專利名稱：一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑配方及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中性蛋白酶和木瓜蛋白酶目前是重要的醫(yī)藥、食品、釀酒、皮革制造等領(lǐng)域的重要 工業(yè)用酶，由于酶制劑有著作用條件溫和、專一性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，目前在已應(yīng)用和未應(yīng)用的領(lǐng)域 有著巨大的潛力。但目前中性蛋白酶和木瓜蛋白酶仍已粉狀酶為主，粉狀酶要在生產(chǎn)過程 中將發(fā)酵、濃縮、精制后的液體酶經(jīng)噴霧干燥后才能成為粉狀酶，由于酶制劑是生物活性物 質(zhì)，在噴霧干燥過程中由于溫度過高，一般會(huì)損失10-20%的活力，所以造成了活力的很大 損失，從而導(dǎo)致成品價(jià)格較高。而且粉狀酶使用不方便，粉狀固體酶的粉塵粘到皮膚上會(huì)對 皮膚造成燒傷，粉狀酶在應(yīng)用時(shí)必須用水溶解后才能使用，由于粉狀酶在噴霧干燥時(shí)，選用 的截體不同，容易造成吸潮結(jié)塊或者載體不能完全溶于水，而造成蛋白酶不能均勻地與底 物接觸。目前液體蛋白酶產(chǎn)品在貯存過程中，由于蛋白酶自身的水解作用造成了酶的失活 量隨時(shí)間的延長而增加，穩(wěn)定性極差。貯存一周活力基本喪失，從而嚴(yán)重影響了液體濃縮蛋 白酶制劑的廣泛應(yīng)用。因此，研究開發(fā)一種質(zhì)優(yōu)價(jià)廉、穩(wěn)定性良好的液體中性蛋白酶和木瓜 蛋白酶具有重大的產(chǎn)業(yè)化意義。如國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局公布的CN200710060594. 5( —種液體堿性蛋白酶復(fù)合穩(wěn)定 劑)專利方法，該該穩(wěn)定劑主要組分及重量份數(shù)分別為CaCl2 5-10硼砂5-10 4-FPBA 0. 05-0. 1甘油與丙二醇混合物5-10，該方法將這些穩(wěn)定劑按一定比例混合，加入液體堿性 蛋白酶中，通過多元醇及新型蛋白酶活性穩(wěn)定劑將蛋白酶活力暫時(shí)抑制，待酶液的環(huán)境改 變時(shí)，活力再重新恢復(fù)，但是這種方法的缺點(diǎn)是蛋白酶活力的恢復(fù)不是完全可逆的，液體堿 性蛋白酶活力不能完全恢復(fù)，只能恢復(fù)80%左右的活力，酶活損失還是較大，不具有產(chǎn)業(yè)化 應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為工業(yè)用液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶提供了一種優(yōu)良的防腐劑配方及應(yīng)用。本發(fā)明是采用如下方案實(shí)現(xiàn)的一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑，其特征在于其構(gòu)成組分及重量 份數(shù)分別為硼砂0. 5-1甘油0. 5-1乙二醇 0. 5-1硫酸鎂0.01-0. 05復(fù)合氨基酸0.5-1將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑成品。所述的構(gòu)成組分的最優(yōu)重量份數(shù)分別為硼砂0.5甘油1乙二醇 1硫酸鎂0.05復(fù)合氨基酸1所述述復(fù)合氨基酸中酪氨酸纈氨酸=8 2本發(fā)明的顯著效果是1、本發(fā)明的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶防腐劑是根據(jù)蛋白酶本身的性質(zhì)，選用 活性保護(hù)劑，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)，確定活性保護(hù)劑的最佳配方及用量，在液體中性蛋白酶和木瓜蛋 白酶周圍形成膠束，降低液體酶在溶液中的游離范圍，并且這種復(fù)合防腐劑對溫度不敏感， 溫度升高對復(fù)合防腐劑不能起到破壞作用。2、本液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑性質(zhì)穩(wěn)定，成本低廉，加入該防 腐劑后液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶在25°C條件下可保存3個(gè)月，且3個(gè)月后的相對酶活 力在90%以上。3、鎂離子能夠屏蔽蛋白酶分子表面的負(fù)電荷，并且鎂離子可以和液體蛋白酶的 活性中心相結(jié)合，使有活性的構(gòu)象能夠穩(wěn)定存在。4、甘油和乙二醇能夠起到增稠的作用，并且在酶蛋白受熱時(shí)，保護(hù)分子的氫鍵不 發(fā)生變形，從而可代替水作為溶劑對蛋白分子的氫鍵起到保護(hù)作用。5、硼砂硼砂本身可以起到殺菌作用，硼砂對液體蛋白酶里的菌類起到隔離作用， 避免雜菌與酶制劑的活性中心結(jié)合，起到延長酶活保質(zhì)期的作用。6、復(fù)合氨基酸蛋白酶降解的最終產(chǎn)物為氨基酸，加入一定量的復(fù)合氨基酸，可以 起到提前達(dá)到酶制劑反應(yīng)的動(dòng)態(tài)平衡，保護(hù)蛋白酶自身的降解。
具體實(shí)施例方式1、本發(fā)明的生產(chǎn)工藝流程發(fā)酵生產(chǎn)的中性淀粉酶或木瓜蛋白酶，過濾，除去濾 渣，經(jīng)膜濃縮至所需活力，加入硼砂0. 5-1，甘油0. 5-1，乙二醇0. 5-1，硫酸鎂0. 01-0. 05，復(fù) 合氨基酸0. 5-1，混合均與，檢測活力，定量灌裝，最后成品入庫。2、本發(fā)明應(yīng)用小試情況如下，常規(guī)方法作為對照組進(jìn)行對比試驗(yàn)，中性蛋白酶檢 測方法按照國標(biāo)GBT23527-2009附錄C紫外分光光度法；木瓜蛋白酶的檢測方法按照廣西 科學(xué)院生物研究所制定的方法檢測，活力定義分別如下蛋白酶活力定義Ig固體酶粉(或ImL液體酶)，在一定溫度和pH值下，Imin水 解酪蛋白產(chǎn)生Iyg酪氨酸，即為ι個(gè)酶活力單位，以μ/g或y/mL表示。木瓜蛋白酶活力定義在測定條件下，每分鐘水解酪蛋白釋出的三氯乙酸可溶物， 在280nm的吸光度與1 μ g的酪氨酸吸光度相當(dāng)時(shí)，所需要的酶量為1個(gè)酶活力單位，以μ / g或μ /mL表示。試驗(yàn)中各取剛生產(chǎn)出的中性蛋白酶和木瓜蛋白酶原液IOOOmL,在25°C的恒溫器 中恒溫保存，每隔10天檢測兩種液體酶的活力，分別以空白為對照。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
權(quán)利要求
一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑，其特征在于其構(gòu)成組分及重量份數(shù)分別為硼砂0.5 1甘油0.5 1乙二醇0.5 1硫酸鎂0.01 0.05復(fù)合氨基酸0.5 1將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑成品。
2.如權(quán)利要求1所述的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑，其特征在于所述 的構(gòu)成組分的最優(yōu)重量份數(shù)分別為硼砂0. 5 甘油1 乙二醇1 硫酸鎂0. 05 復(fù)合氨基酸1
3.如權(quán)利要求1所述的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑，其特征在于上述 復(fù)合氨基酸構(gòu)成組分及重量份數(shù)分別為酪氨酸纈氨酸=8 全文摘要
本發(fā)明涉及一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復(fù)合防腐劑，其構(gòu)成組分及重量份數(shù)分別為硼砂0.5-1；甘油0.5-1；乙二醇0.5-1；硫酸鎂0.01-0.05；復(fù)合氨基酸0.5-1；將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑成品。本發(fā)明制備方法簡單，成分合理，成本低廉液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶穩(wěn)定性強(qiáng)(在25℃恒溫保存3個(gè)月，酶活仍然在90％以上)，此方法是是一種高效的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑，對目前高活力液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶制劑的產(chǎn)業(yè)化具有重大意義。
文檔編號(hào)C12N9/96GK101974506SQ201010291310
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月26日
發(fā)明者劉寶龍, 劉金花, 吳鵬, 宋宵因, 幸芬, 王剛, 趙巖, 趙路, 郭峰, 馬清真 申請人:吳鵬;郭峰