專(zhuān)利名稱(chēng)：一株可產(chǎn)黃樟油素及桉葉油素的真菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株從宜賓油樟植株內(nèi)分離得到的內(nèi)生真菌，編號(hào)為YG42，于2009年 6月19日，以PDA斜面培養(yǎng)的方式保存于北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)微生物菌種保藏管理委 員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC3141，分類(lèi)命名為稀絲頭孢霉屬Haplotrichum sp.。
背景技術(shù)：
宜賓樟油是從油樟樹(shù)的葉經(jīng)水蒸氣蒸餾提煉出來(lái)的，由幾十種不同沸點(diǎn)的化學(xué)物 質(zhì)組成，以1，8_桉葉油素、萜品醇、黃樟油素為主要成分，主要用于醫(yī)藥和香料工業(yè)。內(nèi)生 真菌與宿主協(xié)同進(jìn)化，可能合成植物的某些活性代謝產(chǎn)物，可以考慮研究利用內(nèi)生真菌與 油樟的特殊關(guān)系，工業(yè)化生產(chǎn)樟油或人為調(diào)控油樟內(nèi)生真菌區(qū)系使其早產(chǎn)豐產(chǎn)樟油，從而 解決樟油資源緊缺，來(lái)源單一的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
1株產(chǎn)1，8_桉葉油素、α-萜品醇、黃樟油素的真菌，屬于稀絲頭孢霉屬。采用市售馬鈴薯及成都科龍?jiān)噭S出產(chǎn)的分析純?cè)噭┡渲民R鈴薯瓊脂培養(yǎng)基。培養(yǎng)5天后，菌落直徑2 3cm，菌落整體呈絨毛狀，正面中心呈綠色，向外漸變?yōu)?鵝黃色、白色，背面呈紅色(產(chǎn)水溶性紅色素)；分生孢子梗多側(cè)生在菌絲上，不分枝，表面 平滑，分生孢子紡錘形，孢痕明顯；氣生菌絲色較暗。該真菌能夠在人工培養(yǎng)條件下產(chǎn)生3種主要的樟油組分物質(zhì)1，8_桉葉油素、 α-萜品醇、黃樟油素。其中1，8_桉葉油素產(chǎn)量為0.73%，黃樟油素產(chǎn)量為0.對(duì)％。發(fā)酵 液中1，8_桉葉油素、α-萜品醇、黃樟油素的總含量可達(dá)16g/L。
具體實(shí)施例方式(1)對(duì)該菌株進(jìn)行誘變育種后工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)1，8_桉葉油素、α -萜品醇、黃樟油 素；(2)作為微生態(tài)菌劑返接油樟植株，促使其早產(chǎn)、豐產(chǎn)樟油。


圖1為0. 5g/mLl，8-桉葉油素與0. 5g/mL黃樟油素混合標(biāo)樣。圖2為該油樟內(nèi)生 真菌發(fā)酵液的GC-MS圖譜，其中保留時(shí)間為9. 433min的峰經(jīng)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，與α -萜品 醇的相似度為83%，鑒定為α-萜品醇。序列表<110>宜賓學(xué)院，王濤，游玲，張超，魏琴，杜江，黃興海<120> 一株可產(chǎn)黃樟油素及桉葉油素的真菌<140>2009101638057<141>2009-10-16<160>2 <210>1 <211>1104 <212>DNA
<213> 稀絲頭孢霉屬(Haplotrichum sp.)
<220>
<22 DmRNA
<400>1gtgatacgagtgcgggctcgcggcccacctcccacccgtgtctctctctacctgttgctt60
tggcgggccaccggggccacccggtcgccgggggacgtccgtctccgggcCCgCgCCCgC120
cgaagcgccctgtgaaccctgatgaagatgggctgtctgagtcgcatgaaaattgtcaaa180
actttcaacaatggatctcttggttccggcatcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataa240
gtaatgtgaattgcagaattccgtgaatcatcgaatctttgaacgcacattgcgccccct300
ggcattccggggggcatgcctgtccgagcgtcatttctgccctcaagcgcggcttgtgtg360
ttgggcgtggtccccccggggacctgcccgaaaggcagcggcgacgtccgtccggtcctc420
gagcgtatggggctctgtcactcgctcgggacggatcggcggaggttggtcaccaccaca480
gttttaccacggttgacctcggatcaggtaggagttttacccgctgaacttaagcatatc540
ataaggcggggaaggaaaaaaccatacccgagtgcgggggcctcggggccaaccctcccc600
accggagctccttctttcctaggagtttttttttggtgggccccccaagggtcccccgac660
cccctcggggttgattgttttttttaggggcccccccataaccgcttgattttttaaata720
ggaggaaataaaaagggggggttataaccggaagaaaaaaaatattccattatatttttc780
tcacacgagaggtcctttttgttttgctctttccctccct3.3.3.3.3.3. C 3.3.3.ccaccccagt840
tatgtgcgagcccaaaaagggtgagatgtggttgtgacaatgtaagaaaattaattttta900
ttatttttaa3.3.3.3.3.3-cttttgcccccccctcttagcggcagggagaggagtaata960
aaaacctactaccttcttttttcttctata acgagagtggtggtgaatgtggttattagt1020
ttcaaagggaaaatacagag aaaagaaatatggcagccatccccccaagc1080
aagcttctcccaagctgtatagat 1104
<210>2
<211>1040
<212>DNA
<213> 稀絲頭孢霉屬(Haplotrichum sp.)
<220>
<22 DmRNA
<400>2acggggtactctacctgatccgaggtcaccgtggtaaaactgtggtggtgaccaacctcc60
gccgatccgtcccgagcgagtgacagagccccatacgctcgaggaccggacggacgtcgc120
cgctgcctttcgggcaggtccccggggggaccacgcccaacacacaagccgcgcttgagg180
gcagaaatgacgctcggacaggcatgccccccggaatgccagggggcgcaatgtgcgttc240
aaagattcgatgattcacggaattctgcaattcacattacttatcgcatttcgctgcgtt300
cttcatcgatgccggaaccaagagatccattgttgaaagttttgacaattttcatgcgac360
tcagacagcccatcttcatcagggttcacagggcgcttcggcgggcgcgggcccggagac420
ggacgtcccccggcgaccgggtggccccggtgggcccgccaaagcaacaggtagagagag480
acacgggtgggaggttgggccgcgagggcccgcactcggtaatgatccttccgcaggtac540
ctacacggaggtacacaccatgggggcctgaggtccactcacagggttcttttcggttga600
tttgttgggtgccctggataccccctccctctcaaaaatttttttcgaacgccaccaaaa660
cccgttgaaa0 ￡1￡1￡Ι ￡1￡1cattagggggcgggacacacggggaaaaaaatattacttt720
ttttttgggggggttgttgttttggggcagtgttcgtctaaacaagaactcccagtggcg780
aaatgtttgttgtgggttgctgtttaccctctgaacttatattttttataatcaaattcc840
ccggcctcactttatggcagagatgctgaataaaaaacgtctctttcccccggtgtggga900
gtgtggagaagagtgtttcccccccacacaCCCC3.3.3.3.3.Ccaagagaaagatatggtgtc960
tctccttgatgtagttgtgtgtatttgatttttatttatg aaaagctgtgtagacacatg1020
gcgtatgatgtcacttcaac1040
權(quán)利要求
1.一株真菌，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的編號(hào)為CGMCC3141， 鑒定為稀絲頭孢霉屬Haplotrichum sp.，其特征是培養(yǎng)5天后，菌落直徑2 3cm，菌落整 體呈絨毛狀，正面中心呈綠色，向外漸變?yōu)轾Z黃色、白色，背面呈紅色(產(chǎn)水溶性紅色素)； 分生孢子梗多側(cè)生在菌絲上，不分枝，表面平滑，分生孢子紡錘形，孢痕明顯；氣生菌絲色較 暗。其ITS特征序列與Genebank已發(fā)表的對(duì)應(yīng)序列最高相似度為97%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌，其特征是能夠在人工培養(yǎng)條件下產(chǎn)生3種主要的樟 油組分物質(zhì)1，8_桉葉油素、α-萜品醇、黃樟油素。其中1，8_桉葉油素產(chǎn)量為0.73%，黃 樟油素產(chǎn)量為0. 。3種成分總量在發(fā)酵液中的總含量可達(dá)16g/L，相比目前油樟葉出油 率2%，具備一定開(kāi)發(fā)潛力。
全文摘要
一株分離自油樟植株的內(nèi)生真菌，鑒定為稀絲頭孢霉屬Haplotrichum sp.，該真菌1，8-桉葉油素產(chǎn)量為0.73％，黃樟油素產(chǎn)量為0.24％。其發(fā)酵液中1，8-桉葉油素、α-萜品醇、黃樟油素的總含量可達(dá)16g/L。
文檔編號(hào)C12R1/645GK102071144SQ20091016380
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2009年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月6日
發(fā)明者張超, 杜江, 游玲, 王濤, 魏琴, 黃興海 申請(qǐng)人:宜賓學(xué)院, 王濤