專利名稱：一種轉(zhuǎn)基因大豆基因向根瘤菌水平漂移的評(píng)價(jià)方法
一種轉(zhuǎn)基因大豆基因向根瘤菌水平漂移的評(píng)價(jià)方法
所屬技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)基因大豆基因漂移的評(píng)價(jià)方法，尤其是轉(zhuǎn)基因大豆基因向根瘤 菌水平漂移的評(píng)價(jià)方法。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因大豆是把目的基因通過(guò)一定方法導(dǎo)入大豆后創(chuàng)制的大豆新品種。轉(zhuǎn)基因大 豆從創(chuàng)制到生產(chǎn)中應(yīng)用，需要經(jīng)過(guò)環(huán)境和生物安全性評(píng)價(jià)，只有安全評(píng)價(jià)合格的轉(zhuǎn)基因大 豆才能夠進(jìn)入生產(chǎn)中應(yīng)用。對(duì)轉(zhuǎn)基因作物商品化前的環(huán)境安全評(píng)價(jià)是防止轉(zhuǎn)基因作物大面 積種植所可能帶來(lái)的對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類生存潛在威脅的重要手段。轉(zhuǎn)基因大豆的基因漂移 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)是轉(zhuǎn)基因大豆商業(yè)化種植前安全性評(píng)價(jià)的一項(xiàng)重要內(nèi)容?；蛟谧匀幌到y(tǒng)高等生物的垂直傳遞是基因通過(guò)后代的遺傳，是生物進(jìn)化的基 礎(chǔ)?；虻乃絺鬟f是在不相關(guān)的物種間的基因傳遞，這種現(xiàn)象經(jīng)常在細(xì)菌上發(fā)生。發(fā)生這 種現(xiàn)象的一種方式是DNA直接導(dǎo)入并編碼到細(xì)菌細(xì)胞中。如在土壤中或動(dòng)物的消化道內(nèi)， 這種直接的基因轉(zhuǎn)移方式是最常用來(lái)推測(cè)轉(zhuǎn)基因從轉(zhuǎn)基因植物向微生物轉(zhuǎn)移的途徑。大豆 根瘤是土壤中的根瘤菌侵染大豆根系形成的瘤狀物，在根瘤內(nèi)進(jìn)行空氣中N2的固定和轉(zhuǎn)化 過(guò)程，對(duì)大豆產(chǎn)量和品質(zhì)的形成具有重要作用。因此，建立一種能夠快速、準(zhǔn)確檢測(cè)轉(zhuǎn)基因 大豆基因水平漂移到根瘤菌的方法，對(duì)揭示轉(zhuǎn)基因是否能水平漂移到大豆根瘤菌及其可能 出現(xiàn)的不良結(jié)果具有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容
轉(zhuǎn)基因大豆目前在歐盟、美國(guó)、加拿大等國(guó)家已經(jīng)廣泛種植，種植的品種大多為轉(zhuǎn) 基因抗除草劑大豆。目前中國(guó)轉(zhuǎn)基因大豆的研究工作已經(jīng)啟動(dòng)，并且相繼獲得了一系列有 產(chǎn)業(yè)化前景的轉(zhuǎn)基因大豆品系。因此，盡快建立轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境評(píng)價(jià)程序和方法，關(guān)系到轉(zhuǎn) 基因大豆能否安全和快速通過(guò)評(píng)價(jià)并在生產(chǎn)中進(jìn)行應(yīng)用。本項(xiàng)發(fā)明提出轉(zhuǎn)基因大豆基因 向根瘤菌水平漂移的評(píng)價(jià)方法，應(yīng)用這一方法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆種植后基因是否會(huì)向根瘤 菌進(jìn)行水平漂移及其可能帶來(lái)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)確保轉(zhuǎn)基因大豆安全地投入生產(chǎn)具有重要作 用。本項(xiàng)方法適用于所有轉(zhuǎn)基因大豆的基因向根瘤菌水平漂移的評(píng)價(jià)，是轉(zhuǎn)基因大豆安全 性評(píng)價(jià)中的一項(xiàng)簡(jiǎn)便、易行的評(píng)價(jià)方法。本項(xiàng)發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是把接種已知大豆根瘤菌的轉(zhuǎn)基因 大豆種植在人工氣候室內(nèi)，從大豆根系所結(jié)根瘤中分離根瘤菌并進(jìn)行菌種鑒定，對(duì)經(jīng)過(guò)菌 種鑒定的大豆根瘤菌進(jìn)行DNA提取和PCR擴(kuò)增，檢測(cè)根瘤菌中是否含有目的基因，從而鑒定 轉(zhuǎn)基因大豆基因是否能夠水平漂移并編碼到根瘤菌細(xì)胞中。本發(fā)明的有益效果是采取人工接種大豆根瘤菌的方法，在人工氣候室內(nèi)模擬大 豆生長(zhǎng)的自然環(huán)境條件，在大豆第2片三出復(fù)葉展開時(shí)進(jìn)行根瘤菌的分離、鑒定和目的基 因檢測(cè)。在人工氣候室和根瘤菌純培養(yǎng)的可控環(huán)境條件下，進(jìn)行接種根瘤菌的轉(zhuǎn)基因大豆 播種及出苗后的根瘤菌分離、鑒定和基因檢測(cè)，檢測(cè)方法準(zhǔn)確、快速并可批量測(cè)定，可為轉(zhuǎn)基因大豆基因是否能水平漂移到根瘤菌提供安全可靠的檢測(cè)方法，為轉(zhuǎn)基因大豆安全投入 生產(chǎn)提供基因水平漂移的安全性評(píng)價(jià)方法。
具體實(shí)施方式

把轉(zhuǎn)基因大豆種子用目前正在商業(yè)化應(yīng)用的大豆根瘤菌接種并播種在條件可控 的人工氣候室內(nèi)。人工氣候室內(nèi)模擬自然環(huán)境條件設(shè)置晝夜溫度為28°C/2rC，每天光照 12h，土壤含水量70%。待轉(zhuǎn)基因大豆第2片三出復(fù)葉完全展開時(shí)，取出轉(zhuǎn)基因大豆根系并 從根系上取下根瘤，對(duì)根瘤表面消毒后進(jìn)行根瘤菌分離。對(duì)從轉(zhuǎn)基因大豆根瘤中分離的根 瘤菌進(jìn)行室內(nèi)純培養(yǎng)后提取DNA，對(duì)分離的轉(zhuǎn)基因大豆根瘤菌進(jìn)行16S rDNA鑒定，然后對(duì) 經(jīng)過(guò)鑒定的轉(zhuǎn)基因大豆根瘤菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)從轉(zhuǎn)基因大豆根瘤中分離的根瘤菌是否 具有轉(zhuǎn)基因大豆的目的基因。
權(quán)利要求
一種轉(zhuǎn)基因大豆基因向根瘤菌水平漂移的評(píng)價(jià)方法，其特征是1、把轉(zhuǎn)基因大豆種子用目前正在商業(yè)化應(yīng)用的大豆根瘤菌接種并播種在條件可控的人工氣候室內(nèi)。人工氣候室內(nèi)模擬自然環(huán)境條件設(shè)置晝夜溫度為28℃/21℃，每天光照12h，土壤含水量70％。待轉(zhuǎn)基因大豆第2片三出復(fù)葉完全展開時(shí)，取出轉(zhuǎn)基因大豆根系并從根系上取下根瘤，對(duì)根瘤表面消毒后進(jìn)行根瘤菌分離。對(duì)從轉(zhuǎn)基因大豆根瘤中分離的根瘤菌進(jìn)行室內(nèi)純培養(yǎng)后提取DNA，對(duì)分離的轉(zhuǎn)基因大豆根瘤菌進(jìn)行16S rDNA鑒定，然后對(duì)經(jīng)過(guò)鑒定的轉(zhuǎn)基因大豆根瘤菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)從轉(zhuǎn)基因大豆根瘤中分離的根瘤菌是否具有轉(zhuǎn)基因大豆的目的基因。
全文摘要
本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)基因大豆基因向根瘤菌水平漂移的評(píng)價(jià)方法。把轉(zhuǎn)基因大豆種子用目前正在商業(yè)化應(yīng)用的大豆根瘤菌接種并播種在條件可控的人工氣候室內(nèi)。人工氣候室內(nèi)模擬自然環(huán)境條件設(shè)置晝夜溫度為28℃/21℃，每天光照12h，土壤含水量70％。待轉(zhuǎn)基因大豆第2片三出復(fù)葉完全展開時(shí)，取出轉(zhuǎn)基因大豆根系并從根系上取下根瘤，對(duì)根瘤表面消毒后進(jìn)行根瘤菌分離。對(duì)從轉(zhuǎn)基因大豆根瘤中分離的根瘤菌進(jìn)行室內(nèi)純培養(yǎng)后提取DNA，對(duì)分離的轉(zhuǎn)基因大豆根瘤菌進(jìn)行16S rDNA鑒定，然后對(duì)經(jīng)過(guò)鑒定的轉(zhuǎn)基因大豆根瘤菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)從轉(zhuǎn)基因大豆根瘤中分離的根瘤菌是否具有轉(zhuǎn)基因大豆的目的基因。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK101871010SQ20101020534
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2010年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月22日
發(fā)明者丁偉, 李文濱, 王振華, 程茁 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)