專利名稱：具有減弱的Fc配體親和性的抗IFNAR1抗體的制作方法
具有減弱的Fc配體親和性的抗IFNAR1抗體本申請(qǐng)根據(jù)35 U.S.C. § 119(e)要求2008年2月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?61/006，962，2007年3月7日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/034，618，以及2008年5月2日提 交的61/049，970的權(quán)益，其公開(kāi)內(nèi)容在此弓I入以供參考。
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及干擾素α受體I(IFNARl)特異性，且具有減弱的Fc配體親和力的分 離抗體和組合物。本發(fā)明還包括編碼這些抗體的核酸，互補(bǔ)核酸，載體，宿主細(xì)胞，以及制備 和使用它們的方法，包括治療性組合物、配方、給藥方法和裝置。2.
背景技術(shù)：
2. 1 干擾素I型干擾素(IFN) (IFNa , IFN^ , IFNco，IFN τ )是一類結(jié)構(gòu)相關(guān)的細(xì)胞因 子，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用(Hardy等(2001)Blood 97 473 ；Cutrone and Langer (2001) J. Biol. Chem. 276 17140) 人IFNa基因座具有兩個(gè)亞家族。第一亞家族 由14個(gè)非等位基因和4個(gè)具有至少80%同源性的假基因組成。第二亞家族all或ω 含有5個(gè)假基因和1個(gè)功能性基因，其與IFNa基因顯示70%的同源性(We is smarm和 Weber (1986)Prog. Nucl. Acid Res. Mol. Biol.，33 :251_300)。IFNa 亞型具有不同的特異 性活性，但具有相同的生物譜(Streuli 等，(1981)Proc. Natl. Acad. Sci. USA78 2848)和相 同的細(xì)胞受體(Agnet M.等，于〃白介素5" Ed. I. Gresser p. 1-22，Academic出版社，倫 敦，1983)。干擾素α亞型已被鑒定為具有下列名稱=IFNa 1，2a，2b，4，4b，5，6，7，8，10，14， 16，17，和 21。干擾素β (IFN^ )由單基因編碼，其與IFNa基因具有約50%的同源性。干擾素Υ由活化的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，它與α/β干擾素都不具有任何同源性，也不 與其受體反應(yīng)。2. 1. 1干擾素受體所有人I型干擾素與細(xì)胞表面受體(IFNa受體，IFNAR)結(jié)合，該受體由兩個(gè)跨 膜蛋白 IFNARl 和 IFNAR2 組成(Uze 等，(1990)Cell 60 225 ；Novick 等，(1994)Cell 77 391)。IFNARl對(duì)于高親和性結(jié)合和IFNAR復(fù)合物的不同特異性是必要的(Cutrone等，2001 J.Bio Chem 276 (20) 17140-8)。雖然尚未鑒定出每種I型IFN亞型的功能區(qū)別，據(jù)信各 自可能顯示與IFNAR受體組件不同的作用，從而導(dǎo)致可能的不同信號(hào)傳遞結(jié)果(Cook等， (1996) J. Biol. Chem. 271 13448)。尤其是利用IFNARl和INFAR2突變型的研究顯示α和 β干擾素通過(guò)與各鏈作用不同而通過(guò)受體傳導(dǎo)不同的信號(hào)(Lewerenz等，(1998)J.Mol. Biol. 282 585)。2. 1.2干擾素的功能I型IFN的早期功能研究著力于對(duì)病毒干擾的天然防御(Haller等，(1981) J.Exp. Med. 154 199 ；Lindenmann 等，(1981)Methods Enzymo 1. 78 181)。然而，最近的研究暗示 I型IFN是在適應(yīng)性免疫應(yīng)答中有效的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。特別是，I型IFN已顯示利用原初T細(xì)胞沿Thl途徑的分化(Brinkmann等，(1993) J. Exp. Med. 178 1655)來(lái)增強(qiáng)抗體 生產(chǎn)(Finkelman等，(1991) J. Exp. Med. 174 1179)和支持記憶T細(xì)胞的功能活性和存活 (Santini 等，(2000) J. Exp. Med. 191 1777 ；Tough 等，(1996) Science 272 :1947)。一些研究小組近來(lái)的工作提示，IFNa可增強(qiáng)樹(shù)突細(xì)胞(DC)的成熟或活 化(Santini,等，(2000) J. Exp. Med. 191 1777 ;Luft 等，(1998) J. Immunol. 161 1947 ； Luft 等，(2002) Int. Immunol. 14 367 ；Radvanyi 等，(1999) Scand. J. Immunol. 50 499)。另外，也描述了在許多自身免疫病中I型干擾素的表達(dá)增加(Foulis等，(1987) Lancet 2 1423 ；Hooks 等，(1982)Arthritis Rheum. 25 396 ；Hertzog 等，(1988)Clin. Immunol. Immunopatho1. 48 192 ；Hopkins 禾口 Meager(1988)Clin. Exp. Immunol. 73 88 ； Arvin 和 Miller(1984)Arthritis Rheum. 27 :582)。對(duì)此研究最多的例子是與 IFNa 的升高水平有關(guān)的胰島素依賴性糖尿病(IDDM) (Foulis (1987))和系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE) (Hooks (1982)),以及IFN3可能起到了更重要的作用的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA) (Hertzog(1988)，Hopkins和 Meager(1988)，Arvin 和 Miller(1984)。另外，已報(bào)道施用干擾素α?xí)沟没加信Ｆぐ_和多發(fā)性硬化的病人疾病惡化，并 在先前沒(méi)有自身免疫病史的病人內(nèi)誘導(dǎo)SLE樣的綜合征。干擾素α已顯示在正常小鼠中 誘導(dǎo)腎小球腎炎，并加速NZB/W小鼠中自身免疫病的發(fā)生。另外，IFNa治療在一些病例中 顯示導(dǎo)致不良副作用，包括發(fā)熱和神經(jīng)疾病。因此，有抑制I型IFN活性對(duì)病人有利的病理 狀態(tài)，和存在有效抑制I型IFN活性的制劑的需求。2. 1.3抗體效應(yīng)物功能抗體的Fc區(qū)與許多配體(在本文中也稱為“Fe配體”，這些配體包括但不限于與 抗體Fc區(qū)結(jié)合的因子，例如Fc受體和Clq)相互作用，賦予一系列稱作效應(yīng)物功能的重 要功能，所述配體包括Fc受體和Clq。Fc受體介導(dǎo)抗體和免疫系統(tǒng)的細(xì)胞臂之間的通訊 (Raghavan 等，1996，Annu Rev Cell Dev Biol 12 :181_220 ;Ravetch 等，2001，Annu Rev Immunol 19:275-290)。在人中，該蛋白家族包括Fc γ RI (CD64)，包括同工型Fc γ RIA、 Fc γ RIB、禾口 Fc γ RIC ；Fc y RII (CD32)，包括同工型 Fc y RIIA, Fc yRIIB、禾口 Fc γ RIIC ；以 及 Fc γ RIII (CD16)，包括同工型 Fc y RIIIA 和 Fc y RIIB (Jefferis 等，2002，Immunol Lett 82 57-65)。這些受體通常具有介導(dǎo)與Fc結(jié)合的胞外域、跨膜區(qū)、和可能介導(dǎo)一些胞內(nèi)信號(hào) 傳遞事件的胞內(nèi)域。這些受體在各種免疫細(xì)胞中表達(dá)，包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒 細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板、B細(xì)胞、大顆粒淋巴細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞、天 然殺傷(NK)細(xì)胞和T細(xì)胞。Fc/Fc γ R復(fù)合物的形成將這些效應(yīng)細(xì)胞募集到結(jié)合的抗原的 位點(diǎn)，通常導(dǎo)致胞內(nèi)信號(hào)傳遞事件以及重要的后隨免疫應(yīng)答，例如炎癥介體的釋放，B細(xì)胞 活化，內(nèi)吞作用，吞噬作用，和細(xì)胞毒性攻擊。介導(dǎo)細(xì)胞毒性和吞噬細(xì)胞效應(yīng)物功能的能力 是一種抗體破壞靶細(xì)胞的可能機(jī)制。細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)(其中表達(dá)Fc γ R的非特異性細(xì)胞毒 性細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞上結(jié)合的抗體，并隨之導(dǎo)致靶細(xì)胞裂解)稱作抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì) 胞毒性(ADCC) (Raghavan等，1996，Annu Rev Cell Dev Biol 12 181-220 ;Ghetie等，2000， Annu Rev Immunol 18 :739_766 ;Ravetch 等，2001， Annu Rev Immunol 19:275-290)。細(xì) 胞介導(dǎo)的反應(yīng)(其中表達(dá)Fc γ R的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞上結(jié)合的抗體，并隨 之導(dǎo)致靶細(xì)胞的吞噬作用)被稱作抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用(ADCP)。另外，分子Fc 區(qū)上的重疊位點(diǎn)還控制補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞非依賴性細(xì)胞毒性功能，這也被稱作補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。2. 1. 4不同類型的人Fc γ R 人Fc γ R 分為三種不同類型Fc γ RI (CD64)、Fc γ RII (CD32)和 Fc γ RIII (CD16)。 Fc y RI是高親和性受體(Ka 10-8-10^)，同時(shí)與免疫復(fù)合物和單體IgG分子結(jié)合，而Fc 受體Fc YRII和Fc YRIII顯示的親和力較低(分別為< KT7IT1和2_3xl(T7) (Gessner J. Ε.等，1998，Annn Hematology 76 :231_48)。對(duì)于所有跨膜受體，通過(guò)FcyR的信號(hào)傳遞 是通過(guò)基于免疫受體酪氨酸的活化基序(ITAM)或基于免疫受體酪氨酸的抑制基序(ITIM) 而實(shí)現(xiàn)(Presta 2006, Adv Drug Deli Rev 58:640-656)。72kDa胞外糖蛋白FcyRI主要在髓樣細(xì)胞，例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞⑶4+祖細(xì)胞 上表達(dá)，可引起ADCC、內(nèi)吞作用和吞噬作用應(yīng)答(Siberil等，2006，J Immunol Lett 106 111-118)。40 kDa Fc γ RII受體組(A、B和C同工型)顯示胞外域，但不含活性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 域。這些受體通過(guò)胞質(zhì)尾功能域的磷酸化傳播信號(hào)(Amigorena S.等，1992 Science. 256 1808-12)。FcyRIIA主要在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和血小板上表達(dá)，而 Fc y RIIC受體僅在NK細(xì)胞中被鑒定出。這兩種受體顯示引發(fā)ADCC、內(nèi)吞作用、吞噬作用和 炎癥介體釋放(Cassel 等，1993. Mol Immunol 30:451-60)。相反，F(xiàn)c γ RIIB (Bi 禾Π B2 型) 受體在B細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、和樹(shù)突細(xì)胞上表達(dá)，并顯示 下調(diào)了 A和C同工型觸發(fā)的免疫應(yīng)答。50 kDa Fc γ RIIIA在NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的一個(gè)亞組上表 達(dá)，激活A(yù)DCC、吞噬作用、內(nèi)吞作用和細(xì)胞因子釋放(Gessner等)。Fc γ RIIIB同工型是有錨 定糖基磷酯酰肌醇(GPI)的外在膜蛋白，其與脫粒和反應(yīng)性氧中間物的產(chǎn)生有關(guān)(Salmon J. Ε.等，1995 J Clin Inves 95:2877-85)。IgG分子也顯示對(duì)Fc γ R不同的同工型特異性。IgG3分子與所有FcR同工型強(qiáng)結(jié) 合。IgGl，在血液中最普遍的同工型，與所有Fc γ R結(jié)合，但與Fc y RIIA/B同工型的親和 力較低。IgG4與Fc YRI中等結(jié)合，而與Fc YRIIB的結(jié)合較弱。最后，IgG2僅與Fc γ RIIA 的一種等位形式(Fe y RIIA-H131)微弱結(jié)合(Siberil 等，2006，J Immunol Lett 106 111-118)。2. 1. 5 補(bǔ)體補(bǔ)體炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)是天然免疫應(yīng)答的一部分，對(duì)于個(gè)體抵御感染的能力至關(guān)重 要。另一種重要Fc配體是補(bǔ)體蛋白Clq。Fc與Clq的結(jié)合介導(dǎo)稱作補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性 (CDC)的過(guò)程(Ward等，1995，Ther Immunol 2:77-94中回顧)。Clq能結(jié)合6種抗體，雖然 與兩種IgG的結(jié)合已經(jīng)足夠激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)。Clq與Clr和Cls絲氨酸蛋白酶形成復(fù)合 物，形成補(bǔ)體途徑的Cl復(fù)合物。2. 1. 6涉及Fc γ R結(jié)合的IgG區(qū)域和氨基酸殘基已廣泛研究了對(duì)不同F(xiàn)c YR的人IgG結(jié)合位點(diǎn)的作圖。這些基于遺傳學(xué)改變的 IgG分子的研究鑒定出CH2結(jié)構(gòu)域N-末端部分一段短的連續(xù)氨基酸殘基序列(234-238)直 接參與了與所有Fc γ R的結(jié)合。另外，殘基268、297、327和329可影響Fc γ R亞組的結(jié)合。 位于CH2和CH3結(jié)構(gòu)域中的多個(gè)殘基也對(duì)Fc γ R結(jié)合有貢獻(xiàn)(Canfield SM.等，1991 J Exp Med 173 1483-91，Chappel MS.等，1991，Proc Nat Acad Sci USA 888 9036-40,GergelyJ.等，1990 FASEB J 4:3275-83)。2. 2抗體治療性相關(guān)毒性在許多情況下，免疫球蛋白Fc區(qū)介導(dǎo)的效應(yīng)物功能的結(jié)合和刺激是非常有益 的。然而，在某些情況下降低或消除效應(yīng)物功能可能更有益。這對(duì)于那些設(shè)計(jì)為對(duì)靶細(xì) 胞傳遞藥物(例如毒素和同位素)的抗體尤其如此；在這些靶細(xì)胞中，F(xiàn)C/FcyR介導(dǎo)的 效應(yīng)物功能將健康免疫細(xì)胞引到有效致死載荷附近，導(dǎo)致正常淋巴組織與靶細(xì)胞一起耗 竭(Hutchins 等，1995，PNAS USA 92 :11980_11984 ;White 等，2001，Annu Rev Med 52: 125-145)。在這些情況下，使用很少募集補(bǔ)體或效應(yīng)細(xì)胞的抗體將有極大的益處(見(jiàn)例如， Wu 等，2000，Cell Immunol 200 :16_26 ;Shields 等，2001，J. Biol Chem 276:6591-6604; U. S. 6，194，551 ；U. S. 5，885，573 和 PCT 出版物 W004/029207)。在其它例子中，例如，當(dāng)以阻斷廣泛表達(dá)的受體與其同類配體的相互作用為目標(biāo) 時(shí)，降低或消除所有抗體效應(yīng)功能，以減少不良毒性是有利的。另外，當(dāng)治療性抗體對(duì)許多 人組織顯示混雜結(jié)合時(shí)，明智之舉是限制效應(yīng)物功能靶向到多組組織，以限制毒性。雖然 有許多缺乏特異性效應(yīng)物功能的人免疫球蛋白亞類，不存在缺乏所有效應(yīng)物功能的已知天 然存在的免疫球蛋白。另一種方法是工程改造或突變Fc區(qū)域中引起效應(yīng)物功能的關(guān)鍵 殘基。例如，見(jiàn) PCT 出版物 W02006076594，W0199958572, US20060134709, W02006047350, W02006053301，和U. S. 5，624，821，其在此完整引入以供參考。在許多疾病狀態(tài)的治療中使用單克隆抗體已有詳細(xì)記載。在抗體可觸發(fā)的眾多效 應(yīng)物功能中，抗體治療的要求之一是它們特異性靶向感興趣的靶標(biāo)。例如(但不限于)，通 過(guò)檢測(cè)感興趣組織的免疫組織化學(xué)(IHC)分析靶組織的特異性。重要的是治療劑僅僅與含 有感興趣靶標(biāo)的組織結(jié)合。反之，會(huì)由于在非靶向位點(diǎn)引起不恰當(dāng)?shù)男?yīng)物功能活化而導(dǎo) 致該抗體治療產(chǎn)生高毒性。如果可以減少或消除效應(yīng)物功能，就可避免治療劑廣泛結(jié)合的 危險(xiǎn)。出于所有這些考慮，對(duì)于至少一種促進(jìn)效應(yīng)物功能的Fc配體具有減弱或消除的親和 力的抗體的需要仍然未被滿足。這樣的抗體會(huì)對(duì)慢性炎癥和自身免疫病的治療特別有用。本文中引用或討論的文獻(xiàn)應(yīng)不被視為是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。3.附圖簡(jiǎn)述為了說(shuō)明本發(fā)明，在圖中描述了本發(fā)明的一些實(shí)施方式。然而，本發(fā)明并不限于圖 中所述具體實(shí)施方式
的精確安排和手段。

圖1A. 3F11VH的核酸(SEQ ID No 7)和氨基酸(SEQ ID No 8)序列比對(duì)，其中CDR 區(qū)如上劃線所示。圖IB. 3F11 VK的核酸(SEQ ID No 9)和氨基酸(SEQ ID No 10)序列比對(duì)，其中 ⑶R區(qū)如上劃線所示。圖2A. 4G5 VH的核酸(SEQ ID No 17)和氨基酸(SEQ ID No 18)序列比對(duì)，其中 ⑶R區(qū)如上劃線所示。圖2B. 4G5 VK的核酸(SEQ ID No 19)和氨基酸(SEQ ID No 20)序列比對(duì)，其中 ⑶R區(qū)如上劃線所示。圖3A. 11E2 VH的核酸(SEQ ID No 27)和氨基酸(SEQ ID No 28)序列比對(duì)，其中 ⑶R區(qū)如上劃線所示。圖3Β· 11E2 VK的核酸(SEQ ID No 29)和氨基酸(SEQ ID No 30)序列比對(duì)，其中⑶R區(qū)如上劃線所示。圖4A. 9D4 VH的核酸(SEQ ID No 37)和氨基酸(SEQ ID No 38)序列比對(duì)，其中 ⑶R區(qū)如上劃線所示。圖4B. 9D4 VK的核酸(SEQ ID No 39)和氨基酸(SEQ ID No 40)序列比對(duì)，其中 ⑶R區(qū)如上劃線所示。圖5. 9D4重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列比對(duì)。箭頭表示氨基酸取代(未修飾到修飾 的)，以提高穩(wěn)定性并降低對(duì)至少一種Fc配體的親和力。圖6A.用不同抗-IFNARl抗體處理的人腦組織的免疫組織化學(xué)染色圖譜。當(dāng)與人 腦組織一起孵育時(shí)，與4G4和MDX-1333抗體相比，9D4抗體顯示較低的染色圖譜。圖6B.用不同抗-IFNARl抗體處理的人單核細(xì)胞的免疫組織化學(xué)染色圖譜。作為 陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)試了各種抗-IFNARl抗體與人單核細(xì)胞的反應(yīng)性。圖7.抗-IFNARl抗體9D4在基于細(xì)胞的STAT活化實(shí)驗(yàn)中抑制IFNa信號(hào)傳導(dǎo)。 用抗體9D4處理抑制響應(yīng)干擾素α刺激的STAT1/3/4酪氨酸磷酸化，如用市售STAT抗體 進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析所測(cè)定的。圖8.抗-IFNARl抗體封閉不同濃度的pDC細(xì)胞衍生I型IFN的信號(hào)傳遞。提供 的是在使用從3個(gè)獨(dú)立供體純化的I型IFN上清液的熒光酶報(bào)道實(shí)驗(yàn)中抗體9D4封閉IFN 信號(hào)傳遞的IC50值。包括了各純化的I型干擾素上清液中IFNa ,IFN^、和IFNco的相對(duì)量。圖9A，B，C.抗-IFNARl抗體9D4，9D4-DM(雙突變)，和9D4_TM(三突變)顯示相 似的結(jié)合特征。提供了代表未修飾9D4抗體和2種修飾的抗體9D4-DM和9D4-TM的數(shù)據(jù)。 修飾的抗體顯示與未修飾抗體類似的IFNARl結(jié)合特征。圖10A.抗-IFNARl抗體9D4與可溶性干擾素α受體(sIFNaRl)結(jié)合。提供了 顯示9D4與可溶性干擾素α受體的劑量依賴性結(jié)合的平衡結(jié)合數(shù)據(jù)。圖10B. 9D4對(duì)人PBMC的Kd測(cè)定。提供了通過(guò)與人PBMC結(jié)合測(cè)定的9D4解離常數(shù)。圖11.抗-IFNARl抗體抑制熒光酶報(bào)道實(shí)驗(yàn)中的IFNa誘導(dǎo)的信號(hào)傳遞。包括未 修飾和修飾抗體的抗-IFNARl抗體對(duì)封閉熒光酶報(bào)道實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的白細(xì)胞IFN信號(hào)傳遞顯 示相似的IC50值。圖12A.9D4(未修飾)和修飾的9D4抗體等電點(diǎn)的測(cè)定。提供的是IEF凝膠，其記 錄9D4WT (未修飾)、9D4-DM和9D4-TM抗體的相對(duì)pi值。 圖12B. 9D4 (未修飾)和修飾的9D4熱熔解溫度的測(cè)定。提供的是記錄9D4WT (未 修飾)、9D4-DM和9D4-TM抗體的相對(duì)熔解點(diǎn)(Tm)的溶解曲線。圖13.抗-IFNAR抗體的預(yù)防性處理阻止了 Adv-IFNa誘導(dǎo)的蛋白尿。用對(duì)照 載體、Adv-IFN α，Adv-IFN a +同種型對(duì)照預(yù)處理處理小鼠，在9周內(nèi)分析Adv-IFN a + 抗-IFNAR預(yù)處理的蛋白尿。用抗-IFNAR預(yù)處理的小鼠在IFNa攻擊后不顯示蛋白尿。圖14.用抗-IFNAR抗體預(yù)防性處理阻止了血液中IFNa反應(yīng)性基因(IFIT1， IFI44, CXCLl 1, IFI202b, CXCL19, CXCL9)上調(diào)。用抗-IFNAR抗體預(yù)處理的小鼠與用對(duì)照病 毒、PBS或同種型IgG對(duì)照預(yù)處理的小鼠相比，在受到腺病毒編碼的IFNa攻擊后不顯示所 選IFNa反應(yīng)性基因的上調(diào)。提供了來(lái)自通過(guò)Adv-IFNα感染進(jìn)行IFNa誘導(dǎo)3周后的小鼠血樣中的已知響應(yīng)IFN α的6種基因的相對(duì)表達(dá)。圖15Α，B.用抗-IFNAR抗體預(yù)防性處理阻止了 INFa誘導(dǎo)的自身抗體產(chǎn)生。用 抗-IFNAR抗體預(yù)處理的小鼠與用對(duì)照病毒、PBS或同種型IgG對(duì)照預(yù)處理的小鼠相比，在 受到腺病毒編碼的IFNa攻擊后不顯示自身抗體生產(chǎn)增加。提供了來(lái)自通過(guò)Adv-IFNα感 染進(jìn)行IFN α誘導(dǎo)6周后的小鼠血樣中的抗-dsDNA和抗_SSA/Ro的濃度。圖16A，B.用抗-IFNAR抗體預(yù)防性處理阻止了腎臟中的細(xì)胞因子上調(diào)。用 抗-IFNAR抗體預(yù)處理的小鼠與用對(duì)照病毒、PBS或同種型IgG對(duì)照預(yù)處理的小鼠相比，在受 到腺病毒編碼的IFNa 5攻擊后不顯示腎臟中細(xì)胞因子上調(diào)。提供了來(lái)自通過(guò)Adv-IFNα 5 感染進(jìn)行IFNa誘導(dǎo)6周后的小鼠腎臟樣本中的IP-10和IL-18的測(cè)量值。圖17.用抗-IFNAR抗體預(yù)防性處理阻止了 IFN誘導(dǎo)的自身抗體產(chǎn)生。提供了來(lái) 自小鼠血清的抗-核抗原(ANA)抗體的相對(duì)滴度。用抗-IFNAR抗體預(yù)處理的小鼠與用對(duì) 照病毒、PBS或同種型對(duì)照預(yù)處理的小鼠相比，在IFN攻擊后顯示較低的ANA血清滴度。圖18.抗體介導(dǎo)的SLE血漿抑制介導(dǎo)了樹(shù)突細(xì)胞發(fā)育。提供了 5個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的結(jié) 果，其中衍生自SLE病人的IFN與抗-IFNARl抗體9D4 —起保溫，然后加到人單核細(xì)胞中。 抗-IFNARl抗體9D4的存在抑制了衍生自SLE病人的IFN在分化單核細(xì)胞中誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞 標(biāo)記⑶8和⑶123的能力。圖19.抗-IFNARl抗體抑制用白細(xì)胞干擾素刺激的單核細(xì)胞中⑶38、⑶123、和 ⑶86的表達(dá)。如受控刺激表達(dá)的抑制百分?jǐn)?shù)所示，抗-IFNARl抗體9D4，9D4-DM和9D4-TM 在分化的單核細(xì)胞中顯示對(duì)⑶38，⑶123和⑶86的表達(dá)具有相似的抑制圖譜。圖20.修飾的抗-IFNARl抗體與未修飾的抗-IFNARl抗體相比，顯示對(duì)Fc受體 Fc y Rl的結(jié)合下降。在ELISA實(shí)驗(yàn)中分析抗-IFNARl抗體9D4 (未修飾)、9D4_DM(修飾的) 和9D4-TM(修飾的)與固定在平板上的Fc γ Rl的結(jié)合能力。作為Fc受體結(jié)合的陽(yáng)性對(duì)照， 使用無(wú)關(guān)未修飾的抗體(對(duì)照抗體)。圖21，A，B，C.修飾的抗-IFNARl抗體與未修飾的抗-IFNARl抗體相比，顯示對(duì)Fc 受體Fc YRIIIA結(jié)合下降。在ELISA實(shí)驗(yàn)形式中分析了固定在平板上的未修飾抗-IFNARl 抗體9D4(A)、修飾的抗-IFNARl抗體9D4_DM(B)和9D4_TM(C)與游離Fc y RIIIA的結(jié)合能 力。圖22，Α，B, C.修飾的抗-IFNARl抗體顯示與Fc受體Fc y RIIIA的結(jié)合下降。在 ELISA實(shí)驗(yàn)形式中分析了游離的未修飾抗-IFNARl抗體9D4(A)、修飾的抗-IFNARl抗體 9D4-DM(B)和9D4-TM(C)與固定在平板上的Fc γ RIIIA的結(jié)合能力。圖23Α-Ε. SLE病人血清中IFN亞型的中和。如報(bào)道實(shí)驗(yàn)所測(cè)定的，抗-IFNARl抗體 MDX-1333，9D4-WT 和 9D4-TM 抑制了 α 10 (A)，白細(xì)胞干擾素(B)，α 2b (C)，ω (D)，和 β (E) 的IFN介導(dǎo)的信號(hào)傳遞。圖24.抗-IFNARl抗體中和來(lái)自SLE病人的I型干擾素。通過(guò)報(bào)道實(shí)驗(yàn)，抗-IFNARl 抗體9D4與對(duì)照(非相關(guān)抗體)相比，抑制I型干擾素介導(dǎo)的信號(hào)傳遞。圖25A-D.抗-IFNAR抗體抑制PBMC細(xì)胞中IFN α誘導(dǎo)的pDC群。通過(guò)細(xì)胞表位 表達(dá)測(cè)試，抗-IFNAR抗體阻止脾臟(A)、淋巴結(jié)(B)、外周血(C)和骨髓⑶中異位腺病毒 誘導(dǎo)的干擾素α表達(dá)所誘導(dǎo)的PDC細(xì)胞提高。圖 26.通過(guò) BIACore 分析測(cè)定抗-IFNARl 抗體 9D4-WT，9D4-DM,和 9D4-TM 與 Fc 受體Fc γ RI的結(jié)合分析。簡(jiǎn)單說(shuō)，將抗-IFNARl抗體固定，加入游離Fc y RI測(cè)定親和性。如示 蹤測(cè)定的，修飾的抗體9D4-DM和9D4-TM與未修飾的9D4-WT抗體相比，顯示對(duì)游離Fc y Rl 的親和力較低。圖 27A-C.通過(guò) BIACore 分析測(cè)定抗-IFNARl 抗體 9D4-WT，9D4-DM 和 9D4-TM 與 Fc 受體Fc y RI的結(jié)合分析。簡(jiǎn)單說(shuō)，使游離抗-IFNARl抗體通過(guò)固定的Fc y RI來(lái)測(cè)定親和 性。如示蹤測(cè)定的，修飾的抗體9D4-DM(B)和9D4-TM(C)與未修飾的9D4-WT (A)抗體相比， 顯示對(duì)結(jié)合的Fc y Rl的親和力較低。圖28.抗-IFNAR抗體抑制腎臟中的IFNa反應(yīng)性基因誘導(dǎo)。簡(jiǎn)單說(shuō)，如Taqman 實(shí)驗(yàn)測(cè)定的，與對(duì)照小鼠相比，加速(accelerated)狼瘡小鼠模型中用抗-IFNAR抗體處理 阻止了腎臟中IFNa異位表達(dá)介導(dǎo)的6種基因(ICAM1, VCAM1,CXCL9,CXCL10,^P IFIT1)的 誘導(dǎo)。圖29.抗-IFNAR抗體抑制加速狼瘡小鼠模型中抗_dsDNA抗體的產(chǎn)生。簡(jiǎn)單說(shuō)， 異位表達(dá)IFN α和用抗-IFNAR抗體處理的小鼠聚積的抗-dsDNA抗體水平與類似感染并用 IgG對(duì)照抗體處理的小鼠并不相似。圖30.抗-IFNAR抗體能在加速狼瘡小鼠模型的治療背景下減少蛋白尿。(A)簡(jiǎn)單 說(shuō)，異位表達(dá)IFNa的小鼠發(fā)生狼瘡樣癥狀，例如蛋白尿。在治療性研究中，一旦達(dá)到閾值 蛋白尿評(píng)分，對(duì)小鼠施用抗-IFNAR抗體。在5周中，每半周施用抗-IFNAR抗體、PBS或?qū)?照IgG?？?IFNAR抗體處理組與僅用PBS或?qū)φ誌gG處理組相比，顯示在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中蛋白 尿的嚴(yán)重性下降。圖31.抗-IFNAR抗體能在加速狼瘡小鼠模型的治療背景下提高存活。(A)簡(jiǎn)單 說(shuō)，異位表達(dá)IFNa的小鼠在發(fā)生狼瘡樣癥狀(例如蛋白尿)后的8周時(shí)存活率下降。在 治療性研究中，一旦達(dá)到閾值蛋白尿評(píng)分，對(duì)小鼠施用抗-IFNAR抗體。在5周中，每半周施 用抗-IFNAR抗體、PBS或?qū)φ誌gG。5周后，停止抗體治療，對(duì)所有三個(gè)處理組跟蹤死亡率。 抗-IFNAR抗體處理組與僅用PBS或?qū)φ誌gG處理組相比，顯示低得多的死亡率，后兩者在 9周后都完全死亡。圖32.表示含有L234F/L235E/P331S突變的Fc-TM晶胞的不對(duì)稱單元內(nèi)含物。突 變P331以紅色表示。一個(gè)鋅離子被兩個(gè)空間上靠近的組氨酸殘基螯合。與297結(jié)合的糖 基是根據(jù)其電子密度建模的。圖33.動(dòng)力學(xué)圖像顯示9D4-TM的內(nèi)化。在37°C CO2溫箱內(nèi)用1 μ M CFSE對(duì)THP-I 細(xì)胞染色10分鐘，然后在冰上用1 μ g/ml AleXa647-9D4_TM染色1小時(shí)。除去未結(jié)合的染 料后，細(xì)胞在37°C保溫所示時(shí)間(0，15，30和60分鐘)，采集細(xì)胞圖像。圖34.抗-IFNARl抗體9D4-TM在體外實(shí)驗(yàn)中不顯示CDC活性。該圖中所示的是 CDC實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，以確定9D4-TM抗體引起CDC活性的能力。如所示，9D4-TM抗體與陽(yáng)性對(duì) 照抗體相比，不顯示任何⑶C活性。對(duì)于非相關(guān)對(duì)照抗體R347，⑶C活性也不可檢測(cè)。簡(jiǎn)單 說(shuō)，表達(dá)IFNARl抗原的細(xì)胞與陽(yáng)性對(duì)照、9D4-TM或R347 —起保溫。一系列洗滌后，加入新 鮮人血清。用LDH釋放實(shí)驗(yàn)測(cè)定補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。4.術(shù)語(yǔ)術(shù)語(yǔ)“干擾素α ”，“ IFNa 〃，“ IFNa"，“ IFNA〃和 “IFN alpha”可互換使 用，應(yīng)指干擾素α基因座的功能性基因編碼的IFNa蛋白質(zhì)，其與IFNa 1 (GenBank登錄號(hào)NP_076918或GenBank登錄號(hào)NM_024013編碼的蛋白)具有75%或以上的序列相同性。 IFNa 亞型的例子包括 IFNa 1，a 2a, α 2b, α 4，α 4b α 5，α 6，α 7，α 8，α 10，α 13，α 14， α 16，α 17和α 21。術(shù)語(yǔ)“干擾素α，，，“ IFNa “，和“IFN α ”應(yīng)包括各種IFNa亞型的 重組形式，以及天然存在的制備物，其包含IFNa蛋白，例如白細(xì)胞IFN和淋巴母細(xì)胞IFN。術(shù)語(yǔ)〃干擾素α 受體-1〃，‘‘ IFNARl 〃 ‘‘ IFNAR-I,‘‘和〃 IFNAR-1 抗原〃可 互換使用，包括人IFNAR-I的變體、同工型、種系同源物，以及與IFNAR-I具有至少一個(gè)共同 表位的類似物。因此，本發(fā)明的人抗體在一些實(shí)施方式中可與來(lái)自除人以外的其它物種的 IFNAR-1，或與人IFNAR-I結(jié)構(gòu)相關(guān)的其它蛋白質(zhì)(例如人IFNAR-I同源物)交叉反應(yīng)。在 其它實(shí)施方式中，抗體可以對(duì)人IFNAR-I完全特異，不顯示物種或其它類型的交叉反應(yīng)性。 人IFNAR-I的完整cDNA序列具有GenBank登錄號(hào)NM_000629。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“保守序列修飾”應(yīng)包括不影響或改變含氨基酸序列的抗體結(jié) 合特性的氨基酸修飾。這樣的保守修飾包括氨基酸取代、添加和缺失?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知 的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，例如定點(diǎn)誘變和PCR介導(dǎo)的誘變?cè)诒景l(fā)明的抗體中引入修飾。保守氨基酸取 代是其中氨基酸殘基被具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基取代的那種。例如，相似極性的一種或 多種氨基酸功能上是等價(jià)的，并在肽的氨基酸序列內(nèi)導(dǎo)致沉默改變。中性和用更小的殘基 替換一殘基的取代也可被認(rèn)為是“保守取代”，即使殘基是不同組的(例如用更小的異亮氨 酸取代苯丙氨酸)。具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族已被本領(lǐng)域確定。表1顯示了保守性 氨基酸取代家族的幾個(gè)非限制性例子。表1 保守性氨基酸取代家族
權(quán)利要求
一種IFNAR1特異性的修飾的IgG類單克隆抗體，其特征在于，所述抗體在Fc區(qū)內(nèi)包含至少一個(gè)氨基酸取代，所述取代選自L234F，L235E，和P331S，所述氨基酸如Kabat中列出的EU索引編號(hào)，所述抗體與未修飾抗體相比，顯示對(duì)至少一種Fc配體的親和力下降。
2.如權(quán)利要求1所述的抗體，其特征在于，所述抗體屬于IgGl或IgG4亞類。
3.如權(quán)利要求2所述的抗體，其特征在于，所述抗體是IgGl類分子。
4.如權(quán)利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含氨基酸取代P331S。
5.如權(quán)利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含氨基酸取代L234F和L235E。
6.如權(quán)利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體具有氨基酸取代L234F，L235E和 P331S。
7.如權(quán)利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體是IgG4類分子。
8.如權(quán)利要求7所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含F(xiàn)c區(qū)氨基酸取代L235E。
9.如權(quán)利要求7所述的抗體，其特征在于，所述抗體還在Fc區(qū)包含氨基酸取代S228P。
10.如權(quán)利要求1-9任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含選自表2的至少一個(gè) 互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)。
11.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)CDRl，包含SeqID NO 31 ；b.人重鏈可變區(qū)⑶R2，包含SeqID NO 32 ；c.人重鏈可變區(qū)⑶R3，包含SeqID NO 33 ；d.人輕鏈可變區(qū)⑶Rl，包含SeqID NO 34 ；e.人輕鏈可變區(qū)CDR2，包含SeqID NO 35 ；和f.人輕鏈可變區(qū)CDR3，包含SeqID NO :36。
12.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)CDRl，包含SeqID NO 1 ；b.人重鏈可變區(qū)CDR2，包含SeqID NO 2 ；c.人重鏈可變區(qū)CDR3，包含SeqID NO 3 ；d.人輕鏈可變區(qū)⑶Rl，包含SeqID NO 4 ；e.人輕鏈可變區(qū)CDR2，包含SeqID NO 5 ；和f.人輕鏈可變區(qū)CDR3，包含SeqID NO :6。
13.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)⑶Rl，包含SeqID NO 11 ；b.人重鏈可變區(qū)⑶R2，包含SeqID NO 12 ；c.人重鏈可變區(qū)⑶R3，包含SeqID NO 13 ；d.人輕鏈可變區(qū)⑶Rl，包含SeqID NO: 14;e.人輕鏈可變區(qū)CDR2，包含SeqID NO 15 ；和f.人輕鏈可變區(qū)CDR3，包含SeqID N0:16。
14.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)⑶Rl，包含SeqID NO 21 ；b.人重鏈可變區(qū)CDR2，包含SeqID NO 22 ；c.人重鏈可變區(qū)CDR3，包含SeqID NO 23 ；d.人輕鏈可變區(qū)CDRl，包含SeqID NO 24 ；e.人輕鏈可變區(qū)CDR2，包含SeqID NO 25 ；和f.人輕鏈可變區(qū)CDR3，包含SeqID NO :26。
15.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)，包含SeqID No 38的氨基酸序列；和b.人輕鏈可變區(qū)，包含SeqID No :40的氨基酸序列。
16.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)，包含SeqID No 8的氨基酸序列；和b.人輕鏈可變區(qū)，包含SeqID No 10的氨基酸序列。
17.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)，包含SeqID No 18的氨基酸序列；和b.人輕鏈可變區(qū)，包含SeqID No :20的氨基酸序列。
18.如權(quán)利要求1-10任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含a.人重鏈可變區(qū)，包含SeqID No 28的氨基酸序列；和b.人輕鏈可變區(qū)，包含SeqIDNo :30的氨基酸序列。
19.如權(quán)利要求1-18任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含SeqID No :41的輕 鏈恒定區(qū)序列。
20.如權(quán)利要求1-18任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含SeqID No :42的重 鏈恒定區(qū)。
21.如權(quán)利要求1-18任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含具有SEQID No 41 的氨基酸序列的輕鏈恒定區(qū)和具有Seq ID No :42的氨基酸序列的重鏈恒定區(qū)。
22.如權(quán)利要求19-21任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體包含重鏈氨基酸序列， 所述重鏈氨基酸序列包含等位變異，所述等位變異是至少一個(gè)或多個(gè)選自如EU索引編號(hào) 系統(tǒng)所定義的214，221，356和358的位點(diǎn)。
23.如前任一權(quán)利要求所述的抗體，其特征在于，所述抗體選自人抗體、人源化抗體、 嵌合抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體和合成抗體。
24.一種分離的核酸，其特征在于，包含編碼上述權(quán)利要求任一所述的抗體的多核苷酸 序列。
25.如權(quán)利要求24所述的核酸，其特征在于，所述核酸是可復(fù)制載體。
26.如權(quán)利要求25所述的核酸，其特征在于，所述多核苷酸序列與啟動(dòng)子可操縱性連接。
27.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，包含權(quán)利要求25或26所述的載體或經(jīng)所述載體轉(zhuǎn)化。
28.一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其特征在于，包含人免疫球蛋白重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因，其中所述小 鼠表達(dá)權(quán)利要求1-23任一所述的抗體。
29.一種用權(quán)利要求28所述的小鼠制備的雜交瘤，其特征在于，所述雜交瘤產(chǎn)生所述 抗體。
30.一種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-23任一所述的抗體和藥物學(xué)上可 接受的賦形劑。
31.一種治療與免疫失調(diào)有關(guān)的病況或疾病的方法，其特征在于，包括對(duì)有需要的對(duì)象3施用有效量的權(quán)利要求30所述的組合物。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病是I型干擾素介導(dǎo)的疾病。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述I型干擾素是干擾素a。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，所述I型干擾素介導(dǎo)的疾病與I型干擾素受體有關(guān)。
35.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是AIDS的HIV感染。
36.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
37.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是斯耶格倫氏綜合征。
38.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是肌炎。
39.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是炎性肌炎。
40.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是多發(fā)性肌炎。
41.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是皮肌炎。
42.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是包涵體肌炎。
43.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是青少年肌炎。
44.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是特發(fā)性炎性肌炎。
45.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是血管炎。
46.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是肉樣瘤病.
47.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)選自炎性腸病、多發(fā)性化、自身免疫性甲狀腺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、腎小球腎炎、和移植物抗宿主病。
48.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是牛皮癬或其導(dǎo)致的病況。
49.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病或失調(diào)是移植排斥或移植物抗宿主病。
50.如權(quán)利要求31所述的抗體，其特征在于，所述疾病或失調(diào)選自格雷夫癥、橋本氏 甲狀腺炎、克羅恩氏病、牛皮癬、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、交感神經(jīng)性眼炎、自身免疫性卵巢炎、自 身免疫性睪丸炎、自身免疫性淋巴增生綜合征、抗磷脂綜合征、斯耶格倫氏綜合征、硬皮病、 艾迪生病、多內(nèi)分泌腺缺陷綜合征、Guillan-Barre綜合征、免疫性血小板減少性紫癜、惡 性貧血、重癥肌無(wú)力、原發(fā)性膽汁性肝硬化、混合性結(jié)締組織病、白癜風(fēng)、自身免疫性葡萄膜 炎、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性血小板減少癥、乳糜瀉、皰疹樣皮炎、自身免疫性肝 炎、天皰瘡、尋常天皰瘡、落葉型天皰瘡、大皰性類天皰瘡、自身免疫性心肌炎、自身免疫性 血管炎、斑禿、自身免疫性動(dòng)脈粥樣硬化、貝切特氏病、自身免疫性脊髓病、自身免疫性血友 病、自身免疫性間質(zhì)性膀胱炎、自身免疫性尿崩癥、自身免疫性子宮內(nèi)膜異位、復(fù)發(fā)性多發(fā) 軟骨炎、強(qiáng)直性脊柱炎、自身免疫性蕁麻疹、皮肌炎、密勒_費(fèi)雪綜合征、IgA腎病、肺出血腎 炎綜合征、和妊娠皰疹。
51.如權(quán)利要求31-50任一所述的方法，其特征在于，還包括施用至少一種手段，所述 手段選自光療、糖皮質(zhì)激素、潑尼松、NSAIDS、血漿去除術(shù)、免疫抑制劑、氨甲蝶呤、視黃酸、 硫鳥(niǎo)嘌呤、霉酚酸酯、反丁烯二酸酯、環(huán)磷酰胺、咪唑硫嘌呤、環(huán)孢素、和免疫球蛋白。
52.如權(quán)利要求31-51任一所述的方法，其特征在于，還包括施用至少一種藥物，選自阿法賽特(AMEVIVE )、依那西普(ENBREL, )、阿達(dá)木單抗(HUMIRA )、英夫利昔單 抗(REMICADE )、貝利單抗(LYMPH0STATB )、利妥昔單抗(RITUXAN )、和依法珠單抗 (RAPTIVA )。
53.一種晶體，其特征在于，包含人IgG Fc區(qū)，其中所述人IgG Fc區(qū)包含至少一個(gè)氨基 酸取代，選自如Kabat中列出的EU索引編號(hào)的L234F、L235E和P331S，其中所述片段與未 修飾的Fc區(qū)相比，顯示對(duì)至少一種Fc配體的親和力下降。
54.如權(quán)利要求53所述的晶體，其特征在于，所述人IgGFc區(qū)包含氨基酸取代L234F、 L235E 和 P331S。
55.如權(quán)利要求53所述的晶體，其特征在于，它是衍射質(zhì)量的。
56.如權(quán)利要求53所述的晶體，其特征在于，它是天然晶體。
57.如權(quán)利要求53所述的晶體，其特征在于，具有a=50.18±0.2入，b=147.30±0.2A5 和c=75.47 ±0.2 A的正交單元晶胞。
58.如權(quán)利要求53所述的晶體，其特征在于，具有C222i的空間群。
59.一種修飾的單克隆抗體，其特征在于，所述抗體在Fc區(qū)中包含如Kabat所述的EU 索引號(hào)編號(hào)的氨基酸取代L234F，L235E和P331S，其中所述抗體與未修飾抗體相比，顯示對(duì) 至少一種Fc配體的親和力下降。
60.一種融合蛋白，其特征在于，包含修飾的Fc區(qū)，其中所述Fc區(qū)包含如Kabat所述的 EU索引編號(hào)的氨基酸取代L234F，L235E和P331S，其中所述Fc區(qū)與Fc區(qū)相比，顯示對(duì)至少 一種Fc配體的親和力下降。
61.一種制備權(quán)利要求1-23或59任一所述的抗體的方法。
62.如權(quán)利要求1-23或59任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體是內(nèi)化抗體。
63.如權(quán)利要求60所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是內(nèi)化融合蛋白。
64.如權(quán)利要求63所述的蛋白質(zhì)，其特征在于，所述融合蛋白與IFNARl特異性結(jié)合。
65.如權(quán)利要求1-23、59或62任一所述的抗體，其特征在于，與所述未修飾的抗體相 比，所述抗體顯示減弱或消除的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。
66.如權(quán)利要求1-23、59或62任一所述的抗體，其特征在于，所述抗體與所述未修飾的 抗體相比，顯示減弱或消除的補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CDC)。
67.如權(quán)利要求1-23、59或62任一所述的抗體，其特征在于，與所述未修飾的抗體相 比，所述抗體顯示減弱或消除的ADCC和⑶C。
全文摘要
本發(fā)明提供了對(duì)Fc受體和/或配體親和力下降的抗-IFNAR1抗體，以及制備和使用這些抗體的方法。
文檔編號(hào)C12P21/08GK101952454SQ200980104557
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2009年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月8日
發(fā)明者A·科伊爾, H·吳, P·基納, R·西波蒂 申請(qǐng)人:米迪繆尼有限公司