專(zhuān)利名稱(chēng)：牙齦卟啉單胞菌促血凝功能結(jié)構(gòu)域hgp44基因的克隆重組菌及構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牙齦卟啉單胞菌促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp44基因的原核表達(dá)質(zhì)粒。
背景技術(shù)：
牙周病是人群中發(fā)病率很高的口腔三大疾病之一，在我國(guó)人群中發(fā)病率高達(dá)75% 以上。牙周病是由牙菌斑中的微生物引起的牙周支持組織的慢性感染性疾病，主要癥狀是 牙周袋形成、進(jìn)行性附著喪失和牙槽骨吸收，最終可導(dǎo)致牙松動(dòng)和被拔除。牙周病屬于慢性 感染性疾病，免疫機(jī)制在疾病的發(fā)展過(guò)程中也發(fā)揮了重要的作用。冠心病是目前主要致死性疾病之一，病因機(jī)制復(fù)雜，傳統(tǒng)的致病因素是高血脂、高 血壓、糖尿病、遺傳、吸煙等。近年來(lái)越來(lái)越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成過(guò)程中常 伴隨著炎癥反應(yīng)，病原微生物可以侵襲入內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，激發(fā)和促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化 的炎癥反應(yīng)，由此推測(cè)感染可能是冠心病一個(gè)重要的致病因子。炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)關(guān)系 非常密切，免疫反應(yīng)是炎癥反應(yīng)的重要啟動(dòng)因素。大量的流行病學(xué)研究揭示了牙周病和冠心病之間存在一定的相關(guān)性，進(jìn)一步的實(shí) 驗(yàn)研究提示牙周病主要致病菌牙齦卟啉單胞菌(P. g)在一定程度上促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化 形成。牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,P. g)是革蘭氏陰性、專(zhuān)性厭氧的產(chǎn)黑 色素短桿菌，能產(chǎn)生多種與牙周組織破壞有關(guān)的侵襲性因子，主要有內(nèi)毒素、菌毛、牙齦素 等，是目前公認(rèn)的重要的牙周炎致病菌，也是牙周炎活動(dòng)性檢測(cè)的指示菌。投射掃描電子顯 微鏡發(fā)現(xiàn)P. g可以侵入人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。牙齦素是P. g分泌的胞外蛋白酶，可破壞細(xì)胞基質(zhì)，使宿主免疫調(diào)節(jié)失 衡。目前發(fā)現(xiàn)，與牙周疾病關(guān)系密切的牙齦素主要有兩種精氨酸特異性蛋白酶 (Arginine-gingipains, Rgps)禾口賴(lài)氛酸特異性蛋白醇(Lysine-gingipain, Kgp)，其中 Rgps又稱(chēng)卟啉素，分為RgpA和RgpB兩種。RgpA和Kgp均為非共價(jià)復(fù)合物，包一個(gè)N-末端 前肽區(qū)，蛋白水解區(qū)和一個(gè)C-末端粘附素區(qū)(HGP15[HbR]，Hgpl7，Hgp27和Hgp44)，具有獨(dú) 立的催化區(qū)域和凝集區(qū)域。然而RgpB—級(jí)結(jié)構(gòu)只有催化區(qū)域，其相當(dāng)于HRgpA的催化亞基。 動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程伴隨有炎癥反應(yīng)，而內(nèi)皮細(xì)胞激活是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵步驟。P. g可以激活 內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子如細(xì)胞間黏附分子、血管細(xì)胞黏附分子的釋放，從而有利于中性粒細(xì)胞 向內(nèi)皮細(xì)胞趨化，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖，促進(jìn)血細(xì)胞的游走以及動(dòng)脈粥樣硬 化的形成。Hgp44是牙齦素上一段粘附素區(qū)域，Hgp44能夠通過(guò)粘附到HIV_lgpl20蛋白上， 阻斷HIV-I外膜介導(dǎo)的膜融合，進(jìn)一步阻斷HIV感染。同時(shí)，P. g依賴(lài)細(xì)胞內(nèi)編碼Hgp44粘 附素的基因誘導(dǎo)血小板聚集。目前關(guān)于Hgp44促進(jìn)血小板聚集的研究國(guó)外報(bào)道很少，而國(guó) 內(nèi)沒(méi)有研究報(bào)道過(guò)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種牙齦卟啉單胞菌促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp44基因的克隆重組菌，它是Hgp44-pET22b-BL21 (DE3)大腸埃希氏菌，其保藏編號(hào)為CGMCC NO. 3799，其拉丁學(xué)名為 Escherichia coli。本發(fā)明另一個(gè)所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種上述克隆重組菌的構(gòu)建方法，為 此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案它包括以下步驟1)、通過(guò)PCR方法克隆得到Hgp44基因；所述Hgp44基因序列如序列表中SEQ ID NO :1所示，PCR擴(kuò)增的引物為上游5~-CCATATGAGCGGTCAGGCCGAG-3~下游-GCTCGAGTGCCGTAATCGTCTCTTC-3“，2)、通過(guò)酶切連接方法將Hgp44基因連接到表達(dá)載體pET 22b，形成質(zhì)粒 Hgp44-pET22b ；3)、將構(gòu)建的Hgp44-pET22b載體轉(zhuǎn)化到受體菌coli. BL21 (DE3)中，獲得克隆重組 菌 Hgp44-pET22b-BL21 (DE3)。牙齦卟啉單胞菌誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子引起機(jī)體自身免疫反應(yīng)，并通過(guò) RgpA,Kgp和HagA的編碼基因，即細(xì)胞內(nèi)編碼Hgp44粘附素的基因誘導(dǎo)血小板聚集，促進(jìn)內(nèi) 膜膽固醇的沉積和血管壁增厚，從而對(duì)心血管系統(tǒng)產(chǎn)生嚴(yán)重危害?；贖gp44在牙齦卟啉 單胞菌毒性中具有的意義，本發(fā)明利用已發(fā)表的牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277Hgp44序列， 設(shè)計(jì)引物，采用PCR方法從P. g ATCC 33277全基因組DNA中擴(kuò)增出Hgp44基因片段，克隆 到pMD 18-T載體，經(jīng)酶切鑒定正確后送測(cè)序，測(cè)序結(jié)果證實(shí)與Genbank中牙齦卟啉單胞菌 ATCC 33277Hgp44序列高度同源。本發(fā)明選用的pMD18-T Simple Vector是一種高效克隆PCR產(chǎn)物(ΤΑ Cloning) 的專(zhuān)用載體，由PUC18載體改建而成，它消除了 pUC18載體上的多克隆酶切位點(diǎn)，再在pUC18 載體的多克隆酶切位點(diǎn)處導(dǎo)入了 EcoR V酶切位點(diǎn)，使用EcoR V進(jìn)行酶切反應(yīng)后，再在兩側(cè) 的3'端添加“T”而成本發(fā)明進(jìn)行PCR反應(yīng)擴(kuò)增Hgp44基因時(shí)在PCR產(chǎn)物的3'末端添加 “A”的特性，使用該載體可以大大提高PCR產(chǎn)物的連接、克隆效率。PMD18-T載體消除了多 克隆酶切位點(diǎn)，克隆后的PCR產(chǎn)物將無(wú)法使用載體上的限制酶切下，所以本發(fā)明在為Hgp44 基因設(shè)計(jì)引物時(shí)便引入了 Xho I和Nde I的酶切位點(diǎn)，在酶切反應(yīng)時(shí)就不會(huì)受到T載體上 其他多克隆酶切位點(diǎn)上的限制酶影響，如此大大提高了酶切效率，增加了亞克隆成功率。另 外，該載體分子量為2692bp，和擴(kuò)增的目的基因hgp44的1083bp相比，在后期酶切回收目 的基因時(shí)可以很好的分辨，有利于產(chǎn)物的準(zhǔn)確回收。表達(dá)載體PET 22b含有本實(shí)驗(yàn)所需要 的內(nèi)切酶位點(diǎn)，氨芐抗性有利于篩選轉(zhuǎn)化后的陽(yáng)性克隆。配合E. coli.BL21(DE3)表達(dá)宿主 菌，用于高效表達(dá)外源基因的蛋白表達(dá)。本發(fā)明選用原核表達(dá)載體PET 22b在大腸桿菌中 進(jìn)行融合表達(dá)，通過(guò)SDS-PAGE分析顯示表達(dá)蛋白的分子量約44KD左右，與預(yù)期的Hgp44蛋 白大小一致。本發(fā)明成功克隆了牙齦卟啉單胞菌的促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp44基因，并構(gòu)建了 Hgp44原核表達(dá)系統(tǒng)，為繼續(xù)研究Hgp44的特性及其促進(jìn)血小板聚集的具體機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 Hgp44蛋白的成功表達(dá)為取得相應(yīng)抗體，制備預(yù)防性疫苗的提供了前提條件，為建立敏感、 特異的牙齦素免疫檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步阻斷牙周病致病途徑提供良好的分子 工具，為進(jìn)一步明確牙周病和冠心病之間的相互關(guān)系奠定基礎(chǔ)。


圖1為Hgp44的PCR擴(kuò)增結(jié)果電泳圖。圖2為pMD18T_Hgp44質(zhì)粒Xho I、Nde I雙酶切鑒定結(jié)果圖。圖3為pET22b_Hgp44質(zhì)粒PCR鑒定結(jié)果電泳圖。圖4為pET22b_Hgp44質(zhì)粒的構(gòu)建流程圖。圖5為重組菌Hgp44-pET22b-BL21 (DE3)表達(dá)蛋白的SDS-PAGE鑒定圖
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1，牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277基因組DNA及其目的基因Hgp44的獲得。本實(shí)施例描述了本發(fā)明提供的牙齦卟啉單胞菌促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp4基因的獲 得方法，克隆方法為PCR，包括以下步驟1、牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277的培養(yǎng)和收集將牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277菌種(上海市第九人民醫(yī)院口腔實(shí)驗(yàn)室提供)接 種于非選擇性的⑶C瓊脂平板，37°C厭氧箱內(nèi)(80% N2,10% C02及10% H2并放置鈀粒) 培養(yǎng)，常規(guī)接種，傳代，每平皿選取4-8個(gè)進(jìn)行涂片及生化鑒定及檢查。用PBS將平板上的 P. g菌落收集入1. 5ml的EP管中。2、牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277基因組抽提用上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司的柱式細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒(EZ SpinColumn Bacterial Genomic DNA Isolation Kit UNIQ-10)抽提 P. g 菌的全基因組。 抽提的P. g基因組(標(biāo)記為P. g DNA)凍存于-20°C冰箱。3、PCR 擴(kuò)增目的片段 P. g ATCC 33277 的 Hgp44 基因根據(jù)GenBank已知的U15282Hgp44基因序列設(shè)計(jì)并合成特異引物上游 5~-CCATATGAGCGGTCAGGCCGAG-3~ 下游 5:GCTCGAGTGCCGTAATCGTCTCTTC_3~。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1. 0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，產(chǎn)物片段約為llOObp，與預(yù)期大小相 符，見(jiàn)圖 1。圖中，M :DL2000DNA Marker ；1 陰性對(duì)照；2、3、4 :Hgp44 的 PCR 產(chǎn)物實(shí)施例2重組質(zhì)粒pMD_Hgp44制備將實(shí)施例1的擴(kuò)增產(chǎn)物回收后克隆到pMD 18-T載體，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5a，經(jīng)氨 芐及X-Gal/IPTG篩選陽(yáng)性菌落，增菌后提取質(zhì)粒，經(jīng)Xho I、Nde I雙酶切后電泳檢測(cè)，在 IlOObp處可見(jiàn)酶切片段，初步成功構(gòu)建pMD-Hgp44重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒的限制性酶切鑒定 結(jié)果見(jiàn)圖2。圖中，M =DNAMarker ；1,2 重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果。以下具體描述上述制備過(guò)程1、pMD 18-T連接試劑(大連盒寶生物工程有限公司)產(chǎn)品，按試劑盒說(shuō)明與PCR 回收產(chǎn)物Hgp44基因連接。2XaCl2法制備宿主菌E. coli DH5a感受態(tài)細(xì)胞(天根生化科技(北京)有限公 司提供)，細(xì)胞懸浮液添加冷凍保護(hù)劑(15%-20%甘油)后超低溫冷凍貯存?zhèn)溆?_86°C)；3、重組克隆質(zhì)粒pMD_Hgp44轉(zhuǎn)化感受態(tài)受體菌E. coli DH5a ；取50ul感受態(tài)受體菌與5ul連接產(chǎn)物混勻后，冰浴30min ；42°C熱休克90min ；立 即置冰上2min，加900ul LB培養(yǎng)液，37°C振搖1. 5小時(shí)(130轉(zhuǎn)/分)；涂平皿將培養(yǎng)物于 室溫下以4000rpm，離心1分鐘，吸去大部分上清，留約IOOul上清，將菌體吹打混勻，涂氨芐陽(yáng)性的LB瓊脂培養(yǎng)基平皿[含氨芐100ug/ml，40ul X-Gal (20mg/ml溶于二甲基甲酰胺)， 4ulIPTG (200mg/ml) ]，37°C溫箱，培養(yǎng)過(guò)夜；4、陽(yáng)性克隆的篩選和鑒定藍(lán)白斑法篩選陽(yáng)性克隆，挑取白色菌落37°C培養(yǎng)過(guò)夜，增菌后提取質(zhì)粒，進(jìn)行PCR 初步鑒定和Xho I.Nde I雙酶切鑒定，最后經(jīng)測(cè)序確認(rèn)。5、用柱式質(zhì)粒小量抽提試劑盒(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)快速提取 pMD-Hgp44質(zhì)粒，然后0. 8% Agarose電泳觀察提取結(jié)果。6、重組質(zhì)粒的酶切鑒定采用限制性?xún)?nèi)切酶Xho I, Nde I (Fermentas (MBI))進(jìn)行酶切，回收Hgp44基因片 段，1. 0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。鑒定結(jié)果見(jiàn)圖27、克隆后Hgp44基因的序列測(cè)定PCR和酶切初步鑒定后，將含陽(yáng)性重組質(zhì)粒的菌液送金思特生物技術(shù)公司測(cè)序。載 體取名為pMD-Hgp44，內(nèi)含Hgp44基因片段，長(zhǎng)度約為llOObp，測(cè)定結(jié)果如下GGCCAGTGCCAAGAAGCATGACGGCAAGTGGACGATTCCATATGAGCGGTCAGGCCGAGATTGTTCTTGAAGCTCACGATGTTTGGAATGATGGATCCGGTTATCAGATTCTTTTGGATGCAGACCATGATCAATATGGACAGGTTATACCCAGTGATACCCATACTCTTTGGCCGAACTGTAGTGTCCCGGCCAATCTGTTCGCTCCGTTCGAATATACGGTTCCGGAAAATGCAGATCCTTCTTGTTCCCCTACCAATATGATAATGGATGGTACTGCATCCGTTAATATACCGGCCGGAACTTATGACTTTGCAATTGCTGCTCCTCAAGCAAATGCAAAGATTTGGATTGCCGGACAAGGACCGACGAAAGAAGATGATTATGTATTTGAAGCCGGTAAAAAATACCATTTCCTTATGAAGAAGATGGGTAGCGGTGATGGAACTGAATTGACTATAAGCGAAGGTGGTGGAAGCGATTACACCTATACAGTCTATCGTGACGGCACGAAGATCCAGGAAGGTCTGACGGCTACGACATTCGAAGAAGACGGTGTAGCTGCAGGCAATCATGAGTATTGCGTGGAAGTTAAGTACACAGCCGGCGTATCTCCGAAGGTATGTAAAGACGTTACGGTAGAAGGATCCAATGAATTTGCTCCTGTACAGAACCTGACCGGTAGTGCAGTCGGCCAGAAAGTAACGCTTAAGTGGGATGCACCTAATGGTACCCCGAATCCGAATCCGAATCCGAATCCAAATCCAAATCCGAATCCGAATCCCGGAACAACAACACTTTCCGAATCATTCGAAAATGGTATTCCTGCCTCATGGAAGACGATCGATGCAGACGGTGACGGGCATGGCTGGAAGCCTGGAAATGCTCCCGGAATCGCTGGCTACAATAGCAATGGTTGTGTATATTCAGAGTCATTCGGTCTTGGTGGTATAGGAGTTCTTACCCCTGACAACTATCTGATAACACCGGCATTGGATTTGCCTAACGGAGGTAAGTTGACTTTCTGGGTATGCGCACAGGATGCTAATTATGCATCCGAGCACTATGCGGTGTATGCATCTTCGACCGGTAACGATGCATCCAACTTCACGAATGCTTTGTTGGAAGAGACGATTACGGCACTCGAGCAATCTCCAGAGGATCGCCGGGAACCGAGGACGAGTCGTAATCATGT實(shí)施例3，pET22b-Hgp44 質(zhì)粒構(gòu)建，重組菌 Hgp44_pET22b_BL21 (DE3)本實(shí)施例描述了原核表達(dá)質(zhì)粒pET22b_Hgp44的構(gòu)建過(guò)程及在大腸桿菌中的蛋白 表達(dá)，包括以下步驟1、pMD_Hgp44質(zhì)粒、pET22b載體的酶切及回收pMD_Hgp44 質(zhì)粒、pET22b 載體(pET Expression System 22b 美國(guó) Novagen 公司)分別經(jīng)Xho I、Nde I雙酶切后，進(jìn)行1. 0%瓊脂糖凝膠電泳，回收Hgp44、pET22b片段。2、Hgp44片段與pET22b表達(dá)載體的連接通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)Hgp44片段和pET22b載體大致定量。3、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，涂板(LBamp+)，37 °C過(guò)夜。4、原核表達(dá)質(zhì)粒pET22b_Hgp44篩選第二天確定陰性對(duì)照無(wú)菌落長(zhǎng)出后，長(zhǎng)出的菌落即為重組菌落。標(biāo)記為 Hgp44-pET22b-BL21(DE3)。5、誘導(dǎo)表達(dá)1)、取1-2個(gè)重組菌菌落，接入Iml含氨芐青霉素(50 μ g/ml)的LB培養(yǎng)液，37C培 養(yǎng)過(guò)夜。2)、取50 μ 1過(guò)夜培養(yǎng)物接入5ml含氨芐青霉素(50 μ g/ml)的LB培養(yǎng)液，37°C震 蕩培養(yǎng)2小時(shí)。3)、吸出Iml未經(jīng)誘導(dǎo)的培養(yǎng)物放在一個(gè)微量離心管中，標(biāo)記為 HGP44-pET22b (0)。4)、在剩余培養(yǎng)物中加入IPTG至終濃度為lmmol/L，37°C繼續(xù)通氣培養(yǎng)。在誘導(dǎo)的 不同時(shí)間，(1，2，3，4小時(shí))，取Iml樣品放于微量離心管中，室溫高速離心1分鐘。5)、沉淀懸于100 μ 1 IX SDS凝膠加樣緩沖液，100°C加熱3分鐘，室溫高速離心1 分鐘，冰上放置，待全部樣品處理完后上樣。6)、樣品加熱至室溫，取20 μ 1懸液上樣于10% SDS聚丙烯酰胺凝膠。7)、60V恒壓電泳，至溴酚藍(lán)遷移到濃縮膠底部，進(jìn)入分離膠后將電壓加至120V， 恒壓電泳直至溴酚藍(lán)遷移到分離膠底部。8)、考馬斯亮藍(lán)染色，觀察表達(dá)產(chǎn)物條帶。通過(guò)Xho I、Nde I雙酶切含Hgp44基因的重組質(zhì)粒pMD_Hgp44和表達(dá)質(zhì)粒 pET22b，回收獲得目的基因Hgp44和pET22b載體進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞BL21 (DE3)， 涂皿LBAmp+培養(yǎng)，挑取陽(yáng)性菌落進(jìn)行增菌，提取質(zhì)粒，PCR初步鑒定，獲得重組表達(dá)質(zhì)粒 pET22b-Hgp44。pET22b_Hgp44 的 PCR 鑒定結(jié)果見(jiàn)圖 3。圖 3 中，M :DL2000DNA Marker ；1， 2 :pET22b-Hgp44PCR 鑒定結(jié)果；3 :Hgp44 基因。再經(jīng)酶切鑒定正確后，獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pET22b_Hgp44。載體構(gòu)建流程見(jiàn)圖4。其 中LacZ, Lacl β -半乳糖苷酶基因z, Amp, Ap 氨芐抗性基因，Ori，Π origin 復(fù)制起始原 點(diǎn)，LacZ, Lacl β -半乳糖苷酶基因。6. pET22b-Hgp44 原核表達(dá)蛋白的 SDS-PAGE 分析挑取單個(gè)陽(yáng)性重組菌進(jìn)行增菌，經(jīng)IPTG方法誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)細(xì)菌總蛋白加熱變性后 進(jìn)行SDS-PAGE電泳。圖5示誘導(dǎo)后出現(xiàn)一條明顯區(qū)別于誘導(dǎo)前細(xì)菌的表達(dá)蛋白條帶，分子 量在44KD左右，與預(yù)期蛋白分子量大小相符。圖中，M 中分子量Marker ；1 誘導(dǎo)前對(duì)照； 2,3,4 誘導(dǎo)后表達(dá)蛋白。
權(quán)利要求
牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.g)促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp44基因的克隆重組菌，它是Hgp44 pET22b BL21(DE3)大腸埃希氏菌，其保藏編號(hào)為CGMCC NO.3799，其拉丁學(xué)名為Escherichia coli。
2.權(quán)利要求1所述的克隆重組菌的構(gòu)建方法，其特征在于它包括以下步驟1)、通過(guò)PCR方法克隆得到Hgp44基因；所述Hgp44基因序列如序列表中SEQID NO 1 所示，PCR擴(kuò)增的引物為上游 -CCATATGAGCGGTCAGGCCGAG-3“ 下游 5:GCTCGAGTGCCGTAATCGTCTCTTC-3~，2)、通過(guò)酶切連接方法將Hgp44基因連接到表達(dá)載體pET22b，形成質(zhì)粒 Hgp44-pET22b ；3)、將構(gòu)建的Hgp44-pET22b載體轉(zhuǎn)化到受體菌coli.BL21 (DE3)中，獲得克隆重組菌 Hgp44-pET22b-BL21(DE3)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種牙齦卟啉單胞菌促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp44基因的克隆重組菌，它是Hgp44-pET22b-BL21(DE3)大腸埃希氏菌，其保藏編號(hào)為CGMCC NO.3799，其拉丁學(xué)名為Escherichia coli。本發(fā)明成功克隆了牙齦卟啉單胞菌的促血凝功能結(jié)構(gòu)域Hgp44基因，并構(gòu)建了Hgp44原核表達(dá)系統(tǒng)，為繼續(xù)研究Hgp44的特性及其促進(jìn)血小板聚集的具體機(jī)制奠定基礎(chǔ)。Hgp44蛋白的成功表達(dá)為取得相應(yīng)抗體，制備預(yù)防性疫苗的提供了前提條件，為建立敏感、特異的牙齦素免疫檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步阻斷牙周病致病途徑提供良好的分子工具，為進(jìn)一步明確牙周病和冠心病之間的相互關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12N15/70GK101942410SQ201010202399
公開(kāi)日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月13日
發(fā)明者崔紅花, 張衛(wèi)東, 張琦霞, 朱海華, 鄧淑麗, 陳暉 , 鮑建芳 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)