欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

人工口腔模擬裝置的制作方法

文檔序號:585795閱讀:308來源:國知局
專利名稱:人工口腔模擬裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種在模擬口腔環(huán)境下進行實驗研究的模擬裝置,尤其是涉及一種人 工口腔模擬裝置。
背景技術(shù)
長期以來,人們通常以微生物純培養(yǎng)的方式進行細菌學(xué)的研究,這種研究很大程 度上簡化了外界環(huán)境的影響,幫助人們認識了很多個體微生物的習(xí)性,取得了很多重要的 研究成果,為醫(yī)學(xué)和微生物學(xué)的發(fā)展做出了巨大貢獻。然而自然界中大多數(shù)細菌并不是以 純培養(yǎng)下的游離狀態(tài)生存,而是以生物膜的形式存在。生物膜是大量微生物聚集于某種介 質(zhì)表面上并包裹在其自身分泌的胞外多糖中形成的一種特殊細胞群體結(jié)構(gòu),它可由單種細 菌構(gòu)成,但更多情況下是多種細菌的聚居體。與游離狀態(tài)的細菌相比,生物膜的臨床病理意 義更為重要,由于它具有一層致密的保護性胞外多糖,因此具有更強的耐藥性和更強的抵 抗宿主免疫殺傷的能力,而且生物膜內(nèi)不同細菌之間還存在一套復(fù)雜的信息傳遞體系,一 些耐藥基因可以在不同的菌種間轉(zhuǎn)移,從而加大了傳統(tǒng)抗生素治療的難度。牙菌斑是粘附在牙齒表面、牙齦邊緣、牙齦內(nèi)部或口腔其他軟組織上的一種生物 膜。它由大量口腔細菌、細胞外間質(zhì)、少量白細胞、脫落上皮細胞和食物殘渣組成;其附著牢 固,難以去除。牙菌斑被認為是大多數(shù)口腔疾病的主要致病因素,包括齲齒、牙齦炎、牙周炎 等,因此對牙菌斑的研究成為口腔醫(yī)學(xué)研究的一個熱點。在研究方法上,“原位”的方法最能 反映真實情況,但這種方法實際操作起來難度較大,而且存在很大的不確定性;所以在口腔 生物膜的研究方法上,普遍采用的是體外模型的方法。體外模型一方面可以簡化許多復(fù)雜 的體內(nèi)環(huán)境因素,另一方面可以實現(xiàn)對生物膜生長條件的有目的的控制。目前,口腔生物膜的體外模型研究方法有如下幾種1、恒化器-流動室模型。參見 Herles S, Olsen S, Afflitto J,Garffar A. C hemostat flow cell system :an in vitro model for evaluation of antiplaque age nts.J Dent Res. 1994 ;73(11) :1748_1755。參見圖1所示,該模型包括恒化室101、附加的 細菌溶液室102、混合室103、多通道泵104、多個流動室105和廢液收集室106 ;所述恒化室 101通過管道和混合室103連接相通,所述附加的細菌溶液室102通過管道和混合室103連 接相通,所述混合室103通過管道與多通道泵104的入口連接相通,所述多通道泵104的出 口通過管道與多個流動室105連接相通,所述流動室105通過管道與廢液收集室106連接 相通,所述混合室103也通過管道與廢液收集室106連接相通。該模型的工作原理是在恒 化室101中培養(yǎng)5種口腔細菌,在適宜的生長條件(pH、溫度、營養(yǎng)和厭氧都有規(guī)定的要求) 下經(jīng)過一定時間(通常為2-7天)的培養(yǎng),各菌種會達到一種相對穩(wěn)定平衡的狀態(tài)(即菌 群比例的穩(wěn)定,細菌生長與衰亡的平衡等);在細菌生長達到平衡后,將菌液用泵抽到混合 室103內(nèi),再用多通道泵104將混合室103內(nèi)的菌液分配到多個流動室105內(nèi),菌液流經(jīng)流 動室105后,細菌會在流動室105內(nèi)的載體107表面(羥基磷灰石HAP片或者鍺片)上附 著并繁殖生長形成菌斑樣生物膜。該恒化器_流動室模型有多個流動室105并聯(lián),因此可同時進行多個樣品的測試,而且方便取樣。但是,該模型的缺陷也比較明顯1)流動室沒有 溫度控制,因此不能模擬人口腔真實的生物膜生長溫度;2)整個系統(tǒng)管路較復(fù)雜,受污染 的可能性較大;3)實驗周期較長,完成一輪測試需要大約一周時間。2、恒化器-恒流室模型。中國專利申請?zhí)朇N200610020608. 6,公開了一種口腔生 物膜動態(tài)模型裝置及其形成口腔生物膜的方法。參見圖2所示,該模型包括堿液罐201、培 養(yǎng)基罐202、發(fā)酵罐203、恒流培養(yǎng)室204、和加樣瓶205。該模型的工作原理同“恒化器-流 動室模型”類似即在恒流培養(yǎng)室204內(nèi)進行口腔細菌培養(yǎng),pH可由堿液罐201控制,營養(yǎng) 由培養(yǎng)基罐202提供;該發(fā)明的關(guān)鍵點是它的恒流培養(yǎng)室204,該培養(yǎng)室204可以垂直放置 多個加樣器206,每個加樣器206又可以固定多個生物膜載體207表面如羥基磷灰石片等; 而且該系統(tǒng)可以并聯(lián)多個恒流培養(yǎng)室204。在細菌培養(yǎng)好后,將菌液泵入恒流培養(yǎng)室204 中,細菌就可以在加樣器205上的載體206表面上附著并生長形成生物膜。該模型的優(yōu)缺 點同“恒化器-流動室模型相比,該模型的改進之處就是生物膜生長的恒流培養(yǎng)室溫度可 控,但“恒化器-流動室模型”的缺點在本模型中沒有多大改善,該模型仍具有如下缺陷1) 整個系統(tǒng)的構(gòu)造仍然相當(dāng)復(fù)雜,補料系統(tǒng)、管路和泵都很多;這一方便增加操作的繁瑣度, 另一方面也增加了污染控制的難度;2)實驗周期長。3、Zurich 模型。 參見 Guggenheim B, Giertsen Ε, Schupbach P, Shapiro S.Validation of an in vitro Biofilm Model of Supragingival Plaque. J Dent Res.2001 ;80(1) :363_370· Guggenheim B, Guggenheim M, Gmur R, Giertsen E, Thurnheer T.Application of the Zurich Biofilm Model to Problems of Cariology. Caries Res. 2004 ;38 :212_222。參見圖3所示,該模型包括細胞培養(yǎng)板301,所述細胞培養(yǎng)板301 上設(shè)有24個小孔302,該小孔302內(nèi)設(shè)有生物膜生長載體303。該模型的工作原理是利用 24孔細胞培養(yǎng)板作為生物膜生長裝置,孔內(nèi)放置羥基磷灰石片或者牛牙作為生物膜生長載 體;具體的步驟是首先體外培養(yǎng)5種典型的口腔細菌,然后將其混合接種到24孔板上,厭 氧培養(yǎng),這樣口腔細菌就能在生長載體上沉積并附著生長形成生物膜;培養(yǎng)時間總共需要 64小時,中間需要2次更換培養(yǎng)基;在進行藥物活性測試時,需要選擇6個時間點進行藥物 處理;利用該模型可以模擬人齦上菌斑的生長。該模型的最大的優(yōu)點是裝置設(shè)計簡單,成本 低廉,操作起來也比較方便;但是該模型具有如下缺陷1)它的生物膜培養(yǎng)模式是靜態(tài)培 養(yǎng),無法模擬人口腔中的唾液流動;2)厭氧培養(yǎng),有氧操作,對生物膜的發(fā)育也存在一定影 響;3)它的培養(yǎng)基配制起來比較復(fù)雜。4、人工口腔模型(Artificial Mouth),參見 Sissons CH, Cutress Tff, Hoffman MP, Wakefield JSJ. A multi-station dental plaque microcosm(artificial mouth)for the study of plaque growth, metabolism, pH, and mineralization. JDent Res. 1991 ; 70(11) :1409-1416。參見圖4、5所示,該模型包括一個多站式多端口的密封艙室401,該密 封艙室401上設(shè)有接種口 402、培養(yǎng)基入口 403、檢測電極入口 404和取樣口 405,該密封艙 室401內(nèi)設(shè)有載體支撐臺406,該載體支撐臺406上設(shè)生物膜的生長載體407。該模型的工 作原理是該模型生物膜的生長載體407選用一種組織培養(yǎng)蓋玻片,往接種口 402注入唾液 到載體支撐臺406的蓋玻片載體407上,隨后從頂部培養(yǎng)基入口 403滴加培養(yǎng)液或者其它 沖擊溶液,生物膜就會在蓋玻片載體407上生長,培養(yǎng)過程需要通入?yún)捬鯕怏w以制造厭氧 環(huán)境,通過檢測電極入口 404插入電極可觀察生物膜生長過程的pH變化,還可從取樣口 405取出生物膜樣品進行相關(guān)的生理生化分析。該模型設(shè)計很精巧,能實現(xiàn)對生物膜的生長環(huán) 境和過程進行一些高精度的控制和監(jiān)測,而且能獨立控制多個生物膜樣本的生長;但是該 模型具有如下缺陷1)正因為該模型控制精度要求較高,所以其構(gòu)建成本高;2)該模型的 實驗周期比較長,一次實驗可能需要幾周的時間。3)該模型菌斑需要在厭氧環(huán)境中生長,與 實際體內(nèi)生物膜生長環(huán)境有差別。5、恒厚生物膜反應(yīng)器(Constant Depth Film Fermenter, CDFF);參見 Pe ters AC, Wimpenny JffT. A constant-depth laboratory model film fermentor. Biotechnol Bioeng. 1988 ;32 263-270.Pratten J, Wilson M.Antimicrobial sus ceptibility and composition of microcosm dental plaque supplemented with su crose.Antimicrob Agents Chemother. 1999 ;43 (7) :1595_1599。參見圖6所示,該生物膜反應(yīng)器包括一個腔 體500,該腔體500上設(shè)有樣品入口 501、空氣入口 502和培養(yǎng)基入口 503 ;該腔體500內(nèi)設(shè) 有旋轉(zhuǎn)盤504,該旋轉(zhuǎn)盤上設(shè)有多個相同尺寸的小凹槽505,小凹槽505內(nèi)設(shè)有釉質(zhì)片或羥 磷灰石片506 ;所述小凹槽505的上表面設(shè)有旋轉(zhuǎn)的刀片507。該生物膜反應(yīng)器的工作原理 是生物膜的生長是在腔體500 (類似一個發(fā)酵罐的空間)內(nèi)進行;腔體500內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)盤 504,內(nèi)有多個等深度的小凹槽505,釉質(zhì)片或羥磷灰石片506可置入凹槽505內(nèi)以提供菌 斑形成的表面,該反應(yīng)器內(nèi)接種的細菌可來自厭氧培養(yǎng)恒化器內(nèi)的混合菌液或來自于唾液 /菌斑接種物,實驗時開動旋轉(zhuǎn)盤504,通過旋轉(zhuǎn)盤504上方的培養(yǎng)基入口 503接種細菌和 流加培養(yǎng)基,細菌在凹陷處的表面上附著之后即可逐漸繁殖發(fā)育形成生物膜,并逐漸變厚; 當(dāng)凹槽505中生物膜達到一定厚度時,上方旋轉(zhuǎn)的刀片507就會除去多余的生物膜,以保證 生物膜處于恒定厚度。該反應(yīng)器是一個相對成熟的生物膜反應(yīng)器,在研究成熟生物膜的特 性和抗菌物質(zhì)活性方面都有較為廣泛的應(yīng)用。但是其仍然具有如下缺陷1)沒有對反應(yīng)器 的溫度進行控制;2)實驗周期長;3)實驗結(jié)果的重復(fù)性差。綜上所述,現(xiàn)有的口腔生物膜的體外模型都存在一定的缺點,不能完全滿足研究 的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種人工口腔模擬裝置,該系統(tǒng)裝置結(jié)構(gòu)簡單, 成本低廉,實驗周期短,實驗結(jié)果的重復(fù)性好,精度控制高,不易受到污染。為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案人工口腔模擬裝置,它包括培養(yǎng)基罐,該培養(yǎng)基罐用于菌種的培養(yǎng),菌種的培養(yǎng)以人的唾液或菌斑作為生物 膜的菌種來源,以最大程度地模擬人的真實菌斑的狀態(tài);多通道泵,用于輸送細菌培養(yǎng)液和藥物樣品溶液,也負責(zé)將流動室中廢液輸送到 廢液收集罐;流動室,用于接種和藥物處理,即將唾液包被的羥基磷灰石片放入流動室內(nèi),然后 用移液器往流動室內(nèi)注滿唾液或菌斑的稀釋液,和將藥物樣品溶液泵入流動室對附著并生 長一定時間的的牙菌斑進行處理實驗;藥物樣品溶液瓶,用于提供藥物樣品溶液;和廢液收集罐,用于廢液的收集。
所述培養(yǎng)基罐通過管道與多通道泵相連接,所述多通道泵通過管道與流動室相連 接;所述多通道泵和流動室之間的管道上設(shè)有魯爾接頭,該魯爾接頭通過管道與藥物樣品 溶液瓶相連接,在進行樣品處理時該魯爾接頭可斷開與藥物樣品溶液瓶相連接的狀態(tài);所 述流動室通過管道與廢液收集罐相連接,且所述流動室和廢液收集罐之間的連接管道上設(shè) 有多通道泵。進一步地,所述流動室包括至少一個流動室單元;在一次實驗中可以同時做多組 實驗條件相同的測試,增加樣品測試容量。進一步地,所述培養(yǎng)基罐和多通道泵之間設(shè)有級聯(lián)的Y型接頭,以將培養(yǎng)罐內(nèi)的 培養(yǎng)液分配到各個流動室單元。進一步地,所述多個流動室單元設(shè)置在一流動室固定架上;流動室固定架可以一 次性固定多個流動室,方便對多個流動室進行平行操作,保證各個流動室操作條件的一致 性。進一步地,所述流動室固定架外設(shè)置有恒溫水浴箱;恒溫水浴可以精確控制和調(diào) 節(jié)生物膜的生長溫度。進一步地,所述流動室包括流動室底盤和流動室上蓋;所述流動室底盤上表面設(shè) 有扣合凹槽,該扣合凹槽的大小與流動室上蓋外輪廓相匹配,所述流動室上蓋扣合于扣合 凹槽中,兩者相互扣合起密封作用;所述扣合凹槽的中部設(shè)有液體流動槽,該液體流動槽 內(nèi)容置有至少一個與牙齒材質(zhì)相同或相近的載片;所述流動室上蓋上開設(shè)有一對通孔,該 每個通孔內(nèi)螺合有螺紋聯(lián)接頭,所述螺紋聯(lián)接頭是作為底盤上的液體流動槽中液體的出入 口,以及可作為上蓋拆卸時的把手;所述流動室底盤和流動室上蓋通過固定裝置可拆卸的 固定。所述液體流動槽中部突設(shè)有載片限位凸部,在載片限位凸部側(cè)壁和對應(yīng)的液體流 動槽內(nèi)側(cè)壁上分別設(shè)有用于定位載片的限位結(jié)構(gòu);該限位結(jié)構(gòu)的設(shè)置,使得載片在液體流 動槽內(nèi)能定位在固定的空間位置,便于生物膜在載片上的生長。所述液體流動槽外緣的扣合凹槽上開設(shè)有一個環(huán)形槽,該環(huán)形槽內(nèi)嵌設(shè)有彈性密 封圈;優(yōu)選地,該彈性密封圈是橡膠材質(zhì);彈性密封圈的設(shè)置,可以防止液體流動槽內(nèi)的培 養(yǎng)液滲出槽外,造成污染。所述流動室上蓋的下表面中部向上凹設(shè)有與流動室底盤上的液體流動槽大小匹 配的上蓋凹槽,其作用是增大生物膜培養(yǎng)流動室內(nèi)培養(yǎng)液的容積。所述上蓋凹槽中部向下突設(shè)有上蓋載片限位凸部,該上蓋載片限位凸部與所述液 體流動槽內(nèi)的載片限位凸部位置對應(yīng),其作用是防止載片在流動室底盤和流動室上蓋構(gòu)成 的容置空間內(nèi)隨意移動,避免載片移動影響實驗的效果。所述流動室底盤和流動室上蓋通過螺栓可拆卸的固定,在培養(yǎng)過程中,可隨時取 樣分析。所述與牙齒材質(zhì)相同或相近的載片是羥基磷灰石片或者鍺片。所述流動室底盤和流動室上蓋的材質(zhì)是聚碳酸酯(PC)或聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMC)或其它透明材料,優(yōu)選是耐熱性和耐化學(xué)腐蝕性能較好的聚碳酸酯(PC),選用上述 材料的目的之一是制作的成本低廉,目的之二是便于觀察生物膜在載片上的生長狀況,以 及培養(yǎng)液或樣品溶液在流動槽內(nèi)的流動變化情況。
7
進一步地,所述流動室固定架包括上固定架和下固定架;所述上固定架下表面設(shè) 有凹槽;所述下固定架的上表面設(shè)有與上固定架下表面的凹槽位置相對應(yīng)凹槽,所述上、下 固定架的凹槽與流動室的大小相匹配,從而能將流動室固定在所述上、下固定架的凹槽內(nèi); 所述上、下固定架通過固定裝置固定在一起。進一步地,所述恒溫水浴箱包括箱體和保溫罩,所述保溫罩和箱體匹配扣合,保溫 罩可以保證水浴箱內(nèi)各部分溫度的均勻分布,并減少熱量散失;所述保溫罩的下表面設(shè)有 缺口,該缺口用作管道的進出通道;所述保溫罩的上表面上設(shè)有把手,以方便保溫罩的取 放;所述箱體內(nèi)設(shè)有承物板,用于安放流動室固定架;所述箱體上設(shè)有溫度數(shù)字顯示器和 調(diào)節(jié)旋鈕,以調(diào)節(jié)到需要的溫度條件。進一步地,所述流動室、流動室固定架以及恒溫水浴箱的保溫罩均可選用聚甲基 丙烯酸甲酯(PMMC)或聚碳酸酯(PC)材料加工制作,也可選用其它的有機材料進行制作,優(yōu) 選耐化學(xué)侵蝕的、耐高溫的、透明的材料。本發(fā)明具有如下有益效果結(jié)構(gòu)簡單,成本低廉,實驗周期短,實驗結(jié)果的重復(fù)性 好,精度控制高,不易受到污染。


圖1為現(xiàn)有的恒化器_流動室模型結(jié)構(gòu)示意圖;圖2為現(xiàn)有的恒化器_恒流室模型結(jié)構(gòu)示意圖;圖3為現(xiàn)有的Zurich模型結(jié)構(gòu)示意圖;圖4為現(xiàn)有的人工口腔模型正面結(jié)構(gòu)示意圖;圖5為圖4的側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖;圖6為現(xiàn)有的恒厚生物膜反應(yīng)器結(jié)構(gòu)示意圖;圖7為本發(fā)明的一種技術(shù)方案結(jié)構(gòu)示意圖;圖8為圖7中流動室的具體結(jié)構(gòu)示意圖;圖9為圖8流動室底盤俯視圖;圖10為圖8流動室上蓋俯視圖;圖11為圖9的A-A向剖視圖;圖12為圖10的B-B向剖視圖;圖13為圖7中流動室固定架的俯視圖;圖14圖13的側(cè)視分解圖;圖15為圖7中恒溫水浴箱的具體結(jié)構(gòu)示意 0051]圖16為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的體外菌斑24h菌斑累積和活菌生 長曲線;圖17為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的體外菌斑24h菌斑累積和pH曲 線.
一入 ,圖18為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的體外培養(yǎng)菌斑革蘭氏染色圖;圖19為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的體外培養(yǎng)菌斑在醋酸鉛平板上培 養(yǎng)后的菌落圖;圖20為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的自然菌斑、自然唾液、6h培養(yǎng)后菌斑,24h培養(yǎng)后菌斑PCR-DGGE比較圖;圖21為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的24h菌斑放大300倍時的掃描電 鏡結(jié)構(gòu)圖;圖22為使用本發(fā)明裝置進行的模擬實驗得到的24h菌斑放大5000倍時的掃描電
鏡結(jié)構(gòu)圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
作進一步詳細的說明。參見圖7所示,一種人工口腔模擬裝置600,它包括培養(yǎng)基罐601;多通道泵602、603;流動室604 ;所述流動室604包括24個流動室單元604 ;藥物樣品溶液瓶605;和廢液收集罐606 ;所述培養(yǎng)基罐601通過管道與多通道泵602相連接,所述多通道泵602通過管道 與流動室604相連接;所述多通道泵602和流動室604之間的管道上設(shè)有魯爾接頭607,該 魯爾接頭607通過管道與藥物樣品溶液瓶605相連接,在進行樣品處理時該魯爾接頭可斷 開與藥物樣品溶液瓶相連接的狀態(tài);所述流動室604的每個單元分別通過管道與廢液收集 罐605相連接,且所述流動室604和廢液收集罐605之間的連接管道上設(shè)有多通道泵603 ;上述多通道泵602、603不同時使用,在生物膜培養(yǎng)過程中使用培養(yǎng)基罐601和流 動室604之間的多通道泵602,而流動室604與廢液收集槽605之間的多通道泵603的卡槽 處于松脫狀態(tài);在進行藥物溶液處理時,斷開魯爾接頭607,將與流動室604相連的一端放 入藥物樣品溶液瓶605中,利用多通道泵603完成樣品溶液的注入和清除;整個系統(tǒng)的管道 使用硅膠軟管;所述培養(yǎng)基罐601和多通道泵602之間設(shè)有級聯(lián)的Y型接頭608,以將培養(yǎng)基罐 601內(nèi)的培養(yǎng)液分配到各個流動室604單元;參見圖8 12所示,所述流動室單元604包括流動室底盤609和流動室上蓋610 ; 所述流動室底盤609上表面設(shè)有扣合凹槽611,該扣合凹槽611的大小與流動室上蓋610外 輪廓相匹配,所述流動室上蓋610扣合于扣合凹槽611中;所述扣合凹槽611的中部設(shè)有 液體流動槽612,該液體流動槽612內(nèi)容置有四個羥基磷灰石片載片613 ;所述流動室上蓋 610上開設(shè)有一對通孔614,該每個通孔614內(nèi)螺合有螺紋聯(lián)接頭615 ;所述流動室底盤609 和流動室上蓋610通過螺栓616可拆卸的固定;參見圖9所示,所述液體流動槽612中部突設(shè)有載片限位凸部617,在載片限位凸 部617側(cè)壁和對應(yīng)的液體流動槽612內(nèi)側(cè)壁上分別設(shè)有用于定位載片的限位結(jié)構(gòu)618 ;參見圖8、9、11所示,所述液體流動槽612外緣的扣合凹槽611上開設(shè)有一個環(huán)形 槽619,該環(huán)形槽619內(nèi)嵌設(shè)有橡膠密封圈620 ;參見圖8、12所示,所述流動室上蓋610的下表面中部向上凹設(shè)有與流動室底盤 609上的液體流動槽612大小匹配的上蓋凹槽621 ;參見圖8、12所示,所述上蓋凹槽621中部向下突設(shè)有上蓋載片限位凸部622,該上蓋載片限位凸部622與所述液體流動槽612內(nèi)的載片限位凸部617位置對應(yīng);所述流動室底盤609和流動室上蓋610的材質(zhì)是耐熱性和耐化學(xué)腐蝕性能較好的 聚碳酸酯(PC);參見圖13、14所示,所述24個流動室單元604放置在流動室固定架623上固定; 所述流動室固定架623包括上固定架624和下固定架625 ;所述上固定架624下表面設(shè)有 凹槽626 ;所述下固定架625的上表面設(shè)有與上固定架624下表面的凹槽626位置相對應(yīng) 凹槽627,所述上、下固定架624、625的凹槽626、627與流動室單元604的大小相匹配,從而 能將流動室單元604固定在所述上、下固定架624、625的凹槽626、627形成的空間內(nèi),所述 上、下固定架624、625通過螺栓628固定在一起;參見圖7、15所示,所述流動室固定架623外設(shè)置有恒溫水浴箱629 ;恒溫水浴可 以使整個實驗過程中溫度條件的變化很小,不足以影響整個實驗的精確性;參見圖15所示,所述恒溫水浴箱629包括箱體630和保溫罩631,所述保溫罩631 和箱體30匹配扣合;所述保溫罩631的下表面設(shè)有缺口 632,該缺口 632用作管道的進出通 道;所述保溫罩631的上表面上設(shè)有把手633,以方便保溫罩631的取放;所述箱體630內(nèi) 設(shè)有承物板634,用于安放流動室固定架623 ;所述箱體630上設(shè)有溫度數(shù)字顯示器635和 調(diào)節(jié)旋鈕636,以調(diào)節(jié)到需要的溫度條件;所述流動室固定架623以及恒溫水浴箱629的保溫罩631均選用聚甲基丙烯酸甲 酯材料加工制作。利用本發(fā)明的人工口腔模擬裝置進行模擬實驗的方法,包括如下步驟1)培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基選用基礎(chǔ)粘蛋白培養(yǎng)基(BMM,Sissons, et al. J Dent Res. 1991 ;70(11)
1409-16),配方如下Hog gastric mucin2. 5g/LProteose peptone10. Og/LTrypticase peptone5. Og/LYeast extract5. Og/LKCl2. 5g/LHaemin5mg/LArgininelmmol/LL-cys0. lg/LUrealmmol/LVitamin Kl lmg/L2)羥基磷灰石片的包被收集人的唾液,離心取上清,用紫外照射滅菌,然后將羥基磷灰石片浸入其中,浸 泡時間至少2小時,使羥基磷灰石片表面覆蓋一薄層唾液蛋白;3)菌種來源以人的唾液或菌斑作為生物膜的菌種來源,最大程度地模擬人的真實菌斑的狀 態(tài),收集到的唾液或菌斑可以用BMM培養(yǎng)基稀釋以保證有足夠的接種量;4)接種
10
將唾液包被的羥基磷灰石片613放入流動室604內(nèi),然后用移液器往流動室604 內(nèi)注滿唾液或菌斑的稀釋液5)培養(yǎng)條件恒溫水浴溫度37°C多通道泵602的流速設(shè)置為使每個流動室的清除率為0. IK16)藥物的抗生物膜活性測試a配制藥物溶液;b在生物膜培養(yǎng)時間達到8h后,斷開魯爾接頭607,用多通道泵603先將流動室 604內(nèi)的液體排空;c將與流動室604相連的接頭一端放入藥物樣品溶液中,再用多通道泵603將藥物 溶液泵入流動室604內(nèi),按實驗計劃要求確定作用時間;d作用時間結(jié)束后再用多通道泵603將藥液排空;e同樣用泵入-排空的方法用無菌水清洗流動室,盡可能清除藥液殘留;f重新連接魯爾接頭607,并松脫多通道泵603,用多通道泵602重新往流動室604 內(nèi)注入新鮮培養(yǎng)基;g繼續(xù)培養(yǎng)16h,即可完成一輪測試。通過檢測羥基磷灰石片上的菌斑量以及菌斑中的活菌量比較各藥物的抗生物膜 活性強弱。參見圖16所示,該圖顯示了 24小時培養(yǎng)過程菌斑量和菌斑中活菌量的變化趨勢, 菌斑量在培養(yǎng)過程中保持增長趨勢,而菌斑中的活菌量在9h后就基本達到平衡,這說明菌 斑量的增長不僅包括活菌數(shù)目的增長,很大程度上還包含了生物膜所特有的胞外產(chǎn)物的增 加及其它代謝產(chǎn)物的累積。參加圖17所示,菌斑量在24h不斷增加,但在培養(yǎng)過程中pH接 近中性,無需添加堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)PH值,這也和體內(nèi)菌斑的生長條件相符。這是本發(fā)明的一 個優(yōu)勢所在。參見圖18,19,將菌斑進行革蘭氏染色和稀釋后醋酸鉛平板培養(yǎng)可以觀察到菌斑 細菌種類的多樣性。利用16s rDNA細菌鑒定方法對24h菌斑中的細菌進行分離鑒定,發(fā)現(xiàn)菌斑中的 細菌種屬具有豐富的多樣性,包括鏈球菌屬、放線菌屬、韋榮菌屬、梭桿菌屬、普氏菌屬以及 部分梭菌屬和腸桿菌屬細菌,這些細菌中,這些細菌中,韋榮菌屬、梭桿菌屬及普氏菌屬都 屬于絕對厭氧細菌,在不需要補充厭氧氣體的條件下厭氧菌也能在本模型中獲得良好的生 長,這也是本發(fā)明的另一優(yōu)勢所在。通過PCR-DGGE分析比較,6h,24h培養(yǎng)菌斑和自然菌斑、 自然唾液細菌組成高度相似,參見圖20所示。而利用掃描電鏡對24h菌斑的結(jié)構(gòu)進行觀察, 在放大300倍時可以觀察到生物膜特有的微菌落形態(tài),參見圖21所示;在放大5000倍的時 候則可以看到生物膜內(nèi)菌群形態(tài)的多樣性,參見圖22所示;以上證據(jù)都充分說明了該模型 能夠很好的模擬人的自然菌斑。顯然,本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例,而并非是對 本發(fā)明的實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在上述說明的基礎(chǔ)上還可 以做出其它不同形式的變化或變動。這里無法對所有的實施方式予以窮舉。凡是屬于本發(fā) 明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之列。
權(quán)利要求
人工口腔模擬裝置(600),其特征在于,它包括培養(yǎng)基罐(601);多通道泵(602、603);流動室(604);藥物樣品溶液瓶(605);和廢液收集罐(606);所述培養(yǎng)基罐(601)通過管道與多通道泵(602)相連接,所述多通道泵(602)通過管道與流動室(604)相連接;所述多通道泵(602)和流動室(604)之間的管道上設(shè)有魯爾接頭(607),該魯爾接頭(607)通過管道與藥物樣品溶液瓶(605)相連接;所述流動室(604)通過管道與廢液收集罐(606)相連接,且所述流動室(604)和廢液收集罐(606)之間的連接管道上設(shè)有多通道泵(603)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室(604)包括至 少一個流動室單元(604)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室單元(604)包 括流動室底盤(609)和流動室上蓋(610);所述流動室底盤(609)上表面設(shè)有扣合凹槽 (611),該扣合凹槽(611)的大小與流動室上蓋(610)外輪廓相匹配,所述流動室上蓋(610) 扣合于扣合凹槽(611)中,兩者相互扣合起密封作用;所述扣合凹槽(611)的中部設(shè)有液 體流動槽(612),該液體流動槽(612)內(nèi)容置有至少一個與牙齒材質(zhì)相同或相近的載片 (613);所述流動室上蓋(610)上開設(shè)有一對通孔(614),該每個通孔(614)內(nèi)螺合有螺紋 聯(lián)接頭(615);所述流動室底盤(609)和流動室上蓋(610)通過固定裝置(616)可拆卸的 固定。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述液體流動槽(612)中 部突設(shè)有載片限位凸部(617),在載片限位凸部(617)側(cè)壁和對應(yīng)的液體流動槽(612)內(nèi)側(cè) 壁上分別設(shè)有用于定位載片的限位結(jié)構(gòu)(618)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述液體流動槽(612)外 緣的扣合凹槽(611)上開設(shè)有一個環(huán)形槽(619),該環(huán)形槽(619)內(nèi)嵌設(shè)有彈性密封圈 (620)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述彈性密封圈(620)是 橡膠密封圈。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室上蓋(610)的 下表面中部向上凹設(shè)有與流動室底盤(609)上的液體流動槽(612)大小匹配的上蓋凹槽 (621)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述上蓋凹槽(621)中部 向下突設(shè)有上蓋載片限位凸部(622),該上蓋載片限位凸部(622)與所述液體流動槽(612) 內(nèi)的載片限位凸部(617)位置對應(yīng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室底盤(609)和 流動室上蓋(610)通過螺栓(616)可拆卸的固定。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述與牙齒材質(zhì)相同或相 近的載片(613)是羥基磷灰石片或者鍺片。
11.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室底盤(609)和 流動室上蓋(610)的材質(zhì)是聚碳酸酯或聚甲基丙烯酸甲酯。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述培養(yǎng)基罐(601)和多 通道泵(602)之間設(shè)有級聯(lián)的Y型接頭(608)。
13.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室單元(604)設(shè) 置在流動室固定架(623)上。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室固定架(623) 包括上固定架(624)和下固定架(625);所述上固定架(624)下表面設(shè)有凹槽(626);所 述下固定架(625)的上表面設(shè)有與上固定架(624)下表面的凹槽(626)位置相對應(yīng)凹槽 (627),所述上、下固定架(624,625)的凹槽(626,627)與流動室(604)的大小相匹配;所述 上、下固定架(624、625)通過固定裝置(628)固定在一起。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室固定架(623) 外設(shè)置有恒溫水浴箱(629)。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述恒溫水浴箱(629) 包括箱體(630)和保溫罩(631),所述保溫罩(631)和箱體(630)匹配扣合;所述保溫罩 (631)的下表面設(shè)有缺口(632);所述保溫罩(631)的上表面上設(shè)有把手(633);所述箱 體(630)內(nèi)設(shè)有承物板(634);所述箱體(630)上設(shè)有溫度數(shù)字顯示器(635)和調(diào)節(jié)旋鈕 (636)。
17.根據(jù)權(quán)利要求13或15所述的人工口腔模擬裝置,其特征在于所述流動室固定架 (623)、恒溫水浴箱(629)的保溫罩(631)選用聚甲基丙烯酸甲酯或聚碳酸酯材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人工口腔模擬裝置,它包括培養(yǎng)基罐、多通道泵、流動室、藥物樣品溶液瓶和廢液收集罐;所述培養(yǎng)基罐通過管道與多通道泵相連接,所述多通道泵通過管道與流動室相連接;所述多通道泵和流動室之間的管道上設(shè)有魯爾接頭,該魯爾接頭通過管道與藥物樣品溶液瓶相連接;所述流動室通過管道與廢液收集罐相連接,且所述流動室和廢液收集罐之間的連接管道上設(shè)有多通道泵。本發(fā)明具有如下有益效果結(jié)構(gòu)簡單,成本低廉,實驗周期短,實驗結(jié)果的重復(fù)性好,精度控制高,不易受到污染。
文檔編號C12M1/34GK101948745SQ20101027694
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月9日
發(fā)明者鄒曉斌, 陳望化 申請人:好維股份有限公司
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
山东省| 莱西市| 吉安县| 阿坝| 东丰县| 衡东县| 牙克石市| 嘉定区| 太仓市| 昆明市| 巴彦淖尔市| 慈利县| 永靖县| 尚志市| 梅州市| 湖北省| 伊川县| 龙陵县| 同德县| 万年县| 勃利县| 汾阳市| 探索| 广饶县| 翁牛特旗| 资中县| 葫芦岛市| 江安县| 新竹县| 无锡市| 德江县| 汽车| 东丽区| 安乡县| 卓资县| 安陆市| 漠河县| 凤凰县| 桦甸市| 孙吴县| 崇礼县|