專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種與甌江彩鯉粉花體色相連鎖的scra標(biāo)記和檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于遺傳育種學(xué)和水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種與甌江彩鯉粉花體色相連鎖的DNA分子、引物及一種檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的方法。
背景技術(shù)：
：甌江彩鯉，是浙江省甌江流域的地方性養(yǎng)殖對(duì)象，至今已有1200余年的養(yǎng)殖歷史。甌江彩鯉不僅生長(zhǎng)迅速、營(yíng)養(yǎng)豐富，有極為優(yōu)良的食用性能，而且體色豐富，色彩艷麗，有紅色、白色和花色等多種多樣的體色，可與著名的日本錦鯉相媲美，作為觀賞魚(yú)類(lèi)開(kāi)發(fā)也具有巨大的發(fā)展?jié)摿?。?000年對(duì)甌江彩鯉進(jìn)行系統(tǒng)開(kāi)發(fā)利用以前，有五種基本體色一是"全紅"(全身體表均為紅色)，二是"大花"(即全紅體表鑲嵌大塊黑色斑紋)、三是"麻花"(即全紅體表散布黑色小斑點(diǎn))、四是"粉玉"(即全身體表呈粉白色)，五是"粉花"(即粉白色體表鑲嵌大塊黑色斑紋)。程起群等在2001年第28巻第2期的《水產(chǎn)科技情報(bào)》上報(bào)道了不同體色甌江彩鯉的生長(zhǎng)率和成活存在顯著差異。王成輝等在2004年第13巻第2期的《上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào)》上也報(bào)道了不同體色甌江彩鯉在不同的飼養(yǎng)環(huán)境中存在顯著的生長(zhǎng)差異，表現(xiàn)出較強(qiáng)的遺傳環(huán)境互作。上述研究表明不同體色的甌江彩鯉存在生長(zhǎng)率和成活率上的差異，即體色與生長(zhǎng)性狀存在一定的相關(guān)性。為進(jìn)一步研究和探索甌江彩鯉體色與生長(zhǎng)性能的相關(guān)和連鎖關(guān)系，一直希望找到不同體色的特異性分子標(biāo)記，以期為甌江彩鯉的分子標(biāo)記輔助育種提供依據(jù)，實(shí)現(xiàn)魚(yú)類(lèi)育種從傳統(tǒng)育種向現(xiàn)代分子標(biāo)記育種的跨越。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種與甌江彩鯉粉花體色相連鎖的DNA分子、引物以及檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的方法，來(lái)為甌江彩鯉的分子標(biāo)記輔助育種提供依據(jù)。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)—種用于檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的DNA分子，所述的DNA分子具有SEQIDN0:1中所示的核苷酸序列；—種用于檢測(cè)(尤其是早期檢測(cè)，即體色尚未穩(wěn)定時(shí)的檢測(cè))甌江彩鯉粉花體色的引物，所述引物的長(zhǎng)度為20個(gè)核苷酸，并且所述的引物可擴(kuò)增出具有SEQIDN0:1中所示的核苷酸序列的DNA分子核苷酸序列；所述引物還可選自具有SEQIDNO:2或SEQIDNO:3與SEQIDNO:4所示核苷酸序列的引物；—種早期檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的方法，包括從待測(cè)魚(yú)群隨機(jī)選取10-100尾魚(yú)，優(yōu)選20-50尾魚(yú)，更優(yōu)選50-50尾魚(yú)；檢測(cè)它們的基因組DNA中是否存在具有SEQIDNO:1中所示核苷酸序列的DNA分子，若存在則是甌江彩鯉粉花群體。所述方法中，可利用權(quán)利要求3所述的引物檢測(cè)待測(cè)魚(yú)的基因組DNA。發(fā)明人應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA，RAPD)技術(shù)對(duì)前面所述五種體色甌江彩鯉的觀賞型選育配套系F5進(jìn)行全基因組掃描，發(fā)現(xiàn)了一條與"粉花"體色相關(guān)的特異性條帶，并將此條帶成功的轉(zhuǎn)為SCAR(SequenceCharacterizedAmplifiedRegion)標(biāo)記，用于對(duì)"粉花"體色甌江彩鯉的特異性分子標(biāo)記與檢測(cè)。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)近一年試驗(yàn)，首次揭示與"粉花"體色相連鎖的特異性分子標(biāo)記，并可檢測(cè)"粉花"體色甌江彩鯉，所述分子標(biāo)記存在于"粉花"體色甌江彩鯉的基因組DNA中，而在其它四體色甌江彩鯉的基因組DNA中不存在或者存在幾率顯著降低，因而所述分子標(biāo)記可良好地反映"粉花"體色甌江彩鯉的基因組特點(diǎn)，并應(yīng)用于檢測(cè)"粉花"體色甌江彩鯉，以及應(yīng)用后續(xù)的甌江彩鯉分子標(biāo)記輔助育種。本發(fā)明還揭示了基于所述分子標(biāo)記設(shè)計(jì)的引物和試劑盒?；驹肀景l(fā)明的最主要理論基礎(chǔ)是基于不同體色甌江彩鯉之間基因組序列的多態(tài)性，以及隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA，RAPD)、序列特異擴(kuò)增區(qū)域(SequenceCharacterizedAmplifiedRegions,SCAR)分析方法。RAPD是以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)為基礎(chǔ)，利用人工合成的10bp的隨機(jī)寡核苷酸序列作為引物，以五種體色甌江彩鯉的基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生不連續(xù)的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物，然后通過(guò)如瓊脂糖凝膠電泳等技術(shù)來(lái)檢測(cè)DNA序列的多態(tài)性。通常，隨機(jī)引物的數(shù)量越多所覆蓋的基因組范圍越大，其與基因組結(jié)合的位點(diǎn)更加密集，能夠更全面的反映基因組之間的差異。對(duì)于同源性較高的樣本來(lái)說(shuō)，大量的引物是發(fā)現(xiàn)微小差異的前提。SCAR標(biāo)記一般是由RAPD、RFLP、AFLP等標(biāo)記轉(zhuǎn)化而來(lái)，是根據(jù)已獲得的標(biāo)記片段的序列信息，設(shè)計(jì)特異引物，然后通過(guò)普通的PCR手段來(lái)揭示多態(tài)性。本發(fā)明中，所述的SCAR標(biāo)記是基于RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化而來(lái)。SCAR標(biāo)記是一種十分穩(wěn)定的分子標(biāo)記，在應(yīng)用上具有迅速、簡(jiǎn)便、低成本的特點(diǎn)，非常適合于樣品的大量分析。分子標(biāo)記及其應(yīng)用通過(guò)對(duì)大量的隨機(jī)引物的分析篩選，獲得了與甌江彩鯉"粉花"體色相連鎖的的DNA分子標(biāo)記，所述的DNA分子標(biāo)記具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。所述分子標(biāo)記在甌江彩鯉"粉花"體色群體的基因組DNA中出現(xiàn)的頻率達(dá)到75X以上，因而，利用該分子標(biāo)記可方便地將甌江彩鯉"粉花"體色群體區(qū)分開(kāi)來(lái)，這將十分有利于對(duì)甌江彩鯉實(shí)施早期選擇。引物及其應(yīng)用利用長(zhǎng)度10bp的RAPD隨機(jī)引物，通過(guò)對(duì)隨機(jī)引物的篩選，獲得可良好地將甌江彩鯉"粉花"群體及其他體色群體區(qū)分開(kāi)來(lái)的引物。所述的引物具有SEQIDN0:2所示的核苷酸序列。以甌江彩鯉"粉花"群體中各魚(yú)的基因組DNA為模板，利用所述的引物，擴(kuò)增出長(zhǎng)度約為llOObp的DNA片段的頻率高于75%;而以其它四種體色甌江彩鯉基因組DNA為模板，利用所述的引物，均擴(kuò)增不出長(zhǎng)度約為1100bp的DNA片段。并且，以之作為引物，擴(kuò)增產(chǎn)物的譜帶清晰、多次試驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性好。根據(jù)利用SEQIDNO:2所示的引物擴(kuò)增出的DNA分子標(biāo)記(具有SEQIDNO:l所示的核苷酸序列)，可設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增該DNA分子標(biāo)記的引物對(duì)。任何可特異性擴(kuò)增該DNA分子標(biāo)記或其片段的引物對(duì)均被包括在本發(fā)明中。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的引物對(duì)由具有SEQIDNO:3與SEQIDNO:4所示核苷酸序列的引物。利用本發(fā)明的引物，只需進(jìn)行常規(guī)的PCR反應(yīng)和瓊脂糖凝膠電泳，并通過(guò)判斷相應(yīng)大小PCR產(chǎn)物的有無(wú)，就可以在早期準(zhǔn)確、快速地判斷待測(cè)魚(yú)或魚(yú)群是否屬于甌江彩鯉"粉花"體色群體，而且所需的樣品量很少。鑒定方法基于本發(fā)明所提供的一種與甌江彩鯉"粉花"體色群體相連鎖的分子標(biāo)記，本發(fā)明還提供了一種在早期檢測(cè)甌江彩鯉"粉花"體色群體的方法，所述方法包括從待測(cè)魚(yú)群隨機(jī)選取一定數(shù)量(通常多于30條，數(shù)量越多，準(zhǔn)確性越高)的魚(yú)，檢測(cè)它們的基因組DNA中是否存在具有SEQIDNO:1中所示核苷酸序列的DNA分子；若存在所述DNA分子的魚(yú)的頻率高于75%，則該待測(cè)魚(yú)群是甌江彩鯉"粉花"體色群體；鑒定待測(cè)魚(yú)基因組中是否存在所述分子標(biāo)記的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，本發(fā)明對(duì)此沒(méi)有特別的限制。例如(但不限于)可通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物和/或探針來(lái)鑒定。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，通過(guò)可擴(kuò)增出所述分子標(biāo)記的隨機(jī)引物或所述分子標(biāo)記的特異性引物來(lái)檢測(cè)待測(cè)魚(yú)的基因組DNA。更優(yōu)選的，在以上步驟中，采用具有SEQIDN0:2所示核苷酸序列的引物、以待測(cè)魚(yú)基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，觀察擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在約llOObp的條帶；或者，采用由具有SEQIDN0:3與SEQIDNO:4所示核苷酸序列的引物所示核苷酸序列的引物構(gòu)成的引物對(duì)、以待測(cè)魚(yú)基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，觀察擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在約llOObp的條帶。制備待測(cè)魚(yú)的基因組DNA的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的技術(shù)，例如可采取傳統(tǒng)的酚-氯仿法。PCR技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)，其基本原理是體外酶促合成特異DNA片段的方法。本發(fā)明的方法可采用常規(guī)的PCR技術(shù)進(jìn)行。鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在特異性基因片段(分子標(biāo)記)的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。最為常用的技術(shù)是瓊脂糖凝膠電泳，其可將不同分子質(zhì)量的DNA分離開(kāi)來(lái)，還可顯示擴(kuò)增產(chǎn)物中相應(yīng)的基因片段的多少，其具有操作簡(jiǎn)單，結(jié)果直觀的特點(diǎn)。本發(fā)明首次揭示與甌江彩鯉"粉花"體色相連鎖的特異性分子標(biāo)記，并可早期檢測(cè)甌江彩鯉"粉花"體色群體，所述分子標(biāo)記存在于甌江彩鯉"粉花"體色魚(yú)的基因組DNA中，而在其他四種體色甌江彩鯉的基因組DNA中不存在，因而可良好地應(yīng)用于分離鑒定甌江彩鯉"粉花"體色魚(yú)。利用本發(fā)明揭示的引物，可快速、大批量地早期檢測(cè)待測(cè)魚(yú)，從待測(cè)魚(yú)中快速準(zhǔn)確地鑒定出甌江彩鯉"粉花"體色群體，所需樣品量少，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高，并且具有良好的再現(xiàn)性、結(jié)果穩(wěn)定可靠。下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。圖1顯示了以S495為引物，以五種體色基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，其中泳道5，10，15，20，25，30為"粉花"體色甌江彩鯉的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果；其余泳道為另外四種體色甌江彩鯉的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果。圖2顯示了以S495為引物，以五種體色基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，其中泳道1-17，為"粉花"體色甌江彩鯉的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果；其余泳道另外四種體色甌江彩鯉的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果；泳道M:2000bpDNAladder。圖3顯示了以S49511Q°bp為引物，以五種體色基因組DNA為模板進(jìn)行的PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，其中，泳道1-12，為"粉花"體色甌江彩鯉的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果；其余泳道另外四種體色甌江彩鯉的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果；泳道M:2000bpDNAladder。具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室指南(NewYork:CoIdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例1:S495加咖SCAR轉(zhuǎn)化標(biāo)記的建立本實(shí)施例中采用的五種體色甌江彩鯉樣本都采自浙江省龍泉市省級(jí)彩鯉良種場(chǎng)，五種體色各取40尾。分別剪取各種魚(yú)的鰭條，95%酒精固定。采用的隨機(jī)引物為10堿基引物，均為上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司產(chǎn)品。SCAR分析中除將PCR擴(kuò)增條件調(diào)整為退火溫度57°C、35個(gè)循環(huán)外，其他條件參數(shù)同RAPD分析。1.基因組DNA的提取基因組DNA提取采用常規(guī)的"酚_氯仿"方法進(jìn)行。提取組織為尾鰭。2.基因組DNA的RAPD分析PCR擴(kuò)增反應(yīng)在EppendorfMastercyclerGradientPCR儀上進(jìn)行，每一樣品的反應(yīng)總體積25iiL，含2.5iiL10X擴(kuò)增緩沖液(含100mmol/LTris-HCl，pH9.5，500mmol/LKCl，30mmol/LMgC12，0.001%明膠，最后調(diào)節(jié)pH值至9.0)。2iiLdNTP混合液(每禾中dNTP的終濃度O.2mmol/L)，正、反向引物各liiL(終濃度O.2iimol/L)，2iiL基因組DNA(約50150ng)，0.5iiLTaqDNA聚合酶(1.25單位)，16yL無(wú)菌重蒸水，加入30yL石臘油。PCR的擴(kuò)增程序?yàn)?4t:預(yù)變性5min，接下來(lái)進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94°C45s，36。C45s，72。C90s;最后一次循環(huán)結(jié)束后在72。C延伸5min。取10iiL擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后照相。3.PCR擴(kuò)增結(jié)果用大量的10堿基RAPD引物，對(duì)五種體色樣品各自的混合液，進(jìn)行RAPD分析。在這些引物中，產(chǎn)生了1個(gè)特異擴(kuò)增帶，約在llOObp處，即S495，一，此條帶對(duì)應(yīng)的基因片段為"粉花"體色所特有。引物S495擴(kuò)增的約llOObp條帶如圖1和2所示。引物S495的堿基序列如下GGGTAACGTG(SEQIDNO:2)。4.特異RAPD帶克隆、測(cè)序及SCAR標(biāo)記的建立利用購(gòu)自上海申能博彩生物科技有限公司的瓊脂糖凝膠回收試劑盒，從2.0%的低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中回收純化RAPD特異片段，純化后的產(chǎn)物用pMD19-T載體連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5a上，PCR法鑒定后在ABI3700測(cè)序儀上測(cè)序。采用上述方法回收S495"°°bp基因片段，并克隆、測(cè)序。S495"°°bp片段測(cè)序結(jié)果見(jiàn)SEQIDNO:1。根據(jù)S49511Q°bp基因片段的序列設(shè)計(jì)一對(duì)長(zhǎng)度分別都為20bp的正向引物和反向引物。引物的序列、退火溫度及擴(kuò)增片段大小見(jiàn)表1。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>用表1所示的引物對(duì)分別在五種體色的甌江彩鯉中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，僅在"粉花"群體中產(chǎn)生了1040bp的擴(kuò)增帶，而其他體色群體中未出現(xiàn)此擴(kuò)增帶，結(jié)果見(jiàn)圖3。因此，llOObp標(biāo)記(S495"°°bp)的高頻率，可良好地作為與甌江彩鯉"粉花"體色群體相連鎖的分子標(biāo)記。實(shí)施例2:歐江彩鯉"粉花"體色的鑒定本實(shí)施例中采用的五種體色甌江彩鯉樣本也都采自浙江省龍泉市省級(jí)彩鯉良種場(chǎng)，五種體色各取50尾。分別剪取各種魚(yú)的鰭條，95%酒精固定。1.基因組DNA的提取基因組DNA提取采用常規(guī)的"酚-氯仿"方法進(jìn)行。提取組織為尾鰭。2.SCAR標(biāo)記的PCR擴(kuò)增選用引物SEQIDN0:3禾PSEQIDNO:4作為PCR擴(kuò)增的引物。PCR擴(kuò)增反應(yīng)在EppendorfMastercyclerGradientPCR儀上進(jìn)行，每一樣品的反應(yīng)總體積25uL，含2.5iiL10X擴(kuò)增緩沖液(含100mmol/LTris-HCl，pH9.5，500mmol/LKCl，30mmo1/LMgC12，0.001%明膠，最后調(diào)節(jié)pH值至9.0)。2yLdNTP混合液(每種dNTP的終濃度0.2mmol/L)，正、反向引物各1iiL(終濃度0.2iimol/L)，2iiL基因組DNA(約50150ng)，0.5iiLTaqDNA聚合酶(1.25單位)，16iiL無(wú)菌重蒸水，加入30iiL石臘油。PCR的擴(kuò)增程序?yàn)?4t:預(yù)變性5min，接下來(lái)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94°C45s，57。C45s，72。C90s;最后一次循環(huán)結(jié)束后在72。C延伸5min。3.SCRA標(biāo)記檢測(cè)取10L擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后于紫外線(xiàn)燈或凝膠成像系統(tǒng)中觀察，"粉花"體色甌江彩鯉則出現(xiàn)一條1040bp的擴(kuò)增帶，沒(méi)有擴(kuò)增條帶為其它體色甌江彩鯉。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其等同物界定。序列表〈110〉上海海洋大學(xué)〈120〉一種與甌江彩鯉粉花體色相連鎖的SCRA標(biāo)記和檢測(cè)方法〈130>TXPI091939〈160>4〈210>1〈211>1041〈212>DNA〈213〉人工序列〈400〉1GGGTMCGTGTAGTTMGGTGGCTGTAGTTMCACATGMTCCTCATGATTCCAGGCGTA60GCTMGGTTAGTCCATCATTMTTCCTTATTGGTCCATTAATTAGTTCATGATTMTAM120CTATTMTTCAGATATTAGTACATCATTMTCATGTACCCTTATTGTAMGTGTTACCGA180MCATTTTGCCTTTTTTATTACCCATAGTTTATGTACTTAMGTGTMCAMTATGTTTT240TGCCACTGCAATGCTCTGATGCCCTTCTCATCCATGTCCATACAMTGACATTGTGTCTC300GCTCATGGGTGATATTTCMACTAGTTTAGCTACGATGATMTTAMGGTGCTGTMGCG360ATATTTGTTTGGATCACCACACATGCGTCCCMCTACCTGACAGATATCACAGAGATGGG420TGCCATGAGAMTCACACCTGTCTCTGAMCTGCCCTAGGCCTGTAMCAGCAGMCAGA■GTCAGGGGAGCAGCACACACATTTTTMTCMGMTGTCTGMGTCMTGGGTTTTTTTG540MTGGGTTTTTGGTTAMTGTCTGAMTMGGTCTGTGGTAMCACMGCTCAMMTAC600TTTAMGGTTTATTATACMCATMMMCATCAGTMTACCCCACTMTGATTTTTTM660GCTTTTATGTGACTTTMMACACAGCATTGTGCGTCCATGGGCGTGCTAGTCTAMCM720GACGTGTATTCAGGCGCATTGTTGGCGCGTTGCTATTTTGAGGMCTGMMTAGACTGC780ACCATAGACCMCTCAMCCTGGTCTAMGTCTGGTACMTATTTTTTCTTTGTTATTTA840MGAGCACTTTATGCGCCTATAGGTGGGTGCACMCGTGTGTACACTTTTACTTATTACA■CACGCAGGCAGCAGCACACAMTATTATTAAMTGAGAMTTACATTGCGCCATGTAMT960AGCAMCCCGCCATGTGCGAGCACATTGGCTTTT嵐GGGGATGGGAGATTAGACTCTGA1020TTGGTTTATTGCAOGTTACCC1041〈210>2〈211>10〈212>DNA〈213〉人工序列〈400>2GGGTAACGTG〈210>3〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈400>3GGGTAACGTGTAGTTAAGGT〈210>4〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈400>4GGGTAACGTGCAATAAACCA說(shuō)明書(shū)7/7頁(yè)102020權(quán)利要求一種與甌江彩鯉粉花體色相連鎖的DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子具有SEQIDNO1中所示的核苷酸序列。2.—種用于檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的引物，其特征在于，所述引物的長(zhǎng)度為20個(gè)核苷酸，并且所述的引物可擴(kuò)增出具有SEQIDN0:1中所示的核苷酸序列的DNA分子。3.如權(quán)利要求2所述的引物，其特征在于，所述的引物選自具有SEQIDNO:2或SEQIDNO:3與SEQIDNO:4所示核苷酸序列的引物。4.一種檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的方法，其特征在于，所述方法包括從待測(cè)魚(yú)群隨機(jī)選取10-100尾魚(yú)，檢測(cè)它們的基因組DNA中是否存在具有SEQIDNO:1中所示核苷酸序列的DNA分子，若存在則是甌江彩鯉粉花群體。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，從待測(cè)魚(yú)群隨機(jī)選取20-50尾魚(yú)。6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，從待測(cè)魚(yú)群隨機(jī)選取50-100尾魚(yú)。7.如權(quán)利要求4-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求3所述的引物檢測(cè)待測(cè)魚(yú)的基因組DNA。全文摘要本發(fā)明屬于遺傳育種學(xué)和水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種與甌江彩鯉粉花體色相連鎖的DNA分子、引物及一種檢測(cè)甌江彩鯉粉花體色的方法。采用本發(fā)明方法，利用本發(fā)明引物，可知是否具有此分子標(biāo)記，并可快速、大批量地早期檢測(cè)待測(cè)魚(yú)，從待測(cè)魚(yú)中快速準(zhǔn)確地鑒定出甌江彩鯉粉花體色群體，所需樣品量少，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高，并且具有良好的再現(xiàn)性、結(jié)果穩(wěn)定可靠。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101693922SQ20091019743公開(kāi)日2010年4月14日申請(qǐng)日期2009年10月20日優(yōu)先權(quán)日2009年10月20日發(fā)明者劉豪,呂耀平,王成輝申請(qǐng)人:上海海洋大學(xué);