專利名稱：一種格氏乳酸桿菌的液體深層發(fā)酵方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種飼料和食品添加劑技術，具體是一種格氏乳酸桿菌的液體深層發(fā)酵方法。
背景技術：
乳酸桿菌在自然界中分布廣泛，格氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)作為乳 酸桿菌的一種，是普遍存在于人和動物腸道中的厭氧型益生菌。已有研究表明格氏乳酸桿 菌可定植于動物腸道內，正常生長代謝時產生乳酸和乙酸等，可造成腸道低PH環(huán)境，促進 新陳代謝，抑制有害菌在動物腸道的生長和繁殖。因此，格氏乳酸桿菌在食品和飼料添加劑 上具有潛在的應用前景。現(xiàn)有生產采用格氏乳酸桿菌的技術主要是厭氧發(fā)酵和采用常規(guī)的培養(yǎng)基和培養(yǎng) 條件進行搖瓶培養(yǎng)得到，厭氧發(fā)酵雖然工藝簡單，能耗小，生產周期短，但是往往最終獲得 的菌體數量不高，一般其活菌體數量為5 8X101(lCfU/ml，而導致生產效率降低。格氏乳 酸桿菌的搖瓶培養(yǎng)工藝均采用常規(guī)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，其菌體數量也不高，一般其活菌 體數量為5 SXliTcfu/ml，導致生產效率降低。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術存在的缺陷，提供一種格氏乳酸桿菌的液體深層 發(fā)酵方法。本發(fā)明的格氏乳酸桿菌的液體深層發(fā)酵方法包括如下步驟(1)搖瓶培養(yǎng)格氏乳酸桿菌種子，種子培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件按常規(guī)；(2)發(fā)酵罐中裝入發(fā)酵培養(yǎng)基后實罐滅菌，當發(fā)酵罐罐溫降至38 40°C時，以體 積比8 12%的接種量接種，在以下條件發(fā)酵發(fā)酵溫度35-37°C ；發(fā)酵全過程pH6. 2 6. 7，以濃氨水自動調整；轉速80-120轉/分鐘；氮氣通氣量0. 01 0. 03vvm ；罐壓0 0. 03MPa ；補料液為葡萄糖溶液，葡萄糖含量為100 200g/l，恒速補料，補料總量為初始培 養(yǎng)基體積的0. 2 0. 3倍；發(fā)酵總時間26 28小時。上述液體深層發(fā)酵工藝最終獲得的活菌體數量為5 8X li^cfu/ml。作為優(yōu)選，所述格氏乳酸桿菌來源于豬腸道。發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 50g/l，酵母浸粉5 10g/l，大豆蛋白胨5 10g/l，硫酸銨10 15g/l，乙酸鈉3 7g/l， 檸檬酸鈉3 7g/l，磷酸氫二鉀2 8g/l，七水硫酸鎂0. 3 0. 7g/l，一水硫酸錳0. 05 0. 2g/l。，補料時間控制在4 6小時。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有如下優(yōu)點1、得到的格氏乳酸桿活菌體數量高，達到5 8X101(lCfU/ml ；2、工藝簡單，能耗小，生產周期短；3、培養(yǎng)基由常用原料組成，培養(yǎng)基成本低廉；具體實施方法
實施例1乳酸桿菌的分離與鑒定將 健康育肥豬宰殺后立即取其小腸中部粘膜，無菌條件下沖洗除去粘膜上的食 糜，再刮取粘膜黏附物3次，3次的刮取物均混入20ml無菌生理鹽水中，充分搖勻。取混合后 的生理鹽水0. 2ml均勻涂布于MRS平板培養(yǎng)基上，置于二氧化塘培養(yǎng)箱中，37°C培養(yǎng)24-48 小時，挑取形態(tài)不同的菌落在MRS培養(yǎng)基上進行純培養(yǎng)，然后置于4°C保藏備用。挑選純培養(yǎng)物進行染色，鏡檢；選取無芽孢、革蘭氏陽性桿菌進行接觸酶試驗，再 取接觸酶試驗為陰性的培養(yǎng)物進行糖醇發(fā)酵試驗，初步確定菌種種屬后送中國工業(yè)微生物 菌種保藏中心進行檢驗和鑒定，鑒定結果為格氏乳酸桿菌。實施例2搖瓶培養(yǎng)種子，種子培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件按常規(guī)。50L發(fā)酵罐中，裝入30L發(fā)酵培養(yǎng)基后實罐滅菌。當發(fā)酵罐罐溫降至38°C時，以體積比12%的接種量接種，在以下條件發(fā)酵發(fā)酵 溫度35°C ；發(fā)酵全過程pH6. 2 6. 7，以濃氨水自動調整；轉速120轉/分鐘；氮氣通氣量 0. Olvvm ；罐壓0. 03MPa ；補料液為葡萄糖溶液，葡萄糖含量為100g/l，恒速補料，補料總量 為初始培養(yǎng)基體積的0. 3倍；發(fā)酵總時間26小時，補料時間控制在6小時。發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/l，酵母浸粉10g/l，大豆蛋白胨5g/l，硫酸銨15g/ 1，乙酸鈉3g/l，檸檬酸鈉7g/l，磷酸氫二鉀2g/l，七水硫酸鎂0. 7g/l，一水硫酸錳0. 05g/l。發(fā)酵結束時取發(fā)酵液檢測活菌數為8 X 1010cfu/ml。實施例3種子罐擴大培養(yǎng)種子，種子培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件按常規(guī)。15立方發(fā)酵罐中，裝入8立方發(fā)酵培養(yǎng)基后實罐滅菌。當發(fā)酵罐罐溫降至40°C時，以體積比8%的接種量接種，在以下條件發(fā)酵發(fā)酵 溫度37°C ；發(fā)酵全過程pH6. 2 6. 7，以濃氨水自動調整；轉速120轉/分鐘；氮氣通氣量 0. 03vvm ；補料液為葡萄糖溶液，葡萄糖含量為200g/l，恒速補料，補料總量為初始培養(yǎng)基 體積的0. 2倍；發(fā)酵總時間28小時，補料時間控制在4小時。發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖50g/l，酵母浸粉5g/l，大豆蛋白胨10g/l，硫酸銨IOg/ 1，乙酸鈉7g/l，檸檬酸鈉3g/l，磷酸氫二鉀8g/l，七水硫酸鎂0. 3g/l，一水硫酸錳0. 2g/l。發(fā)酵結束時取發(fā)酵液檢測活菌數為5 X 1010cfu/ml。實施例4發(fā)酵結束后，取發(fā)酵液進行離心濃縮或者膜過濾濃縮，得到活菌濃縮液；再經過吸 附干燥或冷凍干燥等低溫干燥工藝可制得格氏乳酸桿菌的活菌制劑。該活菌制劑通過拌料 或飲水進入動物腸道后可發(fā)揮相應的益生作用，無毒副作用。
權利要求
一種本發(fā)明的格氏乳酸桿菌的液體深層發(fā)酵方法，其特征在于包括如下步驟(1)搖瓶培養(yǎng)格氏乳酸桿菌種子；(2)發(fā)酵罐中裝入發(fā)酵培養(yǎng)基后實罐滅菌，當發(fā)酵罐罐溫降至38～40℃時，以體積比8～12％的接種量接種，在以下條件發(fā)酵發(fā)酵溫度35-37℃；發(fā)酵全過程pH6.2～6.7，以濃氨水自動調整；轉速80-120轉/分鐘；氮氣通氣量0.01～0.03vvm；罐壓0～0.03MPa；補料液為葡萄糖溶液，葡萄糖含量為100～200g/l，恒速補料，補料總量為初始培養(yǎng)基體積的0.2～0.3倍；發(fā)酵總時間26～28小時。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 50g/ 1，酵母浸粉5 10g/l，大豆蛋白胨5 10g/l，硫酸銨10 15g/l，乙酸鈉3 7g/l，檸檬 酸鈉3 7g/l，磷酸氫二鉀2 8g/l，七水硫酸鎂0. 3 0. 7g/l，一水硫酸錳0. 05 0. 2g/ 1。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述格氏乳酸桿菌來源于豬腸道。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于補料時間控制在4 6小時。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種格氏乳酸桿菌的液體深層發(fā)酵方法，包括(1)搖瓶培養(yǎng)格氏乳酸桿菌種子；(2)發(fā)酵罐中裝入發(fā)酵培養(yǎng)基后實罐滅菌，當發(fā)酵罐罐溫降至38～40℃時，以體積比8～12％的接種量接種，在以下條件發(fā)酵發(fā)酵溫度35-37℃；發(fā)酵全過程pH6.2～6.7，以濃氨水自動調整；轉速80-120轉/分鐘；氮氣通氣量0.01～0.03vvm；罐壓0～0.03MPa；補料液為葡萄糖溶液，葡萄糖含量為100～200g/l，恒速補料，補料總量為初始培養(yǎng)基體積的0.2～0.3倍；發(fā)酵總時間26～28小時。最終獲得格氏乳酸桿菌的活菌體數量為5～8×1010cfu/ml。
文檔編號C12N1/20GK101880644SQ201010191709
公開日2010年11月10日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權日2010年5月28日
發(fā)明者李清雄, 林向劍, 鄺金媚, 陶正國 申請人:廣州立達爾生物科技有限公司