專利名稱：一種海洋來源Bacillus barbaricus SCSIO 02429以及用它制備魷魚小肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種芽孢桿菌，具體來說涉及一種海洋來源芽孢桿菌Bacillus barbaricus SCSIO 02429菌株，還涉及利用該菌株來制備魷魚小肽的方法。
背景技術(shù)：
隨著我國海洋捕撈業(yè)的迅速發(fā)展，魷魚年產(chǎn)量已達(dá)30萬噸左右，成為我國重要的 水產(chǎn)加工原料之一。在魷魚的加工處理過程中，有15%左右的內(nèi)臟廢棄物產(chǎn)生，這些廢棄 物富含蛋白質(zhì)，但極易腐爛變質(zhì)，難以儲存。通常的處理方式是將提取完魷魚油后的廢棄物 進(jìn)行掩埋，近期也有對魷魚內(nèi)臟進(jìn)行初級加工制成魷魚溶漿直接用作魚類飼料的報道，但 是這種未經(jīng)精深加工的飼料生物利用率不高，還會污染水體環(huán)境，增加養(yǎng)殖動物病害爆發(fā) 的機會。因此對魷魚內(nèi)臟的深入開發(fā)利用具有經(jīng)濟和環(huán)保的重要意義。魷魚內(nèi)臟的酶解方 法研究也已經(jīng)引起了廣泛重視，使用生物酶技術(shù)將魷魚粗蛋白水解為水產(chǎn)動物易吸收、具 有一定生理功能的小肽類蛋白源是一種有效的方式，并且也進(jìn)行了一些研究，例如薛長湖、 劉春娥等人對酶的種類、用量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間等因素對魷魚內(nèi)臟粗蛋白轉(zhuǎn)化率的影響 的研究(劉春娥，林洪，曹立民，單俊偉.魷魚內(nèi)臟蛋白質(zhì)酶解工藝的研究.食品工業(yè)科技， 2004,25(9) =83-85.)袁亞輝等人利用酶解魷魚內(nèi)臟生產(chǎn)海味素，張井等人對魷魚內(nèi)臟酶 解液中重金屬脫除方法的研究等。在已報道的魷魚內(nèi)臟酶解方法中，采用的酶的種類有胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋 白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶以及這些酶的混合物。但現(xiàn)階段的魷魚內(nèi)臟水 解方法仍存在粗蛋白水解率低，酶解產(chǎn)物中的殘余粗蛋白很難被海水養(yǎng)殖動物吸收利用的 問題。而通過提高反應(yīng)溫度、延長反應(yīng)時間、提高催化劑用量等手段提高粗蛋白水解度后， 又會出現(xiàn)過度水解現(xiàn)象，目標(biāo)小肽的得率大幅降低，例如有文獻(xiàn)報道，魷魚內(nèi)臟水解的氨基 酸得率超過70%，但小肽得率卻非常低。如果能在提高粗蛋白水解效率的同時保證目標(biāo)小 肽得率，就可以大幅提高魷魚內(nèi)臟的利用水平。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于從海洋中開發(fā)出一種新的芽孢桿菌，另一目的是利用這種芽孢 桿菌酶解魷魚內(nèi)臟，提供一種能高粗蛋白水解率和高小肽得率的魷魚小肽的制備方法。我們從中國南海深海沉積物中分離出Bacillus barbaricus SCSIO 02429，用 Bacillus barbaricus SCSIO 02429發(fā)酵得到的粗酶溶液破壞內(nèi)臟蛋白中與肽鏈連接的 氨基多糖側(cè)鏈，再加入菠蘿蛋白酶催化蛋白質(zhì)肽鏈水解，得到的魷魚小肽得率達(dá)40% 46 %，氨基酸得率為16 % 22 %，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。Bacillus barbaricus SCSIO 02429已于2010年8月31日保藏在中國典型培養(yǎng) 物保藏中心，地址是武漢市武昌珞珈山，簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NO =M 2010213。所述的Bacillus barbaricus SCSIO 02429從2009年采集到的中國南海深海沉
3積環(huán)境(經(jīng)度119° 57.260'，緯度20° 59.877'，水深229米)中分離得到。采用細(xì)菌 培養(yǎng)基通過稀釋平板法分離及劃線法進(jìn)行純化。經(jīng)16S rRNA基因序列相似性分析，發(fā)現(xiàn)其 與Bacillus barbaricus具有99% (722/728bp)的相似性，鑒定其為Bacillus barbaricus 種的一個菌株SCSIO 02429。該菌株在ISP2培養(yǎng)基(每升蒸餾水中加入酵母膏4. 0g，麥芽 汁lO.Og，葡萄糖4.0g，瓊脂20.0g，pH 7.0)上28 37°C生長良好。按照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》的標(biāo)準(zhǔn)、方法和種的分類 特征，對待測菌株進(jìn)行細(xì)菌形態(tài)觀察、生理生化測試等試驗。該菌株在PYES medium (0.3% 酪蛋白胨，0.3%的酵母提取物，0. 23%琥珀酸二鈉，pH值7. 2)上同樣生長良好，為棕色、不 透明、平坦的圓形菌落，最大菌落直徑5mm。菌落在生長初期有完整邊界，但在繼續(xù)生長的過 程中邊界逐漸消失。細(xì)胞呈桿狀，芽孢為橢圓型，細(xì)胞為革蘭氏陽性。在PYES medium上， 28 37°C均可良好生長；經(jīng)3周培養(yǎng)后，在4 47°C下均可觀察到明顯的生長。該菌可以 在含2%和5%氯化鈉的PYES medium上生長；培養(yǎng)3周后，在含12% NaCl的PYES medium 培養(yǎng)基上可以觀察到生長。菌株在pH6. 0時可以觀察到生長，在pH7. 0、8. 0、9. 5可以快速 生長，說明該菌具有耐堿性。SCSIO 02429株菌的生理生化試驗結(jié)果見表1，表中“ + ”表示 陽性或能夠利用；“_”表示陰性或不能利用。表1 SCSIO 02429株菌的生理生化試驗結(jié)果
指標(biāo)SCSIO 02429指標(biāo)SCSIO 02429N-乙?；?氨基葡萄糖+L-天門冬氨酸一D-纖維二糖-組氨酸+D-果糖+苯丙氨酸+D-葡萄糖+脯氨酸+D-甘露糖+絲氨酸+D-麥芽糖+分解IH亥糖-馬尿酸鹽+水楊苷-尿素-蔗糖+吐溫20一D -海藻糖+吐溫80-1-肌糖-生長鹽度麥芽糖醇-2%NaCl+D-甘露醇-5%NaCl+檸檬酸鹽+10%NaCl-戊二酸-硝酸鹽還原一L-丙氮酸+47'C下生長-SCSIO 02429 株菌與最相似菌株 Bacillus barbaricus V2-BIII-A2 (參考文 獻(xiàn)Taubel Μ. , Kampfer P, Buczolits S, Lubitz W, Busse H-J R. Bacillus barbaricus sp. nov. , isolated from an experimental wall painting. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2003, 53 725-730.該菌的 16S rDNA 序列 在GenBank/EMBL/DDBJ中的登錄號為AJ422145)在生理學(xué)特性上絕大部分相同，但在D-核 糖，檸檬酸鹽，蔗糖的利用，最高鹽耐受濃度為5%特征上不同。因此，SCSIO 02429被鑒定 為Bacillus barbaricus的一個菌株，Bacillus barbaricus巨前還沒有中文譯名。本發(fā)明的魷魚小肽的制備方法，其特征包括以下的步驟
(1)將Bacillus barbaricus SCSIO 02429菌種轉(zhuǎn)接到菌種活化培養(yǎng)基中，30 37°C下培養(yǎng)18 24h，活化后加入有誘導(dǎo)產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基的容器中，pH = 7. 0 8. 0，30 37°C的條件下發(fā)酵12 24小時，當(dāng)發(fā)酵液蛋白酶活力達(dá)到2000 3000單位/mL，氨基多 糖酶活力達(dá)到0. 95 1. 12單位/mL時，即為糖基水解用粗酶溶液，所述的誘導(dǎo)產(chǎn)酶發(fā)酵培 養(yǎng)基由魷魚內(nèi)臟漿，蛋白胨，酵母膏，復(fù)合鹽和水按質(zhì)量比20 30 5 5 10 1000 混合加熱溶解后制得，所述的復(fù)合鹽由氯化鈉，硫酸鉀，氯化鎂和氯化銨按質(zhì)量比5 8:2:2:3混合得到；(2)將魷魚內(nèi)臟原料碎成漿狀后與步驟(1)所述的粗酶溶液按體積比1 1 2 1混合進(jìn)行酶解，反應(yīng)的起始pH值為6. 5 7. 0，溫度為40 50°C，時間5 8小時， 得糖基側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶解物；(3)按魷魚內(nèi)臟原料每克加入菠蘿蛋白酶1000 1500活力單位的比例，將菠蘿蛋 白酶加入步驟(2)得到的粗蛋白酶解物中，pH調(diào)至6. 5 7.0，在35 40°C下反應(yīng)4 6 小時，得到的酶解產(chǎn)物經(jīng)靜置，粗脂肪層和水層分離，除去脂肪層后干燥，得魷魚小肽。步驟(3)所述的干燥可以是噴霧干燥等。本發(fā)明所用的蛋白胨和酵母膏可從市場 購買。本發(fā)明通過Bacillus barbaricus SCSIO 02429生產(chǎn)的粗酶酶解破壞內(nèi)臟蛋白中 與肽鏈連接的氨基多糖側(cè)鏈，消除糖基對蛋白肽鏈水解位點的保護作用，在溫和條件下反 應(yīng)避免過度水解，使魷魚小肽得率達(dá)40 46%，氨基酸得率達(dá)16 22%，這種魷魚小肽有 降低海水養(yǎng)殖動物幼苗死亡率，提高增重率的作用，可以替代飼料中魚粉等傳統(tǒng)蛋白源，同 時具有一定的生理活性，可以使水產(chǎn)動物的增重率和成活率顯著提高，因此可以用于海水 養(yǎng)殖配合飼料的功能性蛋白源、添加劑等。
具體實施例方式以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對本發(fā)明的限制。實施例中的Bacillus barbaricus SCSIO 02429保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中 心，保藏編號為CCTCC NO =M 2010213 ；所用的魷魚購自廣州市黃沙海產(chǎn)市場，經(jīng)鑒定為北 太平洋魷魚(Ommastr印hes bartrami)，采集內(nèi)臟儲存于_18°C備用。使用前24小時在4°C 下解凍；所用的菠蘿蛋白酶由南寧龐博生物工程有限公司生產(chǎn)，80萬活力單位/g。蛋白胨 Oxide公司生產(chǎn)，酵母膏(Yeast extract)購自碧云天生物技術(shù)研究所。實施例1 在IL水中加入蛋白胨10g，酵母浸膏5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，調(diào)節(jié)pH至7. 0，得
到菌種活化培養(yǎng)基。稱取魷魚內(nèi)臟漿100g，蛋白胨25g，酵母提取物25g，復(fù)合鹽50g，加入去離子水 5000mL,加熱溶解，調(diào)節(jié)pH至7. 0，移入發(fā)酵罐，蒸汽滅菌，得到產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基，其中的復(fù) 合鹽由氯化鈉20. 9g，硫酸鉀8. 3g，氯化鎂8. 3g和氯化銨12. 5g組成。將Bacillus barbaricus SCSIO 02429的菌種轉(zhuǎn)接到菌種活化培養(yǎng)基中，30°C下 培養(yǎng)24h?；罨缶N加入有5L產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在pH = 7. 0，30°C，攪拌速度 100r/min,通氣比0. 2的條件下發(fā)酵24小時，當(dāng)?shù)鞍酌富盍_(dá)2000單位/mL，氨基多糖酶活 力達(dá)0. 95單位/mL時完成發(fā)酵，得到水解用粗酶溶液4. 7L。
蛋白酶活力測定方法按中華人民共和國專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《蛋白酶活力測定法SB/ T10317-1999》方法測定。氨基多糖酶活力單位定義為在60°C，pH 5. 2，反應(yīng)30min，每min形成1 μ mol氨 基葡萄糖所需要的酶量。氨基多糖酶活力測定方法稱取一定量的氨基多糖溶于0. 2mol/ L的醋酸溶液中，用0. 2mol/L的醋酸鈉調(diào)節(jié)pH至5. 2，配成0. 5 %的氨基多糖溶液，吸取 1. 5mL多糖溶液，60°C保溫2min后，加入0. 5mL酶液，搖勻，反應(yīng)30min后，加入3mL鐵氰化 鉀試劑，中止反應(yīng)，用Imoto法測其中還原糖含量，計算氨基多糖的分解速度。稱取5kg切塊魷魚內(nèi)臟，使用勻漿機以2000r/min粉碎lOmin，得約4. 7L糊狀物， 移入裝有產(chǎn)酶發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵罐中，用2. Omol/L的醋酸調(diào)節(jié)溶液pH值到6. 5，將溫度調(diào)至 40°C，攪拌速度lOOr/min，反應(yīng)8小時，得到糖基側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶解物。向糖基側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶酶解產(chǎn)物中加入菠蘿蛋白酶6. 25g，使酶用量達(dá)到 Ig魷魚內(nèi)臟原料約1000活力單位。攪拌均勻后，設(shè)定反應(yīng)溫度為40°C，攪拌速度50轉(zhuǎn)/ 分，調(diào)節(jié)PH值到7. 0，反應(yīng)時間6小時。反應(yīng)完成后，停止攪拌，產(chǎn)物靜置使油水分層，除去 上層粗油后，取樣測定魷魚小肽得率和氨基酸得率，結(jié)果分別為40%和16%。酶解物立即 噴霧干燥，得魷魚小肽粉末853g。采用凝膠色譜法測定小肽得率和氨基酸得率，小肽得率(％ ) = N2Z^N1X 100，氨基 酸得率％= Ν3/Νιχ 100，N1是酶解液中氨基酸態(tài)氮總含量，N2是分子質(zhì)量300 IOOODa肽 類流分中氨基酸態(tài)氮含量(g)，N3是分子質(zhì)量100 250Da流分中氨基酸態(tài)氮的含量(g)。 通過凱氏定氮法測定K。將酶解物脫脂、離心除去不溶物稱重，溶解于0.2mol/L磷酸鈉 緩沖液，載入S印hadexLH 20凝膠柱，使用0. 2mol/L磷酸鈉緩沖液洗脫，依次收集不同保 留體積流分，然后使用凝膠滲透高效液相色譜法測定各流分的分子質(zhì)量分布，合并300 IOOODa分子質(zhì)量范圍內(nèi)流分即為小肽片段，使用凱氏定氮法測定其氨基酸態(tài)氮含量，即為 N2 ；合并100 250Da分子質(zhì)量范圍內(nèi)流分即為游離氨基酸片段，使用凱氏定氮法氨基酸 態(tài)氮含量，即為N3。各流分的分子質(zhì)量分布用凝膠滲透高效液相色譜方法測定，計算公式為 Ve = _b’ lgMw+c’，式中V。為保留體積，Mw為分子質(zhì)量，b’和C’為常數(shù)，用0. 2mol/L磷酸鈉 緩沖液以lmL/min平衡色譜柱(PL aquagel-OH 308um, SEC公司，英國)，至214nm的吸光 度恒定，用藍(lán)色葡聚糖溶液進(jìn)樣測定Vc^死體積)，甘氨酸溶液進(jìn)樣測定Vt (凝膠柱床的總 體積)，用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)混合液進(jìn)樣，流速1. OmL/min,記錄各種標(biāo)準(zhǔn)蛋白的洗脫體積\，繪制 分子量對數(shù)-Ve的工作曲線，求得中常數(shù)b’和c’。直接以Si^phadex LH-20柱色譜分離所 得各流分作為樣品，進(jìn)樣測定保留體積\，根據(jù)公式計算分子質(zhì)量分布范圍。實施例2 在IL水中加入蛋白胨10g，酵母浸膏5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，調(diào)節(jié)pH至7. 0，得
到菌種活化培養(yǎng)基。 稱取魷魚漿150g，蛋白胨25g，酵母提取物25g，復(fù)合鹽50g，加入去離子水5000mL， 加熱溶解，調(diào)節(jié)PH至8. 0，移入發(fā)酵罐，蒸汽滅菌，得到產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基，其中的復(fù)合鹽由氯 化鈉26. 6g，硫酸鉀6. 7g，氯化鎂6. 7g和氯化銨10. Og組成。 將Bacillus barbaricus SCSIO 02429的菌種轉(zhuǎn)接到菌種活化培養(yǎng)基中，37°C下 培養(yǎng)18h?；罨缶N加入有5L產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在pH = 8. 0，37°C，攪拌速度 100r/min,通氣比0. 2的條件下發(fā)酵12小時，當(dāng)?shù)鞍酌富盍_(dá)3000單位/mL，氨基多糖酶活
6力達(dá)1.12單位/mL時完成發(fā)酵，得到水解用粗酶溶液4.孔。蛋白酶活力和氨基多糖酶活 力用實施例1的方法測定。稱取IOkg切塊魷魚內(nèi)臟，使用勻漿機以2000r/min粉碎lOmin，得約9. 4L糊狀物， 移入裝有產(chǎn)酶發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵罐中，用2. Omol/L的醋酸調(diào)節(jié)溶液pH值到7. 0，將溫度調(diào)至 50°C，攪拌速度lOOr/min，反應(yīng)5小時，得到糖基側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶解物。向糖基側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶解物中加入菠蘿蛋白酶18. 15g，使酶用量達(dá)到Ig 魷魚內(nèi)臟原料約1500活力單位。攪拌均勻后，設(shè)定反應(yīng)溫度為35°C，攪拌速度50r/min，調(diào) 節(jié)PH值到6. 5，反應(yīng)時間4小時。反應(yīng)完成后，停止攪拌，產(chǎn)物靜置使油水分層，除去上層粗 油后，取樣測定魷魚小肽得率和氨基酸得率，結(jié)果分別為46%和22%。酶解物立即噴霧干 燥，得魷魚小肽粉末1630g。小肽得率和氨基酸得率按實施例1的方法計算。實施例3 奧尼羅非魚魚苗由廣東柏士聯(lián)羅非魚苗良種場提供，為出膜1天的同一批奧尼羅 非魚仔魚。實驗前先將仔魚放在50升的塑料桶內(nèi)馴養(yǎng)2天，馴養(yǎng)期間不投喂餌料。將奧尼羅非魚魚苗分成1個對照組和4個實驗組，其中對照組所用的飼料配方是 魚粉46%，麥芽根15%，茨粉19%，酵母3%，大豆卵磷脂1%，膽堿0.5%，磷酸氫鈣0.5%， 復(fù)合維生素0.4%，合礦物鹽0.6%，纖維素8 %，豆油1 %，褐藻酸鈉1 %，明膠4%，實驗組1 所用的飼料配方是魚粉41 %，實施例1得到的魷魚小肽5 %，麥芽根15 %，茨粉19 %，酵母 3 %，大豆卵磷脂1 %，膽堿0. 5 %，磷酸氫鈣0.5%，復(fù)合維生素0.4%，復(fù)合礦物鹽0. 6 %，纖 維素8%，豆油1 %，褐藻酸鈉1 %，明膠4%，實驗組2所用的飼料配方是魚粉41 %，實施例 2得到的魷魚小肽5 %，麥芽根15 %，茨粉19 %，酵母3 %，大豆卵磷脂1 %，膽堿0. 5 %，磷酸 氫鈣0.5%，復(fù)合維生素0.4%，復(fù)合礦物鹽0.6%，纖維素8 %，豆油1 %，褐藻酸鈉1 %，明 膠4%，實驗組3所用的飼料配方是魚粉36 %，實施例1得到的魷魚小肽10 %，麥芽根15 %， 茨粉19 %，酵母3 %，大豆卵磷脂1 %，膽堿0. 5 %，磷酸氫鈣0. 5 %，復(fù)合維生素0. 4 %，復(fù) 合礦物鹽0.6%，纖維素8 %，豆油1 %，褐藻酸鈉1 %，明膠4%，實驗組4所用的飼料配方 是魚粉36 %，實施例2得到的魷魚小肽10 %，麥芽根15 %，茨粉19 %，酵母3 %，大豆卵磷 脂1 %，膽堿0.5%，磷酸氫鈣0.5%，復(fù)合維生素0.4%，復(fù)合礦物鹽0.6%，纖維素8 %，豆 油1%，褐藻酸鈉1%，明膠4%。將相應(yīng)的飼料配方在高水分條件下混勻呈漿狀，50°C負(fù)壓 (0. 097mPa)干燥，破碎，過篩，顆粒大小為60 80 μ m,得到的飼料置于20°C冰箱備用。飼養(yǎng)魚苗桶里放置氣石，24h充氣，每天換水50%，吸出桶底廢物，并用恒溫棒控 制溫度為27°C。每天投喂仔魚體重10%的配合餌料3次；實驗周期21天，重復(fù)3次。死亡率和增重率按下面方法計算在實驗開始和結(jié)束時分別測量奧尼羅非魚的體重(精確到0. OOlg)，以及魚苗數(shù)量。死亡率=(實驗開始時魚苗數(shù)量-實驗結(jié)束時魚苗數(shù)量)/實驗開始時育苗數(shù) 量 X 100%絕對增重率=(實驗結(jié)束時魚苗重量(g)-實驗開始時魚苗重量(g)) /實驗天數(shù)結(jié)果是，對照組中魚苗的死亡率是53% 士8%，絕對增中率0.0053士0.0012g/天， 實驗組1中魚苗的死亡率是42% 士 10%，絕對增中率0. 0062 士0. 0005g/天，實驗組2中魚 苗的死亡率是45% 士 10%，絕對增中率0. 0068士0. OOllg/天，實驗組3中魚苗的死亡率是
738% 士2%，絕對增中率0.0075士0.0015g/天，實驗組4中魚苗的死亡率是39% 士6%，絕 對增中率 0. 0069士0. 0012g/ 天。
權(quán)利要求
Bacillus barbaricus SCSIO 02429 CCTCC NOM 2010213。
2.一種魷魚小肽的制備方法，其特征包括以下的步驟(1)將權(quán)利要求1所述的Bacillusbarbaricus SCSIO 02429菌種轉(zhuǎn)接到菌種活化 培養(yǎng)基中，30 37°C下培養(yǎng)18 24h，活化后加入有誘導(dǎo)產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基的容器中，pH = 7. 0 8. 0,30 37°C的條件下發(fā)酵12 24小時，當(dāng)發(fā)酵液蛋白酶活力達(dá)到2000 3000 單位/mL，氨基多糖酶活力達(dá)到0. 95 1. 12單位/mL時，即為糖基水解用粗酶溶液，所 述的誘導(dǎo)產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基由魷魚內(nèi)臟漿，蛋白胨，酵母提取物，復(fù)合鹽和水按質(zhì)量比20 30 5 5 10 1000混合加熱溶解后制得，所述的復(fù)合鹽由氯化鈉，硫酸鉀，氯化鎂和 氯化銨按質(zhì)量比5 8223混合得到；(2)將魷魚內(nèi)臟原料碎成漿狀后與步驟(1)所述的粗酶溶液按體積比1 1 2 1 混合進(jìn)行酶解，反應(yīng)的起始PH值為6. 5 7. 0，溫度為40 50°C，時間5 8小時，得糖基 側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶解物；(3)按魷魚內(nèi)臟原料每克加入菠蘿蛋白酶1000 1500活力單位的比例，將菠蘿蛋白 酶加入步驟(2)得到的粗蛋白酶解物中，pH調(diào)至6. 5 7. 0，在35 40°C下反應(yīng)4 6小 時，得到的酶解物經(jīng)靜置，粗脂肪層和水層分離，除去脂肪層后干燥，得魷魚小肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種魷魚小肽的制備方法，其特征是步驟(3)所述的干燥是 噴霧干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種海洋來源Bacillus barbaricus SCSIO 02429 CCTCC NoM2010213。本發(fā)明還涉及一種魷魚小肽的制備方法，其特征是將Bacillus barbaricus SCSIO 02429加入有誘導(dǎo)產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，得到水解用粗酶溶液，然后將魷魚內(nèi)臟碎成漿狀后加入粗酶溶液進(jìn)行酶解，得到糖基側(cè)鏈被破壞的粗蛋白酶解物，再加入菠蘿蛋白酶進(jìn)行酶解，得到的酶解物經(jīng)靜置，粗脂肪層和水層分離，除去脂肪層后干燥，得魷魚小肽。本發(fā)明的魷魚小肽得率可達(dá)40～46％，氨基酸得率可達(dá)16～22％，這種魷魚小肽有降低海水養(yǎng)殖動物幼苗死亡率，提高增重率的作用，可以替代飼料中魚粉等傳統(tǒng)蛋白源，用于海水養(yǎng)殖配合飼料的功能性蛋白源、添加劑等。
文檔編號C12R1/07GK101974460SQ20101050622
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月28日
發(fā)明者尹浩, 張偲, 田新朋, 羅雄明, 齊振雄 申請人:中國科學(xué)院南海海洋研究所