專利名稱：表皮生長因子受體的外顯子缺失變異體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及新的編碼人表皮生長因子受體變異體 de4EGFR(Epidermal growth factor receptor with Exon 4deletion， de4EGFR)的多核苷酸，以及此多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。
背景技術(shù)：
表皮生長因子受體(EGFR)是原癌基因c-erb B的170千道爾頓(Kilodalton)膜糖蛋白產(chǎn)物。EGFR基因是最初在鳥類紅細(xì)胞增多癥病毒中識(shí)別的erb B致癌基因的細(xì)胞同系物⑴。已在各種人類腫瘤中觀察到這種致癌基因通過基因放大的活化β_8)。已有文獻(xiàn)表明，EGFR在多種類型的人類實(shí)體瘤中過表達(dá)⑼。這些腫瘤包括肺癌、 結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌、腦癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤、卵巢癌、腎癌和前列腺癌⑼。v-erbB致癌基因和正常EGFR基因之間的一個(gè)主要區(qū)別在于病毒致癌基因是正常受體截?cái)喟被淖冃?；它們?nèi)鄙俅蟛糠旨?xì)胞質(zhì)外結(jié)構(gòu)域，但保留了跨膜和酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域(1°)。這導(dǎo)致了它不能結(jié)合表皮生長因子(EGF)，但仍可以磷酸化其它蛋白質(zhì)(11’12)。各種基因變化都可以發(fā)生于病毒性erb B致癌基因中，例如，基因的羧基末端中發(fā)生氨基酸的取代和缺失。其中氨基端缺失對于致癌作用尤為關(guān)鍵。氨基端缺失是大多 v-erb B致癌基因的一個(gè)特征，包括由啟動(dòng)子的插入或逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)引起的那些氨基端缺失。相反，羧基末端缺失似乎只與逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)引起的腫瘤有關(guān)，而且似乎決定于宿主范圍和腫瘤類型的特異性。以氨基端缺失的鳥類c-erb B基因或人EGF受體的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明該缺失可以使細(xì)胞轉(zhuǎn)化(1S。EGFR基因的放大發(fā)生于40-50%的惡性人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤中(14_16)，受體基因的重排在許多具有基因放大的腫瘤中較為明顯。重排似乎更多地影響基因的氨基末端(17_2(1)。迄今已發(fā)現(xiàn)至少有八種EGFR變體1) EGFRvI缺少EGFR的大部分細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。 2)EGFRvII由EGFR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的83aa框內(nèi)缺失組成。3)EGFRvIII由EGFR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的267aa框內(nèi)缺失組成。4)EGFRvIV含有EGFR的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中的缺失。5) EGFRvV含有EGFR的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中的缺失。6)EGFR. TDM/2-7含有EGFR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的外顯子2-7的重復(fù)。7)EGFR. TDM/18-26含有EGFR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的外顯子1846 的重復(fù)。8)另外，存在第二種更為罕見的具有在外顯子11和14之間的連接點(diǎn)引入新穎組氨酸殘基的缺失的EGFRvIII突變體(EGFRvIII/Δ 12-13)(21)(圖1)。EGFRvIII是在人類癌癥中表皮生長因子(EGF)受體最常見發(fā)生的變體。在基因放大的過程中，在胞外區(qū)發(fā)生267個(gè)氨基酸缺失，產(chǎn)生新的連接點(diǎn)(甘氨酸)。已知 EGFRvIII未表達(dá)于任何正常組織(22)。然而，EGFRvIII在許多腫瘤細(xì)胞中有表達(dá)，例如，78% 的乳腺癌組織，50-70%神經(jīng)膠質(zhì)瘤，16%非小細(xì)胞肺癌以及73%卵巢癌表達(dá)EGFRvIIIte)； 此外，發(fā)明者所在實(shí)驗(yàn)室在最近也發(fā)現(xiàn)了肝癌中有EGFRvIII的存在(23’24)。然而，迄今為止，人們對于癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移的原因和機(jī)理的了解還不夠深入，因此本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)與癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的、與癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的表皮生長因子受體變異體de4EGFR多肽以及其片段、類似物和衍生物。本發(fā)明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。本發(fā)明的另一目的是提供生產(chǎn)這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。在本發(fā)明的第一方面，提供新穎的、分離出的de4EGFR多肽，它包括具有SEQ ID NO 2氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。較佳地，該多肽選自下組(a)具有SEQ ID NO 2氨基酸序列的多肽；(b)將SEQ ID NO 2氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)(較佳地1_10個(gè))氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和/或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移功能的由(a)衍生的多肽；(c)與SEQ ID NO 2氨基酸序列有彡95%同源性，且具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移功能的由(a)衍生的多肽。更佳地，該多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。該de4EGFR突變體缺失了表皮生長因子受體的第四外顯子并且在交界處 (Junction)產(chǎn)生了一個(gè)新的氨基酸(甘氨酸)。在本發(fā)明的第二方面，提供編碼分離的這些多肽的多核苷酸，該多核苷酸包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少80% (較佳地至少90%， 更佳地至少95%，最佳地至少98% )相同性(a)編碼上述人de4EGFR多肽的多核苷酸；和 (b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼具有SEQ ID NO 2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO 1中 1-3495位的序列；(b)具有SEQ ID NO :1中1-3498位的序列。在本發(fā)明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞或者被上述多核苷酸直接轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。較佳地，所述的遺傳工程化的宿主細(xì)胞含有所述的載體或染色體中整合有第二方面中所述的多核苷酸。在本發(fā)明的第四方面，提供了制備具有人de4EGFR蛋白活性的多肽的方法，該方法包含(a)在適合表達(dá)人de4EGFR蛋白的條件下，培養(yǎng)上述被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b) 從培養(yǎng)物中分離出具有人de4EGFR蛋白活性的多肽。在本發(fā)明的第五方面，提供了與上述的人de4EGFR多肽特異性結(jié)合的抗體。在本發(fā)明的第六方面，提供了模擬、促進(jìn)、拮抗人de4EGFR多肽活性的化合物，以及抑制人de4EGFR多肽的表達(dá)的化合物。還提供了篩選和/或制備這些化合物的方法。較佳地，該化合物是人de4EGFR多肽的編碼序列或其片段的反義序列。在本發(fā)明的第七方面，提供了檢測(尤其是非診斷地體外檢測)樣品中是否存在 de4EGFR蛋白的方法，它包括將樣品與de4EGFR蛋白的特異性抗體接觸，觀察是否形成抗體復(fù)合物，形成了抗體復(fù)合物就表示樣品中存在de4EGFR蛋白。在本發(fā)明的第八方面，提供了一種檢測與人de4EGFR多肽異常表達(dá)相關(guān)的疾病或疾病易感性(如腫瘤易感性)的方法，該方法包括檢測編碼所述多肽的核酸序列中是否存在突變。在本發(fā)明的第九方面，提供了本發(fā)明多肽和編碼序列的用途。例如本發(fā)明多肽可被用于篩選促進(jìn)人de4EGFR多肽活性的激動(dòng)劑，或者篩選抑制人de4EGFR多肽活性的拮抗劑、或者被用于肽指紋圖譜鑒定。本發(fā)明的人de4EGFR蛋白的編碼序列或其片段，可被作為引物用于PCR擴(kuò)增反應(yīng)，或者作為探針用于雜交反應(yīng)，或者用于制造基因芯片或微陣列。在本發(fā)明的第十方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明的人 de4EGFR多肽的拮抗劑以及藥學(xué)上可接受的載體。這些藥物組合物可治療乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤等病癥。在另一優(yōu)選例中，所述的拮抗劑是特異性結(jié)合于de4EGFR多肽且不結(jié)合于人表皮生長因子受體的抗體。在本發(fā)明的第十一方面，提供了一種確定測試化合物是否是de4EGFR多肽的拮抗劑或激動(dòng)劑的方法，其特征在于，包括步驟(a)將測試化合物加入體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)體系作為測試組；并將體外培養(yǎng)的相同的腫瘤細(xì)胞作為對照組，其中所述的腫瘤細(xì)胞來自于哺乳動(dòng)物，并且表達(dá)本發(fā)明的de4EGFR多肽；(b)觀察測試組和對照組中腫瘤細(xì)胞的遷移/侵襲程度，如果測試組的腫瘤細(xì)胞的遷移/侵襲程度大于對照組，則表示測試化合物是de4EGFR多肽的激動(dòng)劑；如果測試組的腫瘤細(xì)胞的遷移/侵襲程度小于對照組，則表示測試化合物是de4EGFR多肽的拮抗劑。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤細(xì)胞來自于人。本發(fā)明的其它方面由于本文的技術(shù)的公開，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。


下列附圖用于說明本發(fā)明的具體實(shí)施方案，而不用于限定由權(quán)利要求書所界定的本發(fā)明范圍。圖1顯示了野生型EGFR及其各種突變體，圖中eXOn(S)表示外顯子；C_tail表示 C末端。圖2顯示了 de4-EGFR的電泳圖，圖中各泳道如下1. 7402 ；2. 7405 ；3. 7703 ； 4. HepG3B ；5. SK0V3 ；6. 7404。圖3顯示了部分卵巢癌組織中存在de4_EGFR。圖中，泳道1_9為不同的卵巢癌組
幺口
/Ν ο圖4顯示了部分肝癌組織中存在de4_EGFR。圖5顯示了部分腦膠質(zhì)瘤組織中存在de4_EGFR。圖6顯示了前列腺組織中de4_EGFR的表達(dá)情況。圖中，泳道1_11為不同的前列腺癌組織標(biāo)本。圖7顯示了 de4EGFR在不同的腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況。圖8顯示了 de4EGFR的長鏈擴(kuò)增結(jié)果。各泳道如下1. Hela ；2肝癌組織K416。圖9顯示了正常組織中EGFRwt mRNA水平的檢測結(jié)果。各泳道如下1 腦；2 結(jié)
5腸；3 腎；4 肝；5 肺；6 卵巢；7 胰腺；8 胎盤；9 脾；10 胃。圖10顯示了通過Western Bl ot檢測NIH3T3相關(guān)細(xì)胞模型的建立。圖中泳道如下1. NIH3T3GFP ；2.NIH3T3EGFRwt ；3. NIH3T3de4EGFR。圖11顯示了通過Western Blot檢測U87相關(guān)細(xì)胞模型的建立。圖中泳道如下 1.U87MG GFP ；2.U87MG EGFRwt ；3.U87MG de4EGFR。圖12顯示了 EGFR及其突變體可促進(jìn)細(xì)胞的增殖。圖13顯示了 EGFR及其突變體可促進(jìn)細(xì)胞的遷移。圖14顯示了 EGFR及其突變體在體內(nèi)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。圖15顯示了 EGFR及其突變體在體內(nèi)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。圖16顯示了 de4EGFR可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的多發(fā)轉(zhuǎn)移。圖17顯示了體外實(shí)驗(yàn)中，抗體CH12和C225對于U87MG de4EGFR細(xì)胞生長的抑制作用。圖18顯示了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，抗體CH12和C225對于U87MG de4EGFR細(xì)胞生長的抑制作用。圖19顯示了 CH12和C225對于U87MG de4EGFR體內(nèi)治療后的瘤重及抑制率分析。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)并分離了一種新的EGFR外顯子缺失變異體(de4EGFR)，它有如下幾個(gè)特征1)在表皮生長因子受體的胞外區(qū)缺失了第四外顯子，并在交界處產(chǎn)生了一個(gè)新的氨基酸(甘氨酸)。2)它在多種正常組織中不存在，但在某些腫瘤組織中存在。3)該變異體在體外能夠明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲，遷移。4)該變異體在體內(nèi)能夠明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。在本發(fā)明中，術(shù)語“de4EGFR蛋白”、“de4EGFR多肽”或“表皮生長因子受體(缺失) 變異體de4EGFR”可互換使用，都指具有人表皮生長因子受體變異體de4EGFR氨基酸序列 (SEQ ID NO 2)的蛋白或多肽。它們包括含有或不含起始甲硫氨酸的表皮生長因子受體變異體 de4EGFR。如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。如本文所用，“分離的de4EGFR蛋白或多肽”是指de4EGFR多肽基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化de4EGFR蛋白?；旧霞兊亩嚯脑诜沁€原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。 de4EGFR多肽的純度能用氨基酸序列分析。本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細(xì)菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中產(chǎn)生。根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主， 本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括人de4EGFR蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用，術(shù)語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本發(fā)明的天然人de4EGFR蛋白相同的生物學(xué)功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(i)有一個(gè)或多個(gè)保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(ii)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中具有取代基團(tuán)的多肽，或(iii)成熟多肽與另一個(gè)化合物(比如延長多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇) 融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列，或與抗原IgG片段的形成的融合蛋白)。根據(jù)本文的教導(dǎo)，這些片段、衍生物和類似物屬于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的范圍。在本發(fā)明中，術(shù)語“人de4EGFR多肽”指具有人de4EGFR蛋白活性的SEQID NO 2 序列的多肽。該術(shù)語還包括具有與人de4EGFR蛋白相同功能的、SEQ IDNO :2序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)一個(gè)或多個(gè)(通常為1-50個(gè)，較佳地1-30個(gè)，更佳地1-20個(gè)，最佳地1-10個(gè))氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)(通常為20個(gè)以內(nèi)，較佳地為10個(gè)以內(nèi)，更佳地為5個(gè)以內(nèi))氨基酸。例如，在本領(lǐng)域中，用性能相近或相似的氨基酸進(jìn)行取代時(shí)，通常不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸通常也不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能。該術(shù)語還包括人de4EGFR蛋白的活性片段和活性衍生物。該多肽的變異形式包括同源序列、保守性變異體、等位變異體、天然突變體、誘導(dǎo)突變體、在高或低的嚴(yán)緊度條件下能與人de4EGFR DNA雜交的DNA所編碼的蛋白、以及利用抗人de4EGFR多肽的抗血清獲得的多肽或蛋白。本發(fā)明還提供了其他多肽，如包含人 de4EGFR多肽或其片段的融合蛋白。除了幾乎全長的多肽外，本發(fā)明還包括了人de4EGFR多肽的可溶性片段。通常，該片段具有人de4EGFR多肽序列的至少約10個(gè)連續(xù)氨基酸，通常至少約30個(gè)連續(xù)氨基酸，較佳地至少約50個(gè)連續(xù)氨基酸，更佳地至少約80個(gè)連續(xù)氨基酸， 最佳地至少約100個(gè)連續(xù)氨基酸。應(yīng)理解，本發(fā)明多肽的變異形式不包括本領(lǐng)域中已知的如圖1中所示的野生型EGFR及其突變體。發(fā)明還提供人de4EGFR蛋白或多肽的類似物。這些類似物與天然人de4EGFR多肽的差別可以是氨基酸序列上的差異，也可以是不影響序列的修飾形式上的差異，或者兼而有之。這些多肽包括天然或誘導(dǎo)的遺傳變異體。誘導(dǎo)變異體可以通過各種技術(shù)得到，如通過輻射或暴露于誘變劑而產(chǎn)生隨機(jī)誘變，還可通過定點(diǎn)誘變法或其他已知分子生物學(xué)的技術(shù)。類似物還包括具有不同于天然L-氨基酸的殘基(如D-氨基酸)的類似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、Y-氨基酸)的類似物。應(yīng)理解，本發(fā)明的多肽并不限于上述例舉的代表性的多肽。修飾(通常不改變一級(jí)結(jié)構(gòu))形式包括體內(nèi)或體外的多肽的化學(xué)衍生形式如乙酰化或羧基化。修飾還包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或進(jìn)一步加工步驟中進(jìn)行糖基化修飾而產(chǎn)生的多肽。這種修飾可以通過將多肽暴露于進(jìn)行糖基化的酶(如哺乳動(dòng)物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修飾形式還包括具有磷酸化氨基酸殘基(如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸，磷酸蘇氨酸)的序列。還包括被修飾從而提高了其抗蛋白水解性能或優(yōu)化了溶解性能的多肽。在本發(fā)明中，“人de4EGFR蛋白保守性變異多肽”指與SEQ ID NO 2的氨基酸序列相比，有至多10個(gè)，較佳地至多8個(gè)，更佳地至多5個(gè)，最佳地至多3個(gè)氨基酸被性質(zhì)相似或相近的氨基酸所替換而形成多肽。這些保守性變異多肽最好根據(jù)表1進(jìn)行氨基酸替換而產(chǎn)生。表 權(quán)利要求
1.一種分離的人表皮生長因子受體變異體de4EGFR多肽，其特征在于，該多肽選自下組(a)具有SEQID NO 2氨基酸序列的多肽；(b)將SEQID NO :2氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移功能的由(a)衍生的多肽；(c)與SEQID NO :2氨基酸序列有彡95%同源性，且具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移功能的由(a)衍生的多肽。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，該多肽的氨基酸序列如SEQID N0:2所示。
3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列選自下組(a)編碼如權(quán)利要求1所述多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。
4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼氨基酸序列如SEQID NO: 2所示的多肽更佳地，該多核苷酸的序列選自下組 ⑴具有SEQ ID NO :1中1-3495位的序列； (ii)具有SEQ ID NO :1中1-3498位的序列。
5.一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
6.一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它含有權(quán)利要求5所述的載體或染色體中整合有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
7.一種多肽的制備方法，其特征在于，該方法包含(a)在適合表達(dá)的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求6所述的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出人de4EGFR多肽。
8.一種能與權(quán)利要求1所述的人de4EGFR多肽特異性結(jié)合且不結(jié)合于人表皮生長因子受體的抗體。
9.一種藥物組合物，其特征在于，它含有安全有效量的權(quán)利要求1所述的多肽的拮抗劑以及藥學(xué)上可接受的載體。
10.一種確定測試化合物是否是de4EGFR多肽的拮抗劑或激動(dòng)劑的方法，其特征在于， 包括步驟(a)將測試化合物加入體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)體系作為測試組；并將體外培養(yǎng)的相同的腫瘤細(xì)胞作為對照組，其中所述的腫瘤細(xì)胞來自于哺乳動(dòng)物，并且表達(dá)權(quán)利要求1所述的de4EGFR多肽；(b)觀察測試組和對照組中腫瘤細(xì)胞的遷移/侵襲程度，如果測試組的腫瘤細(xì)胞的遷移/侵襲程度大于對照組，則表示測試化合物是de4EGFR多肽的激動(dòng)劑；如果測試組的腫瘤細(xì)胞的遷移/侵襲程度小于對照組，則表示測試化合物是de4EGFR多肽的拮抗劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及表皮生長因子受體的外顯子缺失變異體。具體地，本發(fā)明提供了一種新的表皮生長因子受體變異體-de4EGFR蛋白，編碼de4EGFR蛋白的多核苷酸和經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生這種de4EGFR蛋白的方法。本發(fā)明還公開了編碼這種de4EGFR蛋白的多核苷酸的用途。de4EGFR蛋白具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲/遷移功能。
文檔編號(hào)C12N15/12GK102443056SQ20101051005
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月15日
發(fā)明者周敏, 李宗海, 楊勝利, 王海, 王紅陽, 石必枝, 顧健人 申請人:上海市腫瘤研究所