專利名稱：誘導(dǎo)大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系體胚用的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大蒜組織培養(yǎng)技術(shù)，具體是一種誘導(dǎo)大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系體胚用的培 養(yǎng)基。特別適用于利用從大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系轉(zhuǎn)固體培養(yǎng)后體細(xì)胞胚(簡(jiǎn)稱體胚)的誘導(dǎo)。
背景技術(shù)：
大蒜(Allium sativumL.)是無(wú)性繁殖植物，具有較高的食用及藥用價(jià)值，利用生 物工程技術(shù)改良其品質(zhì).抗病蟲(chóng)性等性狀現(xiàn)已引起廣泛的重視，這些生物技術(shù)應(yīng)用的關(guān)鍵 環(huán)節(jié)是建立一個(gè)大蒜細(xì)胞組織培養(yǎng)、增殖的有效植株再生體系。懸浮培養(yǎng)技術(shù)可以在短時(shí) 間內(nèi)培養(yǎng)出大量同質(zhì)的試驗(yàn)材料，大幅度提高試驗(yàn)效率，為大蒜生物工程提供理想的試驗(yàn) 材料。張毅等利用大蒜懸浮培養(yǎng)提取大蒜次生代謝物質(zhì)有過(guò)報(bào)道(1993)；但利用大蒜懸浮 培養(yǎng)技術(shù)，建立懸浮培養(yǎng)系及有效植株高頻率再生體系尚未報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是解決大蒜懸浮培養(yǎng)系轉(zhuǎn)管固體培養(yǎng)上增殖培養(yǎng)時(shí)體胚難誘導(dǎo)的 技術(shù)難題，提供一種大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系體胚誘導(dǎo)用的培養(yǎng)基。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種誘導(dǎo)大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系體胚用的培養(yǎng)基，是將 6-芐基嘌呤6-BA、激動(dòng)素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，調(diào)整PH值 至5. 8-6. 0制成；其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì)B51L6-BA 5mgKTlmgNAA 0. Olmg蔗糖30g瓊脂6g。上述原料中，B5為基本培養(yǎng)基，提供培養(yǎng)組織生長(zhǎng)發(fā)育所需的無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素和部分 有機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素；6-BA、KT、NM是植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有促進(jìn)培養(yǎng)物愈傷組織形成和發(fā)育的作 用；蔗糖提供培養(yǎng)組織生長(zhǎng)發(fā)育所的碳素營(yíng)養(yǎng)；瓊脂的主要作用是固化培養(yǎng)基，起支撐作用。上述各組份的用量是發(fā)明人在理論分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行大量試驗(yàn)摸索總結(jié)得出的， 按上述比例配制培養(yǎng)基，具有促使大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系形成體細(xì)胞胚的效果。上述培養(yǎng)基的制作方法是將6-BA、KT、NAA、蔗糖溶解于B5，攪拌均勻，PH值調(diào)整為 5. 8-6. 0之間即可。本發(fā)明的積極效果是克服了大蒜懸浮培養(yǎng)難以成系、體細(xì)胞胚(簡(jiǎn)稱體胚)難誘 導(dǎo)的難題，利用本培養(yǎng)基可以使大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系高頻率誘導(dǎo)出體胚。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例和對(duì)照例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的有益效果
3
對(duì)照例1B52,4-D6-BANAA蔗糖瓊脂對(duì)照例2B52,4-DKTNAA蔗糖瓊脂實(shí)施例1B5 1L6-BA 5mgKT lmgNAA 0. Olmg蔗糖30g瓊脂6g試驗(yàn)方法及結(jié)果將上述實(shí)施例的培養(yǎng)基用于大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系轉(zhuǎn)固體培養(yǎng)后體胚的誘導(dǎo)試 驗(yàn)材料大蒜徐州白蒜莖尖分生組織懸浮培養(yǎng)誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織。方法將大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出胚性愈傷組織經(jīng)懸浮培養(yǎng)后，將誘導(dǎo) 出的胚性懸浮系轉(zhuǎn)移到裝有上述固體培養(yǎng)20ml (PH5. 5)的三角瓶中，培養(yǎng)條件為27士 1°C， 每日12h. lOOOlx光照。結(jié)果將大蒜懸浮培養(yǎng)系中3mm以上細(xì)胞團(tuán)轉(zhuǎn)管接種在上述三種培養(yǎng)基上，進(jìn)行 愈傷組織的增殖和體胚的進(jìn)一步發(fā)育誘導(dǎo)。經(jīng)過(guò)4周的繼代培養(yǎng)，接種在對(duì)照例1培養(yǎng)基 上的胚性愈傷組織顏色逐漸由淡黃色變?yōu)榛野咨?，組織增殖速度變快，結(jié)構(gòu)變利疏松，喪失 胚性發(fā)育能力。接種在對(duì)照例2培養(yǎng)基上的胚性細(xì)胞團(tuán)只有10%的細(xì)胞團(tuán)保持亮黃色，維 持其胚性；90%的細(xì)胞團(tuán)喪失了胚性。接種在本實(shí)施例1培養(yǎng)基上的細(xì)胞團(tuán)89%仍表現(xiàn)為 亮黃色.結(jié)構(gòu)致密.有光澤.生長(zhǎng)緩慢，并且逐漸有瘤狀突起，經(jīng)細(xì)胞學(xué)觀察，這時(shí)期體胚 的發(fā)育逐漸成熟。由此可見(jiàn)高比例的細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素有利于體胚的成熟，2，4-D的存在 不利于體胚的成熟分化，大蒜胚胎發(fā)生對(duì)生長(zhǎng)素濃度的要求極低。綜合以上分析，得出大蒜胚性懸浮系體胚誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為B5 1L6-BA 5mg
1L 0. 5mg 0. 5mg 0. 2mg 30g 6g
1L 0. 5mg 0. lmg 0. 2mg 30g 6g
KT lmgNAA 0. Olmg蔗糖30g瓊脂6g。
權(quán)利要求
一種誘導(dǎo)大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系體胚用的培養(yǎng)基，其特征是將6-芐基嘌呤6-BA、激動(dòng)素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，調(diào)整PH值至5.8-6.0制成；其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì)B5 1L6-BA5mgKT 1mgNAA 0.01mg蔗糖30g瓊脂6g。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種誘導(dǎo)大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系體胚用的培養(yǎng)基屬大蒜組織培養(yǎng)技術(shù)。將6-芐基嘌呤6-BA、激動(dòng)素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，調(diào)整PH值至5.8-6.0制成；其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì)B5 1L，6-BA 5mg，KT 1mg，IAA 0.01mg，蔗糖30g和瓊脂6g。本發(fā)明的積極效果是克服了大蒜懸浮培養(yǎng)難以成系、體細(xì)胞胚(簡(jiǎn)稱體胚)難誘導(dǎo)的難題，利用本培養(yǎng)基可以使大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系高頻率誘導(dǎo)出體胚。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101851601SQ20101016960
公開(kāi)日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2010年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月6日
發(fā)明者張?jiān)蕜?申請(qǐng)人:江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所