專利名稱：：一種簡單易行的菌體濃縮方法
技術領域：
：—種簡單易行的菌體濃縮方法，涉及濃縮方法，屬于應用微生物
技術領域：
。種工農(nóng)業(yè)或養(yǎng)殖業(yè)應用的微生物制劑菌體
背景技術：
：隨著微生物在各行各業(yè)應用的普及和逐年來的不斷升溫，人們對于有益微生物在實際中的應用研究不止集中在篩選或構建優(yōu)良菌種，同時還包括對發(fā)酵所得的菌體進行不同程度的濃縮，從而降低運輸貯藏和使用成本，提高單位濃度有效微生物的作用效果。對于大多數(shù)微生物發(fā)酵液來說，由于發(fā)酵液中菌體細小、組分復雜，因此絮凝濃縮負荷大，采用一般的絮凝劑絮凝發(fā)酵液效果不是很好。1970年，Gasner和Wang[GasnerLL，WangDIC.MicrobialCellRecoveryCnhancementthroughFlocculation.BiotechnolBioeng，1970,12(6):873.]對復雜組分發(fā)酵液的絮凝研究表明，用做絮凝劑的聚電解質(zhì)，其電荷密度越高，分子量越大，絮凝能力越強。1990年，J.Hughes[HughesJ，RamsdenDK，Symcsk.TheFlocculationofBacteriaUsingCationicSyntheticFlocculantsandChitosan.BiotechnolTech，1990,4(1):55.]報道了用有高電荷密度的殼聚糖以及分子量為12千萬的陽離子聚丙烯酰胺對細菌發(fā)酵液的絮凝，除菌率可達到90%以上。雖然高電荷密度和高分子量的聚電解質(zhì)絮凝劑對細菌發(fā)酵液的絮凝有較好的效果，但是目前此類絮凝劑的制造成本較高，國產(chǎn)的聚電解質(zhì)類絮凝劑分子量一般較低，無法在成本允許范圍內(nèi)達到良好的絮凝濃縮效果。以污染水體水質(zhì)凈化用微生物制劑為例，人們不可能接受過高的成本，但考慮到實際應用，濃縮菌液的需求又有著廣大的市場。因此開發(fā)一種簡單易行且低成本無毒害的菌體濃縮方法是必要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于開發(fā)一種簡單易行且無毒副作用的菌體濃縮方法，研究了陽離子聚丙烯酰胺、羧甲基纖維素鈉和檸檬酸三銨在菌體絮凝濃縮中的聯(lián)合作用，利用幾種對微生物菌體具有絮凝作用的生物化學成分，經(jīng)過合理組配，制備成絮凝劑，對于幾種微生物發(fā)酵液均具有較好的絮凝濃縮作用。本發(fā)明的技術方案一種菌體濃縮的方法，將以下物質(zhì)作為絮凝物質(zhì)羧甲基纖維素鈉為第一種絮凝物質(zhì)，陽離子聚丙烯酰胺為第二種絮凝物質(zhì)、及擰檬酸三銨為第三種絮凝物質(zhì)；用到的絮凝物質(zhì)為單種，或是以下復配絮凝物質(zhì)中的一種A、羧甲基纖維素鈉與檸檬酸三銨的質(zhì)量配比為1.52.5:0.51.5;B、羧甲基纖維素鈉與陽離子聚丙烯酰胺的質(zhì)量配比為0.51.5:1.52.5;C、羧甲基纖維素鈉、陽離子聚丙烯酰胺和檸檬酸三銨的質(zhì)量配比為0.51.5:1.52.5:0.51.5;濃縮方法為(1)以單種絮凝物質(zhì)進行菌體濃縮3將質(zhì)量體積比為0.1%1%的上述第一種絮凝物質(zhì)加入到100500mL的微生物發(fā)酵液中，20-25。C下100300rpm攪拌520分鐘，再加入質(zhì)量體積比為0.1%1%的第二種絮凝物質(zhì)，20-25t:下100300rpm攪拌520分鐘，再加或不加第三種絮凝物質(zhì)，加質(zhì)量體積比為0.1%1%的第三種絮凝物質(zhì)時同樣在20-25°CT100300rpm攪拌520分鐘，自然靜置1024小時待其自然沉淀至不再有沉淀時將上清吸去，收取沉淀即得濃縮的微生物菌體；或(2)以A或B或C中的一種復配絮凝物質(zhì)進行菌體濃縮將質(zhì)量體積比為0.2%2%的上述復配絮凝物質(zhì)之一加入到100500mL的微生物發(fā)酵液中，20-25。C下100300rpm攪拌530分鐘，自然靜置1024小時待其自然沉淀至不再有沉淀時將上清吸去，收取沉淀即得濃縮的微生物菌體。陽離子聚丙烯酰胺、羧甲基纖維素鈉和檸檬酸三銨均采用市售產(chǎn)品。(1)觀察絮凝濃縮效果取100-500mL發(fā)酵液于三角瓶中，調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值至4-5，然后加入定量絮凝物質(zhì)。反應5-60分鐘，靜置，觀察絮凝濃縮效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，在600nm波長下測量吸光度；以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，在600nm波長下測量吸光度；以發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度；以OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標。絮凝后沉淀中菌體同樣保持活性，濃縮達到10倍以上。(2)待濃縮發(fā)酵液制備a)搖床培養(yǎng)將斜面保存的幾個菌種接入250mL或500mL三角瓶中，培養(yǎng)基量為三角瓶容量的1/3，接種量以標準接種環(huán)挑滿為準；搖床培養(yǎng)14-18h，控制培養(yǎng)溫度28-32°C，pH7.0-7.5，轉(zhuǎn)速150-220rpm;b)種子發(fā)酵接種量6-20mL/L，從搖床培養(yǎng)的三角瓶中接種進50-200L種子發(fā)酵罐，通用培養(yǎng)基，控制發(fā)酵溫度28-32°C，pH7.0-7.5，種子發(fā)酵罐攪拌轉(zhuǎn)速150-220rpm，發(fā)酵時間24-32小時；發(fā)酵產(chǎn)物直接制備成制劑或作為種子進一步進行發(fā)酵罐發(fā)酵；(3)待濃縮發(fā)酵液為100-500毫升，所加絮凝劑以克計算。實驗結果顯示絮凝濃縮效果良好的維持時間長達24小時。本發(fā)明中各組分的作用原理如下1、羧甲基纖維素鈉是天然纖維素經(jīng)化學改性后得到的纖維素衍生物，無臭、無味、無毒，是重要的水溶性聚合物之一。具有增稠、分散、懸浮、粘合、成膜、保護膠體和保護水分等優(yōu)良性能，廣泛應用于食品、醫(yī)藥、牙膏等行業(yè)。它能夠吸水膨脹，在水中溶脹時，可以形成透明的粘稠膠液，在酸堿度方面表現(xiàn)為中性，在絮凝表面帶負電荷的微生物菌體方面具有良好效果。2、陽離子聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺簡稱PAM，由丙烯酰胺單體聚合而成，是一種水溶性線型高分子物質(zhì)。PAM的平均分子量從數(shù)千到數(shù)千萬以上，在水中可大部分電離，屬于高分子電解質(zhì)。在溶液中主要依靠以下幾個作用進行絮凝1)絮凝性PAM使懸浮物質(zhì)通過電中和，架橋吸附作用，起絮凝作用。2)粘合性能通過機械的、物理的、化學的作用，起粘合作用。3)增稠性PAM在中性和酸條件下均有增稠作用，當pH值在10以上PAM易水解。呈半網(wǎng)狀結構時，增稠將更明顯。陽離子聚丙烯酰胺在酸性或堿性介質(zhì)中均呈現(xiàn)陽電性，它通常會比陰離子或非離子型聚丙烯酰胺分子量低，其澄潔污水的性能主要是通過電荷中和作用而獲得。這類絮凝劑的功能主要是絮凝帶負的電荷，具有除濁、脫色功能。尤其在廢水處理中，陽離子聚丙烯酰胺要比用陰離子聚丙烯酰胺，非離子聚丙烯酰胺或無機鹽效果要高數(shù)倍或數(shù)十倍，因為這類廢水普遍帶有負電荷。微生物菌體表面通常帶負電荷，故使用陽離子聚丙烯酰胺效果較好。據(jù)研究，大多數(shù)細菌等電點的pH值為25(革蘭氏陽性菌為23，革蘭氏陰性菌為45)，而水中細菌細胞表面電荷的性質(zhì)受pH值控制，即水的pH值低于細菌等電點時，細菌細胞表面帶正電荷，反之則帶負電荷。一般，細菌的培養(yǎng)、染色、試驗過程均在偏堿性(77.5)、中性、偏酸性(67)條件下，都高于細菌的等電點，故均帶有負電荷。3、檸檬酸三銨通過電荷作用具有對微生物菌體的絮凝作用。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明所用試劑均為無毒副作用的化學物質(zhì)，絮凝得到的菌體不僅保持原有活性，應用到水體水質(zhì)改良和其他領域均不會產(chǎn)生任何危害，是環(huán)境友好產(chǎn)品。將懸浮的微生物沉淀后，僅需吸出上清達到濃縮的效果，其安全性好，成本低廉。整個工藝流程簡便，效率高。具體實施例方式實施例中所述的發(fā)酵液涉及的菌株均已公開，詳見[吳偉，周國勤，杜宣.復合微生態(tài)制劑對池塘水體氮循環(huán)細菌動態(tài)變化的影響.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報，2005，24(4):790-794.]實施例1:以培養(yǎng)好的施氏假單胞菌(Pseudomonasstutzeri)發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以復配絮凝物質(zhì)A進行菌體濃縮實驗，絮凝劑加入比例為0.2%2X，pH調(diào)節(jié)為45，100300rpm攪拌時間10-30分鐘，之后自然沉淀10-24小時，觀察絮凝沉淀效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，在600nm波長下測量吸光度；以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，在600nm波長下測量吸光度；以發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度；以OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表l。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表1數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)A對施氏假單胞菌體發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液OD值和發(fā)酵液OD值比值計算得出濃縮比例分別為12.8、15.3和8.8倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為11倍。可以認定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件溫度營養(yǎng)合適即可繁殖。表1絮凝物質(zhì)A對施氏假單胞菌發(fā)酵液的濃縮效果5<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>對照a:以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照。對照b:發(fā)酵液原液計數(shù)工對移去絮凝體的上清液進行細菌計數(shù)。計數(shù)2:對絮凝體中的細菌進行計數(shù)。以下的表同此說明。實施例2:以培養(yǎng)好的施氏假單胞菌株發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以復配絮凝物質(zhì)B進行菌體濃縮實驗，絮凝劑加入比例為0.2%2X，pH調(diào)節(jié)為45，100300rpm攪拌時間10-30分鐘，之后自然沉淀10-24小時，觀察絮凝沉淀效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度，以發(fā)酵液OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表2。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表2數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)B對施氏假單胞菌體發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液OD值和發(fā)酵液OD值比值計算得出的濃縮比例分別為10、16和13倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為13倍?？梢哉J定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件溫度營養(yǎng)合適即可繁殖。表2絮凝物質(zhì)B對施氏假單胞菌發(fā)酵液的濃縮效果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例3:以培養(yǎng)好的施氏假單胞菌株發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以單種絮凝物質(zhì)進行菌體濃縮將質(zhì)量體積比為0.1%1%的上述第一種絮凝物質(zhì)加入到100500mL的微生物發(fā)酵液中，20-25。C下100300rpm攪拌520分鐘，再加入質(zhì)量體積比為0.1%1%的第二種絮凝物質(zhì)，20-25。C下100300rpm攪拌520分鐘，再加質(zhì)量體積比為O.1%1%的第三種絮凝物質(zhì)時同樣在20-25"下100300rpm攪拌520分鐘，自然靜置1024小時，觀察絮凝沉淀效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度，以發(fā)酵液OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表3。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表3數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)C對施氏假單胞菌體發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液OD值和發(fā)酵液OD值比值計算得出濃縮比例分別為12.5、23和10.8倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為15倍?？梢哉J定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件溫度營養(yǎng)合適即可繁殖。表3絮凝物質(zhì)C對施氏假單胞菌發(fā)酵液的濃縮效果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例4:以培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以單種絮凝物質(zhì)進行菌體濃縮將質(zhì)量體積比為0.1%1%的上述第一種絮凝物質(zhì)加入到100500mL的微生物發(fā)酵液中，20-25。C下100300rpm攪拌520分鐘，再加入質(zhì)量體積比為0.1%1%的第二種絮凝物質(zhì)，20-25。C下100300rpm攪拌520分鐘，不加第三種絮凝物質(zhì)，自然靜置1024小時，觀察絮凝效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度，以發(fā)酵液OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表4。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表4數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)A對枯草芽孢桿菌體發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液OD值和發(fā)酵液OD值比值計算得出的濃縮比例分別為20、22.2和14.9倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為19倍。可認定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件溫度營養(yǎng)合適即可繁殖。表4絮凝物質(zhì)A對枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的濃縮效果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實施例5:以培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以復配絮凝物質(zhì)C進行菌體濃縮實驗，絮凝劑加入比例為0.2%2%，pH45，100300rpm攪拌時間10-30分鐘，自然沉淀10-24小時，觀察絮凝效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度，以發(fā)酵液0D(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表5。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表5數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)C對枯草芽孢桿菌體發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液0D值和發(fā)酵液0D值比值計算得出的濃縮比例分別為21.7、28.6和37倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為29倍。可認定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件溫度營養(yǎng)合適即可繁殖。表5絮凝物質(zhì)C對枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的濃縮效果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實驗編號絮凝物質(zhì)"％)絮體占總發(fā)酵液的體積%血球計數(shù)板法計數(shù)工稀釋傾倒平板法計數(shù)2以絮凝上清液或僅離心后的清液的0D,值與發(fā)酵液原液0D6。。比值10.8-1.2281.8X1063.6X10100.04620.8-1.2332.2X1064.1X101CI0.03530.8-1.2523.0X1064.9X10100.027實施例6:以培養(yǎng)好的水生假絲酵母(Candidaaquatica)發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以復配絮凝物質(zhì)B進行菌體濃縮實驗，絮凝劑加入比例為0.2%2%，pH45，100300rpm攪拌時間10-30分鐘，自然沉淀10-24小時，觀察絮凝沉淀效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度，以發(fā)酵液OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表6。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表6數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)B對水生假絲酵母發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液OD值和發(fā)酵液OD值比值計算得出的濃縮比例分別為12.5、17.8和22.2倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為17.5倍?？梢哉J定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件即可繁殖。表6絮凝物質(zhì)B對水生假絲酵母發(fā)酵液的濃縮效果實驗編號絮凝物質(zhì)B(X)絮體占總發(fā)酵液的體積%血球計數(shù)板法計數(shù)工稀釋傾倒平板法計數(shù)2以絮凝上清液或僅離心后的清液的OD,值與發(fā)酵液原液0D6。。比值對照a1X1053.9X1040對照b2.5X1091.8X109110.6-1.2405.2X1071.7X10100.0820.6-1.2423.0X1072.2X10100.05610<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例7:以培養(yǎng)好的水生假絲酵母發(fā)酵液作為待試溶液。按照方法中提到的培養(yǎng)方法準備發(fā)酵液。以復配絮凝物質(zhì)C進行菌體濃縮實驗，絮凝劑加入比例為0.2%2X，pH調(diào)節(jié)為45，100300rpm攪拌時間10-30分鐘，之后自然沉淀10-24小時，觀察絮凝沉淀效果。用量筒測出絮體體積，并取上清液，以離心過的發(fā)酵液(8000r/min，離心30min)為空白對照a，發(fā)酵液原液為對照b，在600nm波長下測量吸光度，以發(fā)酵液OD(光密度)值變化作為衡量絮凝后菌體濃縮的指標，結果見表7。同時采用血球計數(shù)板對上清液進行細菌計數(shù)，采用稀釋傾倒平板法對濃縮絮凝體進行活菌計數(shù)。表7數(shù)據(jù)顯示，采用復合絮凝物質(zhì)C對水生假絲酵母發(fā)酵液進行濃縮后，三次實驗均獲得較好濃縮效果，根據(jù)上清液OD值和發(fā)酵液OD值比值計算得出的濃縮比例分別為16.7、18.2和11倍，這與根據(jù)濃縮液中的活菌數(shù)計算得出的比例差異不大，濃縮倍數(shù)平均約為15.3倍?？梢哉J定為，絮凝沉淀后的濃縮液中絕大多數(shù)細菌保持活性，并且易于復蘇，不需要特殊條件溫度營養(yǎng)合適即可繁殖。表7絮凝物質(zhì)C對水生假絲酵母發(fā)酵液的濃縮效果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權利要求一種菌體濃縮的方法，其特征在于將以下物質(zhì)作為絮凝物質(zhì)羧甲基纖維素鈉為第一種絮凝物質(zhì)，陽離子聚丙烯酰胺為第二種絮凝物質(zhì)、及檸檬酸三銨為第三種絮凝物質(zhì)；用到的絮凝物質(zhì)為單種，或是以下復配絮凝物質(zhì)中的一種A、羧甲基纖維素鈉與檸檬酸三銨的質(zhì)量配比為1.5～2.5∶0.5～1.5；B、羧甲基纖維素鈉與陽離子聚丙烯酰胺的質(zhì)量配比為0.5～1.5∶1.5～2.5；C、羧甲基纖維素鈉、陽離子聚丙烯酰胺和檸檬酸三銨的質(zhì)量配比為0.5～1.5∶1.5～2.5∶0.5～1.5；濃縮方法為(1)以單種絮凝物質(zhì)進行菌體濃縮將質(zhì)量體積比為0.1％～1％的上述第一種絮凝物質(zhì)加入到100～500mL的微生物發(fā)酵液中，20-25℃下100～300rpm攪拌5～20分鐘，再加入質(zhì)量體積比為0.1％～1％的第二種絮凝物質(zhì)，20-25℃下100～300rpm攪拌5～20分鐘，再加或不加第三種絮凝物質(zhì)，加質(zhì)量體積比為0.1％～1％的第三種絮凝物質(zhì)時同樣在20-25℃下100～300rpm攪拌5～20分鐘，自然靜置10～24小時待其自然沉淀至不再有沉淀時將上清吸去，收取沉淀即得濃縮的微生物菌體；或(2)以A或B或C中的一種復配絮凝物質(zhì)進行菌體濃縮將質(zhì)量體積比為0.2％～2％的上述復配絮凝物質(zhì)之一加入到100～500mL的微生物發(fā)酵液中，20-25℃下100～300rpm攪拌5～30分鐘，自然靜置10～24小時待其自然沉淀至不再有沉淀時將上清吸去，收取沉淀即得濃縮的微生物菌體。全文摘要一種簡單易行的菌體濃縮方法，屬于應用微生物
技術領域：
。本發(fā)明將羧甲基纖維素鈉，陽離子聚丙烯酰胺及檸檬酸三銨作為絮凝物質(zhì)；濃縮用到的絮凝物質(zhì)為單種，或是以上述物質(zhì)的復配絮凝物質(zhì)中的一種，按照一定比例進行組配，然后取一定量加入培養(yǎng)完成的微生物發(fā)酵液中，作用一定時間，發(fā)酵液中的菌體即被絮凝從而沉淀下來達到濃縮的效果。本發(fā)明所用試劑均為無毒副作用的化學物質(zhì)，絮凝得到的菌體不僅保持原有活性，應用到水體水質(zhì)改良和其他領域均不會產(chǎn)生任何危害，是環(huán)境友好產(chǎn)品。將懸浮的微生物沉淀后，僅需吸出上清即達到濃縮的效果，其安全性好，成本低廉，整個工藝流程簡便，效率高。文檔編號C12R1/125GK101748066SQ20091026475公開日2010年6月23日申請日期2009年12月30日優(yōu)先權日2009年12月30日發(fā)明者王小娟,許驕陽申請人:無錫綠水之源生物科技有限公司