專利名稱：一株抑制油菜菌核病菌危害的鏈霉菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株鏈霉菌及其用于抑制油菜菌核病菌危害的用途，更具體地說本發(fā) 明提供了抑制油菜菌核病菌危害的生防菌株，可大大地減輕油菜菌核病的危害。屬于防治 油菜菌核病危害油菜的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
油菜是一種栽培歷史悠久的古老作物，也是一種迅速發(fā)展的新興作物。上世紀60 年代后，油菜成為世界四大油料作物之一，隨著現(xiàn)代科學(xué)的進步以及油菜育種和產(chǎn)品開發(fā) 的成功，油菜的用途擴展到蛋白質(zhì)、飼料、工業(yè)原料和醫(yī)藥等多方面。在中國，油菜的種植 面積和總產(chǎn)量自1978年以來躍居世界第一位。油菜在生產(chǎn)過程中經(jīng)常受到很多病害的侵 染，其中油菜菌核病是我國油菜重要的病害之一，引起的損失占總病害損失的80%左右。油 菜菌核病又稱菌核軟腐病(俗稱白桿、空桿、爛桿、霉兜)，是一種由核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)所致的一種世界性病害。油菜地上各部分均可感病，嚴重時病株整株枯死， 病莖內(nèi)產(chǎn)生大量黑色顆粒狀菌核。菌核散落在田間土壤或混雜在種子中，以及在用病桿殘 渣施肥又未經(jīng)腐熟的土雜肥中越夏越冬，次年氣候溫暖潮濕時，菌核大量萌發(fā)，產(chǎn)生子囊 盤，釋放出無數(shù)子囊孢子，隨風(fēng)傳播，侵染油菜，造成危害。該病害在我國是油菜三大病害 之首，冬、春栽培區(qū)均有發(fā)生，尤其以氣候相對涼爽和潮濕的地區(qū)嚴重，給生產(chǎn)帶來巨大損 失。早在1915年該病在印度就有報道。我國關(guān)于油菜菌核病的研究報道始見于1927年， 至今有80多年的歷史。近年來，隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，受氣候條件不利、品種繁雜、栽 培管理粗放、施肥水平提高等因素的影響，油菜菌核病為害呈加重趨勢，嚴重影響了油菜的 產(chǎn)量和品質(zhì)。其中以長江流域油菜主產(chǎn)區(qū)發(fā)生最為嚴重，每年發(fā)病面積470萬hm2，產(chǎn)量損 失5% 25%，直接經(jīng)濟損失數(shù)億元。該病菌從油菜苗期到成熟期都可造成危害，以中、后 期發(fā)病最普遍，為害最嚴重。一般發(fā)病率10% 20%，嚴重的達80%以上。主要為害油菜 莖稈，引起植株早枯，角果減少，種子皺癟，千粒重和出油率降低，產(chǎn)量下降，已成為影響我 國油菜高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的關(guān)鍵因素。由于油菜菌核病菌所產(chǎn)生的菌核抗逆性極強，且田間的菌核可在相當(dāng)長的時期內(nèi) (50天)陸續(xù)萌發(fā)并形成有效的接種體，給防治帶來了極大困難。目前油菜菌核病的防治 主要依賴于化學(xué)防治。長期以來生產(chǎn)上大量單一使用單方藥劑，造成病菌耐藥性日益增加， 防治效果越來越差。近年來環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留問題也日益嚴峻，農(nóng)產(chǎn)品安全問題引起人 們的廣泛關(guān)注。采取摘除病葉、輪作和培育種植抗病品種等農(nóng)業(yè)防治措施，在一定程度上能 減輕病害造成的損失，但仍然不能達到徹底控制油菜菌核病的目的。因此，生物防治的研究 和應(yīng)用成為新的熱點。已研究發(fā)現(xiàn)約45種真菌和兩種細菌(假單胞桿菌、芽孢桿菌)對核 盤菌能產(chǎn)生拮抗作用。其中黏帚霉(Gliocladium spp.)、木霉(Trichodermaspp.)、盾殼霉 (Coniothyrium minitans)、鍵抱菌(Fusarium spp.)、曲霉(Aspergillus spp.)對核盤菌 具有較強的生物防治潛能。上述微生物產(chǎn)生拮抗作用的機理大部分是微生物之間的寄生作 用。比如綠色木霉和盾殼霉能寄生在油菜菌核病的菌絲和菌核上，導(dǎo)致細胞質(zhì)降解，細胞核破壞。這種生防機制受環(huán)境影響大，防效不穩(wěn)定。放線菌是一類極其豐富的微生物資源，其 中很多、尤其是鏈霉菌屬能產(chǎn)生多種抗生素類物質(zhì)，用于植物病害防治有著廣闊的前景。目 前國內(nèi)外大規(guī)模使用的防治水稻三大病害之一紋枯病的藥劑井R霉素就是放線菌的代謝 產(chǎn)物。井R霉素能導(dǎo)致紋枯病菌菌絲畸形，這種特殊的生防機制使得其在應(yīng)用的30多年來 未見明顯的抗藥性產(chǎn)生。JZG117是九寨溝國家級自然保護區(qū)土壤樣品中分離篩選到的一個抗油菜菌核病 菌的放線菌菌株。該菌株發(fā)酵液經(jīng)細菌過濾器過濾后，加入油菜菌核病菌培養(yǎng)基，與對照相 比，菌絲明顯褐化，不產(chǎn)生菌核。電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)褐化的菌絲與正常菌絲相比，細胞 質(zhì)溶出，細胞“空胞化”。目前為止國內(nèi)未見放線菌株天然活性產(chǎn)物抗油菜菌核病菌的報道。 該菌的代謝產(chǎn)物能明顯抑制油菜菌核病菌產(chǎn)生菌核，從而從根本上切斷病害爆發(fā)流行的源 頭，具有很好的應(yīng)用前景。從保護農(nóng)業(yè)環(huán)境、提高食品安全性、保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展的角度考慮，生物防 治前景十分廣闊。油菜菌核病的生物防治是保障油菜可持續(xù)發(fā)展的一項重要技術(shù)，選用少 量低毒高效、無殘留的生物農(nóng)藥殺死或抑制病原菌，為研究開發(fā)新型生物農(nóng)藥提供資源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對油菜的毀滅性病害_油菜菌核病，提供一株生防活性菌 株，抑制其病原菌的生長，從而有效控制該病害在油菜上的危害，提高油菜的產(chǎn)量和品質(zhì)。因此，本發(fā)明第一個發(fā)明目的是提供一株鏈霉菌株D35 (Streptomyces misawanensis)，其中所述菌株已于2009年08月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物中心，保藏號CGMCCNo. 3250。在一個具體實施方案中，所述的鏈霉菌株JZG117的生理學(xué)特征是(1)在高氏一號培養(yǎng)基(可溶性淀粉 20g、K2HP040. 5g、KN03lg、FeS04 ·7Η20 0. Olg、 NaCIO. 5g、MgSO4O. 5g、瓊脂20g、蒸餾水1000mL、PH7. 2.)上生長，菌落淺黃色。氣生菌絲和 基內(nèi)菌絲均很豐富，氣生菌絲體形成孢子鏈，孢子絲直形，中長，孢子橢圓形，表面光滑；(2)能利用葡萄糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖、棉子糖、菊糖、肌醇、甘露醇；不利用阿 拉伯糖、蔗糖、鼠李糖、山梨醇、衛(wèi)矛醇、檸檬酸鈉；(3)菌株明膠液化弱，牛奶凝固，不胨化；(4)能水解淀粉，纖維素上生長好，能轉(zhuǎn)化蔗糖、還原硝酸鹽；(5)不產(chǎn)生類黑色素、酪氨酸酶和H2S ；(6) 28°C是菌株產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的最適生長溫度，拮抗菌株在pH值5. 0 9. 0均能 產(chǎn)生抗菌物質(zhì)。由于通過上述鏈霉菌株JZG117所獲得的發(fā)酵液具有良好的抑制油菜菌核病菌的 效果，因此其菌株發(fā)酵液也是另一個具體實施方案。在另一個具體實施方案中，篩選所述的菌株JZG117的方法包括(1)從九寨溝國家級自然保護區(qū)收集了 15份土壤樣品，分離了 137個放線菌菌 株；(2)以油菜菌核病菌為指示菌，采用平板對峙生長法對各菌株拮抗活性進行篩選， 得到一個抗菌活性高的放線菌菌株JZG117 ；
(3)菌株發(fā)酵液經(jīng)細菌過濾器過濾后，在每個培養(yǎng)皿加入3mL稀釋5倍的濾液；(4)選取對油菜菌核病菌菌絲抑制率高的菌株，其中優(yōu)選抑制率為85. 6%。其中，加入放線菌發(fā)酵液濾液的培養(yǎng)基與對照相比，菌絲明顯褐化，不產(chǎn)生菌核。 電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，褐化的菌絲與正常菌絲相比，細胞質(zhì)溶出，細胞“空胞化”。本發(fā)明第二個發(fā)明目的是提供一種利用上述菌株在室內(nèi)培養(yǎng)基平板上抑制油菜 菌核病菌的方法。在一個實施方案中，所述的方法包括(3)培養(yǎng)上述菌株JZGl 17，獲得JZGl 17的菌體；(4)將菌株JZG117的菌體接于培養(yǎng)基平板的四周抑制油菜菌核病菌的生長。在一個具體實施方案中，將菌株JZG117的菌體接于培養(yǎng)基平板的四周，同時將油 菜菌核病菌接于培養(yǎng)基平板的中央，培養(yǎng)72小時后可見明顯的抑菌圈，直徑達8mm，并且菌 絲變褐，不產(chǎn)生菌核。在另一個具體實施方案中，所述的方法包括(1)培養(yǎng)上述菌株JZG117，獲得JZG117的發(fā)酵液；(2)將菌株JZG117的發(fā)酵液與培養(yǎng)基混勻后抑制油菜菌核病菌的生長。在一個具體實施方案中，將菌株JZG117的發(fā)酵液稀釋5倍后與培養(yǎng)基混勻， 在28°C下發(fā)酵培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)好的發(fā)酵液首先用IOmL離心管分裝，在冷凍離心機中 15000rpm離心10分鐘，然后用細菌過濾器過濾得到培養(yǎng)濾液。測定抗菌活性時，在每個無 菌培養(yǎng)皿中加入3ml培養(yǎng)濾液與PDA培養(yǎng)基混勻，制成平板，平板培養(yǎng)基冷卻后，將事先裁 取的直徑5mm的菌餅倒置移入平板中央。靜置Ih后放入28°C溫箱中培養(yǎng)，每個重復(fù)3次。 待對照全部長滿，用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并觀察抑菌圈透明程度和邊緣整齊程度， 記錄結(jié)果并按下式計算抑制率菌落直徑=相垂直的兩直徑的平均值_菌餅直徑抑制率(％)=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑_菌餅直 徑)X100%本發(fā)明第三個發(fā)明目的是保護利用上述菌株或菌株發(fā)酵液用于防治油菜菌核病 菌的用途。在一個具體實施方案中，利用上述菌株制備發(fā)酵液，或直接利用菌株發(fā)酵液，對油 菜進行直接噴霧，來抑制油菜菌核病菌在油菜體內(nèi)的擴散，從而減少油菜發(fā)病率，以實現(xiàn)提 高油菜產(chǎn)量和品質(zhì)的用途。技術(shù)效果1、本發(fā)明的鏈霉菌菌株，能夠有效抑制其病原菌的生長，從而有效控制該病害在 油菜上的危害，提高油菜的產(chǎn)量和品質(zhì)；2、本發(fā)明的鏈霉菌菌株，選用發(fā)酵液稀釋5倍與培養(yǎng)基混勻后，對油菜菌核病菌 的抑制率85. 6% ；3、本發(fā)明的鏈霉菌菌株，在溫室試驗中，選用發(fā)酵液稀釋25、50倍，在油菜苗期進 行噴霧防治，對油菜菌核病的防效作用分別為87. 8%和79. 3% ；4、本發(fā)明的鏈霉菌菌株，在田間試驗中，選用發(fā)酵液稀釋25倍，在油菜盛花期時 進行噴霧防治，對油菜菌核病的防效作用分別為80. 8%。具體實施方案實施例1 鏈霉菌株JZGl 17的篩選從九寨溝國家級自然保護區(qū)收集了 15份土壤樣品，采用高氏一號固體培養(yǎng)基(可 溶性淀粉 20g、K2HPO4O. 5g、KN03lg、FeSO4 · 7H20 0. 01g、NaCI0. 5g、MgSO4O. 5g、瓊脂粉 20、蒸 餾水1000mL、PH7. 2)進行篩選，篩選到137個菌株，逐一進行平板拮抗實驗，得到菌核病菌 抑制菌株JZG117，進行生測實驗。將分離純化的菌株JZG117接種于高氏一號液體培養(yǎng)基 (可溶性淀粉 20g、K2HPO4O. 5g、KNO3lg> FeSO4 · 7H20 0. Olg、NaCIO. 5g、MgSO4O. 5g、蒸餾水 1000mL、PH7. 2)。28°C下?lián)u瓶發(fā)酵72h，用細菌過濾器過濾發(fā)酵液，用無菌水稀釋5倍。在 每個無菌培養(yǎng)皿中加入稀釋液3mL，倒入PDA培養(yǎng)基(55°C左右)，搖勻，制成平板，待培養(yǎng)基 冷卻后，用無菌打孔器將培養(yǎng)在PDA上的油菜菌核病菌打成4 5mm的小菌餅，菌絲生長面 朝下移放到加有JZG117發(fā)酵液的平板培養(yǎng)基中央。重復(fù)3次。靜置Ih后放入溫箱，28°C 下培養(yǎng)5d。用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并觀察抑菌圈透明程度和邊緣整齊程度。實施例2 鏈霉菌株JZGl 17的生理生化特征及其保藏將篩選的菌株JZG1172009年08月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心，保藏號CGMCC No. 3251。該菌株的生理學(xué)特征JZG117菌株具有典型的鏈霉菌屬的特征，該菌株在高氏一號培養(yǎng)基上生長，菌落 淺黃色。氣生菌絲和基內(nèi)菌絲均很豐富，氣生菌絲體形成孢子鏈，孢子絲螺旋形，中長；孢 子橢圓形，表面光滑。JZG117菌株能利用利用葡萄糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖、棉子糖、菊糖、 肌醇、甘露醇；不利用阿拉伯糖、蔗糖、鼠李糖、山梨醇、衛(wèi)矛醇、檸檬酸鈉。菌株明膠液化弱。 牛奶凝固，不胨化。淀粉水解。纖維素上生長好。蔗糖轉(zhuǎn)化。硝酸鹽還原。不產(chǎn)生類黑色 素、酪氨酸酶和H2S。28°C是菌株產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的最適生長溫度，拮抗菌株在pH值5. 0 9.0均能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)。該菌株的鑒定根據(jù)放線菌16S rDNA的結(jié)構(gòu)特點及其保守區(qū)設(shè)計特異引物，正向 引物 16sF :AGAGTTTGATCCTGGCTCAG ；反向引物 16sR :AAGGAGGTGATCCAGCCGCA。由上海生物 工程公司合成。以基因組DNA為模板，采用PCR方法擴增16S rDNA, PCR擴增條件為94°C 預(yù)變性5min ；94°C變性Imin，56°C復(fù)性Imin，72°C延伸2min, 25個循環(huán)；72°C延伸8min。采 用1.0%的瓊脂糖對PCR擴增產(chǎn)物電泳檢測。采用北京賽百盛基因技術(shù)有限公司硅膠模型 TMPCR產(chǎn)物純化試劑盒，進行PCR擴增產(chǎn)物的回收。天根生化科技(北京)有限公司pGM-T 克隆試劑盒進行PCR擴增產(chǎn)物的連接以及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化。將轉(zhuǎn)化好的菌株，送上海生工 測序。經(jīng)測序獲得菌株16S rDNA序列，通過互聯(lián)網(wǎng)，將序列提交NCBI數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用BLAST 與數(shù)據(jù)庫中已有的放線菌16SrDNA序列進行相似性比較分析。菌株JZG117的16S rDNA部分核苷酸序列1500bp，將其與BLAST搜索到的相近菌 株進行16S rDNA序列比較，用MEGA4. 1軟件以相近序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明JZG117 的 16S rDNA 序列與綠色產(chǎn)色鏈霉菌(Sti^ptomyces viridochromogenes)的 16SrDNA 序列 同源性非常高，達99%。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征、培養(yǎng)特征和生理生化特征分析，將其鑒定為鏈霉 菌屬的綠色產(chǎn)色鏈霉菌。實施例3 鏈霉菌株JZGl 17發(fā)酵液的制備(1)菌株的培養(yǎng)
配制高氏一號斜面培養(yǎng)基，接種，放入28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時，保存?zhèn)溆谩?2)制備發(fā)酵液配制高氏一號培養(yǎng)液，滅菌前分裝三角瓶(500mL瓶、裝IOOmL 液)，121°C高壓蒸汽滅菌20min，冷卻后在超凈工作臺上接種。用無菌水法直接洗下斜面培 養(yǎng)基上的菌體接入發(fā)酵三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，280C，200r/min,培養(yǎng)48h。馬上轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐發(fā) 酵，參照發(fā)酵罐培養(yǎng)基的配制(配方大米粉10g，黃豆粉5g，葡萄糖10g，碳酸鈣3g，氯化鈉 lg，蛋白胨Ig,水1000毫升PH = 1.2),滅菌，冷卻后接種與發(fā)酵，280C，200r/min,培養(yǎng)72h 中止發(fā)酵，馬上用罐裝塑料袋包裝發(fā)酵液。實施例4 鏈霉菌株JZG117菌體及其發(fā)酵液用于在室內(nèi)培養(yǎng)基平板上抑制油菜菌 核病菌的工藝JZGl 17菌體抑制油菜菌核病菌的工藝用打孔器將油菜菌核病菌打成5mm小菌 餅，在PDA平板中央菌絲生長面朝下放置油菜菌核病菌菌餅，在距離中央3. 5cm的圓周上等 距離接種菌株JZG117的菌體。放入25°C溫箱種培養(yǎng)3 5天。觀察抑菌圈大小，透明程度 和邊緣整齊程度。其中，用菌株JZG117的發(fā)酵液與培養(yǎng)基混勻后抑制油菜菌核病菌的工藝在28°C 下發(fā)酵培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)好的發(fā)酵液首先用IOmL離心管分裝，在冷凍離心機中15000rpm 離心10分鐘，然后用細菌過濾器過濾得到培養(yǎng)濾液，用無菌水稀釋5倍。測定抗菌活性時， 在每個無菌培養(yǎng)皿中加入3ml培養(yǎng)濾液與PDA培養(yǎng)基混勻，制成平板，平板培養(yǎng)基冷卻后， 將事先裁取的直徑5mm的菌餅倒置移入平板中央。靜置Ih后放入28°C溫箱中培養(yǎng)，每個重 復(fù)3次。待對照全部長滿，用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并觀察抑菌圈透明程度和邊緣整 齊程度，記錄結(jié)果并按下式計算抑制率菌落直徑=相垂直的兩直徑的平均值_菌餅直徑抑制率(％)=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑_菌餅直 徑)X100%放線菌JZG117菌株的發(fā)酵液對油菜菌核病菌的生長有較高的抑制率，達85.6%。實施例5 鏈霉菌株JZG117發(fā)酵液用于溫室防治油菜菌核病菌將本產(chǎn)品用于溫室盆栽試驗。將油菜籽單株播種在營養(yǎng)缽中，20天后將JZG117發(fā) 酵液分別稀釋25倍和50倍直接噴霧于油菜上。24小時后將事先裁取的直徑5mm的油菜菌 核病菌的小菌餅菌絲生長面朝下，貼于油菜最嫩葉片正面，透明膠固定。每個處理重復(fù)50 次，5天后統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)。試驗結(jié)果如下表1溫室利用JZGl 17菌株發(fā)酵液噴霧防油菜菌核病
處理發(fā)病率/%防治效果/%~~
25倍發(fā)酵液(噴霧) 9287^8
50倍發(fā)酵液(噴霧)20.7%79.3
CK(噴霧)100.00實施例6 鏈霉菌株JZG117發(fā)酵液用于田間防治油菜菌核病菌選擇多年的重病田進行田間防治效果試驗。待全田95%以上的油菜主莖開花時，
7采用JZG117發(fā)酵液稀釋25倍直接噴霧于油菜。7天后，再噴霧防治一次。油菜采收前7天 調(diào)查統(tǒng)計防治效果。結(jié)果顯示，JZG117菌株發(fā)酵液稀釋25倍后對油菜菌核病的田間防治 效果可達80. 8%。油菜菌核病嚴重度分級指標(biāo)0級無病；1級1/3以下分枝數(shù)發(fā)病，或主莖病斑不超過3cm ；2級1/3_2/3分枝數(shù)發(fā)病，或發(fā)病分枝數(shù)在1/3以下及主莖病斑超過3cm以上；3級2/3以上分枝數(shù)發(fā)病，或發(fā)病分枝數(shù)在2/3以下及主莖中下部病斑超過3cm 以上。病情指數(shù)=Σ (各級株數(shù)X該病級值)/(調(diào)查總株數(shù)X最高級值)XlOO防治效果=(對照病指_處理病指)/對照病指X 100% .
權(quán)利要求
一種具有抑制油菜菌核病菌的綠色產(chǎn)色鏈霉菌JZG117(Streptomycesviridochromogenes)，其中所述菌株已于2009年08月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號CGMCCNo.3251。
2.權(quán)利要求1所述的鏈霉菌株JZG117，其生理學(xué)特征是(1)在高氏一號培養(yǎng)基上生長，菌落淺黃色。氣生菌絲和基內(nèi)菌絲均很豐富，氣生菌絲 體形成孢子鏈，孢子絲直形，中長，孢子橢圓形，表面光滑；(2)能利用葡萄糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖、棉子糖、菊糖、肌醇、甘露醇；不利用阿拉伯 糖、蔗糖、鼠李糖、山梨醇、衛(wèi)矛醇、檸檬酸鈉；(3)菌株明膠液化弱，牛奶凝固，不胨化；(4)能水解淀粉，纖維素上生長好，能轉(zhuǎn)化蔗糖、還原硝酸鹽；(5)不產(chǎn)生類黑色素、酪氨酸酶和H2S；(6)28°C是菌株產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的最適生長溫度，拮抗菌株在pH值5. O 9. O均能產(chǎn)生 抗菌物質(zhì)。
3.—種通過權(quán)利要求1或2所述的綠色產(chǎn)色鏈霉菌JZG117獲得的菌株發(fā)酵液及其制劑。
4.一種用于篩選權(quán)利要求1或2所述菌株JZG117的方法，主要包括以油菜菌核病菌 為指示菌，采用平板對峙生長法對各菌株拮抗活性進行篩選，得到抗菌活性高的放線菌菌 株。
5.一種利用權(quán)利要求1或2的菌株在室內(nèi)培養(yǎng)基平板上抑制油菜菌核病菌的方法，包括(1)培養(yǎng)上述菌株JZG117，獲得JZG117的菌體；(2)將菌株JZG117的菌體接于培養(yǎng)基平板的四周抑制油菜菌核病菌的生長。
6.權(quán)利要求5的方法，其中步驟2中將菌株JZG117的菌體接于培養(yǎng)基平板的四周，同 時將油菜菌核病菌接于培養(yǎng)基平板的中央，培養(yǎng)72小時后可見明顯的抑菌圈，直徑達8mm， 并且菌絲變褐，不產(chǎn)生菌核。
7.一種利用權(quán)利要求3的菌株發(fā)酵液在室內(nèi)培養(yǎng)基平板上抑制油菜菌核病菌的方法， 主要包括將菌株JZG117的發(fā)酵液與培養(yǎng)基混勻后抑制油菜菌核病菌的生長。
8.一種利用權(quán)利要求1或2的菌株或權(quán)利要求3菌株發(fā)酵液及其制劑的用于防治油菜 菌核病菌的用途。
9.權(quán)利要求7的用途，其中利用上述菌株制備發(fā)酵液或直接利用菌株發(fā)酵液，對油菜 進行直接噴霧或灌根，來抑制油菜菌核病菌在油菜體內(nèi)的擴散，從而減少油菜發(fā)病率，以實 現(xiàn)提高油菜產(chǎn)量和品質(zhì)的用途。
全文摘要
本發(fā)明針對現(xiàn)有防治油菜菌核病的不足，提供一種具有抑制油菜菌核病菌的綠色產(chǎn)色鏈霉菌JZG117(Streptomyces viridochromogenes)，其中所述菌株已于2009年08月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號CGMCC No.3251。本發(fā)明還提供了利用該菌株來有效抑制菜菌核病菌在油菜體內(nèi)的擴散，減少發(fā)病率，提高產(chǎn)量和品質(zhì)，并有助于生物防治產(chǎn)品開發(fā)，進而促進該病害的安全控制。
文檔編號C12N1/20GK101935620SQ201010004639
公開日2011年1月5日 申請日期2010年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月13日
發(fā)明者向華 申請人:向華