎng)5-7天，見瓶?jī)?nèi) 培養(yǎng)液中出現(xiàn)0.5-1毫米直徑的菌絲球，霉菌還能見孢子，并根據(jù)需要從取樣口(22)處取 樣檢驗(yàn)，證實(shí)符合要求時(shí)，即完成了一級(jí)培養(yǎng)，若需第二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，關(guān)閉(21) (22) (26)， 開通(23)然后啟動(dòng)(34)將第一級(jí)已培養(yǎng)好的菌種沿封密管道壓、流至第二級(jí)發(fā)酵瓶或罐 ⑵中，接著關(guān)閉(18)，開通(19)，啟動(dòng)(34) (35)采用上述同樣的方法，經(jīng)2天(26°C )的 培養(yǎng)，得到第二級(jí)液體菌種。若需第三級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，關(guān)閉(18) (21) (22) (23) (24) (25) (28) (20)，開通(19) (26)將第二級(jí)培養(yǎng)好的菌種沿封密管道壓流至第三級(jí)發(fā)酵瓶或罐(3)中， 并關(guān)閉(19) (26)開通(20)啟動(dòng)(34) (35)用上述相同的培養(yǎng)方法培養(yǎng)1_2天，即可完成三 級(jí)液體菌種的培養(yǎng)，若所得的容量仍不夠的話，可依上述方法，使逐級(jí)發(fā)酵瓶或灌中培養(yǎng)液的容量，后級(jí)比前級(jí)增多，最佳為1比10地?cái)U(kuò)大數(shù)量，進(jìn)行多級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)直至生產(chǎn)或科研所 需的液體菌種，量得到滿足為止。液體菌種培養(yǎng)完成后，應(yīng)先關(guān)閉(34)取出小氣量通氣裝 置后，再關(guān)閉(35)，這樣效果更好，接種，先將(31)的接種器頭的橡膠蓋取下，先關(guān)閉(20) (26) (27)打開(28)啟動(dòng)(33)將31對(duì)準(zhǔn)所準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上，這時(shí)29、33的活塞閥門進(jìn)行 數(shù)量同等的菌種輸出，連續(xù)接種，接完為止，接種完畢后，按照各個(gè)品種培養(yǎng)條件進(jìn)行嚴(yán)格 的管理。多管接種器醫(yī)藥設(shè)備門市有售，不作

。下面是合乎發(fā)明主題的振動(dòng)器構(gòu)造示意圖見附圖6。(1) (2) (3) (4)為主機(jī)與地 面固定鎖孔。(5)為底座架，(6)為下部彈簧接頭，(7)為彈簧，(8)為電動(dòng)機(jī)(單相電機(jī)) (三相電機(jī))市面有售不作

，電動(dòng)機(jī)單、三相，每1400/分種轉(zhuǎn)，1KW/小時(shí)可帶動(dòng) 40-100公斤的裝置重量，生產(chǎn)中按所需產(chǎn)量配制。(9) (10)為電動(dòng)機(jī)軸頭套突輪接頭，(11) (12)為兩端突輪，突輪與電機(jī)外殼開行。(13)為上部彈簧接頭(14)為電動(dòng)機(jī)固定板(15) 為上部蓋與發(fā)酵箱固定板。下面是為合乎本發(fā)明主題的置裝置裝培養(yǎng)厭氧氣菌的示意圖。參照附圖7，按已知 配方配制好培養(yǎng)基，采用銅柱除氧系統(tǒng)，除氧徹底后，配制培養(yǎng)液，并灌注入發(fā)酵用玻璃瓶， (1) (2) (3)(容量可以為1升、5升、15升)厭氧菌裝用瓶，使培養(yǎng)液占據(jù)發(fā)酵瓶五分之一或 十分之七，瓶或管口安上，不打孔的橡膠塞，將⑴⑵⑶培養(yǎng)液作常規(guī)滅菌處理，30分種 滅菌冷卻后，在無菌條件下接種，必要時(shí)還可以用真空泵抽空箱再次抽真空除氧，除氧完成 后，放入發(fā)酵箱內(nèi)，按菌種所需的最佳溫度，控溫，開啟(35)進(jìn)行振動(dòng)循環(huán)培養(yǎng)2天后發(fā)酵 瓶或管壁凝成一薄層，表面長(zhǎng)出肉眼可見的菌落，抽樣檢驗(yàn)，證實(shí)符合要求時(shí)，即告完成了 培養(yǎng)。若所得的數(shù)量仍不夠的話，可依上述方法，繼續(xù)培養(yǎng)，直到生產(chǎn)或科研所需的液體菌 種量得到滿足為止。真空泵抽空箱市面有售(不作

)。本發(fā)明成功的應(yīng)用于廣東 省微生物研究所菌種保藏中心提供的平菇2株，蘑菇1株，香菇1株，銀耳1株，猴頭菇1株， 茶新菇1株，鳳尾菇1株，黑木耳1株，靈芝1株，金針菇1株，黑根霉1株，米曲霉1株，青 霉1株，赤霉1株(九二〇)，啤酒酵母1株，醋酸酵母1株，耐胺固氮菌1株，等18株菌種， 還有，余兆豐教授提供的，蘇云金桿菌2株，無毒蠟樣孢桿菌(促菌生)5株，雙歧桿菌3株， 赤霉1株，供11株菌種。經(jīng)培養(yǎng)均獲得了具有優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的液體菌種把食用菌液體菌種，使 用于生熟料生產(chǎn)栽培中，大多數(shù)培育出建壯的子實(shí)體，本發(fā)明完成了蘇云金桿菌藥用菌和 黑根霉，釀酒工業(yè)用菌，厭氧菌雙歧桿菌的液體菌種培養(yǎng)試驗(yàn)，事實(shí)表明，本發(fā)明的技術(shù)和 裝置特征與余兆豐教授發(fā)明的。深層通氣培養(yǎng)液體菌種相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是能使菌種的 質(zhì)量穩(wěn)定可靠，本裝置一能培養(yǎng)好氣菌，二能培養(yǎng)厭氣菌，這是前者做不到的。與享蓋特教 授發(fā)明的，厭氧滾管裝置相比，本發(fā)明一能培養(yǎng)厭氣菌，二能培養(yǎng)好氣菌。本發(fā)明的技術(shù)方 法替代了前者，具有新穎性，創(chuàng)造性，適合應(yīng)用性等優(yōu)點(diǎn)，所以本發(fā)明命名為生物發(fā)酵工程， 雙項(xiàng)深培養(yǎng)液體菌種的方法(一體化裝置)。本裝置的造價(jià)大致為小型的貳仟元左右、中 型的伍仟元左右、大型的壹萬(wàn)元左右的成本價(jià)。
五具體實(shí)施例方式實(shí)施例之一平菇沙白、廣溫型菇種，由廣東省微生物研究所菌種保藏中心購(gòu)買， 實(shí)施裝置發(fā)酵瓶0. 5升/只，5升1只，15升1只，上述玻璃發(fā)酵瓶相應(yīng)地配有打好3個(gè)直 徑1厘米元孔的橡膠皮塞子。發(fā)酵箱內(nèi)體積60厘米X60厘米X50厘米的市售電子數(shù)控
5溫箱一臺(tái)。小氣量通氣裝置采用空載氣流量大于1升/分的市售電磁泵、通氣過濾管道，帶有 球徑1. 5厘米或2. 3厘米球形內(nèi)腔的外管徑1厘米的玻璃或不銹鋼管16根，并在球形內(nèi)腔 中以1. 4克/立方厘米的密度充填普通的三叉多通玻璃或不銹鋼管5根，六叉多以通玻璃 或不銹鋼管2根，長(zhǎng)度合適的玻璃或不銹鋼管5根，連接并作啟閉作用的管徑1厘米的優(yōu)質(zhì) 膠皮管12段與支相配用的金屬質(zhì)管夾12只和4個(gè)橡膠蓋蓋上接種器出口。實(shí)施方法(一) 配制好培養(yǎng)液12公斤，灌注入各發(fā)酵瓶約占容積的十分之七，(二)將上述實(shí)施裝置(1) (2) (3)及已灌入的培養(yǎng)液，和通氣裝置放于72厘米X72厘米X 110厘米的圓形立或臥式 高壓蒸氣消毒鍋內(nèi)，經(jīng)1.2公斤/平方厘米，30分鐘的滅菌處理。(三)將上述滅菌處理的 裝置和裝置在高約10厘米，圓徑約2厘米的酒精火焰上部，聯(lián)結(jié)成密閉的連續(xù)式培養(yǎng)裝置。 (四)在塑料薄膜折疊活動(dòng)無菌操作箱內(nèi)，從試管固體斜面母種挖去0. 5厘米X 1厘米的菌 種4塊于第一級(jí)0.5升的發(fā)酵玻璃瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液中。(五)調(diào)節(jié)發(fā)酵箱中的溫度，使箱內(nèi) 溫度恒定在菌種所需要的最佳適合的溫度以使用放入箱中的第一級(jí)培養(yǎng)液中液體菌種維 持26°C的最佳生長(zhǎng)條件下，靜止培養(yǎng)1-2天。(六)開啟振動(dòng)器(35)進(jìn)行振動(dòng)循環(huán)、攪拌。
(七)開啟電磁泵(34)以通氣量0.1升/分的速率向培養(yǎng)液底部不超過1厘米處小氣量 通氣培養(yǎng)一周時(shí)間，箱內(nèi)溫度同上，待肉眼能見0. 5-1厘米直徑的菌絲球充滿培養(yǎng)液為止。
(八)從第一級(jí)0.5升發(fā)酵瓶的取樣口抽取菌種液，用肉眼平皿稀釋計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)每毫升見 500個(gè)以上菌絲球，則認(rèn)為第一級(jí)液體菌種已培養(yǎng)好。(九)利用壓力將第一級(jí)發(fā)酵瓶?jī)?nèi)的 液體菌種沿密封管道壓入第二級(jí)5升的發(fā)酵瓶與瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液混合，維持箱內(nèi)溫度26°C， 以0. 1升/分的通氣速率通氣振動(dòng)循環(huán)攪拌培養(yǎng)2天，用上述相同的檢驗(yàn)方法抽樣檢驗(yàn)認(rèn) 為符合要求后，即認(rèn)為第二級(jí)3. 5升液體菌種已培養(yǎng)好。(十)采用上述同樣的方法，經(jīng)2 天，26°C的通氣培養(yǎng)得到第三級(jí)12公斤液體菌種。實(shí)施例之二 黑根霉菌，廣普型，釀酒工業(yè)用發(fā)酵菌種，菌種由廣東省微生物研 究所菌種保藏中心購(gòu)買，實(shí)施裝置同實(shí)施例之一，實(shí)施方案除培養(yǎng)時(shí)最佳生長(zhǎng)溫度為 24士0.5°C外，均同實(shí)施例之一試驗(yàn)效果良好，經(jīng)釀酒試驗(yàn)，均能超過固體菌種的產(chǎn)量。實(shí)施例之三蘇云金桿菌——以色列變種血清型H-14液體菌種。菌種由余兆豐教 授提供，培養(yǎng)裝置同實(shí)施例之一，實(shí)施方案，除培養(yǎng)時(shí)最佳生長(zhǎng)溫度27士2°C外，均同實(shí)施 例之一試驗(yàn)效果良好，經(jīng)多項(xiàng)生化檢驗(yàn)均符合該菌各種特性要求，將培養(yǎng)好的菌液噴霧于 平菇上滋生的紅色菇蛆蟲體上，20分鐘后90%以上死亡，次日未存活。實(shí)施例之四雙歧桿菌，試驗(yàn)用菌種，由廣東省微生物研究所菌種保藏中心購(gòu)買。 培養(yǎng)裝置、振動(dòng)器、數(shù)控溫箱、發(fā)酵玻璃瓶或管、優(yōu)質(zhì)橡膠塞子、除氧系統(tǒng)，實(shí)施方案按已知 配方，配制好培養(yǎng)基，采用銅柱除氧系統(tǒng)除氧，除氧徹底后，配制培養(yǎng)液，并注入發(fā)酵用的瓶 或管內(nèi)(1) (2) (3)(容量1升、5升、15升)使培養(yǎng)液占據(jù)發(fā)酵瓶，五分之一或十分之七，瓶 口安上，不打孔的橡膠塞將(1) (2) (3)培養(yǎng)液作常規(guī)滅菌處理，30分鐘滅菌冷后，在無菌條 件下接種，必要時(shí)還可以用真空泵抽空箱抽真空一次，將(1) (2) (3)放入，數(shù)控發(fā)酵箱內(nèi)， 控溫37 士 0.5°C，開啟(35)振動(dòng)器、振動(dòng)、循環(huán)培養(yǎng)，24-48小時(shí)后，發(fā)酵瓶壁凝成一薄層表 面長(zhǎng)出肉眼可見的菌落，抽樣檢驗(yàn)，證實(shí)符合要求時(shí)，即告完成了培養(yǎng)。對(duì)比文獻(xiàn)簡(jiǎn)易生物發(fā)酵工程 余兆豐
1986 年厭氧菌的培養(yǎng)與分離微生物學(xué)魏明奎中國(guó)輕工業(yè)出版社(2007)年
權(quán)利要求
本發(fā)明的技術(shù)特征是一種改進(jìn)了振動(dòng)、小氣量通氣、循環(huán)、攪拌，恒溫、接種的雙項(xiàng)培養(yǎng)好氣菌和厭氣菌的液體菌種培養(yǎng)方法要求保護(hù)。
1.本發(fā)明的技術(shù)特征是一種改進(jìn)了振動(dòng)、小氣量通氣、循環(huán)、攪拌，恒溫、接種的雙項(xiàng)培 養(yǎng)好氣菌和厭氣菌的液體菌種培養(yǎng)方法要求保護(hù)。
2.本發(fā)明把振動(dòng)器、恒溫發(fā)酵箱、小氣量通氣，瓶和灌、接種器相連接為一體的發(fā)酵培 養(yǎng)液體菌種的裝置要求保護(hù)。
3.振動(dòng)器的構(gòu)造，無論裝配大、小電動(dòng)機(jī)，大、小、長(zhǎng)、短的彈黃，凡帶有突輪能使彈黃起 作用。能帶動(dòng)本裝置的各類動(dòng)力要求保護(hù)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種液體菌種培養(yǎng)方法，特別是一種改進(jìn)了密封管道系統(tǒng)和滅菌棉花球過濾的小氣量深層通氣振動(dòng)、純環(huán)、攪拌的最新培養(yǎng)方法，把通氣、振動(dòng)、循環(huán)、攪拌、接種器連接為一體的裝置，叫一體化裝置。本裝置革除了搖床，替代了空氣壓縮機(jī)，完成了小氣量通氣培養(yǎng)的不足之處，本裝置，可大可小，不僅適合專業(yè)戶，大小生物工廠培養(yǎng)菌種，也適合科研單位，實(shí)驗(yàn)室、也可以應(yīng)用于其他好氣菌和厭氣菌種，如食用菌，農(nóng)業(yè)用菌，工業(yè)用菌，藥用菌的液體菌種培養(yǎng)。
文檔編號(hào)C12M1/02GK101870952SQ20091013708
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月26日
發(fā)明者蔣深圳 申請(qǐng)人:蔣深圳