專利名稱：一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于廢棄生物資源開發(fā)利用領(lǐng)域，特別是指一種利用廢棄畢赤酵母制備酵
母氨基酸的方法。
背景技術(shù)：
隨著生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，利用基因工程菌生產(chǎn)生物產(chǎn)品已成為現(xiàn)實。巴斯德畢赤 酵母(Pichia pastoris)表達(dá)系統(tǒng)是目前最優(yōu)秀、應(yīng)用最廣泛的外源基因表達(dá)系統(tǒng)之一。 目前許多產(chǎn)品，如植酸酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶等都在巴斯德畢赤酵母中獲得高效表達(dá)， 并實現(xiàn)了這些產(chǎn)品的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。利用工程菌高密度培養(yǎng)生產(chǎn)這些產(chǎn)品的同時會產(chǎn) 生大量的菌體，約占發(fā)酵液體積的30-40%。以一個年產(chǎn)10000噸的植酸酶企業(yè)計，可產(chǎn)生 廢棄畢赤酵母約1000噸(以干物質(zhì)計)，但是目前缺乏廢棄畢赤酵母的再利用的研究和應(yīng) 用，造成生物資源的浪費，而且廢棄畢赤酵母的排放還會對環(huán)境造成污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點和不足，而提供一種利用畢赤酵母
制備酵母氨基酸的方法對，通過廢棄畢赤酵母生產(chǎn)酵母氨基酸，用作飼料添加劑或葉面肥，
不僅可實現(xiàn)廢棄物的資源化利用，并可減少對環(huán)境的污染。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是包括以下步驟， (1)收集畢赤酵母，收集畢赤酵母泥或者畢赤酵母粉； (2)調(diào)漿加水使酵母細(xì)胞干重達(dá)到8% 15%，調(diào)pH至4. 5 5. 0 ; (3)酶解破壁添加破壁酶0. 5%。 1. 0%。，酶解溫度50°C 60°C ，酶解時間12
15h ; (4) 二次調(diào)槳調(diào)pH至5. 5 7. 5 ; (5)蛋白酶解添加蛋白酶O. 3%。 0. 5。；，酶解溫度，4(TC 5(TC，酶解時間20 24h ; (6)去除不溶物通過高速離心機(jī)離心或者膜過濾去除沉淀物；
(7)濃縮采用減壓真空濃縮使固形物含量達(dá)到30% 50% ;
(8)干燥，獲得酵母氨基酸。 所述的破壁酶包括但不局限于葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纖維素酶或溶菌酶中的一 種多種組合。所述的蛋白酶包括但不局限于酶性蛋白酶、中性蛋白酶或堿性蛋白酶中的一 種或多種組合。 進(jìn)一步設(shè)置是所述的步驟(8)采用噴霧干燥方式，其進(jìn)風(fēng)溫度為150°C 200°C， 出風(fēng)溫度為75°C 95°C。本設(shè)置還可以是采用滾筒干燥方式進(jìn)行。 本發(fā)明工藝簡單，產(chǎn)品形態(tài)理想，利用本發(fā)明制備的酵母氨基酸經(jīng)檢測，很好地保 留了酵母原有的營養(yǎng)和功能成分，分子量在一萬以下的肽及氨基酸含量占總蛋白的80%， 還含有一定量的低聚糖。
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本發(fā)明操作方便、連續(xù)性好、處理量大，易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，基本解決了廢棄畢赤 酵母難以處理的技術(shù)屏障。隨著生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，利用畢赤酵母表達(dá)的產(chǎn)品越來越多， 產(chǎn)生的廢棄畢赤酵母的量也越來越大，利用廢棄畢赤酵母制備酵母氨基酸，根據(jù)其衛(wèi)生程 度可作為功能性產(chǎn)品原料用于飼料行業(yè)或生物肥料行業(yè)，具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和市場開發(fā) 前景。 下面結(jié)合說明書附圖和具體實施方式
對本發(fā)明做進(jìn)一步介紹。


圖l本發(fā)明工藝流程具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，只用于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不 能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定，該領(lǐng)域的技術(shù)工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對本發(fā)明 作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。
實施例1 植酸酶生產(chǎn)廢棄畢赤酵母lkg加水9kg，調(diào)pH至5. 5，加入0. 6%。的破壁酶(葡聚 糖酶纖維素酶=1 : 1)，4(TC酶解12h，再調(diào)pH至6. 5，加入0. 3%。中性蛋白酶，45"酶解 2處，高速離心去除沉淀，上清液真空濃縮至固形物含量達(dá)到35%進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度 為160°C，出風(fēng)溫度為82。C，得酵母氨基酸產(chǎn)品460g。
實施例2 植酸酶生產(chǎn)廢棄畢赤酵母lkg加水12. 5kg，調(diào)pH至5. 5，加入0. 6%。的破壁酶(葡
聚糖酶纖維素酶甘露聚糖酶=i : i : i) ，4crc酶解12h，再調(diào)pH至6.5，加入o. 3%0
中性蛋白酶，45t:酶解24h，高速離心去除沉淀，上清液真空濃縮至固形物含量達(dá)到35X進(jìn) 行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度為160°C，出風(fēng)溫度為82t:，得酵母氨基酸產(chǎn)品506g。
實施例3 植酸酶生產(chǎn)廢棄畢赤酵母lkg加水9kg，調(diào)pH至5. 5，加入0. 6%。的破壁酶(葡聚
糖酶纖維素酶甘露聚糖酶=i : i : D，4(rc酶解14h，再調(diào)pH至6.o，加入o.5。；木
瓜蛋白酶，45t:酶解22h，高速離心去除沉淀，上清液真空濃縮至固形物含量達(dá)到35%進(jìn)行 噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度為16(TC，出風(fēng)溫度為82t:，得酵母氨基酸產(chǎn)品482g。
實施例4 木聚糖酶生產(chǎn)廢棄畢赤酵母lkg加水8. 5kg，調(diào)pH至5. 5，加入0. 6%。的破壁酶(葡
聚糖酶纖維素酶甘露聚糖酶=i : i : 1)，4(rc酶解i5h，再調(diào)pH至6.o，加入o.5。；
木瓜蛋白酶，45t:酶解24h，高速離心去除沉淀，上清液真空濃縮至固形物含量達(dá)到35X進(jìn) 行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度為18(TC，出風(fēng)溫度為9(TC，得酵母氨基酸產(chǎn)品478g。
實施例5 植酸酶生產(chǎn)廢棄畢赤酵母lkg加水9kg，調(diào)pH至5. 5，加入1. 0%。的破壁酶(葡聚
糖酶纖維素酶甘露聚糖酶=i : i : D，4(rc酶解10h，再調(diào)pH至6.5，加入o.5。；中
性蛋白酶，45t:酶解24h，高速離心去除沉淀，上清液真空濃縮至固形物含量達(dá)到35X進(jìn)行 噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度為18(TC，出風(fēng)溫度為9(TC，得酵母氨基酸產(chǎn)品512g。
實施例6 木聚糖酶生產(chǎn)廢棄畢赤酵母lkg加水12. 5kg，調(diào)pH至5. 5，加入1. 0%。的破壁酶
(葡聚糖酶纖維素酶甘露聚糖酶=i : i : D，4(rc酶解12h，再調(diào)pH至6.o，加入
0.5。；木瓜蛋白酶，45t:酶解24h，高速離心去除沉淀，上清液真空濃縮至固形物含量達(dá)到 35%進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度為190°C，出風(fēng)溫度為92t:，得酵母氨基酸產(chǎn)品498g。
權(quán)利要求
一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在于包括以下步驟，(1)收集畢赤酵母收集畢赤酵母泥或者畢赤酵母粉；(2)調(diào)漿加水使酵母細(xì)胞干重達(dá)到8％～15％，調(diào)pH至4.5～5.0；(3)酶解破壁添加破壁酶0.5‰～1.0‰，酶解溫度50℃～60℃，酶解時間12～15h；(4)二次調(diào)漿調(diào)pH至5.5～7.5；(5)蛋白酶解添加蛋白酶0.3‰～0.5‰，酶解溫度，40℃～50℃，酶解時間20～24h；(6)去除不溶物通過高速離心機(jī)離心或者過濾去除沉淀物；(7)濃縮采用減壓真空濃縮使固形物含量達(dá)到30％～50％；(8)干燥，獲得酵母氨基酸。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在于所 述的破壁酶包括但不局限于葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纖維素酶或溶菌酶中的一種多種組合。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在于所述的蛋白酶包括但不局限于酶性蛋白酶、中性蛋白酶或堿性蛋白酶中的一種或多種 組合。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在 于所述的步驟(8)采用噴霧干燥方式，其進(jìn)風(fēng)溫度為15(TC 20(TC，出風(fēng)溫度為75t: 95°C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在于所 述的步驟(8)采用噴霧干燥方式，其進(jìn)風(fēng)溫度為150°C 200°C，出風(fēng)溫度為75°C 95°C。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在于 所述的步驟(8)采用滾筒干燥方式進(jìn)行。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，其特征在于所 述的步驟(8)采用滾筒干燥方式進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用畢赤酵母制備酵母氨基酸的方法，包括有收集畢赤酵母、調(diào)漿、酶解破壁、二次調(diào)漿、蛋白酶解、去除不溶物以及干燥步驟，本發(fā)明通過廢棄畢赤酵母生產(chǎn)酵母氨基酸，用作飼料添加劑或葉面肥，不僅可實現(xiàn)廢棄物的資源化利用，并可減少對環(huán)境的污染。
文檔編號C12P13/00GK101736068SQ201010102088
公開日2010年6月16日 申請日期2010年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月22日
發(fā)明者姜小偉, 楊海龍, 陳碎鶴 申請人:溫州海螺挑戰(zhàn)生物工程有限公司