專利名稱：用于維生素d缺乏癥和相關(guān)障礙的方法、組合物、用途和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開(kāi)大體上涉及用于診斷和治療疾病和障礙的方法，以及其所用的相關(guān)組合物 和試劑盒。更具體地，本公開(kāi)涉及用于診斷和治療分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥和其易 感性的方法、相關(guān)的組合物和試劑盒，和用于預(yù)防和治療相關(guān)障礙的方法。
背景技術(shù)：
人類從飲食來(lái)源和7-去羥基膽固醇向維生素D3的UV光依賴性轉(zhuǎn)化中獲得維生 素D。維生素D3(或膽鈣化留醇)和維生素D2(或麥角鈣化留醇)統(tǒng)稱為“維生素D”，它們 是活性維生素D激素的脂溶性前體。維生素D3和維生素&的代謝主要發(fā)生在肝中，以分別 產(chǎn)生25-羥基維生素D3和25-羥基維生素D2 (文中統(tǒng)稱為“25-羥基維生素D”)，它們?yōu)楦?自活性維生素D激素的激素原。這些維生素D激素原的進(jìn)一步代謝活化主要通過(guò)細(xì)胞色素 P450酶(CYP27B)發(fā)生在腎中。CYP27B也在表達(dá)在許多腎外維生素D靶組織中，且可實(shí)現(xiàn) 25-羥基維生素D的局部活化，以產(chǎn)生自分泌和/或旁分泌激素響應(yīng)。具體地，25-羥基維 生素D3代謝為活性激素1，25- 二羥基維生素D3 (或骨化三醇)，且25-羥基維生素&代謝 為活性激素1，25- 二羥基維生素& (文中統(tǒng)稱為“ 1，25- 二羥基維生素D”)。維生素D激素經(jīng)由與維生素D受體(VDR)的相互作用調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過(guò)程。特別地， 維生素D激素通過(guò)小腸控制膳食鈣的吸收和通過(guò)腎控制鈣的再吸收來(lái)調(diào)節(jié)血液鈣水平。過(guò) 量的激素水平可導(dǎo)致尿鈣(高鈣尿癥)、血液鈣(高鈣血癥)和血液磷(高磷血癥)的異常 升高。另一方面，維生素D缺乏癥與繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥、甲狀旁腺增生、低鈣血癥、 慢性腎病(CKD)和代謝性骨病如囊性纖維性骨炎、骨軟化、軟骨病、骨質(zhì)疏松和骨骼外鈣化 有關(guān)。已報(bào)導(dǎo)維生素D激素對(duì)甲狀旁腺激素系統(tǒng)具有許多與其“經(jīng)典”作用不同的“非經(jīng)典” 生物學(xué)作用。已報(bào)導(dǎo)此類作用與細(xì)胞增殖、包括腎素-血管緊張素系統(tǒng)的免疫系統(tǒng)和心血 管系統(tǒng)、血壓、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化、抗纖維化、血紅細(xì)胞形成、毛發(fā)生長(zhǎng)和肌肉功能有關(guān)。維生素D激素原、激素和類似物的分解代謝通過(guò)細(xì)胞色素P450酶的作用來(lái)完成。 細(xì)胞色素P450酶CYPM催化各種維生素D化合物分解代謝中的第一步。特別地，例如CYPM 進(jìn)行25-羥基維生素D3向?qū)Γ?5- 二羥基維生素D3的轉(zhuǎn)化和1，25- 二羥基維生素D3 (骨化三 醇)向1，對(duì)，25-三羥基維生素D3的轉(zhuǎn)化，最終產(chǎn)生維生素D3-23羧酸(calcitroic acid)。 CYP24也可23位羥基化，導(dǎo)致最終代謝產(chǎn)物1，25- 二羥基維生素D3_26，23-內(nèi)酯的生成。由 II相分解代謝酶的進(jìn)一步加工最終將維生素D化合物從身體中清除。

發(fā)明內(nèi)容
本公開(kāi)一方面為診斷患者中分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性的方法，包 括如通過(guò)從患者中獲取組織、血液或細(xì)胞樣本和分析所述樣本的CYPM表達(dá)和/或活性或 其指標(biāo)，來(lái)測(cè)定患者的CYPM表達(dá)和/或活性水平或其指標(biāo)水平，其中CYPM表達(dá)和/或活 性的異常升高預(yù)示分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述患 者的維生素D充足，且所述方法進(jìn)一步包括通過(guò)針對(duì)異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性，對(duì) 患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述患 者缺乏維生素D，且所述方法進(jìn)一步包括通過(guò)針對(duì)異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性，對(duì)患 者施用CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。本公開(kāi)另一方面為診斷患者中分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性的方法， 包括如通過(guò)從患者中獲取組織、血液或細(xì)胞樣本和分析所述樣本的FGF23濃度來(lái)測(cè)定患者 的FGF23水平，其中FGF23濃度的異常升高預(yù)示分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性。 所述方法可進(jìn)一步包括本文所述治療或預(yù)防方法的任意一種。本公開(kāi)另一方面為診斷和治療患者的方法，包括測(cè)定患者的CYPM表達(dá)和/或活 性，或CYPM表達(dá)和/或活性的指標(biāo)，和對(duì)響應(yīng)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的患者施用 CYP24抑制劑。所述方法可進(jìn)一步包括從所述患者中獲取組織、血液或細(xì)胞樣本，和分析所 述樣本的CYPM表達(dá)和/或活性或其指標(biāo)。優(yōu)選地，在測(cè)定CYPM表達(dá)和/或活性或其指標(biāo)時(shí)，所述患者未在接受活性維生素 D治療。優(yōu)選地，所述患者未患有癌癥。所述方法可進(jìn)一步包括測(cè)定所述患者的25-羥基維生素D水平，和通過(guò)對(duì)維生素 D缺乏患者施用所述CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。所述方法可進(jìn)一步包括對(duì)所述患者施用維生素D前激素、激素原和前述任一種的 類似物中的一種或多種，優(yōu)選選自膽鈣化留醇、麥角鈣化留醇、25-羥基維生素D2、25-羥基 維生素D3和它們的組合的化合物。例如，所述治療可包括施用25-羥基維生素D3。優(yōu)選地， 所述治療包括施用治療有效量的25-羥基維生素D3,以將所述患者的25-羥基維生素D水 平恢復(fù)到至少30ng/mL。所述方法可進(jìn)一步包括測(cè)定所述患者的25-羥基維生素D水平，和通過(guò)對(duì)維生素 D充足的患者施用所述CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。在一種類型的實(shí)施方式中，所述患者具有如選自1期和2期，或選自3期和4期的 慢性腎病。在一種類型的實(shí)施方式中，所述患者具有甲狀旁腺功能亢進(jìn)。例如，所述患者的 PTH水平高于患者CKD期的目標(biāo)范圍。在一種類型的實(shí)施方式中，所述患者缺乏1，25_ 二羥基維生素D3。所述方法可進(jìn)一步包括避免活性維生素D治療，或者，如果所述患者正在接受活 性維生素D治療，則降低活性維生素D治療的水平，或停止活性維生素D治療。所述方法可進(jìn)一步包括對(duì)所述患者施用足以增加1，25_ 二羥基維生素D水平的量 的25-羥基維生素D。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述CYPM抑制劑也是維生素D受體激動(dòng)劑。
所述方法可包括測(cè)定所述患者中作為CYPM表達(dá)和/或活性水平指標(biāo)的FGF23的 水平，其中FGF23水平大于正常范圍上限預(yù)示異常升高的CYPM表達(dá)。例如，F(xiàn)GF23水平為 正常范圍上限的至少2倍、至少4倍、至少10倍或至少40倍預(yù)示異常升高的CYPM表達(dá)。所述方法可包括測(cè)定血清或其它體液中CYPM的一種或多種分解代謝副產(chǎn)物的 濃度，以作為CYPM活性指標(biāo)。所述方法可進(jìn)一步包括測(cè)定血清或其它體液中CYPM的一種或多種分解代謝副 產(chǎn)物的一種或多種前體的濃度，并計(jì)算CYPM的一種或多種分解代謝副產(chǎn)物濃度與一種或 多種對(duì)應(yīng)前體的血清濃度的比例，以作為CYPM活性指標(biāo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM的分解代謝副產(chǎn)物包括M，25_ 二羥基維生素D和/或 1,24,25-三羥基維生素D。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM活性測(cè)定包括測(cè)定選自由對(duì)，25-二羥基維生素D與 25-羥基維生素D的比例和1，對(duì)，25-三羥基維生素D與1，25-二羥基維生素D的比例組成 的組中的一個(gè)或多個(gè)比例。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYP24的分解代謝副產(chǎn)物包括選自由帕立骨化醇、度骨化醇、 22-奧沙骨化三醇、二氫速留醇和沈，26，沈，27，27，27-六氟骨化三醇(氟骨三醇)組成的 組中的一種或多種成員的24-羥基化和/或23-羥基化分解代謝副產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM表達(dá)和/或活性或其指標(biāo)的測(cè)定在短期或長(zhǎng)期施用 CYP24底物之后。在此實(shí)施方式中，如下所述，優(yōu)選該CYPM底物不為雙重作用抑制劑和VDR 激動(dòng)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，一種或多種測(cè)定包括血清濃度。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM表達(dá)的測(cè)定包括測(cè)定組織、血漿或細(xì)胞中的CYPM mRNA。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM表達(dá)的測(cè)定包括測(cè)定組織、血漿或細(xì)胞中的CYPM蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM活性的測(cè)定包括測(cè)定組織、血漿或細(xì)胞中的CYPM的酶 活性。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組織或細(xì)胞選自由腎組織、肝組織、甲狀旁腺組織、外周 血單核細(xì)胞和口部細(xì)胞組成的組中。在一個(gè)實(shí)施方式中，異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性是正常CYPM表達(dá)和/或 活性的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少10倍或至少100倍。本公開(kāi)另一方面包括試劑盒，所述試劑盒包括用于測(cè)定一種或多種CYPM分解代 謝副產(chǎn)物水平的試劑，和實(shí)施本文所述方法的說(shuō)明書(shū)。所述試劑盒可進(jìn)一步包括用于測(cè)定 一種或多種對(duì)應(yīng)前體水平的試劑。本公開(kāi)另一方面包括試劑盒，所述試劑盒包括用于測(cè)定CYPM蛋白質(zhì)水平的試 劑，和實(shí)施本文所述方法的說(shuō)明書(shū)。所述試劑可包括固定的抗CYPM抗體和標(biāo)記的抗CYPM 抗體。本公開(kāi)另一方面包括用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥的藥物制劑，所述藥物制劑 包括有效量的CYPM抑制劑。所述制劑可進(jìn)一步包括有效量的25-羥基維生素D3。本公開(kāi)另一方面包括用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)的藥物制劑，所述藥物制劑包括有效量的CYPM抑制劑。所述制劑可進(jìn)一步包括有效量的25-羥基維生素D3。所述 藥物制劑可用于治療慢性腎病如3期或4期CKD繼發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)。本公開(kāi)另一方面包括用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥的CYPM抑制劑。本公開(kāi)另一方面包括用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)，如慢性腎病如3期或4 期CKD繼發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)的CYPM抑制劑。本公開(kāi)另一方面包括CYPM抑制劑在制備用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥的藥物 中的應(yīng)用。本公開(kāi)另一方面包括CYPM抑制劑在制備用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)，如 慢性腎病如3期或4期CKD繼發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)的藥物中的應(yīng)用。對(duì)于本文所述的組合物、方法、應(yīng)用和試劑盒，優(yōu)選特征如組分、其組成范圍、替代 物、病癥(如患病群體的特征)和方法步驟可選自本文提供的各種實(shí)施例。從以下詳細(xì)說(shuō)明并結(jié)合附圖，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將明白其它方面和優(yōu)點(diǎn)。盡管 本發(fā)明方法可有各種形式的實(shí)施方式，但是以下說(shuō)明包括具體實(shí)施方式
，應(yīng)理解本公開(kāi)是 說(shuō)明性的，且并非意在將本發(fā)明限制為本文所述的具體實(shí)施方式
。


為了進(jìn)一步幫助理解本發(fā)明，附上九個(gè)附圖。圖1顯示了在用富含腺嘌呤的食物或?qū)φ帐澄镂桂B(yǎng)的大鼠中，血清甲狀旁腺激素 (PTH)水平在隨時(shí)間變化的圖。圖2顯示了在用三種不同維生素D化合物處理1周的喂腺嘌呤的大鼠中，血清甲 狀旁腺激素(PTH)水平的圖。圖3顯示了在喂腺嘌呤的食物和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的大鼠中，以及在用三種不同維 生素D化合物處理的用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物中，1，25-(0H)2-D3(骨化三醇)水平的圖。圖4顯示了來(lái)自用腺嘌呤喂養(yǎng)和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的大鼠、以及來(lái)自用三種不同維 生素D化合物處理的用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物的腎組織中CYPM表達(dá)的圖。RFI表示相對(duì)誘導(dǎo) 倍數(shù)(relative fold induction)。圖5顯示了來(lái)自用腺嘌呤喂養(yǎng)和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的大鼠、以及來(lái)自用三種不同維 生素D化合物處理的用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物的甲狀旁腺組織中CYPM表達(dá)的圖。圖6顯示了在用腺嘌呤喂養(yǎng)和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的大鼠中，以及在用三種不同維生 素D化合物處理的用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物中，血清FGF23水平的圖。圖7顯示了來(lái)自用腺嘌呤喂養(yǎng)和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的大鼠的腎組織中FGF23水平和 骨鈣蛋白水平的圖。圖8顯示了在用維生素D (25-羥基維生素仏和25-羥基維生素D3)處理2周的大 鼠中，相對(duì)CYPM誘導(dǎo)的圖。圖9顯示了在響應(yīng)于安慰劑和(5Z，7E，16Z，23E) - (1S，3R) -25-降-25-叔丁基磺 ?；?9，10-斷(seco)_5，7，10(19)，16，23-膽甾五烯(cholestapentaene) _1，3_ 二醇給藥 的人中，25-0H-D水平的變化。圖10顯示了在正常和腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥大鼠的腎組織中相對(duì)CYPM誘導(dǎo)的圖， 此圖顯示了 CYPM的基礎(chǔ)表達(dá)(載體)和1，25-二羥基維生素D3(l α，25 (OH)2D3)誘導(dǎo)的CYP24的表達(dá)。圖11顯示了在正常和腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥大鼠的甲狀旁腺組織中相對(duì)CYPM誘 導(dǎo)的圖，此圖顯示了 CYPM的基礎(chǔ)表達(dá)(載體)和1，25-二羥基維生素D3(l α，25 (OH)2D3) 誘導(dǎo)的CYPM的表達(dá)。圖12顯示了在正常大鼠、腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥大鼠和伴隨產(chǎn)生了維生素D缺乏癥 的惡化的用1，25_ 二羥基維生素D3處理的腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥大鼠中CYPM和CYP27B1的 相對(duì)表達(dá)。圖13顯示了在正常大鼠和采用維生素D缺乏食譜的正常大鼠中，以及在食物正常 和食物缺乏維生素D的腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥大鼠之間，CYP24和CYP27B1的相對(duì)表達(dá)。圖14顯示了在用1，25-二羥基維生素D3單獨(dú)孵育或用1，25-二羥基維生素D3和 CYP24抑制劑一起孵育的HEK細(xì)胞中，CYP24表達(dá)的相對(duì)誘導(dǎo)。圖15顯示了在用不同濃度的1，25-二羥基維生素D3單獨(dú)處理或用不同濃度的1， 25- 二羥基維生素D3和CYPM抑制劑一起孵育的HEK細(xì)胞中，3Η-胸腺嘧啶的摻入(％ )。圖16顯示了在用1，25-二羥基維生素D3單獨(dú)處理或用1，25-二羥基維生素D3和 FGF23 一起處理的HPKla-ras細(xì)胞中，CYP24的相對(duì)表達(dá)。圖17顯示了在正常大鼠、用缺乏維生素D的食物喂養(yǎng)的正常大鼠，和用缺乏維生 素D的食物喂養(yǎng)且用不同濃度的1，25_ 二羥基維生素D3處理的正常大鼠中，CYP24的相對(duì) 誘導(dǎo)。圖18顯示了在用添加有腺嘌呤(“腺嘌呤載體”)的正常食物喂養(yǎng)的大鼠、用添加 有腺嘌呤的缺乏維生素D的食物喂養(yǎng)的大鼠，和用添加有腺嘌呤的缺乏維生素D的食物喂 養(yǎng)且用不同濃度的25-羥基維生素D3處理的大鼠中，CYP24的相對(duì)誘導(dǎo)。圖19顯示了 25-羥基維生素D3對(duì)尿毒癥維生素D缺乏大鼠和正常維生素D缺乏 大鼠中1，25-二羥基維生素D3濃度的影響。
具體實(shí)施例方式通常將“維生素D缺乏癥”定義為人患者或其它哺乳動(dòng)物中血清25-羥基維生 素 D 7jC平低于 30ng/mL 的病癥(參見(jiàn) National Kidney Foundation guidelines, NKF, Am. J. Kidney Dis. 42 :S1_S202 (2003)，其通過(guò)引用并入本文)?！熬S生素D缺乏癥”包括“維 生素D不足”，其定義為血清25-羥基維生素D至少為16ng/mL但小于30ng/mL，“輕微”維 生素D缺乏癥，其定義為血清25-羥基維生素D為5-15ng/mL，和“嚴(yán)重”維生素D缺乏癥， 其定義為血清25-羥基維生素D小于5ng/mL。如本文所用，將術(shù)語(yǔ)“維生素D充足”定義為人患者或其它哺乳動(dòng)物中血清25-羥 基維生素D水平大于或等于30ng/mL的病癥。本文所用術(shù)語(yǔ)“有風(fēng)險(xiǎn)”通常是指具有維生素D缺乏癥相關(guān)特征或疾病的那些患 病人群。具體實(shí)例包括但不限于具有1、2、3、4或5期慢性腎病的對(duì)象；未飲用維生素D強(qiáng)化 奶的嬰兒、兒童和成人(如乳糖不耐癥對(duì)象、奶過(guò)敏的對(duì)象、不吃奶的素食者和母乳喂養(yǎng)的 嬰兒)；患有軟骨病的對(duì)象；具有黑色皮膚的對(duì)象(例如，在美國(guó)，相比于4%的白種婦女， 年齡在15和49歲間的42%的非洲裔美國(guó)婦女缺乏維生素D)；老年人(他們合成維生素D 的能力降低且也更經(jīng)常待在室內(nèi))；患有慢性或急性和嚴(yán)重病的成人(他們
更經(jīng)常待在室內(nèi)、醫(yī)院、重病特護(hù)區(qū)、特設(shè)的和輔助護(hù)理區(qū)，包括患有阿爾莫茨海 默癥或精神病的對(duì)象)；將全部暴露皮膚遮蓋的對(duì)象(如某些宗教或文化的成員)；經(jīng)常使 用遮光劑的對(duì)象(如使用防曬系數(shù)(SPF)為8的遮光劑會(huì)降低95%的維生素D產(chǎn)生，較高 的SPF值可進(jìn)一步降低維生素D)；患有脂肪吸收不良綜合癥的的對(duì)象(包括但不限于囊性 纖維化病、膽汁郁積型肝病、其它肝病、膽囊疾病、胰酶缺乏癥、Crohn' s病、炎性腸病、口炎 性腹瀉或乳糜瀉，或部分或全部胃和腸的手術(shù)切除)；患有炎性腸病的對(duì)象；患有Crohn’ s 病的對(duì)象；小腸被切除的對(duì)象；患有齒齦疾病的對(duì)象；服用包括苯妥英、磷苯妥英、苯巴比 妥、卡馬西平和利福平等增加維生素D分解代謝的藥的對(duì)象；服用包括消膽胺、考來(lái)替泊、 奧利司他、礦物油和脂肪替代物等降低維生素D吸收的藥的對(duì)象；服用包括酮康唑等抑制 維生素D活化的藥的對(duì)象；服用包括皮質(zhì)類固醇等降低鈣吸收的藥的對(duì)象；患有肥胖、糖尿 病、胰島素抵抗綜合癥、內(nèi)皮功能紊亂(沉積在身體脂肪儲(chǔ)存中的維生素D的生物利用率較 低)的對(duì)象；患有骨質(zhì)疏松的對(duì)象；絕經(jīng)后的婦女；患有心血管病、動(dòng)脈硬化和/或心力衰 竭的個(gè)體；和/或危重病住院的對(duì)象。在一個(gè)實(shí)施方式中，患者未患有癌癥?！鞍┌Y”是指存在具有癌癥引起的細(xì)胞典型 特征的細(xì)胞，如不可控的增殖、永生、轉(zhuǎn)移潛力、快速生長(zhǎng)和增殖速率以及某些特有的形態(tài) 特征。通常，癌細(xì)胞為腫瘤形式，但這類細(xì)胞可在人或動(dòng)物內(nèi)單獨(dú)存在，或可為致瘤的癌細(xì) 胞，如白血病細(xì)胞。癌癥包括但不限于乳腺癌、肺癌、支氣管癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺 癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、腦或中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、周圍神經(jīng)系統(tǒng)癌、食管癌、宮頸癌、黑色素 瘤、子宮或子宮內(nèi)膜癌、口腔或咽癌、肝癌、腎癌、睪丸癌、膽道癌、小腸或闌尾癌、唾液腺癌、 甲狀腺癌、腎上腺癌、骨肉瘤和軟骨肉瘤。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“甲狀旁腺功能亢進(jìn)”是指原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)、繼發(fā)性甲 狀旁腺功能亢進(jìn)、慢性腎病(3、4或5期)繼發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)，和維生素D缺乏癥繼 發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)。本文所用術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”和“患者”通常包括人、哺乳動(dòng)物(如狗、貓、嚙齒類、綿羊、 馬、母牛、山羊)、獸醫(yī)動(dòng)物(veterinary animals)和動(dòng)物園中的動(dòng)物(zoo animals)，優(yōu)選 人。本文所用術(shù)語(yǔ)“CYPM表達(dá)和/或活性”通常包括轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生CYPM mRNA，翻譯產(chǎn)生 CYPM蛋白質(zhì)，和轉(zhuǎn)錄和翻譯結(jié)合產(chǎn)生CYPM蛋白質(zhì)，以及直接得出的CYPM酶活性，或通過(guò) 計(jì)算CYPM產(chǎn)物與CYPM底物的比例得出的CYPM酶活性。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“維生素D化合物”通常包括維生素D前激素(如膽鈣化留醇和 麥角鈣化留醇)、維生素D激素原(如1 α -羥基維生素D3、1 α -羥基維生素D3、25_羥基維 生素D3和25-羥基維生素D2)、活性維生素D激素、前述化合物的類似物，和前述化合物的 任意組合。具體實(shí)例包括但不限于維生素D3(膽鈣化留醇)、維生素& (麥角鈣化留醇)、 25-羥基維生素D3、25_羥基維生素D2、1 α，25- 二羥基維生素D3、1 α，25- 二羥基維生素D2、 Ια，25_二羥基維生素隊(duì)和維生素D類似物(包括全部羥基和二羥基形式)，包括1，25-二 羥基-19-去甲-維生素D2、22-氧雜骨化三醇、二氫速留醇和沈，26，沈，27，27，27-六氟骨 化三醇(氟骨三醇)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“活性維生素D”和“活化的維生素D”是指至少在Ia位置上被 羥基化的維生素D化合物。活性維生素D化合物包括骨化三醇、1，25- 二羥基維生素D2、阿法骨化醇、度骨化醇、22-氧雜骨化三醇和帕立骨化醇。如本文所用，短語(yǔ)“治療有效量”是指治療或預(yù)防藥(如CYPM抑制劑或雙重作用 CYPM抑制劑和VDR激動(dòng)劑)這樣的量，所述量適用于本發(fā)明的實(shí)施方式，且當(dāng)根據(jù)所需治 療方案施用時(shí)，將會(huì)引起所需的治療或預(yù)防作用或響應(yīng)。更具體地，“治療有效量”是指有效 預(yù)防相關(guān)病癥如維生素D缺乏癥發(fā)展的量，去除、消除或延緩相關(guān)病癥如維生素D缺乏癥的 進(jìn)展的量。本領(lǐng)域技術(shù)人員有能力確定治療有效量，尤其是根據(jù)本文的詳細(xì)公開(kāi)來(lái)確定?！爸委熡行┝俊笔侵笇?shí)現(xiàn)所需效果的活性成分的量。此活性成分的毒性和治療 功效可在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)制藥過(guò)程，如通過(guò)測(cè)定LD5tl (50%群體的致死劑 量)和ED5tl (50%群體的治療有效劑量)來(lái)確定。毒性效果和治療效果之間的劑量比為治 療指數(shù)，可用LD5tl和ED5tl間的比例表示。優(yōu)選高治療指數(shù)。所得數(shù)據(jù)可用于制定人用劑量 的范圍?；钚猿煞值膭┝?jī)?yōu)選在包括ED5tl且毒性很小或無(wú)毒性的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。劑量可 根據(jù)所用劑型和所用給藥途徑在此范圍內(nèi)變化。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“包括”是指除所詳述的那些外，還可能包括其它試劑、成分、步 驟或特征。本公開(kāi)一方面提供了用于診斷分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的方法。此方法包 括測(cè)定維生素D缺乏患者中CYPM表達(dá)和/或活性，和將CYPM表達(dá)和/或活性的異常升 高與分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥相關(guān)聯(lián)。針對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性的異常升高，此 方法可進(jìn)一步包括對(duì)維生素D缺乏的患者施用CYPM抑制劑。本公開(kāi)一方面提供了用于診斷分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性的方法。 此方法包括測(cè)定患者中CYPM表達(dá)和/或活性，和將CYPM表達(dá)和/或活性的異常升高與 分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性相關(guān)聯(lián)。針對(duì)維生素D充足患者中CYPM表達(dá)和 /或活性的異常升高，此方法可進(jìn)一步包括對(duì)維生素D充足的患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑 制和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。針對(duì)維生素D缺乏患者中CYPM表達(dá)和/或活性的異常升 高，此方法可進(jìn)一步包括對(duì)維生素D缺乏的患者施用CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。本公開(kāi)另一方面提供了用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥和/或甲狀旁腺功能亢進(jìn) 的方法。此方法包括測(cè)定患者中的CYPM表達(dá)和/或活性或其指標(biāo)，并針對(duì)CYPM表達(dá)和/ 或活性異常升高的患者施用CYPM抑制劑。此方法可包括通過(guò)對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異 常升高的維生素D缺乏的患者施用CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。此方法可進(jìn)一步 包括通過(guò)對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的維生素D充足的患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑 制和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。此方法可包括通過(guò)對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的患 者施用CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)。此方法也可包括通過(guò)對(duì)CYPM 表達(dá)和/或活性異常升高的患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防1，25- 二羥基維生素 D缺乏。本公開(kāi)另一方面提供了用于治療或預(yù)防患者中維生素D缺乏癥的方法。此方法包 括測(cè)定患者中的CYPM表達(dá)和/或活性，并針對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的患者施 用CYPM抑制劑。此方法進(jìn)一步包括針對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的患者，如通過(guò) 外界影響，例如通過(guò)降低、避免(停止)或中止施用活性維生素D化合物來(lái)降低、避免(停 止)或中止維生素D結(jié)合受體(VDR)的活化，以避免加劇CYPM水平的增加和維生素D缺 乏癥。此方法可進(jìn)一步包括對(duì)患者施用維生素D補(bǔ)充劑，例如通過(guò)對(duì)患者施用25-羥基維生素IK25-羥基維生素D3)。此方法可進(jìn)一步包括測(cè)定患者中完整甲狀旁腺激素(PTH)的 水平和25-羥基維生素D水平。在一個(gè)實(shí)施方式中，患者具有異常升高的PTH水平和正常 的25-羥基維生素D水平。在另一個(gè)實(shí)施方式中，患者具有異常升高的PTH水平和異常降 低的25-羥基維生素D水平(如維生素D缺乏癥)。在一個(gè)實(shí)施方式中，患者具有正常的 PTH水平和異常降低的25-羥基維生素D水平。此方法可進(jìn)一步包括測(cè)定患者的腎小球?yàn)V 過(guò)率(GFR)以確定慢性腎病的時(shí)期。在一個(gè)實(shí)施方式中，患者將具有選自1至5期的CKD。 在另一個(gè)實(shí)施方式中，患者將具有選自1和2期的CKD。在另一個(gè)實(shí)施方式中，患者將具有 選自3和4期的CKD。本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方式提供了通過(guò)測(cè)定患者中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-23 (FGF23) 的水平來(lái)測(cè)定CYPM活性。另一個(gè)實(shí)施方式提供了通過(guò)測(cè)定CYPM的一種或多種分解代 謝副產(chǎn)物(包括但不限于M，25-二羥基維生素D3、25-羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酯、1，24， 25-三羥基維生素D3、24，25- 二羥基維生素&或1，24，25-三羥基維生素D2,或CYPM活性 作用于包括維生素D3_23羧酸或1，25-(0H)2D346，23-內(nèi)酯的維生素D3代謝物而產(chǎn)生的終 產(chǎn)物)，來(lái)測(cè)定CYPM表達(dá)和/或活性。另一個(gè)實(shí)施方式提供了通過(guò)測(cè)定CYPM的一種或多 種分解代謝副產(chǎn)物與一種或多種相應(yīng)前體的比例(如對(duì)，25- 二羥基維生素D與25-羥基 維生素D的比例，或1，24，25-三羥基維生素D與1，25- 二羥基維生素D的比例)，來(lái)測(cè)定 CYP24活性。另一個(gè)實(shí)施方式提供了通過(guò)測(cè)定患者中CYPM mRNA的水平、患者中CYPM蛋 白質(zhì)的水平和/或患者中CYPM酶活性的水平來(lái)測(cè)定CYPM表達(dá)。另一個(gè)實(shí)施方式提供了 通過(guò)測(cè)定其它CYPM底物的CYPM代謝物來(lái)測(cè)定CYPM活性，所述其它CYPM底物可被引 入(如通過(guò)注射)、被CYPM代謝并隨后被測(cè)定。本公開(kāi)另一方面提供了用于診斷分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的試劑盒。在一 個(gè)實(shí)施方式中，試劑盒包括用于測(cè)定CYPM mRNA、蛋白質(zhì)或酶促活性的試劑或其它設(shè)備，和 例如根據(jù)本文公開(kāi)方法使用的說(shuō)明書(shū)。除非另有說(shuō)明，希望本文公開(kāi)的診斷試劑盒和方法包括含下述(包括圖中所示的 那些)其它可選成員、特征和步驟中任意一種或多種組合的多個(gè)實(shí)施方式。也清楚地明白本文所用任何數(shù)值包括從下限值至上限值的全部值，即認(rèn)為在所列 舉的最低值和最高值之間全部可能的數(shù)值組合清楚地表述在本申請(qǐng)中。例如，如果稱濃度 范圍或有益效果范圍為至50%，意思是諸如2%至40^^10%至30%或至3%等數(shù) 值清楚地列舉在本申請(qǐng)中。這些僅是優(yōu)選的示例。在一個(gè)方面，本公開(kāi)提供了診斷分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的方法。此方法 包括測(cè)定維生素D缺乏患者中CYPM表達(dá)和/或活性，和將CYPM表達(dá)和/或活性的異常 升高與分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥相關(guān)聯(lián)。針對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性的異常升高， 此方法可進(jìn)一步包括對(duì)維生素D缺乏的患者施用CYPM抑制劑。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)提供了診斷分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性的方 法。此方法包括測(cè)定患者中CYPM表達(dá)和/或活性，和將CYPM表達(dá)和/或活性的異常升 高與分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性相關(guān)聯(lián)。針對(duì)維生素D充足患者中CYPM表 達(dá)和/或活性的異常升高，此方法可進(jìn)一步包括對(duì)維生素D充足的患者施用CYPM抑制劑 來(lái)抑制和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。針對(duì)維生素D缺乏患者中CYPM表達(dá)和/或活性的異 常升高，此方法可進(jìn)一步包括對(duì)維生素D缺乏的患者施用CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。另一方面，本公開(kāi)提供了用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥和/或甲狀旁腺功能亢 進(jìn)的方法。此方法包括測(cè)定患者中的CYPM表達(dá)和/或活性或其指標(biāo)，并針對(duì)CYPM表達(dá) 和/或活性異常升高的患者施用CYPM抑制劑。此方法可包括通過(guò)對(duì)CYPM表達(dá)和/或活 性異常升高的維生素D缺乏的患者施用CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。此方法可包 括通過(guò)對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的維生素D充足的患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑制 和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。此方法可包括通過(guò)對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的患者 施用CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)。此方法也可包括通過(guò)對(duì)CYPM表 達(dá)和/或活性異常升高的患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防1，25- 二羥基維生素D 缺乏。維生素D缺乏癥與許多其它疾病和障礙有關(guān)，包括繼發(fā)甲狀旁腺功能亢進(jìn)、甲狀 旁腺增生、低鈣血癥、牛皮癬、慢性腎病(CKD)和代謝性骨病，如骨纖維發(fā)育不全、囊性纖維 性骨炎、骨軟化癥、軟骨病、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少、骨硬化、腎性骨營(yíng)養(yǎng)不良癥和骨骼外鈣 化。根據(jù)本公開(kāi)的方法也可用于治療或預(yù)防與維生素D缺乏癥有關(guān)的疾病或障礙。當(dāng)前護(hù)理CKD患者的標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為應(yīng)測(cè)定患者的PTH和25-羥基維生素D水平。在3 期和4期患者中，如果血漿完整甲狀旁腺(PTH)水平升高(如高于CKD時(shí)期的目標(biāo)范圍) 且25-羥基維生素D降低(< 30ng/ml)，隨后用維生素D2補(bǔ)充劑(麥角鈣化甾醇)治療患 者。參見(jiàn)慢性腎病中骨代謝和疾病的國(guó)家腎基金會(huì)K/D0QI臨床實(shí)踐標(biāo)準(zhǔn)“Guideline 7 Prevention And Treatment Of Vitamin D Insufficiency And Vitamin D Deficiency In People With CKD (Algorithm 1) ”，Am J Kidney Dis 42 :S1-S202, 2003 (Suppl 3)，其通過(guò) 引用并入本文。對(duì)于CKD 3期(GFR范圍30-59ml/min/l. 73m2)，目標(biāo)PTH水平為35_70pg/ ml (3. 85-7. 7pmol/L)。對(duì)于 CKD 4 期(GFR 范圍 15-29ml/min/l. 73m2)，目標(biāo) PTH 水平為 70-110pg/ml(7. 7-12. lpmol/L)。另一方面，如果PTH水平高于CKD時(shí)期的目標(biāo)范圍，且25-羥基維生素D的血清水 平為> 30ng/ml，隨后用活性維生素D激素(如骨化三醇、阿法骨化醇或度骨化醇)治療患 者。參見(jiàn)慢性腎病中骨代謝和疾病的國(guó)家腎基金會(huì)K/D0QI臨床實(shí)踐指南“Guideline 8A Active Vitamin D Therapy In Stages 3 And 4 CKD(Algorithm 2)，，，Am J Kidney Dis 42 :S1-S202, 2003 (Suppl 3)，其通過(guò)引用并入本文。不受任何特定理論束縛，圖12顯示了如果25-羥基維生素D的水平正常，按照指 南用活性維生素D激素治療將增加CYPM的水平，因此盡管降低了 PTH水平，但將加劇維生 素D缺乏癥。在患有慢性腎病且PTH水平升高的患者中，CYPM活性過(guò)高應(yīng)通過(guò)(a)使用 CYP24抑制劑和/或(b)避免進(jìn)一步加劇CYPM水平的增加和維生素D缺乏癥來(lái)控制。因此，本公開(kāi)另一方面提供了用于治療或預(yù)防患者中慢性腎病(優(yōu)選3和4期) 繼發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)的方法。此方法包括測(cè)定患者中的CYPM表達(dá)和/或活性，并針 對(duì)CYPM表達(dá)和/或活性異常升高的患者施用CYPM抑制劑。此方法優(yōu)選進(jìn)一步包括通過(guò) 避免施用活性維生素D來(lái)避免CYPM水平增加和維生素D缺乏癥(如果有的話)的加劇。 此方法可進(jìn)一步包括對(duì)患者施用維生素D補(bǔ)充劑，優(yōu)選25-羥基維生素D (如25-羥基維生 素1)3)。此方法可進(jìn)一步包括測(cè)定患者中25-羥基維生素D水平。在一個(gè)實(shí)施方式中，患者 具有異常升高的PTH水平和正常的25-羥基維生素D水平。在另一個(gè)實(shí)施方式中，患者具有異常升高的PTH水平和異常降低的25-羥基維生素D水平。在另一個(gè)實(shí)施方式中，患者 具有正常的PTH水平和異常降低的25-羥基維生素D水平。此方法可進(jìn)一步包括測(cè)定患者 的腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)以確定慢性腎病的時(shí)期。在一個(gè)實(shí)施方式中，不束縛于任何特定理論，將FGF23水平用作CYPM表達(dá)和/或 活性的指標(biāo)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，不束縛于任何特定理論，與任何特定原因無(wú)關(guān)(即無(wú)論 是否通過(guò)CYPM的分解代謝)，升高的FGF23本身作為維生素D缺乏癥易感性的標(biāo)志。從患 者獲得的生物樣本中FGF23的水平可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種技術(shù)來(lái)測(cè)定。例如， 完整FGF-23(iFGF23)和中間C末端FGF-23 (cFGF23)的濃度可使用購(gòu)自IMMUTOPICS (San Clemente, CA, USA)的ELISA試劑盒測(cè)定。雖然濃度可在血漿、血清或其它體液(如唾液) 或組織中測(cè)定，但前述物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果優(yōu)選為血清濃度。對(duì)于健康的成人，正常iFGF23水 平在 0 至 90pg/mL 的范圍內(nèi)(Fliser et al. J. Am. Soc. Nephrol. 18 :2601-2608 (2007), Ibrahim et al. Int. Urol. Nephrol. 41 (1) :163-169 Q009))。對(duì)于健康的成人，正常 cFGF23 水平在 0 至 85 參考單位(RU)/mL 的范圍內(nèi)(Tebbin et al. Mayo Clin. Proc. 80(6) 745-751 (2005))。FGF23的水平大于正常范圍的上限值表示CYPM表達(dá)的異常升高。FGF23 的水平距正常范圍的上端越遠(yuǎn)，與CYPM表達(dá)異常升高的關(guān)聯(lián)度越大。根據(jù)本文所述的方 法，升高的FGF23將至少為正常FGF23的2倍，如3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或1000 倍。在另一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM活性通過(guò)測(cè)定CYPM的一種或多種分解代謝副產(chǎn)物 的水平來(lái)測(cè)定。從患者獲得的生物樣本中CYPM分解代謝副產(chǎn)物的水平可通過(guò)本領(lǐng)域技 術(shù)人員已知的各種技術(shù)來(lái)測(cè)定。例如，CYPM分解代謝副產(chǎn)物可通過(guò)免疫分析，如酶聯(lián)免 疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、免疫熒光分析等來(lái)測(cè)定。測(cè)定CYPM副產(chǎn)物如 25-羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酯或1，25_ 二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酯的另一種方法將利 用它們與天然維生素D結(jié)合蛋白如維生素結(jié)合蛋白(DBP)或維生素D受體的高親和性。這 類蛋白質(zhì)也可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來(lái)修飾，以對(duì)這類維生素D產(chǎn)物具有更高的 親和性或選擇性。與目標(biāo)維生素D代謝物具有親和性的合成抗體或蛋白質(zhì)也可使用如噬菌 體展示或酵母展示等技術(shù)來(lái)產(chǎn)生，且可加入試劑盒中以測(cè)定微生物D代謝物和CYPM分解 代謝副產(chǎn)物的濃度。測(cè)定CYPM分解代謝副產(chǎn)物的其它技術(shù)包括高效液相色譜(HPLC)聯(lián) 用紫外-可見(jiàn)光光譜、熒光光譜、質(zhì)譜等。CYPM活性也可通過(guò)測(cè)定CYPM的一種或多種分 解代謝副產(chǎn)物與一種或多種相應(yīng)前體的比例來(lái)測(cè)定。CYPM分解代謝副產(chǎn)物包括24-羥基 化的天然和合成維生素D化合物。天然CYPM分解代謝副產(chǎn)物的實(shí)例包括M，25- 二羥基 維生素D3、1，24, 25-三羥基維生素D3、24，25- 二羥基維生素D2和1，24, 25-三羥基維生素 D2。CYPM的其它產(chǎn)物也可被23-羥基化，如25-羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酯或1，25_ 二羥 基維生素D3_26，23-內(nèi)酯。CYPM分解代謝副產(chǎn)物的其它實(shí)例包括對(duì)合成的維生素D化合 物進(jìn)行24-羥基化獲得的產(chǎn)物。合成的維生素D化合物包括帕立骨化醇(ZEMPLAR )、度 骨化醇(HECT0R0L )、22_氧雜骨化三醇、阿法骨化醇和沈，26，沈，27，27，27-六氟骨化三 醇(氟骨三醇)。雖然濃度可在血清或其它體液(如唾液)中測(cè)定，但前述物質(zhì)的測(cè)定優(yōu)選 為測(cè)定血清濃度。測(cè)定可在短期或長(zhǎng)期施用CYPM底物之后進(jìn)行。CYP24分解代謝副產(chǎn)物的對(duì)應(yīng)前體化合物包括如25-羥基維生素D3、1，25- 二羥基 維生素D3、25-羥基維生素&和1，25- 二羥基維生素D2。對(duì)應(yīng)前體化合物的水平可與CYPM催化分解副產(chǎn)物一起測(cè)定，且可通過(guò)CYPM的一種或多種分解代謝副產(chǎn)物與一種或多種相 應(yīng)前體的比例來(lái)獲得CYPM活性的值。例如，可測(cè)定M，25- 二羥基維生素D與25-羥基維 生素D的比例，以及1，M，25-三羥基維生素D與1，25-二羥基維生素D的比例，且可使用 這些比例來(lái)獲得CYPM活性。雖然濃度可在血清或其它體液(如唾液)中測(cè)定，但前述物 質(zhì)的測(cè)定優(yōu)選為測(cè)定血清濃度。測(cè)定可在短期或長(zhǎng)期施用CYPM底物之后進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM表達(dá)通過(guò)測(cè)定患者中CYPM mRNA的水平來(lái)確定。從 患者獲取的生物樣本中mRNA的水平可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種技術(shù)測(cè)定。在 Northern印跡中，例如，mRNA水平可通過(guò)將放射活性或熒光標(biāo)記的探針與mRNA樣本雜交， 所述mRNA樣本經(jīng)電泳分離和/或結(jié)合到膜或其它固體支持物上。DNA微陣列技術(shù)提供了另 一種定量mRNA水平的方法，其將熒光標(biāo)記的mRNA樣本與以預(yù)定模式固定在固體支持物上 的數(shù)千DNA寡核苷酸中的數(shù)十個(gè)至數(shù)百個(gè)DNA寡核苷酸雜交。當(dāng)存在低水平的mRNA時(shí)，提 供信號(hào)放大的技術(shù)特別有用。例如，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)通過(guò)將靶mRNA轉(zhuǎn) 化為相應(yīng)的DNA分子，隨后通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增來(lái)將mRNA量化。通過(guò)使用熒光標(biāo)記的 引物，在擴(kuò)增過(guò)程中可實(shí)時(shí)檢測(cè)mRNA水平。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM表達(dá)通過(guò)測(cè)定患者中CYPM蛋白質(zhì)的水平來(lái)確定。從 患者獲取的生物樣本中蛋白質(zhì)的水平可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種技術(shù)測(cè)定。在 Western印跡中，例如，蛋白質(zhì)水平可通過(guò)檢測(cè)靶蛋白特異性抗體與蛋白質(zhì)樣本的結(jié)合來(lái)定 量，所述蛋白質(zhì)樣本經(jīng)電泳分離和/或結(jié)合到膜或其它固體支持物上。依賴于特異性抗體 與靶抗原(如CYP24)結(jié)合的分析可采用各種形式，除Western印跡(免疫印跡)外，這類 分析的實(shí)例還包括酶聯(lián)免疫分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、免疫熒光分析等。蛋白質(zhì) 水平也可通過(guò)各種染色、分光光度法和光譜檢測(cè)技術(shù)，可選地結(jié)合各種分離技術(shù)來(lái)測(cè)定。檢 測(cè)技術(shù)的實(shí)例包括考馬斯染色、銀染色、紫外可見(jiàn)光譜、熒光光譜、質(zhì)譜等。這些檢測(cè)技術(shù) 可與以下分離技術(shù)聯(lián)用，如電泳、毛細(xì)管電泳、高效液相色譜(HPLC)、快速蛋白質(zhì)液相色譜 (FPLC)、薄層層析(TLC)、用于基因定量的Luminex xMAP 倍增技術(shù)等。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM活性通過(guò)測(cè)定患者中CYPM酶活性的水平來(lái)確定。從 患者獲取的生物樣本中酶活性的水平可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種技術(shù)測(cè)定。對(duì)于 CYP24，酶活性可通過(guò)測(cè)定25-羥基維生素D3向?qū)?yīng)24-羥基化的產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化來(lái)測(cè)定。例 如，25-羥基維生素D3向24，25- 二羥基維生素D3的轉(zhuǎn)化可通過(guò)將來(lái)自患者的生物樣本與 放射活性標(biāo)記的25-羥基維生素D3底物一起孵育、將反應(yīng)產(chǎn)物通過(guò)HPLC分離，和測(cè)定相比 于總放射活性的對(duì)，25- 二羥基維生素D3峰的放射活性來(lái)分析。一方面，CYP24表達(dá)和/或活性可在維生素D缺乏或維生素D充足的患者的一種 或多種組織、血漿和細(xì)胞中測(cè)定。CYPM表達(dá)和/或活性可在通過(guò)活組織檢查獲得的組織中 測(cè)定，且所述組織可包括，例如但不限于皮膚組織、腎組織、肝組織、甲狀旁腺組織等。在一 個(gè)實(shí)施方式中，優(yōu)選腎組織。在另一個(gè)實(shí)施方式中，優(yōu)選甲狀旁腺組織。CYPM表達(dá)和/或 活性可在細(xì)胞中測(cè)定，所述細(xì)胞包括獲得自血液的細(xì)胞，如外周血單核細(xì)胞，和從組織拭取 獲得的細(xì)胞，如口腔細(xì)胞。在本文方法的一個(gè)實(shí)施方式中，相比于基于組織的過(guò)表達(dá)測(cè)定， CYP24表達(dá)和/或活性優(yōu)選通過(guò)可在腫瘤生長(zhǎng)中出現(xiàn)的系統(tǒng)性指示物(如外周血單核細(xì)胞 或血清)來(lái)測(cè)定。一方面，CYPM表達(dá)和/或活性異常升高?；趤?lái)自50-100個(gè)“正?！惫w的CYPM表達(dá)和/或活性的平均值，將測(cè)定的CYPM表達(dá)和/或活性的正常水平定義為1個(gè)相對(duì)單 位(RU)，在“正?！惫w中，制備CYPM mRNA并將其用作對(duì)照。CYP24的基準(zhǔn)水平可從收集自正常個(gè)體中的樣本(如腎、皮膚、血液、血清、血漿、 唾液、口腔拭取物)建立，所述正常個(gè)體從基于如性別、種族和/或年齡的不同種群的正 常個(gè)體中收集。CYPM RNA水平可通過(guò)實(shí)時(shí)PCR、Luminex xMAP 倍增技術(shù)技術(shù)或其它 技術(shù)從組織(如腎或皮膚活組織檢查)或細(xì)胞(如口腔拭取物)中建立。通過(guò)使用諸如 Luminex xMAP 倍增技術(shù)和^festern印記等技術(shù)在這些組織中測(cè)定CYPM蛋白質(zhì)水平。 將CYPM RNA水平或CYPM蛋白質(zhì)水平的平均值記為1RU。24-羥基化的天然和合成維生素D化合物如對(duì)，25- 二羥基維生素D3、1，24, 25-三 羥基維生素D3或內(nèi)酯絕對(duì)量的正常水平可基于標(biāo)準(zhǔn)曲線使用諸如HPLC、氣相色譜、質(zhì)譜和 前述方法等技術(shù)從樣本(如血液、血漿、唾液)確立。醫(yī)生將24-羥基化的天然和合成維生 素D化合物的絕對(duì)值作為正常水平。如果患者中CYPM RNA的水平、CYP24蛋白質(zhì)的水平或24-羥基化的天然和合成 維生素D化合物的絕對(duì)值落在“正?！狈秶?，則患者具有異常升高的CYPM表達(dá)和/或活 性。例如，CYP24表達(dá)和/或活性可為正常CYPM表達(dá)和/或活性的至少2倍、至少3倍、 至少4倍、至少5倍或至少10倍。預(yù)期異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性可為正常CYPM 表達(dá)和/或活性的數(shù)百倍或數(shù)千倍(如100X、500X、1000X、5000X等)。在一個(gè)實(shí)施方式中，醫(yī)生通過(guò)收集來(lái)自患者的至少一種樣本(如血液、血漿、唾 液、血清、口腔拭取物)并測(cè)定CYPM RNA水平、CYP24蛋白質(zhì)水平或24-羥基化天然或合 成維生素D化合物的絕對(duì)值，將確定是否患者具有異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性。如 上所述，如果測(cè)得的一個(gè)或若干個(gè)參數(shù)落在“正常”范圍外，且優(yōu)選增加為至少2倍、3倍、4 倍等，醫(yī)生將患者診斷為具有異常升高的CYPM活性和/或表達(dá)，且可開(kāi)CYPM抑制劑的處 方。CYPM抑制劑可包括有機(jī)分子、單鏈或雙鏈核酸(如正義、反義或錯(cuò)義寡核苷 酸；適配子；正義、反義或錯(cuò)義多核苷酸；正義、反義或錯(cuò)義DNA ；正義、反義或錯(cuò)義RNA ； 和siRNA)、肽、碳水化合物和蛋白質(zhì)(如抗體、抗體片段、激素、激素類似物、糖蛋白和凝集 素)。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYPM抑制劑包括美國(guó)專利第6，380，408號(hào)(第6欄)中作為式 IX (化合物1)公開(kāi)的化合物，其為( ，7E，16Z，23E)-(lS，3R)-25-去甲-25-叔丁基磺酰 基-9，10-斷-5，7，10 (19)，16，23-膽甾五烯-1，3-二醇。在一個(gè)實(shí)施方式中，CYP24抑制 劑包括氮雜茂化合物，如(R)-N-(2_(1H-咪唑-1-基)-2-苯乙基)-4'-氯聯(lián)苯_4_羧酰 胺、酮康唑、甲硝唑、氯美噻唑、伊曲康唑和氟康唑。CYP24的一類有機(jī)分子抑制劑包括維生素D化合物的類似物。具有CYPM抑制活 性的1，25- 二羥基維生素D3類似物的實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專利第6，380，408號(hào)、第7，101，865 號(hào)、第7，166，585號(hào)和第6，982，258號(hào)以及美國(guó)專利申請(qǐng)第10/738，248號(hào)中(它們整體 通過(guò)引用并入本文)，且包括23，23- 二氟-24-砜維生素D3化合物、25-砜維生素D3化合 物、24，24- 二氟-25-砜維生素D3化合物、24-亞砜亞胺維生素D3化合物、16-烯-25-肟維 生素D3化合物和16-烯-25-肟醚維生素D3化合物、24-砜維生素D3化合物和24，24- 二 氟維生素D3化合物。在方法的一個(gè)方面，分子可選自醇CYPM抑制劑，如(5Z，7E)-(1S， 3R) -24- (S)-苯基亞砜亞胺-25-去甲-9，10-斷-5，7，10 (19)-膽甾三烯-1,3- 二醇(參見(jiàn)美國(guó)專利第7，101，865號(hào)，化合物1(a))。在方法的另一個(gè)方面，分子可選自同時(shí)為CYPM 抑制劑和維生素D激動(dòng)劑的化合物，如(5Z，7E，16Z，23E) -25-去甲-25-叔丁基磺?；鵢9， 10-斷-5，7，10 (19)，16，23-膽甾五烯_1，3 β - 二醇(參見(jiàn)美國(guó)專利第6，380，408號(hào)，式IX， 化合物 1)和(5Ζ，7Ε，16Ζ) - (1S，3R) -25- (0-烯丙基)-N-叔丁基肟 _9，10-斷-5，7，10 (19)， 16-膽甾五烯-1，3 β - 二醇(參見(jiàn)美國(guó)專利第6，982，258號(hào)，化合物I (g))。CYP24抑制劑可選地與增加體內(nèi)維生素D水平的其它試劑聯(lián)合給藥。本領(lǐng)域已知 的增加體內(nèi)維生素D水平的試劑包括在本公開(kāi)范圍內(nèi)，且包括如維生素D2、25-羥基維生素 D2U, 25- 二羥基維生素D2、維生素D3、25-羥基維生素D3和1，25- 二羥基維生素D3。優(yōu)選 地，避免維生素D化合物，以有利于維生素D前激素、維生素D激素原和其類似物。膽鈣化留醇和麥角鈣化留醇均通過(guò)主要位于人體內(nèi)肝中的酶代謝為激素原。膽鈣 化甾醇代謝為激素原25-羥基維生素D3,且麥角鈣化留醇代謝為激素原25-羥基維生素D2 和對(duì)(幻-羥基維生素1)2。在某些細(xì)胞如腸上皮細(xì)胞中，膽鈣化留醇和麥角鈣化留醇也通 過(guò)與肝中相同或類似的那些酶在肝外代謝為激素原。提高任一前體的濃度增加激素原的產(chǎn) 生；類似地，降低前體的濃度降低激素的產(chǎn)生。膽鈣化留醇和/或麥角鈣化留醇(“膽鈣化 甾醇/麥角鈣化留醇”)血液水平的激增可暫時(shí)提高細(xì)胞內(nèi)維生素D濃度，加速激素原的產(chǎn) 生，且升高細(xì)胞內(nèi)和血液的激素原濃度。1，25_ 二羥基維生素D的血液水平由PTH參與的反饋機(jī)制來(lái)精確地調(diào)節(jié)。腎的 1 α -羥化酶(或CYP27B1)被PTH刺激且被1，25- 二羥基維生素D抑制。當(dāng)1，25- 二羥基 維生素D的血液水平降低，甲狀旁腺通過(guò)細(xì)胞內(nèi)維生素D受體感知這種變化，并分泌ΡΤΗ。 分泌出的PTH刺激腎CYP27B 1的表達(dá)，并以此增加維生素D激素的產(chǎn)生。隨著1，25_ 二羥 基維生素D血液濃度的再次升高，甲狀旁腺進(jìn)一步降低PTH分泌。隨著血液PTH水平降低， 腎產(chǎn)生的維生素D激素下降。提高1，25- 二羥基維生素D血液濃度也直接抑制CYP27B1進(jìn) 一步產(chǎn)生維生素D激素。膽鈣化留醇、麥角鈣化留醇和25-羥基維生素D血液水平的顯著激增也可引起 CYP24的上調(diào)響應(yīng)，以代謝分解暫時(shí)過(guò)量的維生素D底物。類似地，提高1，25_ 二羥基維生 素D血液水平可引起CYPM活性的上調(diào)。不想受任何具體的操作模式的限制，認(rèn)為CYPM的過(guò)表達(dá)是至少一些維生素D缺 乏類型的原因，其與物質(zhì)或陽(yáng)光的缺乏無(wú)關(guān)，但可能由于物質(zhì)或陽(yáng)光的缺乏而復(fù)雜化。因此，在本文公開(kāi)方法的一類實(shí)施方式中，將單獨(dú)施用CYPM抑制劑，或不施用維 生素D化合物(如膽鈣化留醇、麥角鈣化留醇、維生素D激素原、維生素D激素或其類似物)， 最優(yōu)選不施用活性維生素D激素或其類似物。在在本文公開(kāi)方法的另一個(gè)實(shí)施方式中，將 單獨(dú)施用CYPM抑制劑，或當(dāng)也施用維生素D化合物(如膽鈣化留醇、麥角鈣化留醇、維生 素D激素原、維生素D激素或其類似物)時(shí)，將維生素D化合物以控釋制劑給藥以避免化合 物(如緩釋或延長(zhǎng)釋放制劑)的血液水平激增，或經(jīng)由慢推IV遞送方法給藥。一方面，本公開(kāi)提供了用于診斷分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的試劑盒。根據(jù) 本公開(kāi)的試劑盒提供了 CYPM表達(dá)和/或活性的測(cè)定，且包括測(cè)定以下一種或多種性質(zhì)的 試劑盒，所述性質(zhì)包括CYPM分解代謝副產(chǎn)物或此分解代謝副產(chǎn)物前體的水平、CYPM mRNA 的水平、CYPM蛋白質(zhì)的水平和/或CYPM酶活性的水平。在一個(gè)實(shí)施方式中，試劑盒包括 固定的抗CYPM抗體、標(biāo)記的抗CYPM抗體和用于使用如本文公開(kāi)方法的說(shuō)明書(shū)。涉及基于抗體檢測(cè)的其它試劑盒也在本公開(kāi)預(yù)料內(nèi)。例如，用于測(cè)定CYPM表達(dá)的試劑盒可測(cè)定 CYP24催化分解副產(chǎn)物的水平。試劑盒可包括用于測(cè)定催化分解副產(chǎn)物的一種或多種對(duì)應(yīng) 前體水平的試劑。一種此類試劑盒可包括特異于CYPM分解代謝副產(chǎn)物的抗體(其功能性 片段)，和特異于包括CYPM分解代謝副產(chǎn)物的維生素D化合物的抗體。預(yù)期對(duì)維生素D代 謝物和CYPM分解代謝副產(chǎn)物具有高親和性的蛋白，如DBP或VDR或合成衍生的蛋白質(zhì)或 大分子也可用于替代此類試劑盒中的抗體。預(yù)期將前述抗體之一固定在固體支持物上，且 其它抗體具有檢測(cè)用的標(biāo)記。在另一個(gè)實(shí)例中，用于測(cè)定CYPM表達(dá)的試劑盒可包括固定 的CYPM分解代謝副產(chǎn)物和抗CYPM抗體。使用上述試劑盒，通過(guò)測(cè)定CYPM分解代謝副 產(chǎn)物與固定的CYPM分解代謝副產(chǎn)物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗CYPM抗體的能力來(lái)測(cè)定CYPM活性。另一方面，本公開(kāi)包括用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥的藥物制劑，所述藥物制 劑包括有效量的CYPM抑制劑。此制劑可進(jìn)一步包括有效量的25-羥基維生素D3。另一方面，本公開(kāi)包括用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)的藥物制劑，所述藥物 制劑包括有效量的CYPM抑制劑。此制劑可進(jìn)一步包括有效量的25-羥基維生素D3。此藥 物制劑可用于治療慢性腎病如1期或2期CKD繼發(fā)的甲狀旁腺功能亢進(jìn)。每個(gè)醫(yī)生可根據(jù)患者的情況確定確切的制劑、給藥途徑和劑量。劑量和間隔可根 據(jù)個(gè)人調(diào)整，以提供足以保持治療或預(yù)防效果的活性成分的水平。此類制劑可為如顆粒、散劑、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酏劑、混懸劑或溶液的形式。可配置用于各種給藥途徑，如經(jīng)口服給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)直腸給藥、經(jīng)皮下注 射、經(jīng)靜脈注射、經(jīng)肌肉注射或經(jīng)腹腔注射的制劑。以下劑型通過(guò)舉例給出，且不構(gòu)成對(duì)本 發(fā)明的限制。對(duì)于口服、含服和舌下給藥，散劑、混懸劑、顆粒、片劑、丸劑、膠囊、軟膠囊和錠為 可接受的固體劑型。這些劑型可通過(guò)將一種或多種CYPM抑制劑或雙功能CYPM抑制劑和 本發(fā)明的VDR激動(dòng)劑與至少一種添加劑如淀粉或其它添加劑混合來(lái)制備。適合的添加劑 為蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖醇、葡聚糖、淀粉、瓊脂、海藻酸、幾丁質(zhì)、殼聚糖、果 膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成的聚合物或甘油酯?？蛇x 地，口服劑型可包含輔助給藥的其它成分，如無(wú)活性的稀釋劑，或潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂，或防 腐劑如對(duì)羥基苯甲酸酯或山梨酸，或抗氧化劑如抗壞血酸、生育酚或半胱氨酸，崩解劑、粘 結(jié)齊IJ、增稠劑、緩沖劑、甜味劑、調(diào)味劑或加香劑。片劑和丸劑可進(jìn)一步用本領(lǐng)域已知的適合 包衣材料處理。用于口服給藥的液體劑型可為藥學(xué)上可接受的乳劑、糖漿、酏劑、混懸劑和溶液形 式，所述液體劑型可包含無(wú)活性的稀釋劑，如水。藥物制劑和藥劑可使用無(wú)菌液體，例如但 不限于油、水、醇和它們的組合制備成懸浮液或溶液?？杉尤胨帉W(xué)上適合的表面活性劑、混 懸劑、乳化劑以用于口服或腸胃外給藥。如上所述，混懸劑可包括油。此類油包括但不限于花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油 和橄欖油?；鞈抑苿┛梢舶ㄖ舅岬孽?，如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、脂肪酸甘油酯和 乙?；闹舅岣视王ァ；鞈抑苿┛砂ù迹绲幌抻谝掖?、異丙醇、十六醇、甘油和丙 二醇。醚例如但不限于聚乙二醇、石油烴如礦物油和石油，和水也可用在混懸制劑中。對(duì)于經(jīng)鼻給藥，藥物制劑和藥劑可為噴霧劑或氣溶膠，所述噴霧劑或氣溶膠包含 適合的溶劑和可選地其它化合物，例如但不限于穩(wěn)定劑、抗菌劑、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度調(diào)節(jié)劑(bioavailability modifiers)和它們的組合。用于氣溶膠制 劑的推進(jìn)劑可包括壓縮空氣、氮?dú)狻⒍趸蓟驘N類低沸點(diǎn)溶劑?？勺⑸鋭┬屯ǔ０墒褂眠m合的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑制備的含水混懸劑 或含油混懸劑?？勺⑸鋭┬涂蔀槭褂萌軇┗蛳♂寗┲苽涞娜芤合嗷蚧鞈覄┬问健？山邮艿?溶劑或載體包括滅菌水、Ringer溶液或等滲壓的鹽水溶液?；蛘撸瑹o(wú)菌油可用作溶劑或懸 浮劑。優(yōu)選地，油或脂肪酸為非揮發(fā)性的，包括天然或合成油、脂肪酸、甘油單酯、甘油二酯 或甘油三酯。對(duì)于注射，藥物制劑和/或藥劑可為適于用上述適合溶液重建的散劑。這些散劑 的實(shí)例包括但不限于凍干粉、旋轉(zhuǎn)干燥粉或噴霧干燥粉、無(wú)定形粉末、顆粒、沉淀物或微粒。 對(duì)于注射，制劑可選地包含穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度調(diào)節(jié)劑和它們的組I=I ο對(duì)于直腸給藥，藥物制劑和藥劑可為用于在腸、乙狀結(jié)腸和/或直腸中釋放化合 物的栓劑、軟膏劑、灌腸劑、片劑或乳膏劑。直腸栓劑可通過(guò)將本發(fā)明的一種或多種化合物 或此化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體與可接受的載體如可可脂或聚乙二醇混合 來(lái)制備，所述直腸栓劑在正常存儲(chǔ)溫度下以固相存在，且在適用于體內(nèi)如直腸內(nèi)釋放藥物 的那些溫度下以液相存在。油也可用于制備軟明膠型和栓劑制劑。水、鹽水、葡萄糖水溶液 和相關(guān)糖溶液以及甘油可用于制備混懸制劑，所述混懸制劑也可包含懸浮劑，如果膠、卡波 姆、甲基纖維素、羥丙基纖維素或羧甲基纖維素，以及緩沖劑和防腐劑。可將本發(fā)明的制劑設(shè)計(jì)為下述的速效、速釋、長(zhǎng)效和緩釋型。因此，也可配制用于 控釋和慢釋的藥物制劑。本發(fā)明組合物也可包括如膠束或脂質(zhì)體，或一些其它包裹的形式，或可以延遲釋 放的形式給藥以提供更長(zhǎng)的存儲(chǔ)和/或遞送效果。因此，可將藥物制劑和藥劑壓縮為小球 或圓柱體，并經(jīng)肌肉或經(jīng)皮下作為積存注射劑(cbpot injections)植入或作為植入物如支 架。此類植入物可采用已知的惰性材料，如硅酮和生物可降解性聚合物。具體劑量可根據(jù)對(duì)象的病情、年齡、體重、一般健康情況、性別和飲食、服藥間隔、 給藥途徑、排泄率和藥物的組合來(lái)調(diào)節(jié)。包含有效量的任何以上劑型都在常規(guī)實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)， 因此也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。除了上述那些代表性的劑型外，藥學(xué)上可接受的賦形劑和載體通常是本領(lǐng)域 技術(shù)人員已知的，因此也包含在本發(fā)明內(nèi)。這類賦形劑和載體描述在如"Remingtons Pharmaceutical Sciences" Mack Pub. Co. , New Jersey (1991)中， 弓入:Φ^；。維生素D化合物的適合的控釋制劑公開(kāi)在申請(qǐng)PCT/US2008/061579中，此申請(qǐng)作 為WIPO公開(kāi)WO 2008/134512 (2008年11月6日)公布，且其公開(kāi)通過(guò)引用全部并入本文。 預(yù)期此類制劑也可包括相容性CYPM抑制劑和雙功能CYPM抑制劑和VDR激動(dòng)劑。實(shí)施例提供以下實(shí)施例是用于說(shuō)明而非要限制本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例支持以下結(jié)論。在來(lái)自正常和尿毒癥大鼠的組織中，1，25- 二羥基維生素D3強(qiáng)力地誘導(dǎo)CYPM基 因表達(dá)。與其它組織相比，CYPM的組成型表達(dá)在健康腎中相對(duì)較高。然而，尿毒癥大鼠中，CYP24的基礎(chǔ)表達(dá)顯著升高。這提示與尿毒癥狀態(tài)有關(guān)的機(jī)理可能涉及CYPM表達(dá)的調(diào)節(jié)。與正常動(dòng)物的甲狀旁腺相比，在尿毒癥動(dòng)物的甲狀旁腺中1，25_ 二羥基維生素D3 顯著地誘導(dǎo)CYP24，提示重復(fù)給藥可導(dǎo)致抗性增加。尿毒癥大鼠中CYP27B1的表達(dá)與1，25-二羥基維生素D3水平降低無(wú)關(guān)，這提示 CYP24在降低尿毒癥維生素D水平中起更重要的作用。在正常動(dòng)物中，CYPM表達(dá)依賴于維生素D的狀況；維生素D缺乏癥顯著地降低 CYP24表達(dá)水平。尿毒癥動(dòng)物顯示出較高的CYPM表達(dá)基礎(chǔ)水平，此水平在維生素D缺乏癥 狀態(tài)下不改變。這提示在尿毒癥中，獨(dú)立于維生素D的機(jī)理調(diào)節(jié)CYPM水平。這會(huì)對(duì)尿毒 癥中維生素D狀態(tài)產(chǎn)生影響。尿毒癥腎中CYPM基礎(chǔ)表達(dá)的升高可能是導(dǎo)致潛在25 (OH) D3和1，25_ 二羥基維 生素D3缺乏癥以及抵抗維生素D激素替補(bǔ)療法的主要機(jī)理。抑制CYPM的化合物可用于 保持維生素D狀態(tài)和克服CYPM對(duì)治療的抗性。FGF23與1，25- 二羥基維生素D協(xié)同作用以誘導(dǎo)CYPM RNA產(chǎn)生。在尿毒癥的情 況中，高水平的FGF23可能導(dǎo)致進(jìn)一步升高CYP24，使得患者抵抗維生素D治療。CYP24水平在維生素D缺乏的動(dòng)物中降低，并在用25-羥基維生素D治療后增至正 ?；蜉^高水平。
CYP24水平在尿毒癥維生素D缺乏的大鼠中不改變，且在用25-羥基維生素D治療 后不增加，這提示尿毒癥大鼠中缺乏對(duì)維生素D的控制。與維生素D缺乏的動(dòng)物相比，在維生素D缺乏的尿毒癥大鼠中CYPM RNA水平增 加。這可以解釋為何在施用25-羥基維生素D3兩周后，與維生素D缺乏的動(dòng)物相比，在維 生素D缺乏的尿毒癥大鼠中1，25- 二羥基維生素D3的水平較低。實(shí)施例1維生素D缺乏癥的動(dòng)物模型為了獲得維生素D缺乏癥的動(dòng)物模型，用富含腺嘌呤的食物喂養(yǎng)大鼠。在7天 后，與用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物相比，通過(guò)完整PTH(iPTH)Elisa試劑盒在用腺嘌呤喂養(yǎng)的 大鼠中觀察到甲狀旁腺激素(PTH)水平升高，且在四天后，繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)已 出現(xiàn)在用腺嘌呤喂養(yǎng)的大鼠中，但未出現(xiàn)在用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物中(圖1)。通過(guò)用維 生素D化合物治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物，顯著降低iPTH水平。如圖2所示，通過(guò)用1， 25-(OH)2-D3 (骨化三醇或1，25_ 二羥基維生素D3)、25_0H_D3 (骨化二醇或25-羥基維生素 D3)或1，25-(OH)2-D2 (1，25-二羥基維生素D2)治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物，在用腺嘌呤喂養(yǎng) 的動(dòng)物中iPTH水平恢復(fù)至與用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物類似的水平。通過(guò)用質(zhì)譜測(cè)定活性形式的維生素D，即1，25- (OH) 2_D3 (骨化三醇或1，25-二羥基 維生素D3)的水平來(lái)分析用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物的維生素D激素狀態(tài)。與用對(duì)照 食物喂養(yǎng)的動(dòng)物相比，用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物顯示出維生素D激素狀態(tài)的降低(圖3)。通過(guò) 用1，25-(0!1)2-03治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物，用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物中維生素D狀態(tài)恢復(fù)至用 對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物的水平。相反，用25-(OH)2-D3(骨化二醇或25-羥基維生素D3)或1， 25-(0H)2-D2(l，25-二羥基維生素D2)治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物未顯著影響這些動(dòng)物的1， 25-(OH)2-D3 水平(圖 3)。實(shí)施例2
維生素D缺乏癥中的CYPM表達(dá)為了確定維生素D缺乏癥和CYPM水平間的關(guān)系，在用腺嘌呤喂養(yǎng)的大鼠和用對(duì) 照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物中通過(guò)qRT-PCR測(cè)定CYPM表達(dá)。與用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物的腎組織相 比，在用腺嘌呤喂養(yǎng)的大鼠的腎組織中CYPM表達(dá)異常升高為約7倍。用維生素D化合物 治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物進(jìn)一步誘導(dǎo)CYP24。如圖4所示，通過(guò)用1，25-(OH)2-D3 (骨化三醇 或1，25- 二羥基維生素D3)、25-0H-D3 (骨化二醇或25-羥基維生素D3)或1，25- (OH) 2_D2 (1， 25- 二羥基維生素D2)治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物，使得CYPM表達(dá)活性升高為2倍至25 倍。與用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物的甲狀旁腺相比，在用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物的甲狀旁腺組織中 CYP24表達(dá)活性異常升高為約3倍(圖5)。用維生素D化合物治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物顯 著誘導(dǎo)CYPM。如圖5所示，通過(guò)用1，25-(OH)2-D3 (骨化三醇或1，25-二羥基維生素D3)、 25-0H-D3 (骨化二醇或25-羥基維生素D3)或1，25-(OH)2-D2 (1，25-二羥基維生素D2)治療 用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物，使得CYPM表達(dá)活性升高為50倍至14，000倍。實(shí)施例3維生素D缺乏癥中的FGF23表達(dá)為了確定維生素D缺乏癥和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-23 (FGF2!3)水平間的關(guān)系，在用 腺嘌呤喂養(yǎng)的大鼠和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物中測(cè)定血清FGF23水平。與用對(duì)照食物喂養(yǎng)的 動(dòng)物相比，在用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物中血清FGF23水平異常升高為至少53倍(圖6)。用維生 素D化合物治療用腺嘌呤喂養(yǎng)的動(dòng)物也顯示出FGF23水平升高。如圖6所示，與用對(duì)照食物 喂養(yǎng)的動(dòng)物相比，通過(guò)用1，25- (OH) 2-D3 (骨化三醇或1，25- 二羥基維生素D3)、25_0H_D3 (骨 化二醇或25-羥基維生素D3)或1，25-(OH)2-D2 (1，25-二羥基維生素D2)治療用腺嘌呤喂養(yǎng) 的動(dòng)物，使得FGF23水平升高為74倍。在來(lái)自用腺嘌呤喂養(yǎng)的大鼠和用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物的腎組織中，測(cè)定骨形成生 物標(biāo)志物，即FGF23和骨鈣蛋白的水平。與用對(duì)照食物喂養(yǎng)的動(dòng)物相比，在用腺嘌呤喂養(yǎng)的 動(dòng)物中FGF23升高為約55倍且骨鈣蛋白升高為約1. 5倍(圖7)。實(shí)施例425-羥基維生素D治療中的CYPM表達(dá)圖8顯示了在用維生素D (25-羥基維生素仏和25-羥基維生素D3)處理2周的大 鼠中，相對(duì)CYPM誘導(dǎo)的圖。對(duì)正常大鼠經(jīng)靜脈施用16 μ g/kg 25-羥基維生素D2、25-羥 基維生素D3和對(duì)照載體2周。采集血液并通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)定CYPM表達(dá)。實(shí)施例5在人對(duì)象中分析( ，7E，16Z，23E)-(lS，3R)-25-去甲-25-叔丁基磺?；?9， 10-斷-5，7，10 (19)，16，23-膽甾五烯_1，3- 二醇對(duì)25-羥基維生素D水平的影響。對(duì)這 些對(duì)象在第1、3、5、8和10天時(shí)施用安慰劑或此化合物。在此化合物最后施用M小時(shí)后， 測(cè)定25-羥基維生素D水平。血清25-羥基維生素D的百分?jǐn)?shù)變化顯示在圖9中(對(duì)于 90mcg 禾口 180mcg，ρ = 0.1)。實(shí)施例6每天用載體或0. 5mcg/kg 1,25- 二羥基維生素D3經(jīng)靜脈治療SD大鼠，持續(xù)1周。 在最后一次給藥后M小時(shí)采集器官。CYPM基因表達(dá)通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)定。結(jié)果顯示在圖 10中。
用標(biāo)準(zhǔn)食物(正常)或含0. 75%腺嘌呤的誘導(dǎo)尿毒癥的食物(尿毒癥)喂養(yǎng)SD 大鼠。隨后每天用載體或0.5mcg/kg 1，25-二羥基維生素D3經(jīng)靜脈對(duì)動(dòng)物給藥，持續(xù)7周。 在最后一次給藥后M小時(shí)采集器官。CYPM基因表達(dá)通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)定，并相對(duì)于GAPDH 水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。相對(duì)于載體治療組標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)表達(dá)值(相對(duì)表達(dá)=1)。結(jié)果顯示在圖 11中。圖10和11顯示，與正常大鼠相比，在尿毒癥大鼠中CYPM的基礎(chǔ)表達(dá)在腎中顯著 升高(圖10)，但在甲狀旁腺中未顯著升高(圖11)。然而，與正常動(dòng)物相比，尿毒癥動(dòng)物甲 狀旁腺中1，25-二羥基維生素D3(l α，25 (OH)2D3)誘導(dǎo)的CYPM表達(dá)顯著增加?！?”是指在 正常和尿毒癥大鼠中，載體和1，25-二羥基維生素D3治療間CYPM表達(dá)有顯著差異?！?*” 是指載體治療的正常大鼠和尿毒癥大鼠之間有顯著差異?！?·”是指在用1，25-二羥基維生 素D3治療的正常大鼠和尿毒癥大鼠之間CYPM誘導(dǎo)水平之間有顯著差異。將ρ值< 0. 05 設(shè)為顯著的界限。數(shù)據(jù)用平均值士SEM表示。每個(gè)柱上的數(shù)值代表相對(duì)于正常-載體的相 對(duì)誘導(dǎo)倍數(shù)。實(shí)施例7使用與對(duì)應(yīng)于圖11的以上實(shí)施例6所述相同的方法測(cè)定CYPM和CYP27B1表 達(dá)。25 (OH)D3和1，25- 二羥基維生素D3的血清水平通過(guò)LC-MS測(cè)定。血清PTH根據(jù)制造 商的說(shuō)明書(shū)通過(guò)ELISA IMMUTOPICS (San Clemente, CA, USA)測(cè)定。簡(jiǎn)言之，將血清樣本用 [26，27- ] 25 (OH) D3或[25，26- ] 1,25- 二羥基維生素D3加同位素，并溶解在乙腈以作為 內(nèi)標(biāo)。使用 Accubond II ODS-C18 IOOmg, ImL SPE 濾柱(Agilent Technologies)從血清 中提取1，25_ 二羥基維生素D3或25(0H)D3和內(nèi)標(biāo)。收集的餾分在穩(wěn)定的氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至 干燥，將剩余物再溶解于50 μ L甲醇/Η20(80/20 ；ν/ν)中并用LC-MS/MS(Waters Alliance HPLC-Waters Quattro Ultima mass spectrometer)分析。相對(duì)于載體治療組標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì) 表達(dá)值(相對(duì)表達(dá)=1)。結(jié)果顯示在圖12中。圖12顯示在CYP27B1不變的情況下，尿毒癥大鼠中CYPM基礎(chǔ)表達(dá)的增加可導(dǎo)致 較低的1，25_ 二羥基維生素D3水平。用1，25_ 二羥基維生素D3治療引起血清25-(0H)DyK 平的降低。用1，25_ 二羥基維生素D3治療引起PTH降低，但也顯著誘導(dǎo)CYPM表達(dá)。對(duì)于 CYP27B1W和CYPM(#)，星號(hào)代表正常和尿毒癥組之間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異。在上面 的表格中，(*)是指正常和尿毒癥大鼠之間維生素D水平有顯著差異。使用以ρ值<0.05 為界限的student’ s獨(dú)立t檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)其統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。數(shù)據(jù)用平均值士SEM表示。實(shí)施例8通過(guò)用缺乏維生素D的食物喂養(yǎng)SD大鼠6周來(lái)誘導(dǎo)維生素D缺乏癥。用含維生 素D的標(biāo)準(zhǔn)食物喂養(yǎng)正常大鼠。通過(guò)在最后2周持續(xù)口服給藥(管飼法)0.2%的腺嘌呤溶 液來(lái)誘導(dǎo)尿毒癥。通過(guò)經(jīng)口管飼法對(duì)非尿毒癥的對(duì)照大鼠施用載體。在最后一次施用腺嘌 呤后對(duì)小時(shí)采集血清和器官。基因表達(dá)通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)定。實(shí)施例7詳述了 25 (OH)D3和 1，25_ 二羥基維生素D3的血清水平的測(cè)定。結(jié)果顯示在圖13中。圖13顯示CYPM基礎(chǔ)表達(dá)的增加不依賴于尿毒癥大鼠中維生素D代謝物的水 平。“*”是指各個(gè)組與非尿毒癥的正常組之間有顯著差異?！?*”代表CYP27B1正常食物 和CYP27B1維生素D缺乏(VD Def)食物之間有顯著差異。使用以ρ值< 0. 05為界限的 student's獨(dú)立t檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)其統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。數(shù)據(jù)用平均值士SEM表示。不可檢測(cè)的水平表示為“ND”。實(shí)施例9將HEK細(xì)胞以每孔04孔板)25,000個(gè)細(xì)胞接種，并用1，25_ 二羥基維生素 D3(IOnM)單獨(dú)孵育，或用1，25-二羥基維生素D3 (IOnM)與CYPM抑制劑((MK-24 (S)-S (0) (NH)-Ph-l，參見(jiàn)美國(guó)專利第7，101，865號(hào)，化合物I (a)) (IOnM) 一起孵育6、24、48和72小 時(shí)。收集細(xì)胞，并使用TRIZOL 試劑制備RNA。使用實(shí)時(shí)PCR定量CYPM。結(jié)果顯示在圖 14中。
結(jié)果顯示，在CYPM抑制劑MK-24 (S) -S (0) (NH) -Ph-I存在下，1，25- 二羥基維生素 D3顯著延長(zhǎng)了 CYPM誘導(dǎo)。實(shí)施例10將HEK細(xì)胞以2000細(xì)胞/孔的密度轉(zhuǎn)移至96孔板中。在96孔板中生長(zhǎng)2天 后，將細(xì)胞用終濃度為KT6-IO-11的1，25_ 二羥基維生素1)3和終濃度分別為0、1、10和50nM 的MK-24 (S)-S(O) (NH)-Ph-I化合物共同處理。在過(guò)夜處理后，持續(xù)16小時(shí)向細(xì)胞中加入 [咕]-胸腺嘧啶，KGM培養(yǎng)基濃度為0.2mCi/孔。在加入25ml閃爍液體后，使用閃爍計(jì)數(shù)器 來(lái)計(jì)算放射活性的加入。結(jié)果顯示在圖15中。數(shù)據(jù)表示取決于1，25-二羥基維生素D3濃 度的以cpm計(jì)的胸腺嘧啶加入。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表至少4個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)。結(jié)果顯示抑制CYPM活性可將所培養(yǎng)HEK細(xì)胞中1，25- 二羥基維生素D3的抗增 殖效果增加約3個(gè)數(shù)量級(jí)。實(shí)施例11將HPKla-ras 細(xì)胞用含或不含 100ng/mL FGF23 的 0、1、10 和 IOOnM 1，25_ 二羥基 維生素D3 (骨化三醇)處理，并在8小時(shí)后測(cè)定CYPM RNA表達(dá)。結(jié)果顯示FGF23的存在 可協(xié)同1，25- 二羥基維生素D3 —起誘導(dǎo)CYPM RNA產(chǎn)生(圖16)。實(shí)施例12用標(biāo)準(zhǔn)食物或維生素D缺乏的食物喂養(yǎng)SD大鼠4周。隨后按圖17中每個(gè)軸的標(biāo) 記，在2周內(nèi)持續(xù)每天對(duì)動(dòng)物注射0.6、3或18mcg/kg 25-羥基維生素D3或載體。在隨后 一次注射后M小時(shí)采集腎，并通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)定CYPM mRNA水平。結(jié)果顯示在圖17中。實(shí)施例13用標(biāo)準(zhǔn)食物(腺嘌呤載體組)或維生素D缺乏的食物(維生素D缺乏/腺嘌呤載 體組)喂養(yǎng)SD大鼠4周。在此處理后，持續(xù)2周每天對(duì)動(dòng)物口服給予IOOmg腺嘌呤。隨后 按圖18中每個(gè)軸的標(biāo)記，在另外2周內(nèi)持續(xù)每天對(duì)動(dòng)物注射0. 6或18mcg/kg 25-羥基維 生素D3或載體。在隨后一次注射后M小時(shí)采集腎，并通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)定CYPM mRNA水平。 結(jié)果顯示在圖18中。實(shí)施例14圖19顯示與持續(xù)2周施用6或18mcg/kg 25-羥基維生素D的維生素D缺乏的大 鼠相比，在維生素D缺乏的尿毒癥大鼠中1，25- 二羥基維生素D3的水平。以上描述是僅用于理解清楚，且不應(yīng)從中理解為不必要的限制，本發(fā)明范圍內(nèi)的 修改對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。在全文中，當(dāng)組合物被描述為包括組分或材料時(shí)，除非另有說(shuō)明，預(yù)計(jì)組合物也可 基本上由所述組分或材料的任意組合組成，或由所述組分或材料的任意組合組成。
本文公開(kāi)方法的實(shí)施和其單獨(dú)步驟可手動(dòng)和/或在電子裝置輔助下進(jìn)行。雖然已 參照具體實(shí)施方式
描述了方法，但本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易明白可使用其它方式進(jìn)行與方法 相關(guān)的方案。例如，除非另有說(shuō)明，可改變各步驟的順序而不背離所述方法的范圍或精神。 此外，一些單獨(dú)的步驟可組合、省略或進(jìn)一步細(xì)分為附加步驟。在禁止對(duì)在人體上實(shí)施的方法授予專利權(quán)的司法權(quán)中，向人類對(duì)象“施用”組合物 的含義應(yīng)被限制為將受控的物質(zhì)開(kāi)處方，其中人類對(duì)象能夠通過(guò)任何技術(shù)(例如口服、吸 入、局部施用、注射、插入等)自己施用所述物質(zhì)。希望有一種最寬泛的合理解釋，這種解釋 符合限定可授予專利的主題的法律或法規(guī)。在不禁止對(duì)在人體上實(shí)施的方法授予專利權(quán)的 司法權(quán)中，組合物的“施用(給藥)，，既包括在人體上實(shí)施的方法也包括上述行為。本文引用的全部專利、出版物和參考文獻(xiàn)通過(guò)引用全部并入本文。在本公開(kāi)與所 并專利、出版物和參考文獻(xiàn)沖突的情況下，應(yīng)遵循本公開(kāi)。
權(quán)利要求
1.一種診斷患者中分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性的方法，包括通過(guò)從患者獲取組織、血液或細(xì)胞樣本和分析所述樣本的CYPM表達(dá)和/或活性，或所 述CYPM表達(dá)和/或活性的指標(biāo)，來(lái)測(cè)定患者的CYPM表達(dá)和/或活性水平，或所述CYPM 表達(dá)和/或活性的指標(biāo)水平，其中CYPM表達(dá)和/或活性的異常升高預(yù)示分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者的維生素D充足，且所述方法進(jìn)一步包括針 對(duì)異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性，對(duì)患者施用CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防維生素D缺乏癥。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者缺乏維生素D，且所述方法進(jìn)一步包括針對(duì) 異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性，對(duì)患者施用CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。
4.一種診斷和治療患者的方法，包括測(cè)定患者的CYPM表達(dá)和/或活性，或所述CYPM表達(dá)和/或活性的指標(biāo)；和 針對(duì)異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性，對(duì)患者施用CYPM抑制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，進(jìn)一步包括從所述患者獲取組織、血液或細(xì)胞樣本，和分 析所述樣本的CYPM表達(dá)和/或活性，或所述CYPM表達(dá)和/或活性的指標(biāo)。
6.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中在所述測(cè)定時(shí)，所述患者未在接受活性維 生素D治療。
7.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述患者未患有癌癥。
8.如權(quán)利要求4至7中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)定所述患者的25-羥基維生 素D水平，和通過(guò)對(duì)維生素D缺乏患者施用所述CYPM抑制劑來(lái)治療維生素D缺乏癥。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，進(jìn)一步包括對(duì)所述患者施用維生素D前激素、激素原和前 述任一種的類似物中的一種或多種。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述治療包括施用選自膽鈣化留醇、麥角鈣化甾 醇、25-羥基維生素D2、25-羥基維生素D3和它們的組合的化合物。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述治療包括施用25-羥基維生素D3。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述治療包括施用治療有效量的25-羥基維生素 D3,以將所述患者的25-羥基維生素D水平恢復(fù)到至少30ng/mL。
13.如權(quán)利要求4至7中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)定所述患者的25-羥基維生 素D水平，和通過(guò)對(duì)維生素D充足的患者施用所述CYPM抑制劑來(lái)抑制和/或預(yù)防維生素 D缺乏癥。
14.如權(quán)利要求4至13中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述患者患有慢性腎病。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述慢性腎病為1期或2期。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述慢性腎病為3期或4期。
17.如權(quán)利要求4至16中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述患者患有甲狀旁腺功能亢進(jìn)。
18.如權(quán)利要求14至17中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述患者的PTH水平高于患者CKD 時(shí)期的目標(biāo)范圍。
19.如權(quán)利要求4至18中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述患者缺乏1，25_二羥基維生素D3。
20.如權(quán)利要求4至19中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括避免活性維生素D治療，或如 果患者正在接受活性維生素D治療，則降低活性維生素D治療的水平，或停止活性維生素D 治療。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，進(jìn)一步包括對(duì)所述患者施用足以增加1，25_二羥基維 生素D水平的量的25-羥基維生素D。
22.如權(quán)利要求2至21中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述CYPM抑制劑也是維生素D受 體激動(dòng)劑。
23.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，包括測(cè)定所述患者中作為CYPM表達(dá)和/或 活性水平指標(biāo)的FGF23的水平，其中FGF23水平大于正常范圍上限值預(yù)示異常升高的CYPM 表達(dá)。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中FGF23水平為所述正常范圍上限值的至少2倍預(yù) 示異常升高的CYPM表達(dá)。
25.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，包括測(cè)定血清或其它體液中CYPM的一種或 多種分解代謝副產(chǎn)物的濃度，以作為CYPM活性指標(biāo)。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)定血清或其它體液中所述CYPM的一種 或多種分解代謝副產(chǎn)物的一種或多種前體的濃度，并計(jì)算CYPM的一種或多種分解代謝副 產(chǎn)物濃度與一種或多種對(duì)應(yīng)前體的血清濃度的比例，作為CYPM活性指標(biāo)。
27.如權(quán)利要求25至沈中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述CYPM的分解代謝副產(chǎn)物包括 24, 25- 二羥基維生素D和/或1，24，25-三羥基維生素D。
28.如權(quán)利要求沈至27中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述CYPM活性測(cè)定包括測(cè)定選 自由對(duì)，25- 二羥基維生素D與25-羥基維生素D的比例和1，24，25-三羥基維生素D與1， 25- 二羥基維生素D的比例組成的組中的一個(gè)或多個(gè)比例。
29.如權(quán)利要求25至沈中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述CYPM的分解代謝副產(chǎn)物包括 選自由帕立骨化醇、度骨化醇、22-奧沙骨化三醇、二氫速留醇和沈，26，沈，27，27，27-六氟 骨化三醇(氟骨三醇)組成的組中的一種或多種成員的24-羥基化和/或23-羥基化分解 代謝副產(chǎn)物。
30.如權(quán)利要求25至四中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)定在短期或長(zhǎng)期施用CYPM 底物之后。
31.如權(quán)利要求25至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中一種或多種測(cè)定包括血清濃度。
32.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述CYPM表達(dá)的測(cè)定包括測(cè)定組織、血 漿或細(xì)胞中的CYP24mRNA。
33.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述CYPM表達(dá)的測(cè)定包括測(cè)定組織、血 漿或細(xì)胞中的CYPM蛋白質(zhì)。
34.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述CYPM活性的測(cè)定包括測(cè)定組織、血 漿或細(xì)胞中的CYPM的酶活性。
35.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述組織或細(xì)胞選自由腎組織、肝組織、 甲狀旁腺組織、外周血單核細(xì)胞和口部細(xì)胞組成的組中。
36.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性是 正常CYPM表達(dá)和/或活性的至少2倍。
37.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性是 正常CYPM表達(dá)和/或活性的至少3倍。
38.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述異常升高的CYPM表達(dá)和/或活性是 正常CYPM表達(dá)和/或活性的至少4倍。
39.一種試劑盒，所述試劑盒包括用于測(cè)定一種或多種CYPM分解代謝副產(chǎn)物水平的 試劑，和實(shí)施前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的說(shuō)明書(shū)。
40.如權(quán)利要求39所述的試劑盒，進(jìn)一步包括用于測(cè)定一種或多種對(duì)應(yīng)前體水平的試劑。
41.一種試劑盒，所述試劑盒包括用于測(cè)定CYPM蛋白質(zhì)水平的試劑，和實(shí)施前述任一 項(xiàng)權(quán)利要求的說(shuō)明書(shū)。
42.如權(quán)利要求41所述的試劑，包括固定的抗CYPM抗體和標(biāo)記的抗CYPM抗體。
43.一種用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥的藥物制劑，包括有效量的CYPM抑制劑。
44.如權(quán)利要求43所述的制劑，進(jìn)一步包括有效量的25-羥基維生素D3。
45.一種用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)的藥物制劑，包括有效量的CYPM抑制劑。
46.如權(quán)利要求45所述的制劑，進(jìn)一步包括有效量的25-羥基維生素D3。
47.如權(quán)利要求45至46中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，用于治療慢性腎病繼發(fā)的甲狀旁腺 功能亢進(jìn)。
48.如權(quán)利要求47所述的藥物制劑，其中所述慢性腎病為3期或4期。
49.一種CYPM抑制劑，用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥。
50.一種CYPM抑制劑，用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)。
51.如權(quán)利要求50所述的應(yīng)用，其中所述甲狀旁腺功能亢進(jìn)為慢性腎病繼發(fā)的。
52.如權(quán)利要求51所述的應(yīng)用，其中所述慢性腎病為3期或4期。
53.CYP24抑制劑在制備用于治療或預(yù)防維生素D缺乏癥的藥物中的應(yīng)用。
54.CYP24抑制劑在制備用于治療或預(yù)防甲狀旁腺功能亢進(jìn)的藥物中的應(yīng)用。
55.如權(quán)利要求M所述的應(yīng)用，其中所述甲狀旁腺功能亢進(jìn)為慢性腎病繼發(fā)的。
56.如權(quán)利要求55所述的應(yīng)用，其中所述慢性腎病為3期或4期。
全文摘要
本文公開(kāi)了用于診斷、治療和預(yù)防分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥和相關(guān)障礙的方法；相關(guān)的組合物、裝置和試劑盒。此方法包括測(cè)定患者中CYP24表達(dá)和/或活性，或其指標(biāo)如FGF23水平，和將CYP24表達(dá)和/或活性的異常升高與分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥或分解代謝相關(guān)的維生素D缺乏癥的易感性相關(guān)聯(lián)。針對(duì)CYP24表達(dá)和/或活性的異常升高，此方法進(jìn)一步包括對(duì)維生素D缺乏或有維生素D缺乏風(fēng)險(xiǎn)的患者施用CYP24抑制劑，和優(yōu)選避免激活維生素D結(jié)合受體，如通過(guò)避免對(duì)此類患者施用活性維生素D化合物。可選地，可施用維生素D前激素或激素原。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102046812SQ200980120404
公開(kāi)日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2009年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日
發(fā)明者P·馬丁·佩特科維奇, 喬爾·Z·梅爾尼克, 克里斯丁·F·黑爾維希 申請(qǐng)人:泊溫提賽若撲有限責(zé)任公司, 賽特克羅公司