專(zhuān)利名稱(chēng)：一種檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的方法及其專(zhuān)用量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的方法及其專(zhuān)用量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒。目前其中獸藥殘留問(wèn)題是影響動(dòng)物性食品安全的最主要因素之一，由于動(dòng)物樣本 成分復(fù)雜，待測(cè)物濃度較低，而且大多數(shù)取樣量很少，這就對(duì)分析方法的選擇性和靈敏度提 出了更高的要求。量子點(diǎn)(Quantum dot,QD)由于具有獨(dú)特的光學(xué)和電學(xué)性質(zhì)，使其熒光免 疫分析中得到越來(lái)越多的應(yīng)用，作為熒光探針，QD的光學(xué)特性比在免疫熒光分析法中經(jīng)常 采用的傳統(tǒng)發(fā)色團(tuán)如羅丹明6G或其它有機(jī)染料分子有明顯的優(yōu)越性QD的激發(fā)光譜寬，且 連續(xù)分布，而發(fā)射光譜呈對(duì)稱(chēng)分布且寬度窄，熒光發(fā)射波長(zhǎng)可通過(guò)改變量子點(diǎn)的大小而加 以調(diào)節(jié)，因而不同大小的半導(dǎo)體量子點(diǎn)能被單一波長(zhǎng)的光激發(fā)而發(fā)出不同顏色的熒光。量 子點(diǎn)可持續(xù)發(fā)光，其熒光壽命可達(dá)染料分子的100倍以上，比常規(guī)的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方 法的抗背景干擾能力強(qiáng)，自動(dòng)化程度高，提高了分析方法的精密度，在獸醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品分 析等方面將會(huì)有更廣闊的應(yīng)用前景?；前奉?lèi)化合物(Sulfonamides，SAs)是一類(lèi)廣譜抗菌藥，臨床上主要用于預(yù)防和 治療細(xì)菌感染性疾病，還常作為飼料添加劑在動(dòng)物生產(chǎn)中長(zhǎng)期應(yīng)用。然而，磺胺藥會(huì)引起人 過(guò)敏性反應(yīng)，人體中長(zhǎng)期存在磺胺類(lèi)化合物會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)菌對(duì)磺胺類(lèi)化合物產(chǎn)生耐藥性， 且可能有致癌性。因此，我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件規(guī)定其殘留限量為100yg/kg。但由于磺 胺類(lèi)化合物的成本較低，價(jià)格便宜，在畜牧生產(chǎn)中不合理使用現(xiàn)象嚴(yán)重，使其在動(dòng)物性食品 中殘留引起生態(tài)環(huán)境污染和人類(lèi)健康危害的潛在威脅已倍受關(guān)注。動(dòng)物組織中磺胺類(lèi)化合 物殘留的檢測(cè)方法主要采用液相色譜法、液相色譜_聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫法等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒。本發(fā)明提供的檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，包括磺胺類(lèi)化合物特
異性抗體、包被原和標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述包被原為磺胺類(lèi)化合物半抗原與載體蛋白的偶
權(quán)利要求
一種檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，包括磺胺類(lèi)化合物特異性抗體、包被原和標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述包被原為磺胺類(lèi)化合物半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物；其結(jié)構(gòu)式如式I所示(式I)。FSA00000216050900011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括濃 縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液、包被緩沖液、封閉液和量子點(diǎn)標(biāo)記的抗抗體；所述試劑盒由磺胺類(lèi)化合物特異性抗體、包被原、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶 液、包被緩沖液、封閉液和量子點(diǎn)標(biāo)記抗抗體組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，其特征在于所述磺胺類(lèi)化合 物特異性抗體為磺胺甲惡唑單克隆抗體或磺胺甲惡唑多克隆抗體，所述磺胺甲惡唑單克隆 抗體是由保藏號(hào)為CGMCC No. 3780的對(duì)9種磺胺類(lèi)化合物(磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺 胺甲嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺 胺對(duì)甲氧嘧啶)都有交叉反應(yīng)的磺胺甲基異惡唑單克隆雜交瘤細(xì)胞株SAs分泌的抗體；所述量子點(diǎn)標(biāo)記的抗抗體中所述量子點(diǎn)為QD650。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，其特征在于所述標(biāo)準(zhǔn)品 溶液中標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 0μ g/L、0. 5μ g/L、l. 5μ g/L、4. 5μ g/L、22. 5μ g/L 或 112. 5μ g/L， 所述標(biāo)準(zhǔn)品為磺胺甲惡唑；所述濃縮洗滌液是將0. 05g疊氮化鈉和IOOmL濃度為0. 02M、pH為7. 4的磷酸鹽緩沖 液混合得到溶液；所述濃縮復(fù)溶液是將0. Ig牛血清白蛋白和IOOmL濃度為0. 05mol/L、pH為7. 4的磷酸 鹽緩沖液混合得到的溶液；所述包被緩沖液是PH值為9. 6的濃度為0. 03mol/L的碳酸鹽緩沖液；所述封閉液是將0. Olg疊氮化鈉、IOg牛血清白蛋白和IOOmL濃度為0. 03mol/L、pH值 為7. 4磷酸鹽溶液混合得到的溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，其特征在于所述包被原是按照如下方法制備得到的a、將每52mg磺胺類(lèi)化合物半抗原加入6mL 0. 25M的硫酸水溶液中，得到的溶液稱(chēng)為A液；將每80mg的載體蛋白溶于4mL濃度為IOOmg/ mL、pH值為10的碳酸鈉水溶液中，得到的溶液稱(chēng)為B液；將每20mg亞硝酸鈉溶于2mL水得 到的溶液稱(chēng)為C液；在0°C條件下，將C液加入到A液中得到的混合物稱(chēng)為D液；b、將D液逐滴加入到B液中，得到D液和B液的混合液；逐滴加入的方式為從開(kāi)始加入 時(shí)計(jì)起，6min后開(kāi)始攪拌混合液，并使混合液的pH保持在9_10之間，滴加完畢后，繼續(xù)攪拌 反應(yīng)4h，將得到的產(chǎn)物透析，得到所述包被原；(式 I)。所述磺胺甲惡唑半抗原的結(jié)構(gòu)式如式II所示
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，其特征在于 所述磺胺類(lèi)化合物半抗原為磺胺甲惡唑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，其特征在于 所述量子點(diǎn)標(biāo)記抗抗體為量子點(diǎn)QD650標(biāo)記的羊抗鼠抗抗體；所述載體蛋白為鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或血藍(lán)蛋白，優(yōu)選為卵清蛋白；所述磺胺類(lèi)化合物為磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺甲嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺 胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧噠嗪或磺胺對(duì)甲氧嘧啶。
8.—種檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的方法，包括以下步驟1)樣品前處理將每Ig動(dòng)物組織勻漿后，加入4mL的乙腈-鹽酸混合液振蕩混合lmin，以3000g的 速度離心5min，將2mL上清液用氮?dú)獯蹈?，加入ImL復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，再加入ImL 正己烷混合，3000g離心5min，取下層溶液用復(fù)溶液稀釋2倍后獲得待測(cè)樣本溶液，所述乙 腈-鹽酸混合液是由體積比為84 16的乙腈和濃度為0. IM鹽酸水溶液混合得到；所述動(dòng) 物組織為豬肉或雞肉；所述復(fù)溶液為將所述濃縮復(fù)溶液用0. 05mol/L、pH值為7. 4的磷酸鹽 緩沖液稀釋10倍得到的；2)利用權(quán)利要求1-7中任一所述的檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒檢測(cè) 步驟1)中的樣本溶液；所述磺胺類(lèi)化合物為磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺甲嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺 胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧噠嗪或磺胺對(duì)甲氧嘧啶。
9.由保藏號(hào)為CGMCCNo. 3780的對(duì)9種磺胺類(lèi)化合物都有交叉反應(yīng)的磺胺甲基異惡唑 單克隆雜交瘤細(xì)胞株SAs分泌的磺胺類(lèi)化合物單克隆抗體。
10.保藏號(hào)為CGMCCNo. 3780的對(duì)9種磺胺類(lèi)化合物都有交叉反應(yīng)的磺胺甲基異惡唑 單克隆雜交瘤細(xì)胞株SAs。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的方法及其專(zhuān)用量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒。本發(fā)明提供的檢測(cè)磺胺類(lèi)化合物的量子點(diǎn)熒光免疫試劑盒，包括磺胺類(lèi)化合物特異性抗體、包被原和標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述包被原為磺胺類(lèi)化合物半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的試劑盒具有樣品前處理過(guò)程簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉、特異性高、靈敏度高、精確度高等特點(diǎn)，能夠現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控且適合大量樣本的篩查。
文檔編號(hào)C12N5/20GK101936983SQ20101024417
公開(kāi)日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月3日
發(fā)明者史為民, 吳聰明, 張素霞, 曹興元, 湯樹(shù)生, 沈建忠, 王戰(zhàn)輝, 程林麗 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)