專利名稱：快速檢測糖尿病試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，尤其涉及一種快速檢測糖尿病試劑盒。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病，快速準(zhǔn)確地檢測糖尿病對治療糖尿 病具有重要意義。現(xiàn)在檢測糖尿病的常用方法為葡萄糖氧化酶法，該法利用酶偶聯(lián)反應(yīng)，分 兩步完成，第一步反應(yīng)是葡萄糖氧化酶催化被測物質(zhì)β -D葡萄糖與氧反應(yīng)生成葡萄糖酸 和過氧化氫，第二步反應(yīng)是過氧化氫(H2O2)在過氧化物酶(如辣根過氧化物酶)、4_氨基 安替比林(4-ΑΑΡ)、苯酚的存在下，生成紅色醌亞胺化合物，然后利用分析儀器測定顯色溶 液的吸光度進而求算葡萄糖含量。該方法特異性好、靈敏度高、準(zhǔn)確性高，是國際公認(rèn)的方 法。目前，我國大中城市醫(yī)院普遍采用國外進口的自動生化分析儀和進口試劑，國產(chǎn)葡萄糖 氧化酶試劑難以滿足快速分析的要求，只能用于小城市和縣級醫(yī)院的手工操作。進口試劑 一般包括酶試劑、酚試劑和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，酶試劑為含有4-氨基安替比林，過氧化物酶， 葡萄糖氧化酶的磷酸鹽緩沖溶液，酚試劑一般為苯酚類溶液，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液即為葡萄糖 濃度已知的溶液。為了加快反應(yīng)速率以適應(yīng)快速分析的要求，還要在酶試劑中加入變旋酶， 這樣導(dǎo)致成本提高，而且變旋酶容易失活，穩(wěn)定性不夠好。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種不含變旋酶的快速檢測糖尿病試劑盒，從 而滿足既能準(zhǔn)確快速的檢測糖尿病，又使生產(chǎn)成本降低的要求。通過研究發(fā)現(xiàn)，將酶先用微波處理再配成酶試劑，并選擇合適的酚配成酚試劑，可 以使整個酶偶聯(lián)反應(yīng)的速率大為提高，而且測定準(zhǔn)確度也可以得到保證。本發(fā)明采取如下 技術(shù)方案來解決前述技術(shù)問題一種快速檢測糖尿病試劑盒，包括酶試劑、酚試劑和已知濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液， 酶試劑為含有4-氨基安替比林，過氧化物酶，葡萄糖氧化酶的磷酸鹽緩沖溶液，其特征在 于所述酚試劑為含有4-氯間苯二酚和3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉的水溶液。在本試劑盒中，酶試劑中還可以含有疊氮鈉，各組分的濃度范圍為酶試劑4_氨基安替比林，濃度范圍為0. lg/L 10g/L ；過氧化物酶，濃度范圍為 1625U/L 162500U/L ；葡萄糖氧化酶，濃度范圍為11760U/L 1176000U/L ；磷酸鹽緩沖溶 液PH范圍6 8 ；疊氮鈉的濃度范圍為0. lg/L 10g/L ；酚試劑4_氯間苯二酚，濃度范圍為0. 58g/L 58g/L ；3，5_ 二氯_2_羥基苯磺酸 鈉，濃度范圍為0. 2g/L 20g/L。以下為優(yōu)選的方案酶試劑4_氨基安替比林1. Og/L ；過氧化物酶16250U/L ；葡萄糖氧化酶117600U/ L ；磷酸鹽緩沖液的pH = 7. 0士0. 05 ；1. Og/L疊氮鈉；酚試劑含有4-氯間苯二酚5. 8g/L ；3，5- 二氯_2_羥基苯磺酸鈉2. Og/L ；
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為1. 0000g/L。本試劑盒采用非酶類物質(zhì)替代變旋酶、并利用微波輻射協(xié)同作用顯著增加了酶促 反應(yīng)速度，解決了國產(chǎn)葡萄糖氧化酶試劑反應(yīng)速度慢的問題，使其由原來37°C、近30min完 成測定縮短為室溫、3 4min完成測定；檢測靈敏度提高2倍。采用非酶類物質(zhì)替代變旋 酶，避免了酶容易失活、穩(wěn)定性不夠好、成本高等問題，既有效加快了反應(yīng)速率，又充分保持 了酶法測糖特異性較高、條件溫和等優(yōu)點。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步描述實施例一1.試劑盒制作流程葡萄糖氧化酶一微波輻射(350W)處IOs —加過氧化物酶和4_氨基安替比林、疊 氮鈉、磷酸鹽緩沖液一包裝3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉和4-氯間苯二酚一加水溶解一包裝 葡萄糖一烘干一準(zhǔn)確稱重一加水溶解一葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液一用參考方法測定一包裝 2.試劑盒的組成 2. 1.酶試劑(IOmlXl) 葡萄糖氧化酶 過氧化物酶4-氨基安替比林磷酸緩沖液 疊氮鈉
2.2 酚試劑(IOmlXl) 4_氯間苯二酚 3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉2. 3葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(1ml X 1)D-無水葡萄糖 苯甲酸鈉2. 50g/L
3.試劑盒的配制
對于新購的原料測定后進行試配，小批量合格后再大批量配制。 3. 1酶試劑的配制 3. 1. 1環(huán)境溫度4 15°C 3. 1. 2操作方法
磷酸鹽緩沖液50克磷酸氫二鈉和10克磷酸二氫鉀溶于1升水，用磷酸或氫氧化 鈉調(diào)節(jié)至所用pH = 7.0 士 0.05 ；1. Og 4-氨基安替比林，1. Og疊氮鈉，加500mLpH = 7. 0 士0. 05的磷酸鹽緩沖液使 其溶解，加經(jīng)微波處理的葡萄糖氧化酶，使?jié)舛?17600U/L，加過氧化物酶使?jié)舛?6250U/ L，W pH = 7. 0士-0. 05的磷酸鹽緩沖液至總體積1L。4°C貯存。3. 1. 3配制后檢驗合格，然后進行包裝(IOml西林瓶X 1)。



117600U/L 16250U/L 1. Og/L
pH = 7. 0 士 0. 05
1.0g/L
5. 8g/L
2.0g/L
1. 0000g/L
4
3. 2酚試劑的配制3. 2. 1環(huán)境溫度室溫3. 2. 2操作方法4-氯間苯二酚5. 8g/L，3，5_ 二氯_2_羥基苯磺酸鈉2. Og,加蒸餾水至總體積1L。3. 2. 3配制后檢驗合格，然后進行包裝(IOml塑料瓶X 1)。3. 3葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的配制準(zhǔn)確稱取于105 110°C烘干恒重的D-無水葡萄糖1. OOOOg，溶于0. 25%的苯甲 酸鈉水溶液中，定容至IL ；配制時使用雙蒸水，按規(guī)定的濃度進行配制，配制后要用參考方 法進行對比測定，如不能達到1.0000g/L要進行調(diào)整、分裝(10ml安瓶X 1)。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液也可以從市面購買。實施例二 試劑盒使用方法1、儀器要求各類分光光度計，自動、半自動生化分析儀均可。2、標(biāo)本要求標(biāo)本在30分鐘內(nèi)分離血清，否則由于糖酵解使結(jié)果降低；標(biāo)本以草酸鉀-氟化鈉 為抗凝劑，其作用是抑制糖原酵解；標(biāo)本在2-8°C可穩(wěn)定24h，-20°C冷凍可穩(wěn)定一個月。3、穩(wěn)定性與保存酶工作液2_8°C貯存，穩(wěn)定一個月，酶試劑2_8°C貯存可穩(wěn)定一年。試劑混濁或有 絮狀物視為失效。4、工作液配制根據(jù)標(biāo)本量，臨用時將酶試劑和酚試劑加蒸餾水各稀釋10倍，再 按體積比1 1混勻。5、操作程序波長500nm 比色杯光徑1. Ocm或0. 5cm測定方法終點法，反應(yīng)溫度25°C6、操作表
權(quán)利要求
一種快速檢測糖尿病試劑盒，包括酶試劑、酚試劑和已知濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，酶試劑為含有4 氨基安替比林，過氧化物酶，葡萄糖氧化酶的磷酸鹽緩沖溶液，其特征在于所述酚試劑為含有4 氯間苯二酚和3，5 二氯 2 羥基苯磺酸鈉的水溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的一種快速檢測糖尿病試劑盒，其特征在于在酶試液中還含有疊 氮鈉。
3.如權(quán)利要求2所述的一種快速檢測糖尿病試劑盒，其特征在于酶試劑4_氨基安替比林，濃度范圍為0. lg/L 10g/L;過氧化物酶，濃度范圍為 1625U/L 162500U/L ；葡萄糖氧化酶，濃度范圍為11760U/L 1176000U/L ；磷酸鹽緩沖溶 液，pH范圍6 8 ；疊氮鈉的濃度范圍為0. lg/L 10g/L 酚試劑4_氯間苯二酚，濃度范圍為0. 58g/L 58g/L ；3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉， 濃度范圍為0. 2g/L 20g/L。
4.如權(quán)利要求3所述的一種快速檢測糖尿病試劑盒，其特征在于酶試劑4_氨基安替比林1. Og/L ；過氧化物酶16250U/L ；葡萄糖氧化酶117600U/L ；磷 酸鹽緩沖液的pH = 7. 0士0. 05 ；1. Og/L疊氮鈉；酚試劑含有4-氯間苯二酚5. 8g/L ；3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉2. Og/L ；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為1. 0000g/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速檢測糖尿病試劑盒，包括酶試劑、酚試劑和已知濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，酶試劑為含有4-氨基安替比林，過氧化物酶，葡萄糖氧化酶的磷酸鹽緩沖溶液，酚試劑為含有4-氯間苯二酚和3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉的水溶液。本試劑盒解決了國產(chǎn)葡萄糖氧化酶試劑反應(yīng)速度慢的問題，使其由原來37℃、近30min完成測定縮短為室溫、3～4min完成測定；檢測靈敏度提高2倍。
文檔編號C12Q1/54GK101942498SQ20091015834
公開日2011年1月12日 申請日期2009年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月7日
發(fā)明者馮碩, 張冬暖, 張美月, 李芝, 果秀敏, 翟彤宇 申請人:河北農(nóng)業(yè)大學(xué);河北省微生物研究所