專利名稱：一種抗病復(fù)合微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物有機(jī)肥領(lǐng)域，具體地涉及一種具有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)及抑制病害
的抗病復(fù)合微生物菌劑及含此菌劑的生物有機(jī)肥。
背景技術(shù)：
中國(guó)微生物肥料研究起源于20世紀(jì)30年代，中國(guó)著名的土壤微生物學(xué)家張憲武 教授在1937年發(fā)表了第一篇《大豆根瘤菌研究與應(yīng)用》的文章，50年代初，張憲武教授又帶 領(lǐng)中國(guó)科學(xué)院林業(yè)土壤研究所的科研人員，在東北地區(qū)150萬(wàn)hm2的土地上推廣大豆根瘤 菌接種劑的技術(shù)，使得農(nóng)作物平均增產(chǎn)10%以上。60年代推廣使用放線菌制成的"5406"抗 生菌肥料和固氮藍(lán)綠藻肥。70 80年代中期，開(kāi)始研究VA菌根，以改善植物磷素營(yíng)養(yǎng)條件 和提高水分利用率。80年代中期 90年代，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中又相繼應(yīng)用聯(lián)合固氮菌和生物鉀肥 作為拌種劑。在總結(jié)中國(guó)微生物肥料幾十年的研究、生產(chǎn)和應(yīng)用歷史經(jīng)驗(yàn)后，微生物肥料研 制單位相繼推出聯(lián)合固氮菌肥、硅酸鹽菌劑、光合細(xì)菌菌劑、PGPR制劑和有機(jī)物料(秸稈) 腐熟劑等適應(yīng)農(nóng)業(yè)發(fā)展需求的新品種。進(jìn)入21世紀(jì)后，國(guó)內(nèi)外出現(xiàn)了基因工程菌肥、作基 肥和追肥用的有機(jī)無(wú)機(jī)復(fù)合菌肥、生物有機(jī)肥、非草炭載體高密度的菌粉型微生物接種劑 肥料以及其它多種功能類型和名稱的微生物肥料。隨著研究的深入和應(yīng)用的不斷擴(kuò)大，微 生物肥料已形成由豆科作物接種劑向非豆科作物肥料轉(zhuǎn)化；由單一接種劑向復(fù)合生物肥轉(zhuǎn) 化；由單一菌種向復(fù)合菌種轉(zhuǎn)化；由單一功能向多功能轉(zhuǎn)化；由用無(wú)芽胞菌種生產(chǎn)向有芽 胞菌種生產(chǎn)轉(zhuǎn)化等趨勢(shì)。根據(jù)我國(guó)生產(chǎn)"綠色食品"的要求，控制化肥農(nóng)藥的施用量勢(shì)在必 行，微生物肥有活化土壤養(yǎng)分，促進(jìn)根系吸收水分、剌激植物生長(zhǎng)，有些還能抑制有害微生 物的存活，表現(xiàn)出減輕一些病(蟲(chóng))害的作用。因此，研究具有抗病功能的微生物肥料十分 必要。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種具有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)及抑制病害的 抗病復(fù)合微生物菌劑及用此菌劑生產(chǎn)的生物有機(jī)肥。 本發(fā)明中，由如下七種菌組成巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)、枯草 芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)、地衣芽孢桿菌 (licheniformis)、假單抱桿菌(pseudomonas)、酉良酒酵母(Saccharomycescerevisiace) 菌、植物乳酸桿菌(lactobcillus planta進(jìn))。 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種抗病復(fù)合微生物菌劑，其特
征在于按載體的重量份配比組成如下 含巨大芽孢桿菌載體 0.S 1.2份、 含枯草芽孢桿菌載體 1. 0 2. 0份、 含蠟狀芽孢桿菌載體 0. 2 0. 6份、 含地衣芽孢桿菌載體 0. 2 0. 6份、
含假單孢桿菌載體 0. 1 0. 5份、 含釀酒酵母菌株載體 0. 2 0. 6份、
含植物乳酸桿菌載體 0. 1 0.5份、 載體組成為，麩皮和米糠按重量比為i : i i : 2。 上述抗病復(fù)合微生物菌劑制備方法如下
l)載體制備 將麩皮和米糠按重量比i : i i : 2混合均勻，作為吸附載體； 2)含微生物菌株的載體制備 ①含巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)載體按微生物領(lǐng)域常規(guī)操作進(jìn)行活 化，經(jīng)一級(jí)放大，二級(jí)放大和搖床放大，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸 附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2. 5億/克，具備混合條件； 采用的培養(yǎng)基為在常規(guī)PDA培養(yǎng)基中添加PGY蛋白胨0. 5克，牛肉膏0. 5克，酵 母膏0. 5克，吐溫80 0. 5克，調(diào)節(jié)P朋.8 7. 0 ; ②含枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌 數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合 條件； ③含蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù) 為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條 件； ④含地衣芽孢桿菌(licheniformis)載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為 2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件；
⑤含假單孢桿菌(pseudomonas)載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件；
⑥含釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiace)載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效 活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2. 5億/克，具 備混合條件； ⑦含植物乳酸桿菌(lactobcillus plantarum)載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效 活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2億/克，具備 混合條件。
3)混合 將第二步驟制備的含微生物菌株的載體，按上述重量份配比，取料，混合均勻；在 無(wú)菌條件下，進(jìn)行自然固態(tài)堆積發(fā)酵，保持溫度35 38°C，持續(xù)24 36小時(shí)；然后進(jìn)行 低溫干燥，干燥溫度不高于55t:，至含水量《20%，有效活菌總數(shù)> 20億/克，雜菌率 《10%，即得抗病復(fù)合微生物菌劑，常溫常壓真空包裝。 采用如上所述的抗病復(fù)合微生物菌劑，可以制成具有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)及抑制病害 的生物有機(jī)肥，生物有機(jī)肥包括如上所述的抗病復(fù)合微生物菌劑、有機(jī)物料、玉米面和禽 畜糞便；其配比為每立方米的禽畜糞便添加80 100kg的有機(jī)物料、1 2kg的玉米面和 0. 8 1. 5kg的抗病復(fù)合微生物菌劑； 其中所述的有機(jī)物料是稻殼、鋸末或秸稈的一種或幾種的混合。優(yōu)選秸稈。
4
上述具有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)及抑制病害的生物有機(jī)肥的制備方法，包括如下步驟
按所述的配比，取禽畜糞便、秸稈和玉米面，混合均勻，通過(guò)調(diào)節(jié)原料的配比，至混 合物的C/N比在20 25 : 1之間，通過(guò)添加或不添加泥灰，至混合物的水分在65 70% 之間，將上述混合好的物料送入GALLUS發(fā)酵倉(cāng)，加壓混煉，除臭殺菌；出倉(cāng)后，將抗病復(fù)合 微生物菌劑接種于混合物中，混合均勻后，經(jīng)堆置發(fā)酵和攤開(kāi)晾干，當(dāng)水分降至25 35% 時(shí)，將發(fā)酵產(chǎn)物造粒，干燥，制成具有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)及抑制病害的生物有機(jī)肥。當(dāng)物料含 水量降低至20%以下時(shí)，包裝。 上述的生物有機(jī)肥，還可以添加輔料，輔料為麩皮、魚(yú)粉、骨粉、草炭、膨潤(rùn)土或頁(yè)
巖的一種或幾種的混合。 本發(fā)明的有益效果是 1.本發(fā)明的含有抗病復(fù)合微生物菌劑的生物有機(jī)肥，產(chǎn)生的抗生素對(duì)多種真菌性 病害、細(xì)菌性病害具有防治作用，對(duì)病毒性病害有抑制作用，如常見(jiàn)的立枯病、黃萎病、黑斑 病、霜腐病、根腐病、晚疫病和病毒性花葉病等。防治效果達(dá)到80%以上，抑制減少病原菌的 發(fā)生和繁衍。對(duì)作物安全，提高作物抗病性，是生產(chǎn)無(wú)公害、綠色食品有效的生物有機(jī)肥料。
2.利用抗病復(fù)合微生物菌劑生產(chǎn)的生物有機(jī)肥，抗病效果比市場(chǎng)上同類產(chǎn)品高 10 15%。 3.本發(fā)明耐受惡劣條件能力強(qiáng)，繁殖速度快，產(chǎn)品易于保存，自然環(huán)境下，產(chǎn)品保 存兩年后，菌體存活率為75%，菌體中的芽孢桿菌率所占的比例達(dá)到總數(shù)的90%以上。
4.生產(chǎn)成本低，工藝穩(wěn)定。價(jià)格便宜，農(nóng)民可以用得起；工藝條件成熟，產(chǎn)品種類 多，成熟度高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 :抗病復(fù)合微生物菌劑
(一)按載體的重量份配比組成如下
含巨大芽孢桿菌載體l份、含枯草芽孢桿菌載體1. 45份、含蠟狀芽孢桿菌載體0. 4份、含地衣芽孢桿菌載體0. 4份、含假單孢桿菌載體0. 3份、含釀酒酵母菌載體0. 4份、含植物乳酸桿菌載體0. 3份；載體組成為，麩皮和米糠按重量比為i : i。
(二)抗病復(fù)合微生物菌劑的制備方法
1、載體制備將麩皮和米糠按重量比1:l混合均勻，作為吸附載體；2、含微生物菌株的載體制備
①含巨大芽孢桿菌載體:按微生物領(lǐng)域常規(guī)操作進(jìn)行活化，經(jīng)一級(jí)放大，二級(jí)放大
和搖床放大，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù) 超過(guò)2. 5億/克，具備混合條件；
采用的培養(yǎng)基為在常規(guī)PDA培養(yǎng)基中添加PGY蛋白胨0. 5克，牛肉膏0. 5克，酵 母膏0. 5克，吐溫80 0. 5克，調(diào)節(jié)P朋.8 7. 0 ; ②含枯草芽孢桿菌載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)
時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件； ③含蠟狀芽孢桿菌載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)
時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件； ④含地衣芽孢桿菌載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)
時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件； ⑤含假單孢桿菌載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)
時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件； ⑥含釀酒酵母菌載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)
時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2. 5億/克，具備混合條件 ⑦含植物乳酸桿菌載體培養(yǎng)基和步驟同①，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)
時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2億/克，具備混合條件。 3、混合 將第二步驟制備的含微生物菌株的載體，按載體重量份配比，取料，混合均勻；在
無(wú)菌條件下，進(jìn)行自然固態(tài)堆積發(fā)酵，保持溫度35 3『C，持續(xù)24 36小時(shí)；然后進(jìn)行低 溫干燥，干燥溫度不高于55°C ，當(dāng)含水量《20% ，有效活菌總數(shù)^ 20億/克，雜菌率《10% 時(shí)，常溫常壓下真空包裝，制成抗病復(fù)合微生物菌劑。實(shí)施例2 :抗病復(fù)合微生物菌劑
(一)按載體的重量份配比組成如下:
含巨大芽孢桿菌載體0. 8份、含枯草芽孢桿菌載體l.O份、含蠟狀芽孢桿菌載體0. 2份、含地衣芽孢桿菌載體0. 2份、含假單孢桿菌載體0. 1份、含釀酒酵母菌載體0. 2份、含植物乳酸桿菌載體0. 1份、載體組成為，麩皮和米糠按重量比為1
(二)制備方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例3抗病復(fù)合微生物菌劑
(一)按載體的重量份配比組成如下:
含巨大芽孢桿菌載體1.2份、含枯草芽孢桿菌載體2. 0份、含蠟狀芽孢桿菌載體0. 6份、含地衣芽孢桿菌載體0. 6份、含假單孢桿菌載體0. 5份、含釀酒酵母菌載體0. 6份、含植物乳酸桿菌載體0. 5份、
載體組成為，麩皮和米糠按重量比為1 : 2。
( 二 )制備方法同實(shí)施例1 。 實(shí)施例4 一種含有抗病復(fù)合微生物菌劑的生物有機(jī)肥
( — )生物有機(jī)肥的配比 每立方米雞糞添加90kg秸稈、1. 5kg玉米面和1. Okg實(shí)施例1制備的抗病復(fù)合微 生物菌劑。
( 二 )制備方法如下 按配比，將雞糞、秸稈和玉米面，混合均勻，測(cè)得C/N比為25 : l，水分為75. 3%， 添加泥灰，至測(cè)得混合物的水分在65 70%之間。將上述混合好的物料送入GALLUS發(fā)酵 倉(cāng)，加壓混煉，除臭殺菌。出倉(cāng)后，將1. Okg抗病復(fù)合微生物接種于混合物中，物料混合均勻 后，堆置發(fā)酵，堆置成高0.7m、寬2.2m的長(zhǎng)條形料堆。上插溫度計(jì)，用草苫覆蓋。24小時(shí)后 翻堆1次，之后每天翻1次，每天測(cè)定溫度1次，翻拌后溫度升高微弱或不再升高，標(biāo)志著易 分解的碳水化合物和氮化物的初級(jí)分解已基本結(jié)束。發(fā)酵5天后，將料堆攤開(kāi)晾干，當(dāng)水分 降至30 %時(shí)，將發(fā)酵產(chǎn)物造粒，干燥，當(dāng)物料含水量降低至20 %以下時(shí)，包裝，制成含有抗 病復(fù)合微生物菌劑的生物有機(jī)肥。 實(shí)施例5含有抗病復(fù)合微生物菌劑的生物有機(jī)肥
向?qū)嵤├?制得的生物有機(jī)肥中添加輔料。 ①每公斤生物有機(jī)肥中添加0.05kg魚(yú)粉，制成進(jìn)一步含有魚(yú)粉的生物有機(jī)肥。
②每公斤生物有機(jī)肥中添加0. 05kg骨粉和0. 5kg草炭，制成進(jìn)一步含有骨粉和草 炭的生物有機(jī)肥。 ③每公斤生物有機(jī)肥中添加0. 04kg魚(yú)粉、0. 2kg草炭和0. 2kg膨潤(rùn)土，制成進(jìn)一步 含有魚(yú)粉、草炭和膨潤(rùn)土的生物有機(jī)肥。 ④每公斤生物有機(jī)肥中添加0. 6kg頁(yè)巖，制成進(jìn)一步含有頁(yè)巖的生物有機(jī)肥。
權(quán)利要求
一種抗病復(fù)合微生物菌劑，其特征在于按載體的重量份配比組成如下含巨大芽孢桿菌載體0.8～1.2份、含枯草芽孢桿菌載體1.0～2.0份、含蠟狀芽孢桿菌載體0.2～0.6份、含地衣芽孢桿菌載體0.2～0.6份、含假單孢桿菌載體 0.1～0.5份、含釀酒酵母菌載體 0.2～0.6份、含植物乳酸桿菌載體0.1～0.5份、載體組成為，麩皮和米糠按重量比為1∶1～1∶2。
2. —種權(quán)利要求1所述的抗病復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于制備方法如下1)載體制備 將麩皮和米糠按重量比11 12混合均勻，作為吸附載體；2) 含微生物菌株的載體制備分別將巨大芽孢桿菌和釀酒酵母菌活化，經(jīng)一級(jí)放大，二級(jí)放大和搖床放大，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，分別進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2. 5億/克， 具備混合條件；分別將枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和假單孢桿菌活化，經(jīng)一級(jí)放大， 二級(jí)放大和搖床放大，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億/ml個(gè)數(shù)時(shí)，分別進(jìn)行載體吸附，至載體 上有效活菌數(shù)超過(guò)3億/克，具備混合條件；將植物乳酸桿菌活化，經(jīng)一級(jí)放大，二級(jí)放大和搖床放大，當(dāng)有效活菌數(shù)為2. 5 5億 /ml個(gè)數(shù)時(shí)，進(jìn)行載體吸附，至載體上有效活菌數(shù)超過(guò)2億/克，具備混合條件；3) 混合將第二步驟制備的含微生物菌株的載體，按權(quán)利要求1所述的重量份配比，取料，混合 均勻；在無(wú)菌條件下，進(jìn)行自然固態(tài)堆積發(fā)酵，保持溫度35 38t:，持續(xù)24 36小時(shí)；然 后進(jìn)行低溫干燥，干燥溫度不高于55°C ，至含水量《20% ，有效活菌總數(shù)^ 20億/克，雜菌 率《10%。
3. —種含有權(quán)利要求1或2所述的抗病復(fù)合微生物菌劑的生物有機(jī)肥，其特征在于包 括抗病復(fù)合微生物菌劑、有機(jī)物料、玉米面和禽畜糞便；其配比為每立方米的禽畜糞便添加 80 100kg的有機(jī)物料、1 2kg的玉米面和0. 8 1. 5kg的抗病復(fù)合微生物菌劑；其中所述的有機(jī)物料是稻殼、鋸末或秸稈的一種或幾種的混合。
4. 按照權(quán)利要求3所述的生物有機(jī)肥，其特征在于包括輔料，輔料為麩皮、魚(yú)粉、骨粉、 草炭、膨潤(rùn)土或頁(yè)巖的一種或幾種的混合。
5. —種權(quán)利要求3所述的生物有機(jī)肥的制備方法，其特征在于包括如下步驟 按權(quán)利要求3所述的配比，取禽畜糞便、秸稈和玉米面，混合均勻，通過(guò)調(diào)節(jié)原料的配比，至混合物的C/N比在20 25 : 1之間，通過(guò)添加或不添加泥灰，至混合物的水分在 65 70%之間，將上述混合好的物料送入GALLUS發(fā)酵倉(cāng)，加壓混煉，除臭殺菌；出倉(cāng)后， 將抗病復(fù)合微生物菌劑接種于混合物中，混合均勻后，經(jīng)堆置發(fā)酵和攤開(kāi)晾干，當(dāng)水分降至 25 35%時(shí)，將發(fā)酵產(chǎn)物造粒，干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗病復(fù)合微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。采用的技術(shù)方案是抗病復(fù)合微生物菌劑含有巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、假單孢菌、釀酒酵母菌和植物乳酸桿菌等七種菌株。采用此抗病復(fù)合微生物菌劑制備的生物有機(jī)肥具有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)及抑制病害的作用。本發(fā)明對(duì)多種真菌性病害、細(xì)菌性病害具有防治作用，對(duì)病毒性病害有抑制作用，防治效果達(dá)到80％以上?？共⌒Ч岣?0～15％。本發(fā)明生產(chǎn)成本低，工藝穩(wěn)定。
文檔編號(hào)C12N1/18GK101724558SQ20091022054
公開(kāi)日2010年6月9日 申請(qǐng)日期2009年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月8日
發(fā)明者王秀蘭, 肖千明 申請(qǐng)人:營(yíng)口恒新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司