專利名稱：他莫昔芬用藥靶向位點(diǎn)檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種檢測(cè)他莫昔芬用 藥靶向位點(diǎn)檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
他莫昔芬(Tamoxifen，ΤΑΜ)是一種非留體抗雌激素藥物，在臨床已廣泛應(yīng)用于乳 腺癌的預(yù)防和治療。其結(jié)構(gòu)與雌激素相似，在靶器官內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)雌激素受體(ER)，減少細(xì)胞質(zhì) 內(nèi)ER的含量，阻止核內(nèi)雌激素生成、基因轉(zhuǎn)錄和ER再合成。在組織培養(yǎng)中可見ER陽性細(xì) 胞的生長(zhǎng)可直接被TAM所抑制。TAM還通過作用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的MAPK通路、阻斷蛋白激 酶C介導(dǎo)的ERK激活、激活TGF-β (轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子來抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。CYP2D6基因參與約25%臨床常用藥物的代謝，包括β受體阻滯劑、抗抑郁藥物、 抗精神病藥物及化療藥物等。由于CYP2D6基因存在遺傳多態(tài)性導(dǎo)致個(gè)體之間CYP2D6酶活 性有差異，出現(xiàn)藥物代謝能力的多態(tài)性，導(dǎo)致病人用藥時(shí)很難獲得最佳血藥濃度，如血藥濃 度過低無法有效發(fā)揮藥物療效或濃度過高出現(xiàn)毒副作用。他莫西芬作為無活性的前藥，在 體內(nèi)主要由CYP2D6催化形成有活性的化學(xué)成分Endoxifen，發(fā)揮藥物療效，因此CYP2D6基 因多態(tài)性導(dǎo)致的酶活性改變將直接影響他莫西芬用藥效果。所以CYP2D6基因的分型檢測(cè) 對(duì)于臨床他莫西芬用藥指導(dǎo)有重要意義。CYP2D6基因呈現(xiàn)高度多態(tài)性，目前已知有63種主要的等位基因，導(dǎo)致酶活性增 加、降低或缺失。CYP2D6等位基因活性的改變是由于基因突變?cè)斐杀磉_(dá)產(chǎn)物酶分子的改變， 從而產(chǎn)生代謝缺陷?；蛲蛔兊闹饕绞绞菈A基缺失或替換引起讀碼框架移位，或者大片 段基因的丟失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種檢測(cè)他莫昔芬用藥靶向位點(diǎn)的試劑盒。該試劑盒包括檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針 對(duì)、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反應(yīng)緩沖液、去離子水。本試劑盒中所述的特異性熒光探針對(duì)是能夠輕易完成設(shè)計(jì)的，特異性熒光探針對(duì) 可用常規(guī)的探針合成技術(shù)進(jìn)行合成。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn) 方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。實(shí)施例檢測(cè)試劑盒的使用步驟1:DNA模板的抽取用硅膠吸附法抽提口腔上皮細(xì)胞的基因組DNA。步驟2 熒光定量PCR反應(yīng)
使用檢測(cè)試劑盒中的熒光定量PCR套裝，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)的體系為總 體積10 μ 1，包含濃度為20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mMMgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有義引物和反義引物各0. 225 μ 1、10 μ M的帶VIC熒光探針和帶FAM熒光探針 各0. 25μ 1，去離子水5. 325 μ 1。在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為50°C、2分鐘，95°C、10分鐘，進(jìn)行60個(gè)循環(huán) 的95°C、30秒，60°C、1分鐘。反應(yīng)結(jié)束后在熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟3:基因型分析根據(jù)試劑盒使用說明書標(biāo)示的基因分型圖示對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因型分析。熟悉熒光定量PCR技術(shù)的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過辨識(shí)熒光定量PCR儀上顯示 的最終樣品熒光量，根據(jù)不同序列探針熒光信號(hào)的強(qiáng)弱即可確定所檢測(cè)的SNP位點(diǎn)的基因 型。
權(quán)利要求
1. 一種檢測(cè)他莫昔芬用藥靶向位點(diǎn)檢測(cè)試劑盒，包括特異性引物對(duì)及特異性熒光探針 對(duì)、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、去離子水，其特征在于所 述的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針對(duì)是針對(duì)CYP2D6基因多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計(jì)的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測(cè)他莫昔芬用藥靶向位點(diǎn)檢測(cè)試劑盒。該試劑盒包括檢測(cè)他莫昔芬用藥靶向位點(diǎn)CYP2D6基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針對(duì)、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反應(yīng)緩沖液、去離子水。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102108386SQ200910200490
公開日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2009年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者馮哲民, 賀憲民, 鄒祖燁 申請(qǐng)人:上海主健生物工程有限公司