專利名稱：：防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料，屬于農(nóng)業(yè)集約化生產(chǎn)
技術(shù)領(lǐng)域：
。二
背景技術(shù)：
：自2001年在我國(guó)第一次發(fā)現(xiàn)連作香蕉巴拿馬枯萎病后，該土傳連作病害迅速蔓延，目前在我國(guó)香蕉主要生產(chǎn)區(qū)(海南省、廣東省、廣西壯族自治區(qū))越來越嚴(yán)重，正在成為香蕉生產(chǎn)的瓶頸。連作香蕉巴拿馬枯萎病是由病原真菌(尖孢鐮刀菌第4小種)引起的，在連作4茬時(shí)就開始出現(xiàn)，連作6茬以后越發(fā)嚴(yán)重。如果沒有防治該病害的方法與途徑，再過5-10年中國(guó)就難以生產(chǎn)香蕉，這對(duì)中國(guó)的香蕉業(yè)和人民的生活將產(chǎn)生很大影響。我們的研究結(jié)果表明，連作作物枯萎病的關(guān)鍵問題不是養(yǎng)分缺乏或不平衡，也不是土壤次生鹽漬化問題，而是土壤中的微生物區(qū)系及其次生物質(zhì)的致毒問題。另一方面，水稻、小麥、玉米、油菜等作物秸稈就地焚燒、規(guī)?；B(yǎng)殖后的畜禽糞便隨地棄置等不僅嚴(yán)重污染了環(huán)境，也極大地浪費(fèi)了能作為有機(jī)肥和生物有機(jī)肥產(chǎn)品的原料；大量的養(yǎng)分資源(C、N、P、K、S及微量元素)流失于土壤-植物系統(tǒng)之外，明顯地削弱了我國(guó)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的能力。如何將從土壤中因作物收獲而取走的營(yíng)養(yǎng)元素最大限度地歸還到土壤中去，唯一的途徑就是將這些固體有機(jī)廢棄物制成商品有機(jī)肥料再施入土壤。如果將這些固體有機(jī)廢棄物經(jīng)過高溫發(fā)酵合成高品位的有機(jī)堆肥，再用于功能菌的載體，所制成的微生物有機(jī)肥料功能明確，將會(huì)有很好的應(yīng)用前景。三
發(fā)明內(nèi)容1.技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于提供用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料，防效高，并且有增產(chǎn)功能，使香蕉連作障礙土壤得到生物修復(fù)，確保集約化農(nóng)業(yè)的順利發(fā)展。2.技術(shù)方案用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌NJN-6和NJN-ll，均屬枯草芽孢桿菌(5flc///^犯6"to)，2009年7月9日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，NJN-6菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.3183，NJN-11的菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.3184;NJN-6菌株的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+,細(xì)胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長(zhǎng)，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，發(fā)酵果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性;NJN-11菌株的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長(zhǎng)，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陽性，發(fā)酵葡萄糖、果糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性。用上述防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌所生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料，該微生物有機(jī)肥料中含有1X1()S個(gè)/g以上的NJN-6和1X1()S個(gè)/g以上的NJN-11、全氮含量質(zhì)量比為4~5%，全氮中質(zhì)量比90%以上為有機(jī)氮，總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為610%、有機(jī)質(zhì)含量質(zhì)量比為3035%。所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其特征為(1)將權(quán)利要求1所述的拮抗菌NJN—6和NJN—11，分別進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵生產(chǎn)的條件為培養(yǎng)液為PDA，pH6.07.0,發(fā)酵溫度范圍3035'C，攪拌速度為180~300轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵時(shí)間為48hr.，發(fā)酵液的含菌或芽孢量^1X10ie個(gè)/ml;所用PDA培養(yǎng)液配制方法為(以配制1L培養(yǎng)基為例)用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min,接著用四層醫(yī)用紗布過濾，濾液加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值調(diào)至7.2-7.4，121'C滅菌20min。(2)分別將NJN—6和NJN—11發(fā)酵液按50L/噸的量接種到腐熟的豬糞堆肥和菜粕的微生物分解混合物中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵過程中每天翻堆1次，溫度不超過50'C，發(fā)酵5天，發(fā)酵結(jié)束后拮抗菌NJN—6和NJN—ll含量均達(dá)到lXl()S個(gè)/g以上，獲得拮抗菌NJN—6的豬糞堆肥固體菌劑、菜粕的微生物分解混合物固體菌劑和NJN—11的兩種固體菌劑。所用腐熟的豬糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)含量>35%，有機(jī)氮含量為1.2-2%，含水量25-30%。(3)按豬糞堆肥、菜粕的微生物分解混合物兩類分別將拮抗菌NJN—6固體菌劑和NJN—ll固體菌劑按照體積比l:l混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕的微生物分解混合物的固體混合菌劑；(4)再將豬糞堆肥的固體混合菌劑與菜粕微生物酶解混合物的固體混合菌劑按體積比50-70%:30-50%的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過60'C的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，包裝出廠即為能防治連作香蕉巴拿馬枯萎病的微生物有機(jī)肥。所述微生物有機(jī)肥料可專用于巴拿馬枯萎病的生物防治。3.有益效果本發(fā)明與目前市場(chǎng)上的有機(jī)肥料產(chǎn)品相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1)該肥料產(chǎn)品中含有抑制香蕉巴拿馬枯萎病原真菌生長(zhǎng)的專一性高效菌株NJN-6和NJN-11，其抑制效果非常顯著。試驗(yàn)結(jié)果表明，香蕉枯萎病的防治率達(dá)到80%以上，在已經(jīng)嚴(yán)重發(fā)病(當(dāng)季發(fā)病率15%以上)的田塊上，香蕉巴拿馬枯萎病可以控制在5%以下(表2)，如果連年這樣施用，可以有效控制枯萎病的發(fā)生。2)該肥料為有機(jī)肥，含有豐富的有機(jī)質(zhì)(3035%)，有機(jī)氮含量為4%,而且大部分為氨基酸和小分子多肽。本產(chǎn)品總磷含量為4%,而且生物有效性特別高，使用本產(chǎn)品后能使作物順利度過苗期磷素敏感期。3)由于是生物菌株制劑，完全沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列問題，因而有利于蔬菜的無公害生產(chǎn)，農(nóng)民可以不用或減少其他防治疫病化學(xué)農(nóng)藥的用量，這不僅可為農(nóng)民節(jié)省開支，而且有利于農(nóng)產(chǎn)品的出口。同時(shí)，該微生物肥料還有增產(chǎn)功能，可為農(nóng)民增加收入。4)該微生物有機(jī)肥可以在營(yíng)養(yǎng)缽使用，也可以在大田使用，不僅具有有機(jī)肥的功能，而且其中所含的拮抗菌通過多種生防機(jī)制起作用，從而達(dá)到防治香蕉枯萎病的效果。四圖lNJN-6菌株的拮抗效果圖2NJN-ll菌株的拮抗效果圖3.NJN-6菌株的盆載拮抗效果(注Tl為化肥對(duì)照，T3為含有NJN-6的有機(jī)肥)圖4.NJN-11菌株的盆載拮抗效果(注Tl為化肥對(duì)照，T4為含有NJN-11的有機(jī)肥)圖5NJN-6菌株和NJN-11菌株混合肥料的盆載拮抗效果(注Tl為化肥對(duì)照，T5為同時(shí)含有NJN-6和NJN-11的有機(jī)肥)五具體實(shí)施方式(一)拮抗菌株的分離拮抗菌株的初篩采集香蕉連作田塊中健康香蕉的根際土壤，采用PDA+NA加入病原菌尖孢鐮刀菌(i^yan'謂0;9^0r謂)第4小種(來自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心)孢子懸液的雙層平板初篩拮抗菌株，初篩共獲得11株拮抗菌株，將菌種凍干一2(TC保存，用于進(jìn)一步篩選。拮抗菌株的復(fù)篩取初篩后的拮抗菌株和病原菌，在PDA平板上進(jìn)行對(duì)峙試驗(yàn)，進(jìn)行復(fù)篩。用打孔器(5mm)從長(zhǎng)滿病原菌的平板上挖取一塊病原菌菌塊至PDA平板中央，置于28'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。ld(24h)后在PDA平板中央，距病原菌塊四周2cm處用滅菌牙簽接種待測(cè)拮抗菌，28'C培養(yǎng)3~5d，觀察測(cè)試拮抗菌菌落對(duì)病原菌的抑制情況。最終篩選得到菌株NJN-6和菌株NJN-11,NJN-6菌株和NJN-11菌株的拮抗效果分別見圖1和圖2。(二)拮抗菌株的鑒定NJN-6菌株和NJN-11菌株均鑒定為枯草芽孢桿菌(5a"7/www^'to)。NJN-6菌株的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長(zhǎng)，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，發(fā)酵果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性；NJN-11菌株的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+,細(xì)胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長(zhǎng)，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陽性，發(fā)酵葡萄糖、果糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性。(三)菌劑生產(chǎn)(1)將拮抗菌NJN—6和NJN—11，分別接種到PDA培養(yǎng)液進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵生產(chǎn)的條件為pH6.07.0，發(fā)酵溫度范圍2437'C，攪拌速度為180300轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵時(shí)間為48hr.，發(fā)酵液的含菌或芽孢量^1X10^個(gè)/ml;所用PDA培養(yǎng)液配制方法為(以配制1L培養(yǎng)基為例)用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，接著用四層醫(yī)用紗布過濾，濾液加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值調(diào)至7.2-7.4，121'C滅菌20min。(2)將NJN—6和NJN—11發(fā)酵液按50L/噸的量分別接種到腐熟的豬糞堆肥和菜粕的微生物分解混合物中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵過程中每天翻堆1次，溫度不超過50。C，發(fā)酵5天，發(fā)酵結(jié)束后拮抗菌含量均達(dá)到1X108個(gè)/g以上，獲得拮抗菌NJN—6的豬糞堆肥固體菌劑、菜粕的微生物分解混合物固體菌劑和NJN—ll的兩種固體菌劑。腐熟的豬糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)含量》35%，有機(jī)氮含量為1.2-2%,含水量25-30%。其中菜粕的微生物分解混合物制備方法為(公知公用，見發(fā)明專利ZL200610086126.0，一種農(nóng)用氨基酸的生物制取方法及其肥料產(chǎn)品)，菌株37-1發(fā)酵液加入到菜粕原料中，調(diào)節(jié)含水量55-65%和pH6.0-7.5，進(jìn)行開放式固體發(fā)酵，待發(fā)酵溫度上升至5(TC時(shí)立即開始翻堆，以后每天翻堆，使堆溫始終維持在35-50'C共5天，固體發(fā)酵開始后，堆物的pH會(huì)不斷上升，每次翻堆時(shí)用含酸液體調(diào)節(jié)含水量和pH,使它們分別維持在55-65%和6.0-7.0，發(fā)酵終止時(shí)再用含酸液體進(jìn)行噴灑，直至堆物pH調(diào)整為5.0左右，再進(jìn)行低溫干燥或自然涼干，即為菜昨的微生物分解混合物(含氨基酸的混合材料)。(3)按豬糞堆肥、菜粕的微生物分解混合物兩類分別將拮抗菌NJN—6固體菌劑和NJN—11固體菌劑以體積比1:1混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕的微生物分解混合物的固體混合菌劑。(4)再將豬糞堆肥的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比70%分別與菜粕微生物酶解混合物的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比30%的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過6(TC的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，獲得能防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的單菌微生物有機(jī)肥(分別含菌株NJN-6、菌株NJN-11)、混合微生物有機(jī)肥(含菌NJN-6和NJN-11)。該混合微生物有機(jī)肥料(防治香蕉巴拿馬枯萎病的專用微生物有機(jī)肥)中含有1X1()8個(gè)/g以上的NJN-6和NJN-ll、全氮含量質(zhì)量比為45%,全氮中質(zhì)量比90%以上為有機(jī)氮，總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為610%、有機(jī)質(zhì)含量質(zhì)量比為3035%。(四)溫室防效試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理Tl-對(duì)照，未施用微生物有機(jī)肥料；T3-施用單菌微生物有機(jī)肥料(含NJN—6菌株)；T4-施用單菌微生物有機(jī)肥料(含NJN—11菌株)；T5-施用復(fù)合微生物有機(jī)肥料(含NJN—6菌株和NJN—11菌株)。微生物有機(jī)肥料用量香蕉育苗時(shí)按土重的2%施用(育苗時(shí)所用的土壤均為健康土壤)，待香蕉長(zhǎng)至第5片真葉時(shí)將其移栽到香蕉連作土壤中，其中連作土壤中也按土重2%的用量施入。所有處理的氮磷鉀用量一致，常規(guī)管理。之后觀察其發(fā)病情況，記錄發(fā)病率，確認(rèn)拮抗菌株是否有抑制香蕉巴拿馬枯萎病的效果。香蕉苗移栽30天后，發(fā)現(xiàn)T1(對(duì)照，未施微生物有機(jī)肥料)處理有發(fā)病植株，再過20天后，Tl處理有80%的植株發(fā)病，其它各處理的發(fā)病情況不一。香蕉苗移栽50天后的植株發(fā)病率和防治率結(jié)果如表1所示。盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明使用含有NJN—6的有機(jī)肥(T3)和含有NJN-ll的有機(jī)肥(T4)香蕉最終枯萎病的防治率分別為75%和68%(圖3、圖4)，其中T5-施用復(fù)合微生物有機(jī)肥料(含NJN—6菌株和NJN—11菌株)效果最好，防治率可以達(dá)到87.5%(圖5)。表1不同生物有機(jī)肥防臺(tái)香蕉巴拿馬枯萎病^力效果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2不同生物有機(jī)肥對(duì)香蕉連作枯萎病土壤微生物區(qū)系的影響處理細(xì)菌(個(gè)/g土)放線菌(個(gè)/g土)真菌(個(gè)/g土)Tl1.54X1083.57X1062.3X105T31.49X1096.8X1072.4X104T42.56X1092.87X1076.9X104T52.87X1094.33X1073.1X104注Tl:CK(化肥)；T3:抗香蕉巴拿馬枯萎病專性拮抗菌(NJN-6)單菌微生物有機(jī)肥；T4:抗香蕉巴拿馬枯萎病專性拮抗菌(NJN—11)單菌微生物有機(jī)肥；T5:NJN-6和NJN—11菌株混合微生物有機(jī)肥；所有供試土壤均為香蕉連作土壤(五)田間試驗(yàn)通過營(yíng)養(yǎng)缽育苗和移栽大田同時(shí)施用防治香蕉巴拿馬枯萎病的專用微生物有機(jī)肥，微生物有機(jī)肥的用量如下營(yíng)養(yǎng)缽育苗時(shí)施用量為1.596，移栽大田時(shí)的施用量為每棵1.5kg(折225kg/畝)。結(jié)果表明，在已經(jīng)嚴(yán)重發(fā)病(當(dāng)季發(fā)病率15%以上)的田塊上，香蕉巴拿馬枯萎病可以控制在5%以下(表3)。按照每公斤香蕉4元計(jì)算，營(yíng)養(yǎng)缽育苗和移栽大田同時(shí)施用微生物有機(jī)肥可使蕉農(nóng)增收3424元/畝，扣除該微生物有機(jī)肥成本投入517.5元/畝，蕉農(nóng)還可凈得2906.5元/畝，使大面積施用這種微生物有機(jī)肥料成為可能。表3施用微生物有機(jī)肥對(duì)防治香蕉枯萎病的影響(海南樂東紅湖試驗(yàn)小區(qū))處理枯萎病發(fā)生率(%)香蕉產(chǎn)量(kg/畝)增產(chǎn)率(%)對(duì)照(營(yíng)養(yǎng)缽和移栽大田均不施用微生物有機(jī)肥)18±2.32505±85營(yíng)養(yǎng)缽育苗施用微生物有機(jī)肥7.8±1.83127±9424.8移栽大田施用微生物有機(jī)肥12.1±2.12989±7419.3營(yíng)養(yǎng)缽和移栽大田均施用微生物有機(jī)肥4.5±1.53361±8834.2注抗香蕉巴拿馬枯萎病專用微生物有'ft肥的用量:營(yíng)養(yǎng)缽育苗HS用量為1.5%,移栽大田的施用量為每棵1.5kg(折225kg/畝)本發(fā)明專利從微生物區(qū)系這一關(guān)鍵問題著手(表2)，研制出一種能顯著消除香蕉作物連作巴拿馬枯萎病發(fā)生的微生物有機(jī)肥料產(chǎn)品，生物防治率達(dá)80%以上。本肥料產(chǎn)品的作用機(jī)制在于本肥料產(chǎn)品中的有效碳和有效氮源給產(chǎn)品中的功能菌微生物區(qū)系的培育提供了很好的條件，使之迅速建立外源有益功能菌微生物的生態(tài)及其食物鏈；另一方面，本肥料產(chǎn)品中含有較高含量的有機(jī)氮和有機(jī)磷，這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)連作障礙土壤中香蕉作物的生長(zhǎng)十分有利，大大提高了香蕉作物的立苗率和抗逆能力。權(quán)利要求1.用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌，包括菌株NJN-6和菌株NJN-11，均為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，2009年7月9日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，NJN-6菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.3183，NJN-11的菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.3184；NJN-6菌株的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長(zhǎng)，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，發(fā)酵果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性；NJN-11菌株的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長(zhǎng)，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陽性，發(fā)酵葡萄糖、果糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性。2、用權(quán)利要求1所述用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌所生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料，該微生物有機(jī)肥料中含有l(wèi)Xl()S個(gè)/g以上的NJN-6和NJN-11、全氮含量質(zhì)量比為45%，全氮中質(zhì)量比90%以上為有機(jī)氮，總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為610%、有機(jī)質(zhì)含量質(zhì)量比為3035%。3、權(quán)利要求2所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其特征為(1)將權(quán)利要求1所述的拮抗菌NJN—6和NJN—11，分別接種到PDA培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵生產(chǎn)的條件為pH6.07.0，發(fā)酵溫度范圍3035'C,攪拌速度為180300轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵時(shí)間為48hr.，發(fā)酵液的含菌或芽孢量》1X10!。個(gè)/ml;(2)分別將NJN—6和NJN—11發(fā)酵液按50L/噸的量接種到腐熟的豬糞堆肥和菜粕的微生物分解混合物中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵過程中每天翻堆1次，溫度不超過5(TC，發(fā)酵5天，發(fā)酵結(jié)束后拮抗菌NJN—6和NJN—ll含量均達(dá)到lXl()8個(gè)/g以上，獲得拮抗菌NJN—6的豬糞堆肥固體菌劑、菜粕的微生物分解混合物固體菌劑和NJN—ll的兩種固體菌劑。(3)按豬糞堆肥、菜粕的微生物分解混合物兩類分別將拮抗菌NJN—6固體菌劑和NJN—ll固體菌劑以體積比1:1混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕微生物分解混合物的固體混合菌劑；(4)再將豬糞堆肥的固體混合菌劑與菜粕微生物酶解混合物的固體混合菌劑按體積比50-70%:30-50%的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過60'C的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，包裝出廠即為能防治連作香蕉巴拿馬枯萎病的微生物有機(jī)肥。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中步驟(1)所用PDA培養(yǎng)液配制方法為，以配制1L培養(yǎng)基為例用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，接著用四層醫(yī)用紗布過濾，濾液加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值調(diào)至7.2-7.4，121'C滅菌20min。5、根據(jù)權(quán)利要求3或4所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中步驟(2)所用腐熟的豬糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量>35%,有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1.2-2%,含水量質(zhì)量比25-30%。6、權(quán)利要求2所述微生物有機(jī)肥料的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料，屬于農(nóng)業(yè)集約化生產(chǎn)技術(shù)。本發(fā)明分離到了兩株拮抗菌NJN-6和NJN-11，接種到腐熟的豬糞堆肥和菜粕的微生物分解混合物中進(jìn)行固體發(fā)酵制成微生物有機(jī)肥料，肥料中含有1×10⁸個(gè)/g以上的拮抗菌、全氮含量為4～5％(90％以上為有機(jī)氮)，總氮磷鉀養(yǎng)分為6～10％、有機(jī)質(zhì)含量為30～35％。試驗(yàn)結(jié)果表明，香蕉枯萎病的防治率達(dá)到80％以上，在已經(jīng)嚴(yán)重發(fā)病(當(dāng)季發(fā)病率15％以上)的田塊上，香蕉巴拿馬枯萎病可以控制在5％以下，如果連年這樣施用，可以有效控制枯萎病的發(fā)生。文檔編號(hào)C12N1/20GK101659934SQ20091018336公開日2010年3月3日申請(qǐng)日期2009年9月18日優(yōu)先權(quán)日2009年9月18日發(fā)明者欣何,楊興明,標(biāo)沈,沈其榮,黃啟為申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)被以下專利引用(1),