專利名稱：一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富集細(xì)菌的培養(yǎng)基，具體地涉及一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
糞鏈球菌是一種對人和畜都有益的微生物菌種，也是農(nóng)業(yè)部允許使用的飼料級微 生物飼料添加劑的菌種之一，屬兼性厭氧革蘭氏陽性菌，具有調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)菌群平 衡，提高免疫力等功效。把它經(jīng)過系列工藝可以制做成微生物制劑，能夠直接喂養(yǎng)畜禽，既 可以改善畜禽腸道內(nèi)的微生物結(jié)構(gòu)，又可以競爭性排斥腸道內(nèi)的其它病原微生物，維持體 內(nèi)微生態(tài)平衡，改善消化系統(tǒng)，促進(jìn)畜禽對營養(yǎng)的吸收，提高機(jī)體免疫力，保證畜禽能夠更 好的生長。 糞鏈球菌的推廣和應(yīng)用，關(guān)鍵在于需要合適的培養(yǎng)基質(zhì)，但目前經(jīng)典的用于富集 糞鏈球菌的常規(guī)培養(yǎng)基，主要配方為牛肉浸膏4. 5g，胰蛋白胨或多胨15. 0g，葡萄糖7. 5g， 氯化鈉7. 5g，疊氮化鈉(NaN3)0. 2g，用蒸餾水配成1000ml。其平均富集的時間為25 30 天，周期長，且存在培養(yǎng)基成分復(fù)雜，成本較高的缺點。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基，用本發(fā)明的培養(yǎng)基 培養(yǎng)糞鏈球菌，培養(yǎng)速度快，周期短，成本低。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基，其特 征在于由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、鹽溶液、葡萄糖和酵母膏組成；在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，每1000ml基礎(chǔ)培 養(yǎng)基加入3 7ml的鹽溶液、15 20g的葡萄糖和5 15g的酵母膏；
所述鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的MnS04 4H20， 2g的FeS04 7H20和2g 的NaCl，用蒸餾水配成lOOOml。 優(yōu)選的富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，每lOOOml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入5ml 的鹽溶液、18g的葡萄糖和10g的酵母膏。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基是糞鏈球菌的常用培養(yǎng)基。也就是現(xiàn)有技術(shù)中經(jīng)常用的，并已公開的 糞鏈球菌培養(yǎng)基。 調(diào)節(jié)本發(fā)明培養(yǎng)基pH為7 9，12rC滅菌30min。將糞鏈球菌接種于培養(yǎng)基中， 振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，溫度為30°C 。 酵母膏對糞鏈球菌的生長量的影響隨著酵母膏的濃度的增加而增加，經(jīng)過22h的 培養(yǎng)，當(dāng)酵母膏的用量為10g/L時(每lOOOml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入10. 0g)，其菌體繁殖速度很 快，菌液OD,達(dá)1. 5，當(dāng)酵母膏的用量小于10g/L時，菌液OD,小于1. 5。因此，酵母膏的用 量以10g/L的酵母膏為宜。 葡萄糖對糞鏈球菌的生長量的影B向，隨著葡萄糖的濃度的增加而增加，經(jīng)過22h 的光照培養(yǎng)后，當(dāng)葡萄糖的用量為18g/L(每lOOOml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入18g)時，其菌體繁殖 速度很快，菌液0D66。達(dá)1. 5，當(dāng)葡萄糖的用量小于18g/L時，菌液0D66。小于1. 5。因此，葡萄
3糖的用量以18g/L為宜。 本發(fā)明中，由于添加了鹽溶液，能加快微生物的生長，為微生物提供所需營養(yǎng)物 質(zhì)。 本發(fā)明的有益效果是 1、富集培養(yǎng)速度快。由于在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加大了酵母膏、葡萄糖等營養(yǎng)成分的用 量，為糞鏈球菌創(chuàng)造了一個更好的營養(yǎng)條件，使糞鏈球菌生長速度快，培養(yǎng)22h后，培養(yǎng)其 0D腳達(dá)到1. 5左右。 2、糞鏈球菌生長期延長，最大生長量提高。隨著培養(yǎng)時間的增加，菌液OD,逐漸 增加，培養(yǎng)22h時，其0D66。為1. 5，比使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)糞鏈球菌時的0D66。有所提高，糞 鏈球菌的最大值提前了 3 5小時，對其繁殖更有促進(jìn)作用。 3、成本低。在常規(guī)培養(yǎng)基中，由于加入了疊氮化鈉，使用成本太高，而本發(fā)明用酵 母膏和鹽溶液替代了疊氮化鈉，使成本降低。


圖1是本發(fā)明與常規(guī)培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基富集培養(yǎng)過程中，光密度0D66。的變化圖；
圖中，+常規(guī)培養(yǎng)基+本發(fā)明培養(yǎng)基
具體實施方式

實施例1( — )富集糞鏈球菌培養(yǎng)基的配制 基礎(chǔ)培養(yǎng)基取蛋白胨10g、醋酸鈉10g和瓊脂粉10g，用蒸餾水配成1000ml。
在上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入5ml鹽溶液(鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的 MnS04 4H20， 2g的FeS04 7H20和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml) 、 18g的葡萄糖和10g 的酵母膏。 ( 二 )糞鏈球菌的培養(yǎng) 將上述培養(yǎng)基的pH調(diào)至7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3%接 種于培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30°C。 富集培養(yǎng)結(jié)果恒溫培養(yǎng)22h，菌液0D,為1. 4，光照培養(yǎng)26h，達(dá)到最大生長量，菌 液0D66。為1. 5，使糞鏈球菌的最大生長量提前了 4h。
實施例2( — )富集糞鏈球菌培養(yǎng)基的配制 基礎(chǔ)培養(yǎng)基取蛋白胨10g，醋酸鈉10g和瓊脂粉10g，用蒸餾水配成lOOOml。
在上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入3ml鹽溶液(鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的 MnS04 4H20，2g的FeS04 7H20和2g的NaCl，用蒸餾水配成lOOOml) 、15g的葡萄糖和5的 酵母膏。 ( 二 )糞鏈球菌的培養(yǎng) 將上述培養(yǎng)基的pH調(diào)至7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3%接 種于培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30°C。 富集培養(yǎng)結(jié)果恒溫培養(yǎng)22h，菌液0D66。為1. 35，光照培養(yǎng)27h，達(dá)到最大生長量，菌液0D,為1. 5，使糞鏈球菌的最大生長量提前了 3h。
實施例3( — )富集糞鏈球菌培養(yǎng)基的配制 基礎(chǔ)培養(yǎng)基取蛋白胨10g，醋酸鈉10g和瓊脂粉10g，用蒸餾水配成lOOOml。
在上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入7ml鹽溶液鹽溶液(鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的MnS04 *4H20，2g的FeS04 *7H20和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml) 、20g的葡萄糖和 15g的酵母膏。 ( 二 )糞鏈球菌的培養(yǎng) 將上述培養(yǎng)基的pH調(diào)至7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3%接 種于培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30°C。 富集培養(yǎng)結(jié)果恒溫培養(yǎng)22h，菌液0D66。為1. 5，達(dá)到最大生長量，使糞鏈球菌的最 大生長量提前了 3h 5h。
對比例 分別取實施例1本發(fā)明的培養(yǎng)基和背景技術(shù)中介紹的常規(guī)培養(yǎng)基，分別調(diào)節(jié)培養(yǎng) 基的PH為7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3 %接種于培養(yǎng)基中，振蕩混 勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度3(TC。光照培養(yǎng)40h，測定培養(yǎng)基富集培養(yǎng)過程中光密度0D, 變化(見圖1)。 從圖1可知，使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)糞鏈球菌，30h左右時菌液0D66。為1. 5 ;使用本 發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)糞鏈球菌，隨著培養(yǎng)時間的增加，菌液0D66。逐漸增加，培養(yǎng)26h，其0D66。為 1. 5，本發(fā)明的培養(yǎng)基使糞鏈球菌的達(dá)到最大生長量的時間提前了 3 5h，并且對其繁殖和 快速培養(yǎng)更有促進(jìn)作用。
權(quán)利要求
一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基，其特征在于由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、鹽溶液、葡萄糖和酵母膏組成；在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，每1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入3～7ml的鹽溶液、15～20g的葡萄糖和5～15g的酵母膏；所述的鹽溶液是將40g的MgSO4·7H2O，2g的MnSO4·4H2O，2g的FeSO4·7H2O和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基，其特征在于在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，每1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入5ml的鹽溶液、18g的葡萄糖和10g的酵母膏。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基。采用的技術(shù)方案是一種富集糞鏈球菌的培養(yǎng)基，其特征在于由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、鹽溶液、葡萄糖和酵母膏組成；在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，每1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入3～7ml的鹽溶液、15～20g的葡萄糖和5～15g的酵母膏；所述的鹽溶液是將40g的MgSO4·7H2O，2g的MnSO4·4H2O，2g的FeSO4·7H2O和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml。用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)糞鏈球菌，培養(yǎng)速度快，成本低。彌補(bǔ)了糞鏈球菌生長周期過慢以及成本較高方面的不足之處，提高了生長速率，使達(dá)到最大生長量的時間縮短了3～5個小時。
文檔編號C12N1/20GK101792725SQ201010124570
公開日2010年8月4日 申請日期2010年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月16日
發(fā)明者付保榮, 孟雪蓮, 徐成斌, 惠秀娟, 曹向宇, 李法云, 馬溪平 申請人:遼寧大學(xué)