專利名稱：用間隙連接調(diào)節(jié)化合物治療疼痛的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域涉及遞送經(jīng)由調(diào)節(jié)間隙連接緩解疼痛的化合物通過皮膚，該化合物 包括寡核苷酸間隙連接調(diào)節(jié)劑。
背景技術(shù)：
下文包含可以用于理解本發(fā)明的信息。并非承認，任何本文所提供的任何信息是 現(xiàn)有技術(shù)，或者與目前所述或要求保護的發(fā)明相關(guān)，或者特別或無保留地引用的任何出版 物或文獻是現(xiàn)有技術(shù)。目前，疼痛已經(jīng)成為常見的病癥即嚴重且開銷巨大的公眾健康問題，且對必須給 予遭受疼痛的身體以及情緒后果的個體支持的家庭、朋友和保健提供者而言是一挑戰(zhàn)。國 際疼痛研究協(xié)會(InternationalAssociation for the Study of Pain)將疼痛定義為“與 實際或潛在組織損傷有關(guān)或?qū)τ谶@樣的損傷而描述的令人不快的感覺和情緒經(jīng)歷”。通常， 有兩種基本類型的疼痛急性和慢性的。對于大部分而言，急性疼痛源自疾病、炎癥或組織 損傷。這種類型的疼痛通常突然發(fā)生，例如在創(chuàng)傷或手術(shù)后發(fā)生，并且可以伴有焦慮或情緒 悲痛。在某些情況下，急性疼痛可以變?yōu)槁缘?。慢性疼痛被廣泛地認為代表疾病本身。慢 性疼痛比急性疼痛持續(xù)更長的時間，并且對大部分醫(yī)藥治療是抵抗的。慢性疼痛可以，并且 經(jīng)常導致對患者嚴重的問題。關(guān)節(jié)炎被認為是美國最普遍的疾病之一，并且是殘疾的首要原因。根據(jù)疾病控制 與預防中)!> (Centers for Disease Control and Prevention)的估計，每 3 名美國人中有 1名受超過100種類型關(guān)節(jié)炎的影響。疼痛，特別是全身關(guān)節(jié)的疼痛刻畫了關(guān)節(jié)炎的特征。 銀屑病，其主要是皮膚病癥，如果不進行治療可以發(fā)展成銀屑病關(guān)節(jié)炎。類風濕性關(guān)節(jié)炎、 骨關(guān)節(jié)炎和強直性脊柱炎是退行性關(guān)節(jié)炎疾病的全部實例。例如，除了關(guān)節(jié)炎原因以外，關(guān)節(jié)的正常功能及其移動以及身體的其他部分可 以由于創(chuàng)傷或骨科及其他手術(shù)方法而嚴重受損。這可以導致壓痛(tenderness)、隱痛 (aching)、疼痛和長恢復時間，以及關(guān)節(jié)靈活性喪失或移動范圍、強壯性或諸如肌肉、腱、 囊、骨或韌帶的關(guān)節(jié)/關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)彈性減小。關(guān)節(jié)靈活性減小還可以涉及關(guān)節(jié)或組織架構(gòu)的 永久改變或縮短。關(guān)節(jié)靈活性或關(guān)節(jié)架構(gòu)改變或異常還可以與各種損傷或疾病狀況有關(guān)或 由其引起，所述狀況例如代謝紊亂；缺血；對關(guān)節(jié)、囊、骨、軟骨、腱、韌帶或肌肉的損傷；骨 折；半脫位；脫位；擠壓損傷；長期不動(如石膏或夾板中固定關(guān)節(jié))；以及癱瘓。目前，緩 解關(guān)節(jié)靈活性或關(guān)節(jié)架構(gòu)改變或異常的普通手術(shù)介入面臨成功有限的問題，因為矯正手術(shù) 方法也是可控損傷或創(chuàng)傷的形式，并且該方法可以導致進一步的疼痛。間隙連接是促進細胞間直接通訊的細胞膜結(jié)構(gòu)。間隙連接通道由兩種連接子(半 通道)形成，每個連接子由6個連接蛋白亞基組成。每個六聚體連接子與相反膜中的連接 子對接以形成單一的間隙連接。據(jù)報道，在整個身體中發(fā)現(xiàn)了間隙連接通道。例如，諸如 角膜上皮的組織具有6-8個細胞層，但是仍然在不同的層中表達不同的間隙連接通道，并 且連接蛋白43在基底層中而連接蛋白沈在基底細胞層至中間翼細胞層。通常，連接蛋白 是蛋白家族，常根據(jù)它們的分子量進行命名，或者根據(jù)系統(tǒng)發(fā)生基礎(chǔ)而分類為α、β和Y子類。已經(jīng)鑒定了至少20種人和19種鼠同種型。據(jù)報道，不同的組織和細胞類型具有特 征性的連接蛋白表達模式，并且諸如角膜的組織被證實在損傷或移植后改變連接蛋白表達 模式(Qui, C. et al.，(2003)Current Biology, 13 :1967-1703 ；Brander et al.，(2004)， J.Invest Dermatol. 122 :1310-20)。據(jù)報道，異常連接蛋白功能可以與某些疾病狀態(tài)有關(guān)(如心臟病)(A. C. de Carvalho, et al.，J Cardiovasc Electrophysiol 5:686(1994))。在某些連接蛋白中， 周轉(zhuǎn)和運輸屬性的改變可以由加入的外源試劑所誘導，該外源試劑可以影響間隙連接細 胞間通訊的水平(Darrow, B. J.，etal.，Circ Res 76 :381(1995) ；Lin R, et al.，J Cell Biol 154(4) :8150001)。據(jù)報道，反義技術(shù)調(diào)節(jié)與病毒、真菌和代謝疾病有牽連的基因的 表達。參見，例如美國專利5，166，195號(HIV的寡核苷酸抑制劑)、美國專利5，004，810 號(與單純皰疹病毒Vmw65 mRNA雜交并抑制復制的低聚物)。還參見Becker和Green 的美國專利7，098，190號(包含連接蛋白的反義核苷酸的制劑)。已經(jīng)報道了間隙連接 和半通道的肽抑制劑(包括肽模擬物(ρ印tidomimetic))。參見，例如Berthoud，V. Μ. et al. , Am J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279 :L619-L622 (2000) ；Evans, W. H. and Boitano, S. Biochem. Soc. Trans. 29 :606-612 禾口 De Vriese A. S. , et al. Kidney Int. 61 177-185(2001)。還參見Green和Becker，W02006/134494( “抗連接蛋白化合物及其使用 方法”)。盡管在理解解釋與疼痛和疼痛緩解的原因有關(guān)的過程(包括與關(guān)節(jié)炎疾病狀況 和手術(shù)及骨科方法相關(guān)的疼痛)的機制的原則有進展，但是還存在對于改善結(jié)果和恢復的 合適治療選擇的未滿足的需求。皮膚提供了針對外源物質(zhì)和感染的保護屏障。在哺乳動物中，這通過在角質(zhì)細 胞的表面形成稱為角質(zhì)化包膜(cornified envelope, CE)的高度不溶性蛋白和脂類結(jié) 豐勾: ] ° (Downing et al. , Dermatology inGeneral Medicine (—MIS 禾4~巾白勺 1 月夫 病學)，F(xiàn)itzpatrick, et al. , eds. , pp. 210-221 (1993), Ponec, Μ. , The Keratinocyte handbook (角質(zhì)細胞手冊)，Leigh, et al.，eds.，pp. 351-363 (1994))。CE 由諸如神經(jīng)酰 胺、固醇和脂肪酸的極性脂類以及交聯(lián)蛋白的復雜網(wǎng)絡組成；然而角質(zhì)層細胞的細胞質(zhì)保 持極性和水性。CE非常薄(10微米)，但是提供了基本屏障。然而，皮膚被認為是給藥的途 徑。大部分透皮遞送系統(tǒng)通過利用皮膚穿滲透增強媒介物實現(xiàn)表皮滲透。這樣的化合物或 化合物的混合物在本領(lǐng)域通過各種術(shù)語是已知的，其包括例如“滲透增強劑，，或“皮膚增強 劑”。透皮遞送治療化合物的其他方法包括諸如離子電泳(ionophoretic)裝置、電穿孔裝 置和微針入度(micropenetration)裝置的裝置。發(fā)明概述本文所述和要求保護的發(fā)明具有許多特征和實施方案，其包括但不限于本發(fā)明概 述中列出或描述或引用的那些。其并非意圖囊括一切，并且本文所述和要求保護的發(fā)明并 不限于本發(fā)明概述中所鑒定的特征或?qū)嵤┓桨?，或者為該發(fā)明概述中所鑒定的特征或?qū)嵤?方案限制，包括本發(fā)明概述僅用于示例而不是限制目的。本發(fā)明一方面提供了與疼痛有關(guān)的疾病狀況的新的治療方法，其通過向皮膚應用 間隙連接調(diào)節(jié)劑進行。間隙連接調(diào)節(jié)劑包括抗連接蛋白化合物、間隙連接修飾化合物、連 接蛋白結(jié)合化合物和半通道調(diào)節(jié)化合物。本發(fā)明的另一方面是通過向皮膚或向皮膚中應用抗連接蛋白化合物來緩解疼痛。在一實施方案中，減輕了皮膚疼痛。在另一實施方案 中，減輕了創(chuàng)傷引起或?qū)е碌奶弁?。在一實施方案中，通過向有需要的個體局部給予藥物 可接受的透皮遞送形式或裝置中的、包含治療有效量的諸如抗連接蛋白43化合物的間隙 連接調(diào)節(jié)劑的藥物組合物來減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛，從而減輕疼痛，該支持體結(jié) 構(gòu)包括(單獨、共同或以任何組合)關(guān)節(jié)、肌肉、腱、韌帶、軟骨和皮膚。在另一實施方案 中，減輕了個體的肌肉骨骼系統(tǒng)中的疼痛。在另一實施方案中，通過注射或滴注包含治療 有效量的諸如抗連接蛋白43化合物的間隙連接調(diào)節(jié)劑的藥物組合物來減輕個體的支持 體結(jié)構(gòu)中和/或個體的肌肉骨骼系統(tǒng)中的疼痛，其包括，例如注射或滴注貯庫制劑(depot formulation)，或其緩慢釋放、持續(xù)釋放或延遲釋放制劑。本發(fā)明的方面涉及透皮制劑和用于遞送間隙連接調(diào)節(jié)劑的裝置。根據(jù)非限制性優(yōu)選方面，調(diào)節(jié)的連接蛋白為連接蛋白43，并且調(diào)節(jié)的連接蛋白43 間隙連接或半通道為連接蛋白43間隙連接或半通道。在一實施方案中，間隙連接調(diào)節(jié)劑為抗連接蛋白多核苷酸，優(yōu)選為抗連接蛋白寡 核苷酸。在另一實施方案中，抗連接蛋白寡核苷酸為反義寡核苷酸。在其他實施方案中，抗 連接蛋白寡核苷酸為RNAi或siRNA化合物。根據(jù)替代性實施方案，抗連接蛋白寡核苷酸為 核酶化合物。在某些非限制性優(yōu)選實施方案中，抗連接蛋白寡核苷酸為抗連接蛋白43寡核 苷酸。在其他實施方案中，間隙連接調(diào)節(jié)劑為肽或多肽、抗體或其結(jié)合片段、肽模擬物、 肽類似物或連接蛋白羧基末端多肽。非限制性優(yōu)選肽和肽模擬物包括抗連接蛋白43肽或 肽模擬物，其包括抗連接蛋白43半通道阻斷肽或者抗連接蛋白43半通道阻斷肽模擬物。非 限制性優(yōu)選連接蛋白羧基末端多肽包括連接蛋白43羧基末端多肽。其他非限制性優(yōu)選間 隙連接調(diào)節(jié)劑包括抗連接蛋白化合物、連接蛋白結(jié)合化合物和半通道調(diào)節(jié)化合物，例如抗 連接蛋白43化合物、抗連接蛋白43結(jié)合化合物和連接蛋白43半通道調(diào)節(jié)化合物。在其他實施方案中，間隙連接調(diào)節(jié)劑為間隙連接修飾化合物(包括，例如限制或 關(guān)閉間隙連接的連接蛋白磷酸化試劑)、連接蛋白結(jié)合化合物(包括，例如阻斷或抑制ZO-I 蛋白相互作用的連接蛋白羧基末端多肽)、半通道調(diào)節(jié)化合物(包括，例如可以結(jié)合并限制 連接蛋白半通道開放的模擬肽)或者抗ZO-I蛋白寡核苷酸。非限制性優(yōu)選間隙連接修飾 化合物包括連接蛋白43間隙連接修飾化合物。非限制性優(yōu)選連接蛋白結(jié)合化合物包括連 接蛋白43結(jié)合化合物。非限制性優(yōu)選半通道調(diào)節(jié)化合物包括連接蛋白43半通道調(diào)節(jié)化合 物。非限制性優(yōu)選抗ZO-I蛋白寡核苷酸包括用于調(diào)節(jié)連接蛋白43活性或者與連接蛋白43 結(jié)合的那些寡核苷酸。間隙連接調(diào)節(jié)劑的各種用途包括治療用途，或在生產(chǎn)或制備制劑、組合物、制品或 試劑盒中的用途。例如，用于遞送間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮遞送系統(tǒng)的實施方案包括通過向皮膚應用 而遞送治療有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑的制劑。制備本文所述的透皮遞送系統(tǒng)的方法和使用 所述制劑的方法(如，治療和預防疼痛)是其他實施方案。仍然在其他實施方案中，本發(fā)明所用的透皮制劑包含增強透皮滲透的脂類組合 物。這樣的脂類組合物包括植物油、堅果油、動物油或合成油或者脂肪酸、脂肪醇或脂肪 胺。非限制性優(yōu)選油包括澳洲堅果油、白芒花籽油(meadowfoam oil)(白池花(limnanthes
7alba))、蓖麻油、西蒙得木油、玉米油、葵花籽油、芝麻油或鴯鹋油。一種特別優(yōu)選的油是鴯 鹋油。在某些非限制性優(yōu)選實施方案中，透皮遞送系統(tǒng)包含每分子中具有約10-19個乙 氧基化的乙氧基化的油或者脂肪酸、脂肪醇或脂肪胺。適合作為滲透增強劑的乙氧基化的 脂類包括諸如以下的油乙氧基化的植物油、堅果油、合成油或動物油，合適地乙氧基化的 鴯鹋油或乙氧基化的澳洲堅果油。根據(jù)非限制性優(yōu)選方面，可以用于本文所述的制劑中的 合適的乙氧基化的脂類可以為每分子中具有至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或更 多個乙氧基化的植物油、堅果油、動物油或合成油，或者脂肪酸、脂肪醇或脂肪胺。非限制性 優(yōu)選乙氧基化的油包括澳洲堅果油、白芒花籽油(白池花)、蓖麻油、西蒙得木油、玉米油、 葵花籽油、芝麻油或鴯鹋油。任選地，可以將諸如醇和/或水和/或水性佐劑的用于藥物制 劑的其他常規(guī)試劑與滲透增強劑混合，以改進特定間隙連接調(diào)節(jié)劑的溶解性和/或運輸。在某些實施方案中，本文所述的透皮遞送系統(tǒng)適合于透皮給予間隙連接調(diào)節(jié)劑， 該間隙連接調(diào)節(jié)劑為分子量等于或小于約9，000至約10，000道爾頓的分子。然而，在某些 實施方案中，間隙連接調(diào)節(jié)劑為分子量等于或大于約9，OOOto約10，000道爾頓的分子。仍然在其他實施方案中，透皮遞送系統(tǒng)包含與一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑聯(lián)合的 微針、微突出物陣列(microprojection array)或其他微針入度裝置。非限制性優(yōu)選抗連 接蛋白化合物包括抗連接蛋白43化合物。非限制性優(yōu)選間隙連接修飾劑包括調(diào)節(jié)連接蛋 白43間隙連接的那些間隙連接修飾劑。非限制性優(yōu)選連接蛋白結(jié)合劑包括連接蛋白43結(jié) 合化合物。非限制性優(yōu)選半通道調(diào)節(jié)劑包括調(diào)節(jié)連接蛋白43半通道的那些半通道調(diào)節(jié)劑。 其他透皮遞送系統(tǒng)包括電穿孔、離子電滲(iontophoresis)、超聲導入(sonophoresis)和 超聲裝置，該裝置包含間隙連接調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑。利用透皮遞送制劑和裝置的幾種方法也是本發(fā)明的實施方案。例如，一種方法涉 及在需要減輕疼痛的個體的治療中通過透皮遞送包含間隙連接調(diào)節(jié)劑的制劑來減輕疼痛 的方法。監(jiān)測疼痛減輕作為治療或恢復程序的一部分也是期望的。本發(fā)明還包括透皮遞送組合物，其包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，用于在個體 的治療中，包括在個體的關(guān)節(jié)炎疾病狀況的治療中，或在包括骨科方法或手術(shù)在內(nèi)的侵入 性醫(yī)療方法或手術(shù)中或者之后(和/或之前，作為預治療)，緩解疼痛或預防疼痛；或者在 傾向于或面臨疼痛風險的個體的治療中，緩解疼痛或預防疼痛。本發(fā)明還包括用于透皮遞 送間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物，其用于治療需要治療的這類個體。向疼痛位點(例如，急性 或慢性疼痛位點，或者用于預防疼痛)和/或接近疼痛位點的位置(例如，包括反映的疼痛 或繼發(fā)性疼痛的區(qū)域)給予本文所述的試劑和制劑。因此，例如向個體的支持體結(jié)構(gòu)和/ 或肌肉骨骼系統(tǒng)中的疼痛位點和/或接近疼痛位點的位置，該支持體結(jié)構(gòu)包括關(guān)節(jié)、肌肉、 腱、韌帶、軟骨和皮膚(包括任何一種或多種這些結(jié)構(gòu)，共同或任何組合)，通過局部或本文 所提供的其他給藥方式(包括例如通過注射或滴注)來給予試劑和制劑，從而減輕疼痛。利用可以包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮遞送組合物、方法和/或透皮遞 送裝置治療個體以提供疼痛緩解，可以包括聯(lián)合、同時、分別、順序或持續(xù)給予這樣的組合 物。還提供了緩解或預防疼痛的多種應用。根據(jù)某些方面，本發(fā)明一般涉及一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的用途(包括治療用 途或在生產(chǎn)或制備組合物、制劑、制品以及試劑盒中的用途)，以為患有疼痛、對疼痛易感或面臨疼痛風險的個體的治療提供疼痛緩解或疼痛預防。用于手術(shù)前和/或手術(shù)后患者的用 途不僅提供疼痛緩解，還提供恢復改善和恢復時間加速。在一方面，本發(fā)明包括透皮遞送組合物，該透皮遞送組合物包含藥物可接受的間 隙連接調(diào)節(jié)劑，用于在個體的治療中，包括在個體的關(guān)節(jié)炎疾病狀況的治療中，或在包括例 如骨科方法或手術(shù)在內(nèi)的侵入性醫(yī)療方法或手術(shù)期間或之后(和/或之前，作為預治療)， 緩解或預防疼痛。在其他實施方案中，包括亞治療有效量的兩種或更多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的兩種或 更多種間隙連接調(diào)節(jié)劑可以分別或共同用于通過透皮遞送給藥，來提供治療有效的聯(lián)合作 用。因此，還提供了用于預防或確定治療個體的疼痛的透皮遞送組合物，該組合物提供為單 一間隙連接調(diào)節(jié)劑或聯(lián)合制劑的形式，例如作為治療有效量的兩種或更多種間隙連接調(diào)節(jié) 劑的混合物，例如一種或多種抗連接蛋白多核苷酸與一種或多種抗連接蛋白肽、肽模擬物 或間隙連接修飾劑的混合物。在其他實施方案中，通過透皮遞送聯(lián)合給予亞治療有效量的 兩種或更多種間隙連接調(diào)節(jié)劑來提供期望的治療效果。在一實施方案中，例如，在與透皮遞送一種或多種抗連接蛋白肽、肽模擬物或者間 隙連接修飾劑或其他間隙連接調(diào)節(jié)劑相同的時間或大約相同的時間，通過透皮遞送給予包 含一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的組合物。在一實施方案中，在透皮遞送一種或多種抗 連接蛋白肽、肽模擬物或者間隙連接修飾劑或其他間隙連接調(diào)節(jié)劑至少約30分鐘內(nèi)，給予 包含一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的透皮遞送組合物。在一實施方案中，在透皮遞送一 種或多種抗連接蛋白肽、肽模擬物或者間隙連接修飾劑或其他間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮遞送 組合物至少約1小時內(nèi)，給予包含一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的透皮遞送組合物。在 一實施方案中，在透皮遞送包含一種或多種抗連接蛋白肽、肽模擬物或者間隙連接修飾劑 或其他間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮遞送組合物至少約2-12小時內(nèi)，給予包含一種或多種抗連 接蛋白多核苷酸的透皮遞送組合物。在一實施方案中，在透皮遞送一種或多種抗連接蛋白 肽、肽模擬物或者間隙連接修飾劑或其他間隙連接調(diào)節(jié)劑至少約M-48小時內(nèi)，給予包含 一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的透皮遞送組合物。在另一實施方案中，在互相約1-8小 時內(nèi)、互相約1天內(nèi)或互相約1周內(nèi)，通過透皮遞送給予抗連接蛋白多核苷酸和抗連接蛋白 肽或肽模擬物或其他間隙連接調(diào)節(jié)劑。其他實施方案包括通過透皮遞送給予一種或多種抗 連接蛋白多核苷酸和/或一種或多種抗連接蛋白肽、肽模擬物或間隙連接修飾劑，以及一 種或多種間隙連接關(guān)閉化合物、一種或多種半通道關(guān)閉化合物和/或一種或多種連接蛋白 羧基末端多肽?？梢砸匀魏雾樞蚪o予間隙連接調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明包括，在生產(chǎn)適合于透皮遞送和用于治療個體以提供疼痛緩解的劑型(包 括包含劑型的裝置)中，使用本文所述的治療有效量的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的方 法。這樣的劑型和裝置包括如本文所公開的用于治療個體的那些劑型和裝置。術(shù)語“聯(lián)合制劑”在以下意義上包括“組件試劑盒(kit of parts)”，即上文所定 義的聯(lián)合伴侶(combination partner)可以獨立地或通過利用與不同量的聯(lián)合伴侶(a)和 (b)的不同固定組合，即同時、分別或順序地劑量給藥。例如，試劑盒的組件(parts of the kit)可以同時或時間上錯開，即對于組件試劑盒的任何組件，在不同的時間點并以相等或 不同的時間間隔進行給藥。在某些其他方面，本發(fā)明提供了 包含在適合于透皮遞送的制劑中的治療有效量的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的包裝，以及單獨使用或與一種或多種其他間隙連接調(diào)節(jié)劑 (或其組合)聯(lián)合使用的說明書。在其他實施方案中，包裝含有亞治療有效量的一種或多種 間隙連接調(diào)節(jié)劑，當共同使用或聯(lián)合提供時，該一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑是治療有效的。在一方面，本發(fā)明涉及減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛的方法，該方法包括局部 給予有需要的所述個體藥物可接受的透皮遞送形式的藥物組合物，該藥物組合物包含治療 有效量的連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑，從而減輕疼痛。根據(jù)一實施方案，支持體結(jié)構(gòu)為關(guān) 節(jié)。根據(jù)另一實施方案，支持體結(jié)構(gòu)選自肌肉、骨、腱、韌帶和軟骨。這些方法適用于治療患 有關(guān)節(jié)炎的個體?？梢灾委煹募膊顩r包括骨關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、頸關(guān)節(jié)炎和強直性 脊柱炎。在另一實施方案中，該方法適合于治療患有急性疼痛的個體。通過該方法治療的 合適的疼痛疾病狀況包括背部疼痛、膝部疼痛、髖部疼痛、肩部疼痛、手疼痛或手指疼痛。在 替代性實施方案中，個體患有慢性疼痛，并且可以包括背部疼痛、膝部疼痛、髖部疼痛、肩部 疼痛、手疼痛或手指疼痛。在另一實施方案中，個體患有手術(shù)后疼痛。合適的透皮劑型包括局部凝膠劑、洗劑、軟膏劑或噴霧劑。在一方面，所述透皮遞送形式包括包含油的透皮滲透劑。合適地，油為具有10-19 個乙氧基/分子的乙氧基化的油。合適地，所述乙氧基化的油為乙氧基化的鴯鹋油。根據(jù) 替代性的優(yōu)選方面，油包括選自澳洲堅果油、白芒花籽油、蓖麻油、西蒙得木油、玉米油、葵 花籽油、芝麻油和鴯鹋油的油。在替代性實施方案中，所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為10，000道爾頓或更大。 或者，所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑小于10，000道爾頓。在一實施方案中，所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為寡核苷酸。合適的寡核苷酸 包括選自反義寡核苷酸、核酶、RNAi寡核苷酸和siRNA寡核苷酸的那些寡核苷酸。在一方面，本發(fā)明涉及這樣的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為連接 蛋白43反義寡核苷酸。合適的反義寡核苷酸包括GTAATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC (SEQ ID NO 1) ；GTAATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC (SEQ ID NO 2)；禾口 GGC AAG AGA CAC CAA AGA CAC TAC CAG CAT(SEQ IDNO :3)?；蛘撸线m的反義寡核苷酸具有約15至約35個核苷酸，并且與連接蛋白43mRNA 充分互補形成生理條件下解鏈溫度高于20°C的雙鏈體。其他合適的反義寡核苷酸具有約 15至約35個核苷酸，并且與連接蛋白43mRNA的反義序列具有至少約70%的同源性。其他合適的連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑包括RNAi或siRNA多核苷酸?；蛘?，所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為肽或肽模擬物。在一方面，所述肽或肽 模擬物與連接蛋白43半通道結(jié)合。在另一方面，所述肽或肽模擬物與連接蛋白43Z0-1蛋白結(jié)合位點結(jié)合。其他合適的連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑包括連接蛋白43磷酸化試劑。在另一實施方案中，提供了本發(fā)明的方法，該方法還包括第二藥物化合物，其中所 述第二藥物化合物是非留體抗炎藥物，如雙氯芬酸(diclfenac)。常規(guī)地，向接近個體的組織或關(guān)節(jié)疼痛位點的皮膚給予本發(fā)明的組合物。還提供了用于減輕個體疼痛的藥物組合物，該藥物組合物包含疼痛減輕量的例如 抗連接蛋白43化合物，和包含透皮遞送劑的藥物可接受的載體。另外，提供了用于減輕個
10體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛的包含制劑的藥物組合物，該制劑在透皮劑型中具有疼痛減輕量 的例如連接蛋白43化合物。任選地，組合物包含透皮滲透增強劑。在其他藥物組合物中， 例如，所述抗連接蛋白43化合物為寡核苷酸，并且所述透皮滲透劑促進寡核苷酸通過皮膚 的遞送。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了用于在個體的支持體結(jié)構(gòu)中減輕疼痛的方法，該 方法包括向有需要的個體應用包含例如抗連接蛋白43化合物的透皮遞送裝置，該透皮遞 送裝置被應用至接近所述個體組織或關(guān)節(jié)疼痛位點的皮膚區(qū)域。合適地，抗連接蛋白43化 合物例如為寡核苷酸，并且透皮遞送裝置促進寡核苷酸通過皮膚的遞送。一種合適的透皮遞送裝置為透皮微突出物遞送裝置。所述微突出物裝置可以任選 地具有生物相容包衣(coating)，該包衣形成自具有例如分散于其上的抗連接蛋白43化合 物的包衣制劑。替代的合適透皮遞送裝置是在組織膜中形成至少一個微孔的透皮遞送裝 置，從而促進例如所述抗連接蛋白43化合物通過皮膚的遞送。在另一方面，提供了制品，該制品包含包裝材料和包含于所述包裝材料中的透皮 遞送組合物，其中所述透皮遞送組合物包含疼痛緩解有效量的例如抗連接蛋白43化合物 和透皮滲透有效量的乙氧基化的油；并且其中所述包裝材料包含表明所述組合物可以用于 減輕支持結(jié)構(gòu)中的疼痛的標簽。制品可以包含選自乙氧基化的澳洲堅果油、乙氧基化的白 芒花籽油、乙氧基化的蓖麻油、乙氧基化的西蒙得木油、乙氧基化的玉米油、乙氧基化的葵 花籽油、乙氧基化的芝麻油和乙氧基化的鴯鹋油的乙氧基化的油。任選地，所述抗連接蛋白 43化合物例如為寡核苷酸。在另一方面，提供了制品，該制品包含包裝材料和包含于所述包裝材料中的透皮 遞送組合物，其中所述透皮遞送組合物包含疼痛緩解有效量的例如抗連接蛋白43化合物 和透皮滲透有效量的油，并且其中所述包裝材料包含表明所述組合物可以用于減輕支持結(jié) 構(gòu)中的疼痛的標簽。制品可以包含選自澳洲堅果油、白芒花籽油、蓖麻油、西蒙得木油、玉米 油、葵花籽油、芝麻油和鴯鹋油的油。任選地，所述抗連接蛋白43化合物例如為寡核苷酸。在另一方面，提供了用于減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛的方法，該方法包括向 有需要的所述個體局部給予治療有效量的例如含有連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮、 注射、滴注或貯庫劑型，從而減輕疼痛。下文提供了本發(fā)明的這些和其他方面，其不限于本發(fā)明概述中的信息或被本發(fā)明 概述中的信息所限制。發(fā)明詳述本文所用的“病癥”是涉及疼痛的任何病癥、疾病或疾病狀況，它們會從間隙連接 調(diào)節(jié)劑受益，該間隙連接調(diào)節(jié)劑包括例如一種或多種抗連接蛋白化合物、間隙連接修飾化 合物、連接蛋白結(jié)合化合物或半通道調(diào)節(jié)化合物。本文所用的“個體”指任何哺乳動物，包括人、家養(yǎng)動物和家畜以及動物園動物、運 動動物或?qū)櫸?，如狗、馬、貓、羊、豬、牛等。非限制性優(yōu)選哺乳動物為人，包括成人、兒童以及 老年人。非限制性優(yōu)選運動動物為馬和狗。非限制性優(yōu)選寵物為狗和貓。本文所用的“個體的支持體結(jié)構(gòu)”指該個體的關(guān)節(jié)、肌肉、腱、韌帶、軟骨和皮膚。本 發(fā)明特別有用的應用包括預防或治療關(guān)節(jié)中或其附近的疼痛，包括肩、髖、踝、膝、肘、手、足 和手指。本發(fā)明其他特別有用的應用包括預防或治療背部，特別是下背部中的疼痛。每種這些疼痛可以分別地治療，因為關(guān)節(jié)、肌肉、腱、韌帶和皮膚中的每一種疼痛都是分別治療 對象。 本文所用的“肌肉骨骼系統(tǒng)”(又稱為運動系統(tǒng))指賦予動物利用肌肉和骨骼體系 進行物理運動能力的系統(tǒng)。肌肉骨骼系統(tǒng)包括由通過關(guān)節(jié)和韌帶與其他骨連接的骨組成的 骨骼，以及通過鍵與骨骼連接的骨骼肌。本發(fā)明特別有用的應用包括預防或治療肌肉骨骼 疼痛，包括影響肌肉、韌帶和腱以及骨的疼痛。 本文所用的“疼痛”包括急性疼痛和慢性疼痛。還包括神經(jīng)痛。本文所用的“預防(preventing)”或“預防(prevention) ”表示全部或部分地預 防，或者改善、減輕或控制。涉及本發(fā)明的化合物或組合物時，本文所用的“治療有效量”或“有效量”指足以 誘導期望的生物、藥理或治療結(jié)果的量。該結(jié)果可以是疾病或病癥或疾病狀況的體癥、癥狀 或原因的緩解，或生物系統(tǒng)任何其他期望的改變。在本發(fā)明中，結(jié)果包括預防疼痛。本文所用的術(shù)語“治療(treating) ”和“治療(treatment) ”指治療性治療和預防 (prophylactic)或予頁防(preventative)管理。本文所用的“間隙連接調(diào)節(jié)劑，，是影響或調(diào)節(jié)連接蛋白、連接蛋白半通道(連接 子)或間隙連接的活性、屬性、表達或形成的化合物。間隙連接調(diào)節(jié)劑無限制地包括反義化 合物(如反義多核苷酸)、RNAi和siRNA化合物、抗體及其結(jié)合片段以及包括“肽模擬物” 和肽類似物的肽和多肽。除了抗連接蛋白多核苷酸以及抗連接蛋白肽和肽模擬物以外，其 他間隙連接調(diào)節(jié)劑包括阻斷、抑制或減少間隙連接開放的化合物，該化合物包括作用是關(guān) 閉間隙連接的試劑(如連接蛋白磷酸化化合物)、阻斷抑制或減少辦通道開放的化合物(如 連接蛋白磷酸化化合物)以及阻斷、抑制或者減少或破壞與連接蛋白相互作用的ZO-I蛋白 的化合物(如羧基末端連接蛋白43多肽)。這樣的間隙連接調(diào)節(jié)劑對于治療個體以提供疼 痛緩解是有用的，這包括緩解由于創(chuàng)傷而導致的疼痛，由于骨科方法或手術(shù)導致的疼痛，或 者由于骨科疾病、病癥和/或疾病狀況導致的疼痛。非限制性優(yōu)選間隙連接調(diào)節(jié)劑為抗連 接蛋白43試劑、抗連接蛋白43間隙連接試劑以及抗連接蛋白43半通道試劑。在本文中進 一步詳細地討論了示例性抗連接蛋白試劑。其他非限制性優(yōu)選間隙連接調(diào)節(jié)劑為抗連接蛋 白^H式劑、抗連接蛋白沈間隙連接試劑以及抗連接蛋白沈半通道試劑。非限制性優(yōu)選間 隙連接調(diào)節(jié)劑為抗連接蛋白30試劑、抗連接蛋白30間隙連接試劑以及抗連接蛋白30半通 道試劑。術(shù)語“肽模擬物”和“模擬物”包括天然存在及合成的化學化合物，其可以具有與 它們所模擬的蛋白區(qū)域的相同結(jié)構(gòu)和功能特征。對于連接蛋白，它們可以模擬例如涉及連 接子-連接子對接和細胞間通道形成的相反連接蛋白的細胞外環(huán)?！半念愃莆铩敝高@樣的化合物，其具有與模板肽類似的性質(zhì)的化合物，并且可以是 非肽藥物。包括基于肽的化合物的“肽模擬物”(又稱為“模擬肽”)還包括這樣的基于非 肽的化合物，例如肽類似物。在結(jié)構(gòu)上與治療有用的肽類似的肽模擬物可以用于產(chǎn)生等同 或增強的治療或預防效果。通常，肽模擬物在結(jié)構(gòu)上與范例多肽(即，具有生物或藥理功 能或活性的多肽)相同或類似，但是還可以具有任選地由例如選自以下的連接代替的一個 或多個肽連接-CH2NH-、-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH = CH-(順式與反式)、-COCH2-, -CH(OH) CH2-和-CH2S0-。模擬物可以完全由天然氨基酸或氨基酸的非天然類似物組成，或者可以是部分天然肽氨基酸與部分氨基酸的非天然類似物的嵌合分子。模擬物還可以包含任何量的 天然氨基酸保守取代，只要這樣的取代也基本上不改變模擬物的活性。例如，模擬物組合物 可以用作抗連接蛋白試劑，如果該組合物能夠下調(diào)連接蛋白或半通道的生物作用或活性， 例如防止半通道的對接形成間隙連接介導的細胞間通訊，或防止半通道開放將細胞質(zhì)暴露 于細胞外環(huán)境。肽模擬物、模擬肽和連接蛋白調(diào)節(jié)肽，以及包括連接蛋白磷酸化化合物和連 接蛋白羧基末端多肽在內(nèi)的化合物，包括本文所述的那些化合物，以及本領(lǐng)域可以已知的 的那些化合物，不論是目前已知還是以后開發(fā)的。間隙連接調(diào)節(jié)劑包括這樣的試劑，其關(guān)閉或阻斷間隙連接和/或半通道，或者防 止或降低通過間隙連接的細胞間通訊，或者防止或降低細胞通過半通道與細胞外環(huán)境通 訊。本文所用的各種形式的“調(diào)節(jié)劑”和連接蛋白活性的“調(diào)節(jié)”指全部或部分抑制連 接蛋白或連接蛋白半通道或連接蛋白間隙連接的表達或作用或活性，并且可以作為抗連接 蛋白化合物發(fā)揮功能。通常，術(shù)語“蛋白”指通過肽鍵連接的兩個或更多個單獨的氨基酸(不論是否天然 存在)的任何聚合物，當和一個氨基酸(或氨基酸殘基)的α碳原子鍵合的羧酸基團的羧 基碳原子與和相鄰的氨基酸的α碳原子鍵合的氨基的氨基氮原子共價連接時形成了這樣 的聚合物。這些肽鍵連接和包含它們的原子(即α碳原子、羧基碳原子(及它們的取代基 氧原子)和氨基氮原子(及它們的取代基氫原子))形成蛋白的“多肽骨架”。另外，本文所 用的術(shù)語“蛋白質(zhì)”被理解為包括術(shù)語“多肽”和“肽”(它們有時候在本文中互換使用)。 類似地，蛋白片段、類似物、衍生物和變體在本文中可以稱為“蛋白”，并且除非另外指明，應 當被視為蛋白。術(shù)語蛋白的“片段”指包含較少的蛋白的全部氨基酸殘基的多肽。蛋白的 “結(jié)構(gòu)域”也是片段，并且包含通常賦予活性或功能所需的蛋白的氨基酸殘基。本文所用的術(shù)語“透皮”表示將試劑遞送到皮膚和/或通過皮膚，進行治療。本文所用的術(shù)語“透皮通量(transdermal flux) ”表示透皮遞送的比率。本文所用的“透皮通量率”是任何分析物通過個體、人或動物的皮膚流出的比率， 或者任何透膜體(permeant)、藥物、藥物活性劑、染料或色素進入和通過有機體皮膚的比 率。本文所用的術(shù)語“微突出物(microprojection) ”和“微凸起(microprotrusion) ” 指穿刺元件，其適合于通過角質(zhì)層刺入或切入活體動物的下表皮層或表皮層和真皮層，特 別是哺乳動物，更特別是人的下表皮層或表皮層和真皮層。本文所用的術(shù)語“微突出物構(gòu)件(microprojection member) ”通常表示這樣的微 突出物陣列，其包含通常排列為陣列的多個微突出物，以用于刺入角質(zhì)層。微突出物構(gòu)件可 以以各種方式形成，包括例如通過蝕刻或沖壓來自薄片的微突出物，并將微突出物折疊或 扭曲出片的平面以形成三維構(gòu)型。微突出物成員還可以以其他已知的方式形成，例如如美 國專利6，050, 988所公開的，通過沿著每條帶的邊緣形成一條或多條具有微突出物的帶。本文所用的術(shù)語“包衣制劑”意圖表示并包括用于包被微突出物和/或其陣列的 組合物或混合物。優(yōu)選地，包衣制劑包含至少一種間隙連接調(diào)節(jié)劑，該間隙連接調(diào)節(jié)劑可以 例如位于制劑、溶液或懸浮液中。本文所用的術(shù)語“生物相容包衣”和“固體包衣”意圖表示并包括基本上為固態(tài)的“包衣制劑”。本文所用的“人工開口 ”或“微孔”表示包括微孔在內(nèi)的合適大小的生物膜的物 理缺口(physical breach)，用于通過該物理缺口遞送或提取液體或其他成分。因此，“人 工開口 ”或“微孔”或任何這樣的類似術(shù)語指在生物膜中產(chǎn)生的期望深度的小洞、開口或 裂縫(crevice)，或者通過生物膜的小洞、開口或缺口。例如，開口可以通過如美國專利 5，885，211號所述通過傳導熱能來形成，或通過機械過程形成，或通過煙火過程形成。例如， 洞或孔的直徑大小是約1-1000微米。應當理解，術(shù)語微孔為了簡便以單數(shù)形式使用，但是 裝置和方法可以形成多個開口或孔?！半x子電滲”指通過使用兩個或更多個電極向組織表面應用外部電場，并且將離子 化形式的藥物或與離子轉(zhuǎn)運有關(guān)的水通量所攜帶的未離子化的藥物(電滲)遞送到組織， 或者類似地提取生物流體或分析物。“電穿孔”指通過電流來在細胞壁上產(chǎn)生開口，通常是小于微孔的數(shù)量級的開口。 通過電穿孔所形成的開口通常在任何維度上僅有幾納米。在透膜體已經(jīng)通過微孔進入組織 的這些較深層后，電穿孔用于促進有機體外層之下的靶組織對所選的透膜體的細胞吸收?！俺晫搿被颉俺曁幚怼敝嘎暷?，其可以包括通過以下方式產(chǎn)生的通常描述為超 聲的頻率將交流電通過材料來使壓電晶體或其他機電元件振動。使用聲能來增加皮膚對 藥物分子的滲透性被稱為超聲導入或超聲透入(phonophoresis)?！凹裳b置(integrated device) ”表示這樣的裝置，其適合于在組織中形成人工 開口，并且還適合于一種或多種另外的應用，例如將一種或多種透膜體遞送入組織(優(yōu)選 通過人工開口)，和任選地從組織收集生物流體(優(yōu)選通過人工開口)，以及任選地分析該 生物流體來確定其特征。本文所用的“非侵入性”表示不要求針、導管或其他侵入性醫(yī)療設(shè)備進入身體的部 分。本文所用的“最小侵入性”指使用機械、液壓或電方式來侵入角質(zhì)層以產(chǎn)生小洞或 微孔，而不引起下層組織的重大損傷。本文所用的“藥物可接受的載體”指可以將諸如藥物可接受的藥物的物質(zhì)提 供于其中用于遞送的載體。藥物可接受的載體在本領(lǐng)域中有描述，例如在“Remington The Science and Practice of Pharmacy (雷明頓制藥科學與實踐)”Mack Publishing Company，Pennsylvania，1995，其公開通過引用并入本文。載體可以包括例如水和其他水性 溶液、油、脂類、糖、多糖、緩沖液、賦形劑以及生物可降解的聚合物，如聚酯、聚酸酐、聚氨基 酸、脂質(zhì)體及它們的混合物。發(fā)明_既述在下文的公開中，描述了幾種能夠給予人體有效量的藥劑或化妝品(cosmetic agent)的透皮遞送系統(tǒng)。盡管本發(fā)明的實施方案可以用于給予低或高(或者低和高兩者) 分子量的間隙連接調(diào)節(jié)劑，但是特別合適的實施方案包括可以給予分子量大于約5，000或 6，000道爾頓的化合物的透皮遞送系統(tǒng)。例如，一實施方案包括透皮遞送系統(tǒng)，該透皮遞送 系統(tǒng)可以給予治療有效量的用于緩解疼痛的間隙連接調(diào)節(jié)劑。這些實施方案中的一些涉及 透皮遞送系統(tǒng)，該透皮遞送系統(tǒng)可以給予諸如核酸、肽和肽模擬物的間隙連接調(diào)節(jié)劑，以及 其他間隙連接調(diào)節(jié)劑。這些實例提供為證明，本發(fā)明的實施方案可以用于透皮遞送低分子量和高分子量化合物，并且應當理解利用本文所述的實施方案，可以將治療有益量或預防 有益量的許多其他分子有效遞送至身體。本文所述的具體透皮遞送制劑可以包含滲透增強劑，其包括脂類或乙氧基化的脂 類。脂類(如油)和乙氧基化的脂類(如乙氧基化的油)可以用作透皮滲透媒介物或增強 劑以運輸?shù)头肿恿亢透叻肿恿炕衔锿ㄟ^皮膚。還應當理解，乙氧基化的脂肪酸(如棕櫚 油酸或油酸)可以用于某些實施方案中(如，除了補充油或乙氧基化的油，例如鴯鹋油或澳 洲堅果油，或者乙氧基化的鴯鹋油或乙氧基化的澳洲堅果油外)。乙氧基化的脂類可以以本領(lǐng)域已知的許多方式來產(chǎn)生。與本發(fā)明的透皮方法有關(guān) 的可用方法涉及環(huán)氧乙烷與植物油、堅果油(如澳洲堅果)、動物油(如鴯鹋油)或合成油 的反應。滲透增強劑的親水組分可以借助存在于脂類分子的乙氧基化的數(shù)目。另外，可以添 加醇、非離子增溶劑或乳化劑以改善遞送的試劑的溶解性或滲透增強劑的效率或流動性。 合適的親水組分包括但不限于乙二醇、丙二醇、二甲亞砜(DMSO)、二甲基聚硅氧烷(DMPX)、 油酸、辛酸、異丙醇、1-辛醇、乙醇(變性的或無水的)以及其他制藥級或無水醇。本發(fā)明的實施方案還可以包括制劑領(lǐng)域中常規(guī)使用的試劑，例如水性佐劑。因此， 本發(fā)明的幾個實施方案可以具有滲透增強劑，該滲透增強劑包含疏水/親水組分，并且可 以含有親水組分和/或任選的水性佐劑，該疏水/親水組分包括乙氧基化的油(如澳洲堅 果油、椰子油、桉樹油、合成油、蓖麻油、甘油、玉米油、西蒙得木油或鴯鹋油)，該親水組分包 括醇、非離子增溶劑或乳化劑(如異丙醇)。制劑中的其他常規(guī)組分可以用于本發(fā)明的透皮遞送制劑中，該常規(guī)組分包括香 劑、乳膏劑、軟膏劑、著色劑和其他化合物，只要添加的組分不對間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮遞 送產(chǎn)生不良影響。用于本發(fā)明的透皮遞送系統(tǒng)的其他實例包括透皮遞送裝置，例如致微孔 (microporation)裝置、電穿孔裝置、離子電滲裝置、超聲導入裝置和微突出物裝置及陣列。本發(fā)明提供了治療和預防疼痛的方法。在某些實施方案中，為需要治療的患者提 供了包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮遞送系統(tǒng)，從而緩解疼痛。可以使患者與透皮 遞送系統(tǒng)接觸并使治療持續(xù)至足以減輕疼痛或預防疼痛的時間。間隙連接調(diào)節(jié)劑本文所述發(fā)明的間隙連接調(diào)節(jié)劑能夠調(diào)節(jié)或影響分子進出細胞的轉(zhuǎn)運(如，阻 斷、減少、抑制或下調(diào))。因此，本文所述的某些間隙連接調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)細胞通訊(如細胞間)。 某些間隙連接調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)或影響細胞質(zhì)與周質(zhì)或細胞外空間之間的分子傳遞。這樣的間隙 連接調(diào)節(jié)劑通常靶向連接蛋白和/或連接蛋白半通道(連接子)。半通道與包含連接蛋白 的所得間隙連接，在開放的半通道的情況下，獨立地參與細胞質(zhì)與細胞外空間或組織之間 的小分子交換或釋放，并且在開放的間隙連接的情況下，獨立地參與鄰近細胞的細胞質(zhì)之 間的小分子交換或釋放。因此，本文所提供的間隙連接調(diào)節(jié)劑可以直接或間接減少細胞之 間的偶聯(lián)或通訊，或者減少或阻斷細胞與細胞外空間或組織之間的通訊(或分子的傳遞)， 并且分子從細胞向細胞外空間或組織內(nèi)(或從細胞外空間或組織進入細胞)轉(zhuǎn)運的調(diào)節(jié)， 或者鄰近細胞之間轉(zhuǎn)運的調(diào)節(jié)在本發(fā)明的抗連接蛋白試劑和實施方案的范圍內(nèi)。優(yōu)選地， 連接蛋白為連接蛋白43。能引起所期望的分子通過間隙連接或連接蛋白半傳遞(如轉(zhuǎn)運)的抑制的任何間隙連接調(diào)節(jié)劑，可以用 于本發(fā)明的實施方案中。調(diào)節(jié)分子通過間隙連接或連接蛋白半通道 的任何間隙連接調(diào)節(jié)劑也提供于特定的實施方案中(如調(diào)節(jié)、阻斷或減少分子從細胞的細 胞質(zhì)通過進入細胞外空間或鄰近的細胞質(zhì)的那些間隙連接調(diào)節(jié)劑)。通過或不通過間隙連 接解偶聯(lián)(阻斷分子通過間隙連接的轉(zhuǎn)運)，這樣的間隙連接調(diào)節(jié)劑可以調(diào)節(jié)分子通過間 隙連接或連接蛋白半通道。這樣的化合物包括例如蛋白和多肽、多核苷酸及其他有機化合 物，并且它們可以例如全部或部分地阻斷間隙連接或半通道的功能或表達，或者全部或部 分地下調(diào)連接蛋白的產(chǎn)生。某些間隙連接抑制劑列于Evans，W. H. and Boitano，S. Biochem. Soc. Trans. 29 =606-612(2001)中。其他間隙連接調(diào)節(jié)劑包括連接蛋白磷酸化化合物，其全 部或部分地關(guān)閉間隙連接和/或半通道；和連接蛋白羧基末端多肽，其可以抑制、減少或阻 斷ZO-I蛋白結(jié)合。優(yōu)選地，連接蛋白為連接蛋白43，半通道為連接蛋白43半通道，并且間 隙連接為連接蛋白43間隙連接。某些間隙連接調(diào)節(jié)劑提供連接蛋白表達的下調(diào)(例如，通過下調(diào)mRNA轉(zhuǎn)錄或翻 譯)，或者降低或抑制連接蛋白、連接蛋白半通道或間隙連接的活性。在下調(diào)的情況下，在連 接蛋白表達被下調(diào)的位點，這會具有以下效果減少通過間隙連接的細胞間直接通訊，或減 少細胞質(zhì)通過半通道暴露于細胞外空間?？惯B接蛋白43試劑是優(yōu)選的。其他本發(fā)明優(yōu)選 的實施方案是抗連接蛋白26試劑和抗連接蛋白30試劑。間隙連接調(diào)節(jié)劑的實例包括降低或抑制連接蛋白mRNA和/或蛋白的表達或功能 的試劑，或者降低連接蛋白、連接蛋白半通道或間隙連接的活性、表達或形成的試劑。抗連 接蛋白試劑包括抗連接蛋白多核苷酸，例如反義多核苷酸和其他多核苷酸(如具有siRNA 或核酶功能性的多核苷酸)；和抗體及其結(jié)合片段；以及肽和肽模擬物，其包括調(diào)節(jié)半通道 或間隙聯(lián)系連接活性或功能的肽模擬物和肽類似物?？惯B接蛋白43試劑是優(yōu)選的。其他 本發(fā)明優(yōu)選的實施方案是抗連接蛋白26試劑和抗連接蛋白30試劑。多核苷酸用于本發(fā)明的多核苷酸包括連接蛋白反義多核苷酸，以及具有使得它們能下調(diào)連 接蛋白表達的功能的多核苷酸。其他合適的抗連接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和 siRNA多核苷酸?？惯B接蛋白43多核苷酸是優(yōu)選的。其他本發(fā)明優(yōu)選的實施方案是抗連接 蛋白沈試劑和抗連接蛋白30試劑。反義多核苷酸與諸如RNAi、siRNA和核酶多核苷酸的其他抗連接蛋白多核苷酸 以及具有修飾和混合的骨架的多核苷酸的合成，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見，例如 Stein C. A. and Krieg Α. Μ. (eds)，Applied Antisense Oligonucleotide Technology, 1998 (Wiley-Liss)。合成抗體和結(jié)合片段以及包括肽模擬物與肽類似物在內(nèi)的肽和多肽 的方法，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見，例如Lihu Yang et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. ,1 ；95 (18) :10836-10841(Sept 1 1998) ；Harlow andLane(1988) “Antibodies :A Laboratory Manuel (抗體實驗室手冊)，，Co Id Spring Harbor Publications, New York ； Harlow and Lane (1999) "Using Antibodies，，A Laboratory Manuel ( “使用抗體”實驗室 手冊)，Cold Spring Harbor Publications, New York。根據(jù)一方面，連接蛋白表達的下調(diào)通?？梢曰诶梅戳x多核苷酸(如DNA或RNA 多核苷酸)的反義方法，更特別是基于使用反義寡脫氧核苷酸(ODN)。這些多核苷酸(如 0DN)靶向要下調(diào)的連接蛋白。通常，多核苷酸是單鏈的，但是可以是雙鏈的。
反義多核苷酸可以抑制連接蛋白的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。優(yōu)選地，多核苷酸是從連接 蛋白基因或mRNA的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯的特異性抑制劑，并且不抑制從其他基因或mRNA的轉(zhuǎn) 錄和/或翻譯。產(chǎn)物可以與連接蛋白基因或mRNA結(jié)合，(i)在編碼序列的5’，和/或(ii) 在編碼序列，和/或(iii)在編碼序列的3’。反義多核苷酸通常與連接蛋白mRNA反義，優(yōu)選例如連接蛋白43mRNA。其他本發(fā)明 優(yōu)選的實施方案是抗連接蛋白26反義化合物和抗連接蛋白30反義化合物。這樣的多核苷 酸能夠與連接蛋白mRNA雜交，因而可以通過干擾連接蛋白mRNA代謝的一個或多個方面來 抑制連接蛋白的表達，該連接蛋白mRNA代謝包括轉(zhuǎn)錄、mRNA加工、mRNA從細胞核的轉(zhuǎn)運、翻 譯或mRNA降解。反義多核苷酸通常與連接蛋白mRNA雜交，形成可以導致mRNA翻譯的直接 抑制和/或不穩(wěn)定的雙鏈體。這樣的雙鏈體易被核酸酶降解。反義多核苷酸可以與連接蛋白mRNA的全部或部分雜交。通常，反義多核苷酸與連 接蛋白mRNA的核糖體結(jié)合區(qū)或編碼區(qū)雜交。多核苷酸可以與連接蛋白mRNA的全部或部分 互補。例如，多核苷酸可以與連接蛋白mRNA的全部或部分準確互補。然而，絕對互補性不 是必須的，具有足夠的互補性以形成生理條件下解鏈溫度高于約20°C、30°C或40°C的雙鏈 體的多核苷酸特別適合用于本發(fā)明。因此，多核苷酸通常是與mRNA互補的序列的同源物。多核苷酸可以是與連接蛋白 mRNA在諸如以下的中等到高嚴緊條件下雜交的多核苷酸約50°C至約60°C，0. 03M氯化鈉 和0. 03M檸檬酸鈉。對于某些方面，合適的多核苷酸的長度通常為約6-40個核苷酸。優(yōu)選地，多核苷 酸的長度為約12至約35個核苷酸，或者約12至約20個核苷酸，更優(yōu)選為約18至約32個 核苷酸。根據(jù)替代性方面，多核苷酸的長度可以為至少約40個核苷酸，例如至少約60或 至少約80個核苷酸，并且高達約100、約200、約300、約400、約500、約1000、約2000或約 3000或更多個核苷酸。多核苷酸所靶向的連接蛋白或多種連接蛋白依賴于待實現(xiàn)下調(diào)的位點。對于連接 蛋白亞基組成而言，這反映了身體中不同位點的間隙連接的不均勻組成。在一方面，連接蛋 白是天然存在于人或動物中的連接蛋白，或者天然存在于連接蛋白表達或活性要降低的組 織中的連接蛋白。連接蛋白基因(包括編碼序列)通常與一種或多種本文所述的特異性連 接蛋白的編碼序列具有同源性，例如與表8所示的連接蛋白43編碼序列具有同源性。連接 蛋白通常為α或β連接蛋白。優(yōu)選地，連接蛋白為α連接蛋白，并且表達于要治療的組合。然而，就在組織中的分布而言，某些連接蛋白比其他連接蛋白更普遍。分布最廣泛 的連接蛋白之一是連接蛋白43。靶向連接蛋白43的多核苷酸特別適合用于本發(fā)明。在其 他方面，靶向其他連接蛋白。其他本發(fā)明優(yōu)選的連接蛋白靶標是連接蛋白^H式劑和連接蛋 白30試劑?？惯B接蛋白多核苷酸包括連接蛋白反義多核苷酸以及具有使得它們能下調(diào)連接 蛋白表達的功能的多核苷酸。其他合適的抗連接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和SiRNA 多核苷酸。在一非限制性優(yōu)選方面，反義多核苷酸僅靶向一種連接蛋白的mRNA。最優(yōu)選地，該 連接蛋白為連接蛋白43。在另一方面，該連接蛋白為連接蛋白沈或連接蛋白30。在另一方面連接蛋白為連接蛋白31. 1、32、36、37、40或45。在其他方面，該連接蛋白為連接蛋白 30. 3,31,40. 1 或 46.6。還考慮到，可以聯(lián)合使用靶向不同連接蛋白的多核苷酸(例如，可以靶向1、2、3、4 或更多種不同的連接蛋白)。例如，靶向連接蛋白43以及連接蛋白家族的一個或多個其他 成員(如連接蛋白26,30,30. 3,31. 1、32、36、37、40、40. 1、45和46. 6)的多核苷酸可以聯(lián)合 使用。除了連接蛋白43以外，優(yōu)選的靶連接蛋白為連接蛋白沈和30?；蛘?，反義多核苷酸可以為組合物的部分，該組合物可以包含靶向超過一種連接 蛋白的多核苷酸。優(yōu)選地，多核苷酸所針對的連接蛋白之一為連接蛋白43。寡脫氧核苷酸 所針對的其他連接蛋白可以包括例如連接蛋白26和30。寡脫氧核苷酸所針對的其他連接 蛋白可以包括例如連接蛋白30. 3,31. 1、32、36、37、40、40. 1、45和46. 6。針對各種連接蛋白 的合適的示例性多核苷酸(和0DN)列于表1中。單獨的反義多核苷酸可以是特定的連接蛋白特異性的，或者可以靶向1、2、3或更 多種不同的連接蛋白。特異性多核苷酸通常靶向連接蛋白基因或mRNA中的序列，該序列在 連接蛋白之間不是保守的，但是非特異性多核苷酸靶向各種連接蛋白的保守序列。用于本發(fā)明的多核苷酸可以合適地為未修飾的磷酸二酯低聚物。這樣的寡脫氧核 苷酸的長度可以變化。據(jù)發(fā)現(xiàn)，30mer (單元單體)的多核苷酸為特別合適的。15-25mer也 是合適的，例如18-2aner。參照寡脫氧核苷酸，描述了本發(fā)明的許多方面。然而，應當理解，其他合適的多核 苷酸(如RNA多核苷酸)可以用于這些方面。反義多核苷酸可以被化學修飾。這可以增強它們對核酸酶的抗性，并且可以增強 它們進入細胞的能力。例如，可以使用寡核苷酸硫代磷酸酯。其他脫氧核苷酸類似物包括甲 基膦酸酯、磷酰胺、二硫代磷酸酯、N3’ P5’ -磷酰胺和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯以及它們的 2’ -0-烷基類似物和2’ -0-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯?；蛘?，可以使用混合骨架的寡核 苷酸(“MBO”)。MBO含有寡脫氧核苷酸硫代磷酸酯(寡脫氧核苷酸)的節(jié)段，以及合適地 放置的修飾寡脫氧核苷酸或寡核糖核苷酸的節(jié)段。MBO具有硫代磷酸酯連接的節(jié)段，以及其 他修飾的寡核苷酸的其他節(jié)段，例如甲基膦酸酯，其是非離子的并且對核酸酶或2’ -0-烷 基寡核糖核苷酸具有很強的抗性。制備修飾骨架和混合骨架的寡核苷酸的方法是本領(lǐng)域已 知的。本發(fā)明所用的反義多核苷酸的精確序列會取決于靶連接蛋白。在一實施方案中， 合適的連接蛋白反義多核苷酸可以包括諸如寡脫氧核苷酸的選自表1所示下列序列的多 核苷酸表權(quán)利要求
1.用于減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛的方法，包括局部給予有需要的所述個體藥物 可接受的透皮遞送形式的藥物組合物，所述藥物組合物包含治療有效量的連接蛋白43間 隙連接調(diào)節(jié)劑，從而減輕疼痛。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述支持體結(jié)構(gòu)為關(guān)節(jié)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述支持體結(jié)構(gòu)選自肌肉、骨、腱、韌帶和軟骨。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有關(guān)節(jié)炎。
5.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述個體患有骨關(guān)節(jié)炎。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有類風濕性關(guān)節(jié)炎。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有頸關(guān)節(jié)炎。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有強直性脊柱炎。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有急性疼痛。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述個體患有背部疼痛、膝部疼痛、髖部疼痛、肩部 疼痛、手疼痛或手指疼痛。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有慢性疼痛。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述個體患有背部疼痛、膝部疼痛、髖部疼痛、肩 部疼痛、手疼痛或手指疼痛。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有手術(shù)后疼痛。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述透皮劑型選自局部凝膠劑、洗劑、軟膏劑或噴霧劑。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述透皮遞送形式包含透皮滲透劑，所述透皮滲透 劑包含油。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述油為具有10-19個乙氧基化/分子的乙氧基 化的油。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述乙氧基化的油含有16個乙氧基化/分子。
18.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述油包括選自澳洲堅果油、白芒花籽油、蓖麻 油、西蒙得木油、玉米油、葵花籽油、芝麻油和鴯鹋油的油。
19.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述乙氧基化的油包括選自澳洲堅果油、白芒花 籽油、蓖麻油、西蒙得木油、玉米油、葵花籽油、芝麻油和鴯鹋油的乙氧基化的油。
20.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述油為鴯鹋油。
21.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述乙氧基化的油為乙氧基化的鴯鹋油。
22.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為10，000道爾頓 或更大。
23.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑小于10，000道爾頓。
24.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為寡核苷酸。
25.如權(quán)利要求M所述的方法，其中所述寡核苷酸選自反義寡核苷酸、核酶、RNAi寡核 苷酸和siRNA寡核苷酸。
26.如權(quán)利要求I-M或25中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連 接調(diào)節(jié)劑為連接蛋白43反義寡核苷酸。
27.如權(quán)利要求沈所述的方法，其中所述反義寡核苷酸選自GTAATTGCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC(SEQ ID NO :1)、GTAATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC (SEQ ID NO 2)禾口 GGCAAG AGA CAC CAA AGA CAC TAC CAG CAT(SEQ ID NO :3)。
28.如權(quán)利要求沈所述的方法，其中所述反義寡核苷酸具有約15至約35個核苷酸，并 且與連接蛋白43mRNA充分互補以形成生理條件下解鏈溫度高于20°C的雙鏈體。
29.如權(quán)利要求沈所述的方法，其中所述反義寡核苷酸具有約15至約35個核苷酸，并 且與連接蛋白43mRNA的反義序列具有至少約70%的同源性。
30.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為RNAi或siRNA 多核苷酸。
31.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為肽或肽模擬物。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述肽或肽模擬物與連接蛋白43半通道結(jié)合。
33.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述肽或肽模擬物與連接蛋白43Z0-1蛋白結(jié)合位點結(jié)合。
34.如權(quán)利要求1所述的方法，還包括第二藥物化合物，其中所述第二藥物化合物為非 甾體抗炎藥物。
35.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑為連接蛋白43磷 酸化試劑。
36.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑按重量或體積計 的量為約0. 01 %至約50. 0%。
37.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑大約的平均分子 量小于約10，000道爾頓，并且按重量或體積計的治療有效量為約0. 01%至約50. 0%。
38.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑的治療有效量為 約 0. 01%至約 10. 0%。
39.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑按重量或體積計 的治療有效量為約0. 01%至約5. 0%。
40.如權(quán)利要求I-M或25中任一權(quán)利要求所述的方法，其中將所述組合物給予至接近 所述個體的組織或關(guān)節(jié)疼痛位置的皮膚區(qū)域。
41.用于減輕個體的疼痛的藥物組合物，包含疼痛減輕量的抗連接蛋白43化合物，以 及包含透皮遞送劑的藥物可接受的媒介物。
42.用于減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛的藥物組合物，包含在透皮劑型中具有疼痛 減輕量的抗連接蛋白43化合物的制劑。
43.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其中所述組合物包含透皮滲透增強劑。
44.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其中所述抗連接蛋白43化合物為寡核苷酸，并 且所述透皮滲透劑促進寡核苷酸通過皮膚的遞送。
45.用于減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)中的疼痛的方法，包括向有需要的個體應用包含抗連 接蛋白43化合物的透皮遞送裝置，并且應用至接近所述個體的組織或關(guān)節(jié)疼痛位置的皮 膚區(qū)域。
46.如權(quán)利要求45的方法，其中所述抗連接蛋白43化合物為寡核苷酸，并且所述透皮 遞送裝置促進寡核苷酸通過皮膚的遞送。
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述透皮遞送裝置為透皮微突出物遞送裝置。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述微突出物裝置具有生物相容的包衣，所述包 衣形成自具有分散于其上的抗連接蛋白43化合物的包衣制劑。
49.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述透皮遞送裝置在組織膜中形成至少一個微 孔，從而促進所述抗連接蛋白43化合物通過皮膚的遞送。
50.制品，包含包裝材料和包含于所述包裝材料中的透皮遞送組合物，其中所述透皮 遞送組合物包含疼痛緩解有效量的抗連接蛋白43化合物和透皮滲透有效量的乙氧基化的 油，并且其中所述包裝材料包含表明所述組合物可以用于減輕支持結(jié)構(gòu)中的疼痛的標簽。
51.如權(quán)利要求50所述的制品，其中所述乙氧基化的油選自乙氧基化的澳洲堅果油、 乙氧基化的白芒花籽油、乙氧基化的蓖麻油、乙氧基化的西蒙得木油、乙氧基化的玉米油、 乙氧基化的葵花籽油、乙氧基化的芝麻油和乙氧基化的鴯鹋油。
52.如權(quán)利要求50所述的制品，其中所述抗連接蛋白43化合物為寡核苷酸。
53.制品，包含包裝材料和包含于所述包裝材料中的透皮遞送組合物，其中所述透皮遞 送組合物包含疼痛緩解有效量的抗連接蛋白43化合物和透皮滲透有效量的油，并且其中 所述包裝材料包含表明所述組合物可以用于減輕支持結(jié)構(gòu)中的疼痛的標簽。
54.如權(quán)利要求53所述的制品，其中所述油選自澳洲堅果油、白芒花籽油、蓖麻油、西 蒙得木油、玉米油、葵花籽油、芝麻油和鴯鹋油。
55.如權(quán)利要求53所述的制品，其中所述抗連接蛋白43化合物為寡核苷酸。
56.用于減輕個體的支持體結(jié)構(gòu)或肌肉骨骼系統(tǒng)中的疼痛的方法，包括給予有需要的 所述個體治療有效量的含有連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑的透皮、注射、滴注或貯庫劑型， 從而減輕疼痛。
全文摘要
本發(fā)明涉及包括透皮遞送在內(nèi)的遞送治療有效量的用于調(diào)節(jié)間隙連接形成和功能的化合物，其包括用于降低間隙連接形成和功能的寡核苷酸，和用于治療個體的方法及組合物，該個體患有與疾病、病癥或疾病狀況有關(guān)的疼痛，以及與包括但不限于肌肉疼痛、韌帶疼痛、腱疼痛、關(guān)節(jié)疼痛以及手術(shù)后疼痛在內(nèi)的疼痛有關(guān)的疼痛。
文檔編號C12N15/113GK102099475SQ200980128149
公開日2011年6月15日 申請日期2009年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月4日
發(fā)明者布拉德?！·杜甫特, 科林·格林 申請人:科達治療公司