專利名稱：一種再生微載體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品的再生方法，特別是涉及一種廣泛應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域 的微載體的再生方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
微載體是指直徑在60-250 μ m,能適用于貼壁細(xì)胞生長的微珠。一般是由天然葡聚 糖或者各種合成的聚合物組成。微載體培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)有1表面積/體積大，因此單位體積培養(yǎng) 液的細(xì)胞產(chǎn)率高；2把懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)融合在一起，兼有兩者的優(yōu)點(diǎn)；3可用簡單的顯 微鏡觀察細(xì)胞在微珠表面的生長情況；4簡化了細(xì)胞生長各種環(huán)境因素的檢測和控制，重 現(xiàn)性好；5培養(yǎng)基利用率較高；6放大容易；7細(xì)胞收獲過程不復(fù)雜；8勞動(dòng)強(qiáng)度小；9培養(yǎng)系 統(tǒng)占地面積和空間小。美國GE公司銷售的微載體廣泛應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域，是一種化學(xué)穩(wěn)定細(xì)胞培養(yǎng) 基質(zhì)。但這種微載體制造技術(shù)要求高，國內(nèi)只能依靠進(jìn)口，成本比較高，很難推廣。國外大公司出于種種考慮僅使用一次，而國內(nèi)企業(yè)卻希望能夠多次使用，從而降 低生產(chǎn)成本。但據(jù)本申請人的檢索，一直都沒有比較好的再生方法披露。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對上述問題提供一種使用方便、價(jià)格便宜且高效的再生微載 體的方法。據(jù)研究，控制細(xì)胞貼壁的基本因素是電荷密度而不是電荷性質(zhì)。若電荷密度太低， 細(xì)胞貼附不充分，但電荷密度過大，反而會(huì)產(chǎn)生“毒性”效應(yīng)。細(xì)胞與微載體的相融性，是與 微載體表面理化性質(zhì)有關(guān)。一般細(xì)胞在進(jìn)入生理PH值時(shí)，表面帶負(fù)電荷。若微載體帶正電 荷，則利用靜電引力可加快細(xì)胞貼壁速度。若微載體帶負(fù)電荷，因靜電斥力使細(xì)胞難于黏附 貼壁，但培養(yǎng)液中溶有或微載體表面吸附著二價(jià)陽離子作為媒介時(shí)，則帶負(fù)電荷的細(xì)胞也 能貼附。正是基于此原理，微載體可以再生。本發(fā)明給出的技術(shù)解決方案是這種再生微載體的方法，其特征在于有以下步 驟(1)將裝有微載體的塑料桶內(nèi)上層廢液倒出；(2)微載體堿處理向桶內(nèi)加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0. 6-1. 0M，充分 攪拌后靜止放置過夜；(3)微載體酸處理分層后倒出上清液，在帶有篩網(wǎng)的容器內(nèi)用注射用水清洗微 載體，洗去多余的堿至PH值約為8. 0-10. 0，后加入37%的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)， 使HCL終濃度為0. 3-0. 5M，充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜；(4)微載體電荷處理分層后倒出上清液，在篩網(wǎng)容器內(nèi)用注射用水清洗微載體， 洗去多余的酸至PH值約為4. 0-6. 0，用注射用水配制0. 5M磷酸鹽緩沖液100升，然后用緩 沖液清洗兩遍，使微載體帶正電荷，根據(jù)體積折算質(zhì)量，每100克微載體的沉降體積為1. 6升，將每IOOg微載體裝入瓶內(nèi)，補(bǔ)加磷酸鹽緩沖液；(5)調(diào)節(jié)pH值用5M的氫氧化鈉溶液調(diào)整微載體混懸液的pH值在7. 35 7. 45 范圍內(nèi)。將處理好的微載體裝入容器待用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是1可有效降低微載體的成本，并可多次處理2細(xì)胞貼壁效果理想與新微載體幾乎一樣，可在不影響培養(yǎng)效果前提下降低使用 成本。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明可以通過以下實(shí)施例實(shí)現(xiàn)，但不受以下實(shí)施例中比例、組成、方法、步驟的 限制。應(yīng)該理解，這里討論的實(shí)施例和實(shí)施方案只是為了說明，對熟悉該領(lǐng)域的人可以提出 各種改進(jìn)和變化，這些改進(jìn)和變化將包括在本申請的精神實(shí)質(zhì)和范圍以及所附的權(quán)利要求 范圍內(nèi)。實(shí)施例11將裝有微載體的塑料桶內(nèi)上層廢液倒出。2微載體堿處理按一定比例向桶內(nèi)加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0. 6M， 充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜。3微載體酸處理分層后倒出上清液，在帶有篩網(wǎng)的容器內(nèi)用注射用水清洗微載 體，洗去多余的堿至PH值為8.0。后加入37%的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL 終濃度為0. 3M，充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜。4微載體電荷處理分層后倒出上清液，在篩網(wǎng)容器內(nèi)用注射用水清洗微載體，洗 去多余的酸至PH值為4.0。用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升。然后用緩沖液清 洗兩遍，使微載體帶正電荷。根據(jù)體積折算質(zhì)量，每100克微載體的沉降體積為1. 5升，將 IOOg沉降后微載體裝入瓶內(nèi)，補(bǔ)加磷酸鹽緩沖液。5調(diào)節(jié)pH值用5M的氫氧化鈉溶液調(diào)整微載體混懸液的pH值在7. 35。將處理好 的微載體裝入容器待用。實(shí)施例21將裝有微載體的塑料桶內(nèi)上層廢液倒出。2微載體堿處理按一定比例向桶內(nèi)加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為1. 0M, 充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜。3微載體酸處理分層后倒出上清液，在帶有篩網(wǎng)的容器內(nèi)用注射用水清洗微載 體，洗去多余的堿至PH值為10.0。后加入37%的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL 終濃度為0. 5M充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜。4微載體電荷處理分層后倒出上清液，在篩網(wǎng)容器內(nèi)用注射用水清洗微載體，洗 去多余的酸至PH值約為6.0。用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升。然后用緩沖液 清洗兩遍，使微載體帶正電荷。根據(jù)體積折算質(zhì)量，每100克微載體的沉降體積為1. 4升， 將IOOg沉降后微載體裝入瓶內(nèi)，補(bǔ)加磷酸鹽緩沖液。5調(diào)節(jié)pH值用5M的氫氧化鈉溶液調(diào)整微載體混懸液的pH值在7. 45。將處理好 的微載體裝入容器待用。
實(shí)施例31將裝有微載體的塑料桶內(nèi)上層廢液倒出。2微載體堿處理按一定比例向桶內(nèi)加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0. 8M， 充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜。3微載體酸處理分層后倒出上清液，在帶有篩網(wǎng)的容器內(nèi)用注射用水清洗微載 體，洗去多余的堿至PH值為9.0。后加入37%的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL 終濃度為0. 4M，充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜。4微載體電荷處理分層后倒出上清液，在篩網(wǎng)容器內(nèi)用注射用水清洗微載體，洗 去多余的酸至PH值為5.0。用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升。然后用緩沖液清 洗兩遍，使微載體帶正電荷。根據(jù)體積折算質(zhì)量，每100克微載體的沉降體積為1. 6升，將 IOOg沉降后微載體裝入瓶內(nèi)，補(bǔ)加磷酸鹽緩沖液。5調(diào)節(jié)pH值用5M的氫氧化鈉溶液調(diào)整微載體混懸液的pH值在7. 4。將處理好 的微載體裝入容器待用。
權(quán)利要求
1. 一種再生微載體的方法，其特征在于有以下步驟(1)將裝有微載體的塑料桶內(nèi)上層廢液倒出；(2)微載體堿處理向桶內(nèi)加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0.6-1. 0M，充分?jǐn)嚢?后靜止放置過夜；(3)微載體酸處理分層后倒出上清液，在帶有篩網(wǎng)的容器內(nèi)用注射用水清洗微載體， 洗去多余的堿至PH值約為8. 0-10. 0，后加入37%的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使 HCL終濃度為0. 3-0. 5M，充分?jǐn)嚢韬箪o止放置過夜；(4)微載體電荷處理分層后倒出上清液，在篩網(wǎng)容器內(nèi)用注射用水清洗微載體，洗去 多余的酸至PH值約為4. 0-6. 0，用注射用水配制0. 5M磷酸鹽緩沖液100升，然后用緩沖液 清洗兩遍，使微載體帶正電荷，根據(jù)體積折算質(zhì)量，每100克微載體的沉降體積為1. 6升，將 每IOOg微載體裝入瓶內(nèi)，補(bǔ)加磷酸鹽緩沖液；(5)調(diào)節(jié)pH值用5M的氫氧化鈉溶液調(diào)整微載體混懸液的pH值在7.35 7. 45范圍 內(nèi)。將處理好的微載體裝入容器待用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種再生微載體的方法，適用于生物制藥領(lǐng)域，其特點(diǎn)是有以下步驟(1)將裝有微載體的塑料桶內(nèi)上層廢液倒出；(2)微載體堿處理；(3)微載體酸處理；(4)微載體電荷處理(5)調(diào)節(jié)微載體混懸液的pH值在7.35～7.45范圍內(nèi)；將處理好的微載體裝入容器待用。本發(fā)明可有效降低微載體的成本，并可多次處理，再生后的微載體的細(xì)胞貼壁效果理想與新微載體幾乎一樣，可在不影響培養(yǎng)效果前提下降低使用成本。
文檔編號C12N5/00GK102146356SQ20101020824
公開日2011年8月10日 申請日期2010年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月24日
發(fā)明者李旭 申請人:遼寧成大生物股份有限公司