專利名稱：一種鑒定奶牛乳房炎抗性相關(guān)的分子標(biāo)記檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于檢測試劑盒領(lǐng)域，具體涉及一種奶牛早期乳房炎抗性篩選的分子鑒定 試齊U盒。
背景技術(shù)：
乳房炎是奶牛最常見的疾病之一，在世界范圍內(nèi)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究 者正試圖通過遺傳育種和生物技術(shù)手段來預(yù)防和控制乳房炎。奶牛乳房炎表型性狀主要 有臨床乳房炎(Clinical Mastitis, 00、體細(xì)胞評分(Somatic Cell Score, SCS)和奶 的導(dǎo)電率(Milk Conductivity, MC)等。本研究通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (PCR-SSCP)技術(shù)，對TZS基因的突變位點產(chǎn)生的不同基因型與奶牛奶牛群改良計劃(DHI) 數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，篩選出對奶牛乳房炎有抗性的個體。

發(fā)明內(nèi)容
為解決當(dāng)前奶牛乳房炎抗性早期篩選的難題，本分子檢測試劑盒依據(jù)分子遺傳學(xué) 研究結(jié)果，針對TZS基因特異性突變位點，設(shè)計了特異性引物，采用PCR-SSCP技術(shù)對樣品進(jìn) 行檢測與基因型鑒定。本發(fā)明所說的鑒定奶牛乳房炎抗性相關(guān)的分子標(biāo)記檢測試劑盒，包括一對特異性 引物和PCR-SSCP試劑，所說的特異性引物是
F: 5’ - ACTTGTGTGGGTCTGGTGTAG -3，(SEQ ID NO. 1)， R:5，- AAACCAAGGCGCAGTTCAACAGGCACT -3，( SEQ ID NO. 2)。本分子標(biāo)記試劑盒包含已設(shè)計合成的1對特異性引物，以及與PCR-SSCP技術(shù)相關(guān) 所有試劑。操作時采用PCR-SSCP技術(shù)，根據(jù)相應(yīng)的反應(yīng)條件對采集樣品的DNA進(jìn)行檢測， 利用PCR-SSCP的不同帶型進(jìn)行基因型鑒定。根據(jù)既定的基因型與SCS的顯著相關(guān)性來預(yù) 測樣品牛的乳房炎抗性狀況。KK基因型作為本研究的乳房炎抗性基因型。如果考慮選育乳 房炎抗性牛群，應(yīng)選留KK基因型。本試劑盒可用于奶牛乳房炎抗性的早期篩選，經(jīng)600余頭奶牛的初步試用，奶牛 基因型與SCS水平吻合率高達(dá)86%以上。自血樣送檢起2日內(nèi)可獲得結(jié)果，每10份樣品檢 測成本僅需200元，若大批量檢測，成本更低。推廣后可以減少因乳房炎引起的經(jīng)濟(jì)損失 1500元/頭以上，有著巨大的市場推廣價值。


圖1 IL8基因的擴(kuò)增片段的SSCP電泳圖譜。圖2突變位點的測序結(jié)果。
具體實施例方式本分子檢測試劑盒包含有已設(shè)計合成的1對特異性引物(F: 5’ -
權(quán)利要求
一種鑒定奶牛乳房炎抗性相關(guān)的分子標(biāo)記檢測試劑盒，包括特異性引物和PCR SSCP試劑，其特征在于，所說的特異性引物是F: 5’ ACTTGTGTGGGTCTGGTGTAG 3’, R:5’ AAACCAAGGCGCAGTTCAACAGGCACT 3’。
全文摘要
本發(fā)明屬于檢測試劑盒領(lǐng)域，具體涉及一種奶牛早期乳房炎抗性篩選的分子鑒定試劑盒。該試劑盒包括特異性引物和PCR-SSCP試劑，所說的特異性引物序列如SEQIDNO.1和2所示。本試劑盒可用于奶牛乳房炎抗性的早期篩選，經(jīng)600余頭奶牛的初步試用，奶牛基因型與SCS水平吻合率高達(dá)86%以上，檢測快，成本低。
文檔編號C12N15/11GK101942522SQ20101050684
公開日2011年1月12日 申請日期2010年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月14日
發(fā)明者冀德君, 常玲玲, 楊章平, 毛永江, 陳仁金, 陳瑩 申請人:揚州大學(xué)