專(zhuān)利名稱(chēng)：細(xì)菌組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有長(zhǎng)儲(chǔ)存期的細(xì)菌組合物，和產(chǎn)生此類(lèi)組合物的方法。本發(fā)明還涉 及包含細(xì)菌組合物的食物制品。
背景技術(shù)：
幾篇專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)了用聲稱(chēng)增加細(xì)菌制劑耐貯藏性的特定賦形劑或載體配制的 細(xì)菌制劑。另外的專(zhuān)利文獻(xiàn)涉及降低細(xì)菌制劑的水活性(aw)，例如通過(guò)加入將結(jié)合一些水 的Si02。還有使用不同形式的干燥劑用于去除水。US4956295公開(kāi)了與硅膠吸附劑混合的干燥乳桿菌。聲稱(chēng)混合物可在無(wú)冷藏情況 下儲(chǔ)存。US7122370B和US72^818B公開(kāi)了包含益生菌細(xì)菌與單價(jià)藻酸鹽的制劑，其中制 劑具有0. 01和0. 07之間的水活性，并且其中當(dāng)暴露于酸性環(huán)境中時(shí)形成海藻酸凝膠，保護(hù) 益生菌細(xì)菌不被酸性環(huán)境的抗生素效應(yīng)作用。在與細(xì)菌混合之前，將藻酸鹽干燥至低于5% 的含水量。EP1482811B公開(kāi)了得到食物制品的方法，包括步驟a.混合有活力的微生物制劑與其它成分，b.干燥混合物至低于0. 3的水活性，c.壓縮混合物，d.包衣,禾口e.與食物制品混合。US2005/0100559公開(kāi)了具有小于0. 5的水活性的干細(xì)菌組合物。US6953592B公開(kāi)了基于非發(fā)泡、水可溶性或水可分散性碳水化合物的基質(zhì)，所述 基質(zhì)在閉合的孔中包含當(dāng)基質(zhì)接觸水時(shí)足以促進(jìn)基質(zhì)溶解或分散的數(shù)量的滯留氣。US2005/0266069要求保護(hù)用于腸靶向的有活力的和穩(wěn)定的益生菌制劑，包含許 多益生菌微球體，每一個(gè)微球體包含包含一種或一種以上益生菌細(xì)菌、纖維質(zhì)賦形劑、崩 解劑和一種或一種以上添加劑的核；和能夠抵抗胃液的腸溶衣，其具有小于5%的殘留水 水平和0. 1和0. 5之間的水活性(aw)。WO 2005/063200公開(kāi)了在兩個(gè)區(qū)中包含益生菌微生物(例如乳桿菌屬 (Lactobacillus)GG)和其它營(yíng)養(yǎng)活性成分的益生菌片劑；第一區(qū)包含所述的益生菌微生 物并且第二區(qū)包含至少一種所述的其它活性成分。第一區(qū)中的水活性應(yīng)該不大于0.2。據(jù) 稱(chēng)雖然總含水量相對(duì)高但是得到了好的微生物生存力。W008048731A要求保護(hù)通過(guò)減少包含LGG的制劑的水活性至小于大約0. 16并且維 持制劑溫度在25°C或低于25°C延長(zhǎng)包含LGG的粉末化營(yíng)養(yǎng)制劑的儲(chǔ)存期的方法。US7037708B公開(kāi)了包含至少一種載體結(jié)合形式的植物乳桿菌(LactcAaciIlus ρlantarum)的組合物，其a)具有至少大約0. Imm的顆粒大小和b)包含從大約10E10至 10E12cfu/g的至少一種微生物種類(lèi)；c)具有小于0. 15的水活性(aw)和d)被壓縮。公開(kāi)了培養(yǎng)物可以包含泡騰添加劑。然而，從商業(yè)角度看，這些細(xì)菌制劑沒(méi)有一種是令人滿意的，特別是對(duì)雙歧桿菌細(xì) 胞的制劑。因此，需要具有改善的穩(wěn)定性和提高的有活力細(xì)菌細(xì)胞遞送的包含細(xì)菌細(xì)胞的 改善的組合物。具體而言，需要提供包含雙歧桿菌菌株的穩(wěn)定的組合物，其先前在室溫下極難于 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，包含雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)菌株細(xì)胞和碳酸 鹽碳酸氫鈉的片劑具有優(yōu)良的穩(wěn)定性，特別是如果儲(chǔ)存在不暴露于環(huán)境水分的環(huán)境中時(shí)， 例如在密封的鋁袋或閉包中，或者在封閉的玻璃容器中。當(dāng)所保護(hù)的片劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于高 溫度下時(shí)，優(yōu)良的穩(wěn)定性最顯著。此外，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，向包含雙歧桿菌屬菌株細(xì)胞的組合物中加入碳酸的鹽令 人驚奇地防止或減少儲(chǔ)存過(guò)程中正常發(fā)生的脫色(紅色素)。基于這些驚奇的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明涉及通過(guò)向組合物中加入碳酸的鹽以穩(wěn)定(例如增 加穩(wěn)定性和/或減少/避免脫色)包含雙歧桿菌屬菌株活細(xì)胞的組合物的方法。特別地， 本發(fā)明涉及用于改善包含細(xì)菌細(xì)胞的組合物顏色穩(wěn)定性的方法，所述方法包括將細(xì)菌細(xì)胞 與碳酸的鹽混合。本發(fā)明可以看作是改善細(xì)菌組合物穩(wěn)定性/儲(chǔ)存期的方法，并且因此本發(fā)明還涉 及用于制備具有改善增加的/改善的/延長(zhǎng)的穩(wěn)定性/儲(chǔ)存期的細(xì)菌組合物的方法，其包 括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞，優(yōu)選屬于雙歧桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽的載體以 提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮形成片劑或球劑。本發(fā)明還涉及穩(wěn)定的組合物，并且涉及包含穩(wěn)定組合物的食物制品，穩(wěn)定的組合 物或者摻入到食物制品中或者與食物制品一起包裝。發(fā)明詳述在第一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及用于制備細(xì)菌組合物的方法(例如用于改善細(xì)胞的 存活和/或減少組合物的脫色)，其包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽(或碳酸鹽)的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮。此外，本發(fā)明涉及用于下列的方法i)增加組合物中細(xì)菌細(xì)胞的存活時(shí)間，或ii) 避免或減少細(xì)菌組合物的脫色，或者iii)增加細(xì)菌組合物的儲(chǔ)存期，或iv)增加細(xì)菌組合 物的穩(wěn)定性，該方法包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽(或碳酸鹽)的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮。在本發(fā)明的感興趣的實(shí)施方案中，方法用于通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與碳酸的鹽以改善 包含細(xì)菌細(xì)胞的組合物的穩(wěn)定性(包括顏色穩(wěn)定性)。應(yīng)當(dāng)理解，混合步驟a)的目的是將細(xì)菌細(xì)胞與鹽接觸，并且因此混合的順序不重要。因此，細(xì)菌細(xì)胞可以在與鹽混合之前和/或之后和/或同時(shí)與載體混合。目前優(yōu)選的 是所有成分同時(shí)混合。通過(guò)將粉末壓縮，本發(fā)明方法的產(chǎn)物將是散劑形式或者固體形式如片劑或球劑的 細(xì)菌組合物。碳酸的鹽優(yōu)選選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、倍半碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、倍半碳酸 鉀、碳酸鎂、甘氨酸鈉碳酸鹽、L-賴(lài)氨酸碳酸鹽、精氨酸碳酸鹽、無(wú)定形碳酸鈣、碳酸銨、碳酸 氫銨及其組合，并且目前最優(yōu)選的鹽是碳酸氫鈉。a)中的載體還包含酸性成分，例如有機(jī)酸，優(yōu)選為粉末。酸性成分優(yōu)選地選自檸檬酸、酒石酸、柔和酸、富馬酸、己二酸、乳酸、琥珀酸、磷酸 氫二鈉、磷酸二氫鈉及其組合。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，方法還包括干燥步驟，例如冷凍干燥、真空干燥、通過(guò)干 燥劑或者加熱方式的干燥。干燥步驟可以如下實(shí)施i)在混合步驟之前(即細(xì)菌細(xì)胞或載體中的一種或多種被干燥)；和/或ii)在混合步驟之后(即混合物被干燥)；和/或iii)在任選壓縮步驟之后(即片劑或球劑被干燥)。細(xì)菌細(xì)胞優(yōu)選地是產(chǎn)生乳酸的細(xì)胞和/或益生菌細(xì)胞，例如屬于選自下 列屬的細(xì)菌細(xì)胞雙歧桿菌屬、乳桿菌屬和鏈球菌屬(Str印tococcus)。目前優(yōu)選 的細(xì)菌細(xì)胞屬于選自下列的種干酪乳桿菌(LactcAacillus casei)、嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus)、羅伊氏_1木干菌(Lactobacillus reuteri)、比菲德氏菌 (Lactobacillus bifidum)、格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、植物乳桿菌、約氏乳 桿菌(Lactobacillus johnsonii)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、發(fā)酵乳 If |if (Lactobacillus fermentum) > glj zFSS？LIf lif (Lactobacillus paracasei) > ^
桿菌(Lactobacillus crispatus)、長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、兩歧雙歧桿 菌(Bifidobacterium bifidum)、IL雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、短雙歧桿菌 (Bifidobacterium brevis)、動(dòng)物雙歧桿菌(Bifidobacterium animal is)、青 雙岐桿 菌(Bifidobacterium adolescentis)、雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis) > ^ 熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)禾口乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),例如屬 于選自下列菌株的細(xì)菌細(xì)胞BB-12 、LA-1、LA-5、BB-02、動(dòng)物雙歧桿菌菌株DSM15954、 長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種(Bifidobacterium longum subsp. infantis)菌株 DSM15953、長(zhǎng) 雙歧桿菌長(zhǎng)亞種(Bifidobacterium longum subsp. longum)菌株 DSM15955、糞腸球菌 (Enterococcus faecium)菌株DSM15958、嗜酸乳桿菌菌株DSM13M1、德氏乳桿菌保加利 亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus)菌株 DSM15956、瑞士乳桿菌 (Lactobacillus helveticus)菌株 DSM14998、瑞士乳桿菌菌株 DSM14997、乳酸乳球菌菌 株DSM14797、嗜熱鏈球菌菌株DSM15957、發(fā)酵乳桿菌菌株ATCC55845和鼠李糖乳桿菌菌株 ATCC55826和它們?nèi)我庖环N的突變體或變異體。目前最優(yōu)選的是細(xì)菌細(xì)胞屬于雙歧桿菌屬 菌株BB-12⑧或BB-12⑧free。載體還可包含選自下列的成分無(wú)機(jī)酸或其鹽、有機(jī)酸或其鹽、碳水化合物、乳糖、 糖醇、可溶性纖維和淀粉。本發(fā)明的方法還包括另外的步驟，例如包衣步驟(其中例如本發(fā)明的片劑/球劑以本領(lǐng)域已知的方式包衣)，和/或包裝步驟，例如包括將粉末或壓縮的粉末(片劑/球劑) 置于可密封的容器中，例如鋁制的和/或聚合物制的容器中。2.權(quán)利要求1的用于制備無(wú) 脫色或者脫色降低的細(xì)菌組合物的方法，其包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮形成片劑或球劑。3.權(quán)利要求1的用于制備具有改善的細(xì)胞存活和/或增加的儲(chǔ)存期，和/或增加 的穩(wěn)定性的細(xì)菌組合物，其包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮形成片劑或球劑。4.權(quán)利要求1的用于改善包含細(xì)菌細(xì)胞的組合物中細(xì)胞存活的方法，包括混合細(xì) 菌細(xì)胞與碳酸的鹽。5.權(quán)利要求1的用于改善包含細(xì)菌細(xì)胞的組合物的顏色穩(wěn)定性的方法，包括混合 細(xì)菌細(xì)胞與碳酸的鹽。在第二個(gè)方面中，本發(fā)明涉及可通過(guò)本發(fā)明的方法得到的組合物。本發(fā)明的組合 物包含細(xì)菌細(xì)胞和包含碳酸的鹽(或碳酸鹽)的載體。細(xì)菌細(xì)胞可以屬于上述任意種或 株。在當(dāng)前感興趣的實(shí)施方案中，細(xì)胞屬于雙歧桿菌屬菌株BB-12 。組合物可包含至少 10E5CFU/mg，例如至少10E7CFU/mg或至少10E9CFU/mg的細(xì)菌細(xì)胞，CFU是細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞 形成單位。在第三個(gè)方面中，本發(fā)明涉及本發(fā)明組合物作為食品、飼料添加劑、藥物、飲食補(bǔ) 充劑或益生菌的用途。包含本發(fā)明組合物的食品或飼料制品也是本發(fā)明的一個(gè)方面，并且 包括制品例如乳制品，例如乳或發(fā)酵乳，和水果汁，例如思慕雪。食品/飼料制品可以與本發(fā)明的組合物混合，或者在食品/飼料加工廠混合，或者 由消費(fèi)者混合。因此，本發(fā)明還涉及多組分試劑盒，包括食品/飼料制品和本發(fā)明的組合 物，例如試劑盒，其包括具有食物制品的容器和具有本發(fā)明組合物的容器。在另外的方面中，本發(fā)明涉及碳酸的鹽(例如上面提到的鹽)作為細(xì)菌組合物，特 別是包含屬于雙歧桿菌屬(例如屬于選自長(zhǎng)雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、短雙歧 桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、青春雙岐桿菌、嬰兒雙歧桿菌的種)的細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)菌組合物的i)穩(wěn) 定劑，例如顏色穩(wěn)定劑，ii)用于提高其儲(chǔ)存期，iii)用于增加其穩(wěn)定性，或iv)用于增加其 中的細(xì)胞存活的用途。定義在本上下文中，術(shù)語(yǔ)“片劑”指壓縮的粉末。術(shù)語(yǔ)包括所有物理形式和所有大小， 例如丸劑、球劑、片劑等。術(shù)語(yǔ)“細(xì)菌組合物”應(yīng)當(dāng)理解為包含細(xì)菌細(xì)胞或者細(xì)胞培養(yǎng)物的組合物。細(xì)胞優(yōu) 選是活的或休眠的，并且進(jìn)一步優(yōu)選組合物包含至少10E5細(xì)胞形成單位/g。細(xì)菌細(xì)胞可以 屬于單一菌株或者是屬于不同菌株的細(xì)胞的混合物。在本上下文中，術(shù)語(yǔ)“突變體”應(yīng)當(dāng)理解為通過(guò)例如遺傳工程、輻射和/或化學(xué)處 理從本發(fā)明菌株衍生的菌株。優(yōu)選地突變株是功能等效突變株，例如具有與母本菌株如益 生菌基本相同或者改善的特性的突變株。此種突變體是本發(fā)明的一部分。特別地，術(shù)語(yǔ)“突 變體”指通過(guò)將本發(fā)明的菌株經(jīng)受任何常規(guī)使用的誘變處理，包括用化學(xué)誘變劑如甲基磺酸乙酯(EMS)或N-甲基-N'-硝基-N-硝基胍(NTG)處理、紫外線或者經(jīng)歷自發(fā)突變而得 到的菌株。在本上下文中，術(shù)語(yǔ)“變異體”應(yīng)當(dāng)理解為與本發(fā)明的菌株功能等效的菌株，例如 與如益生菌具有本質(zhì)相同或者改善的特性?？梢允褂眠m當(dāng)篩選技術(shù)鑒定的此類(lèi)變異體是本 發(fā)明的一部分。在描述本發(fā)明的上下文中(特別是在后附權(quán)利要求書(shū)上下文中)使用的術(shù)語(yǔ)“一 (a)，，和“一(an)，，和“該(the)，，和相似術(shù)語(yǔ)解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)兩者，除非本文另外指 出或者通過(guò)上下文明顯矛盾時(shí)。術(shù)語(yǔ)“包含”、“具有”、“包括”和“含有”解釋為開(kāi)放性術(shù)語(yǔ) (即意思是“包括，但不限于”)，除非另外指出。除非本文另外指出，本文中對(duì)數(shù)值范圍的描 述僅用作分別提及處于該范圍內(nèi)的每個(gè)數(shù)值的速記法，并且各個(gè)數(shù)值整合入說(shuō)明書(shū)中好像 它們?cè)诒疚闹蟹謩e描述一樣。除非本文另外指出或者除非通過(guò)上下文明顯矛盾，本文所述 的所有方法以任何適宜順序開(kāi)展。本文所提供的任何實(shí)例和所有實(shí)施例或示例性措辭(例 如“例如”)的使用僅旨在更好地闡述本發(fā)明并且不限制本發(fā)明的范圍，除非另外聲明。說(shuō) 明書(shū)中沒(méi)有任何語(yǔ)言解釋為指出任何非要求保護(hù)的元素作為實(shí)施本發(fā)明的要素。圖例

圖1 于37°C儲(chǔ)存3個(gè)月的散劑H1069和H1071中BB-12 的存活情況。圖 2 顯示粉末混合物 Hl 184 A(A)、Hl 184 B(B)、Hl 184 C(C)和 Hl 184 D(D)在室 溫2周后的圖片。
實(shí)施例實(shí)施例1 制造兩種混合物，包含經(jīng)研磨的BB_12 HA(5. 1% (w/w)和賦形劑(甘露醇；10% (w/w)，乳糖；84. 4% (w/w)，硬脂酸鎂；0. 5% (w/w)，無(wú)碳酸氫鈉的粉末混合物H1069,和包 含經(jīng)研磨的BB-12 HA(5. 1% (w/w)和賦形劑(甘露醇；10% (w/w)，乳糖；54. 4% (w/w), 硬脂酸鎂；0.5% (w/w)與碳酸氫鈉；30% (w/w)的粉末混合物H1071。碳酸氫鈉的濃度如 下得到，即用碳酸氫鈉替換賦形劑中的乳糖部分，粉末中所有其他成分仍為相同濃度。將粉末包裝在鋁箔袋中O0_30g)并于37°C儲(chǔ)存3個(gè)月。在剛剛包裝后(0月)、 儲(chǔ)存1個(gè)月后和3個(gè)月后對(duì)于每袋分析菌落形成單位(cfu/g)和水活性(aw)。結(jié)果在剛剛包裝后粉末H1069和H1071的水活性是相同的，為aw(H1069) = 0. 19 和aw(H1071) = 0. 19。在儲(chǔ)存1個(gè)月和3個(gè)月后，粉末的水活性增加至aw = 0. 27-0. 31。 菌落形成單位的結(jié)果顯示在0個(gè)月和1個(gè)月時(shí)cfu/g相當(dāng)，但顯示在3個(gè)月后BB-12②的 存活率差異極大(圖1)。結(jié)論用碳酸氫鈉替換右旋糖賦形劑導(dǎo)致儲(chǔ)存過(guò)程中BB-12 存活的改善。該結(jié) 果顯示碳酸氫鈉改善了儲(chǔ)存過(guò)程中粉末中動(dòng)物雙歧桿菌的存活。實(shí)施例2 測(cè)試碳酸氫鈉是否影響包含抗壞血酸鹽的雙歧桿菌屬制劑的紅餼顯 色。粉末混合物的含量(w/w)-Hl 184 A 研磨的BB-12 HA培養(yǎng)物，51 %甘露醇和25%菊糖-Hl 184 B 研磨的BB-12 HA培養(yǎng)物，51 %甘露醇和25%碳酸氫鈉
-Hl 184 C 研磨的BB-12 HA培養(yǎng)物，63%甘露醇和25%菊糖-Hl 184 D 研磨的BB-12 HA培養(yǎng)物，63%甘露醇和25%碳酸氫鈉研磨的BB-12 HA培養(yǎng)物包含抗壞血酸鹽作為冷凍保護(hù)劑?？箟难猁}與發(fā)酵 殘?jiān)磻?yīng)并發(fā)展成紅色。提高溫度和濕度加速反應(yīng)。將粉末置于不透氣的鋁箔袋中。為了測(cè)試，從鋁箔袋中取出5_8g數(shù)量的粉末并置 于小的塑料容器中(Rotronic制造的用于aw測(cè)量)。將塑料容器置于室溫下，并在2周后 可以看到顯色的差異，如圖2中所示。粉末具有大約0.4的相似aw。圖2顯示，粉末A和C 顏色變成淡紅色，而粉末B和D保持它們最初的淡黃色。結(jié)論粉末混合物中碳酸氫鈉的存在對(duì)紅色的顯色具有影響。當(dāng)粉末混合物中存 在碳酸氫鈉時(shí)沒(méi)有顯色成紅色。本文中描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，包括發(fā)明人已知用于開(kāi)展本發(fā)明的最佳方 式。在閱讀前述描述后，這些優(yōu)選實(shí)施方案的變體對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言變得顯而易 見(jiàn)。發(fā)明人期望技術(shù)人員根據(jù)需要采用此類(lèi)變體，并且發(fā)明人意欲以本文明確描述之外的 方式實(shí)施本發(fā)明。因此，如所適用法律所允許，本發(fā)明包括在后附權(quán)利要求書(shū)中描述的主題 的所有修改形式和等效物。此外，上述元素在其所有可能的修改方式中的任何組合包括在 本發(fā)明之中，除非本文另外指出或者除非根據(jù)上下文明顯矛盾。參考文獻(xiàn)US2004175389, W003075676, US2005100559,US6953592,W003012819,W005266069, W005063200在該專(zhuān)利文件中弓丨用的所有參考文獻(xiàn)通過(guò)參考方式在此以其全部?jī)?nèi)容整合入本 文。
權(quán)利要求
1.用于制備細(xì)菌組合物(例如具有改善的穩(wěn)定性，具有改善的細(xì)胞存活和/或無(wú)脫色 或者脫色降低)的方法，其包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮形成片劑或球劑。
2.權(quán)利要求1的用于制備無(wú)脫色或者脫色降低的細(xì)菌組合物的方法，其包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮形成片劑或球劑。
3.用于制備具有改善的細(xì)胞存活和/或增加的儲(chǔ)存期和/或增加的穩(wěn)定性的細(xì)菌組合 物的任何前述權(quán)利要求的方法，其包括下列步驟a)通過(guò)混合細(xì)菌細(xì)胞與包含碳酸的鹽的載體以提供粉末；和b)任選地將粉末壓縮形成片劑或球劑。
4.用于改善包含細(xì)菌細(xì)胞的組合物中細(xì)胞存活的任何前述權(quán)利要求的方法，包括混合 細(xì)菌細(xì)胞與碳酸的鹽。
5.用于改善包含細(xì)菌細(xì)胞的組合物的顏色穩(wěn)定性的任何前述權(quán)利要求的方法，包括混 合細(xì)菌細(xì)胞與碳酸的鹽。
6.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌組合物是散劑、顆粒劑、片劑或球劑形式。
7.任何前述權(quán)利要求的方法，其中碳酸的鹽選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、倍半碳酸鈉、碳酸 鉀、碳酸氫鉀、倍半碳酸鉀、碳酸鎂、甘氨酸鈉碳酸鹽、L-賴(lài)氨酸碳酸鹽、精氨酸碳酸鹽、無(wú)定 形碳酸鈣、碳酸銨、碳酸氫銨及其組合。
8.任何前述權(quán)利要求的方法，其中a)中的載體還包含酸性成分，例如有機(jī)酸，優(yōu)選作 為粉末。
9.前述權(quán)利要求的方法，其中酸性成分選自檸檬酸、酒石酸、柔和酸、富馬酸、己二酸、 乳酸、琥珀酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉及其組合。
10.任何前述權(quán)利要求的方法，其還包括干燥步驟，例如冷凍干燥、真空干燥、通過(guò)干燥 劑方式的干燥、或加熱。
11.任何前述權(quán)利要求的方法，其中干燥步驟如下實(shí)施i)在混合步驟之前(即細(xì)菌細(xì)胞或載體中的一種或多種被干燥)；和/或ii)在混合步驟之后(即混合物被干燥)；和/或iii)在任選壓縮步驟之后(即散劑、片劑或球劑被干燥)。
12.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞是產(chǎn)生乳酸的細(xì)胞和/或益生菌細(xì)胞。
13.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于選自包括雙歧桿菌屬的屬。
14.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于選自下列的種長(zhǎng)雙歧桿菌、兩歧雙 歧桿菌、乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、青春雙岐桿菌、嬰兒雙歧桿菌。
15.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于動(dòng)物雙歧桿菌的種，例如動(dòng)物雙歧桿 菌乳酸亞種。
16.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于選自下列的菌株BB-12 、BB-02、 動(dòng)物雙歧桿菌菌株DSM15954、長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種菌株DSM15953、長(zhǎng)雙歧桿菌長(zhǎng)亞種菌株 DSM15955以及它們的任何突變體或變異體。
17.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于雙歧桿菌屬菌株BB-12 。
18.任何前述權(quán)利要求的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于雙歧桿菌屬菌株BB-12 free。
19.任何前述權(quán)利要求的方法，其中載體還包含選自下列的成分無(wú)機(jī)酸或其鹽、有機(jī) 酸或其鹽、碳水化合物、乳糖、糖醇、可溶性纖維和淀粉。
20.任何前述權(quán)利要求的方法，其還包括包衣步驟。
21.任何前述權(quán)利要求的方法，其還包括包裝步驟，例如包括將粉末或壓縮的粉末置于 可密封的容器中，例如鋁制的和/或聚合物制的容器中。
22.通過(guò)任何前述權(quán)利要求的方法得到的組合物。
23.組合物，包含細(xì)菌細(xì)胞和載體，所述載體包含碳酸的鹽。
24.任何前述權(quán)利要求的組合物，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于雙歧桿菌屬的種。
25.任何前述權(quán)利要求的組合物，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于選自下列的種長(zhǎng)雙歧桿菌、兩歧 雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、青春雙岐桿菌、嬰兒雙歧桿菌。
26.任何前述權(quán)利要求的組合物，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于雙歧桿菌屬菌株BB-12 。
27.任何前述權(quán)利要求的組合物，其包含至少10E5CFU/mg，例如至少10E7CFU/mg或至 少10E9CFU/mg，CFU是細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞形成單位。
28.任何前述權(quán)利要求的組合物作為食品或飼料添加劑、藥物、飲食補(bǔ)充劑或益生菌的 用途。
29.包含任何前述權(quán)利要求組合物的食物制品或飼料制品。
30.任何前述權(quán)利要求的制品，其是乳制品，例如乳或發(fā)酵乳。
31.任何前述權(quán)利要求的制品，其是果汁。
32.多組分試劑盒，包含任何前述權(quán)利要求的組合物和食物制品，例如乳制品，例如乳 或發(fā)酵乳，或果汁。
33.前述權(quán)利要求的試劑盒，其包含具有食物制品的容器和具有任何前述權(quán)利要求組 合物的容器。
34.碳酸的鹽作為細(xì)菌組合物中顏色穩(wěn)定劑的用途。
35.碳酸的鹽用于提高細(xì)菌組合物中細(xì)胞存活的用途。
36.碳酸的鹽用于提高細(xì)菌組合物儲(chǔ)存期的用途。
37.碳酸的鹽用于提高細(xì)菌組合物穩(wěn)定性的用途。
38.任何前述權(quán)利要求的用途，其中細(xì)菌組合物包含屬于雙歧桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞。
39.前述權(quán)利要求的用途，其中細(xì)菌細(xì)胞屬于選自下列的種長(zhǎng)雙歧桿菌、兩歧雙歧桿 菌、乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、青春雙岐桿菌、嬰兒雙歧桿菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有長(zhǎng)儲(chǔ)存期的細(xì)菌組合物，和產(chǎn)生此類(lèi)組合物的方法。本發(fā)明還涉及包含細(xì)菌組合物的食物制品。
文檔編號(hào)C12N1/04GK102124097SQ200980131869
公開(kāi)日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2009年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月28日
發(fā)明者伊本·杰普森, 彼得·瓦格納, 維格爾·約根森 拉塞, 柏姬·斯圖-勞里森, 梅特·溫寧, 蘇珊娜·亞伯拉罕森 申請(qǐng)人:科.漢森有限公司