專利名稱：一種木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法及其用途，是一種利用微生物 處理農(nóng)業(yè)廢棄秸稈的生物技術(shù)。
背景技術(shù)：
我國是個(gè)養(yǎng)牛大國，近年來，隨著養(yǎng)牛業(yè)向規(guī)模化、集約化方向發(fā)展，牛糞對(duì)環(huán)境 的污染問題變得越來越嚴(yán)重。1999年中國農(nóng)業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒表明，牛的飼養(yǎng)量為3506. 94萬頭 /年，每頭牛產(chǎn)糞量10. 6噸/年、產(chǎn)尿量4. 9噸/年；總產(chǎn)糞量13689. 52萬噸/年，總產(chǎn)尿 量4500. 66萬噸/年。堆肥法對(duì)于性冷牛糞需要三四個(gè)月甚至半年，歷時(shí)長，處理效率低下， 難以適應(yīng)現(xiàn)代規(guī)模養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。傳統(tǒng)的牛糞堆的溫度也不高，難以殺滅牛糞中所含的大量 雜草中子和蟲卵病菌等缺點(diǎn)限制了其使用價(jià)值。如何迅速而有效地處理牛糞是科技工作者 面臨的新挑戰(zhàn)。新鮮牛糞含水率都在80%以上，常常通過添加麥秸、稻殼等農(nóng)作物秸稈進(jìn)行調(diào)節(jié)。 農(nóng)業(yè)秸稈中較難降解的有機(jī)成分是木質(zhì)素，其在堆肥化中的降解是促進(jìn)堆肥化進(jìn)程的關(guān) 鍵。木質(zhì)素的降解能為提高堆肥的效率、縮短堆肥時(shí)間改善堆肥質(zhì)量的研究提供一條新的 思路和技術(shù)。在自然界中，能降解木質(zhì)素并產(chǎn)生相應(yīng)酶類的生物只占少數(shù)。降解木質(zhì)素的真菌 主要是白腐真菌，此類真菌能夠分泌胞外氧化酶降解木質(zhì)素，因此被認(rèn)為是最主要的木質(zhì) 素降解微生物。目前，國內(nèi)外普遍采用的秸稈發(fā)酵技術(shù)如好氧發(fā)酵或厭氧發(fā)酵存在諸如菌 種較單一，分解能力弱，纖維素總降解率低，一般為20 40%左右以及發(fā)酵周期較長，一般 需要50d左右的發(fā)酵周期等問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法及其用途，為解決現(xiàn) 有在秸稈降解過程中所利用的微生物菌劑種類單一、分解能力弱、纖維素總降解率低以及 發(fā)酵周期長等問題，提供了一種高效秸稈分解復(fù)合菌群。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法按照以下的步驟進(jìn)行(1)牛糞培養(yǎng)基的制備稱取牛糞150g加入IOOOmL的燒杯中，倒入400mL水，充 分?jǐn)嚢?0min，過濾取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)搖瓶培養(yǎng)接種劑制備取牛糞堆肥150g投加到含400mL水的IOOOmL的燒杯 中，充分?jǐn)嚢?0min，待用；(3)取IOmL搖瓶培養(yǎng)接種劑投加到IOOmL液體牛糞培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置 于轉(zhuǎn)速為120r/min和溫度為45°C的搖床上培養(yǎng)3 5d ；(4)黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的 常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)(Coprinus sp)的;t音#。包原毛平胃 (Phanerochaete
chrysosporium)禾口木霉(Trichodermasp)、根霉(Rhizopus sp)、花裙傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的菌種分別經(jīng)過含PDA培養(yǎng)基的斜面培養(yǎng)，獲得其孢子，濃 度為每毫升1 X IO5個(gè)孢子，其中PDA培養(yǎng)基采用200g/L的馬鈴薯浸出液，然后添加20g/ L的葡萄糖和17 20g/L的瓊脂并定溶至IL ；(5)將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(Rhizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液 混合，幾種菌液的體積比為2 1 1 1 1 1，然后干燥，獲得發(fā)酵菌劑。本發(fā)明的木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的用途，是將該種微生物菌劑作為牛糞與農(nóng)業(yè)秸 稈的堆肥發(fā)酵菌劑。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、能全面降解各種有機(jī)物質(zhì)，尤其是秸稈和牛糞中的木質(zhì) 纖維素，降解率高，周期短，適宜條件下25天左右，降解率達(dá)60%以上；2、可實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)廢棄 物和畜禽糞便的有效利用，改良農(nóng)業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)生態(tài)環(huán)境，減少因焚燒秸稈造成的空氣污染和 保護(hù)環(huán)境。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明的木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法按以下具體步驟制備(1)牛糞培養(yǎng)基的制備稱取牛糞150g加入IOOOmL的燒杯中，倒入400mL水，充 分?jǐn)嚢?0min，過濾取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)搖瓶培養(yǎng)接種劑制備取牛糞堆肥40g，過篩，然后在稱取20g投加到含50mL 水的IOOOmL的燒杯中，充分?jǐn)嚢?0min，待用；(3)取IOmL搖瓶培養(yǎng)接種劑投加到IOOmL液體牛糞培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置 于轉(zhuǎn)速為120r/min和溫度為45°C的搖床上培養(yǎng)3d 5d ；(4)黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的 常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、Panaeolus sp、 Coprinus sp 的；t音養(yǎng)。黃 包原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)禾口 木 β (Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花裙傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌 (Coprinus sp)的菌種分別經(jīng)過含PDA培養(yǎng)基的斜面培養(yǎng)，獲得其孢子，濃度為每毫升 IX IO5個(gè)孢子，其中PDA培養(yǎng)基采用200g/L的馬鈴薯浸出液，然后添加20g/L的葡萄糖和 17 20g/L的瓊脂并定溶至IL ；(5)將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(Rhizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液 混合，菌液的體積比為2 1 1 1 1 1。干燥，獲得發(fā)酵菌劑。實(shí)施例2牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉 (Trichoderma sp)、根霉(Rhizopussp)、花裙傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液混合的制備如實(shí)施例1。該復(fù)合菌劑適合秸稈和糞便為主要原料的堆肥使用。實(shí)施例3牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(Rhizopus sp)孢子懸液混合的制備如實(shí)施例1。將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、木霉(Trichoderma)和根霉(Rhizopus sp)的孢子懸液混合,三種菌液的 體積比為1 2 1。該復(fù)合菌劑適合秸稈(菌液與粉碎為1厘米左右秸稈的體積比采用 1 100-1 200，二者充分混合，濕度控制在75-80% )為主要原料的堆肥使用。
權(quán)利要求
一種木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法，其特征是，按照以下的步驟進(jìn)行(1).牛糞培養(yǎng)基的制備稱取牛糞150g加入1000mL的燒杯中，倒入400mL水，充分?jǐn)嚢?0min，過濾取掉渣制，取100mL加入250mL的三角瓶中待用；(2).搖瓶培養(yǎng)接種劑制備取以牛糞為原料采用常規(guī)方法堆置獲得的堆肥40g，過篩后，然后再將過篩后的堆肥稱取20g投加到含50mL水的1000mL的燒杯中，充分?jǐn)嚢?0min，待用；(3).取10mL搖瓶培養(yǎng)接種劑投加到100mL液體牛糞培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置于轉(zhuǎn)速為120r/min和溫度為45℃的搖床上培養(yǎng)3d～5d；(4).黃孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、曲霉Aspergillus sp、花褶傘屬真菌Panaeolussp、鬼傘屬真菌Coprinus sp的培養(yǎng)將黃孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium和Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、花褶傘屬真菌Panaeolus sp、鬼傘屬真菌Coprinus sp的菌種分別經(jīng)過含PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，獲得其孢子，濃度為每毫升1×108個(gè)孢子，其中PDA培養(yǎng)基采用200g/L的馬鈴薯浸出液，然后添加20g/L的葡萄糖和17～20g/L的瓊脂并定溶至1L；(5).將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌Phanerochaetechrysosporium和Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、花褶傘屬真菌Panaeolus sp、鬼傘屬真菌Coprinus sp的孢子懸液混合，菌液的體積比為2∶1∶1∶1∶1∶1，然后干燥，獲得發(fā)酵菌劑。
2.權(quán)利要求1所述的木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的用途，其特征在于將該種微生物菌劑 作為牛糞與農(nóng)業(yè)秸稈的堆肥發(fā)酵菌劑。全文摘要
本發(fā)明涉及一種木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的制備方法及其用途，是一種快速簡便的制備高效木質(zhì)纖維分解復(fù)合菌群的方法，具體為牛糞與農(nóng)業(yè)秸稈地堆肥化提供微生物菌劑，解決了牛糞和農(nóng)業(yè)秸稈難堆肥化的問題。該復(fù)合菌群由采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和分離自牛糞的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液混合組成，能夠全面降解牛糞和木質(zhì)纖維素的農(nóng)業(yè)秸稈。在牛糞與稻秸的堆肥中使用該菌劑，其發(fā)酵周期短，僅需25d。菌群的制作方法簡單，易于實(shí)施，單位原料中菌群含量大，活性高。
文檔編號(hào)C12R1/885GK101974426SQ20101028216
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月15日
發(fā)明者劉張, 周成, 寧平, 熊向峰, 瞿廣非, 賈麗娟, 鄧志華, 黃兆林, 黃凱 申請(qǐng)人:昆明理工大學(xué)