專利名稱：從咖啡果中分離2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸的工業(yè)化方法
技術領域：
本發(fā)明屬于食品添加劑中的2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸，特別是涉及一種具有抑 制甜味、從咖啡果中分離2- -甲氧基苯氧基)_丙酸的方法，產品純度高達99. 9%以上， 2-(4-甲氧基苯氧基)_丙酸可作為新型食品添加劑應用于月餅、糖果、蜜餞等高糖食品中 用以抑制過高的甜味。
背景技術：
甜味抑制劑是通過阻塞甜度和味覺的受體，從而控制或降低含糖食品的甜度的一 類新型添加劑。國內很多傳統(tǒng)食品，如蜜餞、月餅、巧克力等，都是以蔗糖作為防腐劑的，在 達到防腐的同時，不同程度的存在著過甜的問題。而使用了甜味抑制劑后，既能發(fā)揮蔗糖的 防腐、改善質構等功能，又不會使食品過甜而影響口感。因此甜味抑制劑的應用前景十分廣 泛。我們在中國發(fā)明專利ZL200510101321. 1已報道過一種天然甜味抑制劑三萜烯糖 苷的工業(yè)化生產方法。它是從森林匙羹藤酸(Glymnemic acid)、Hodulcin (存在于鼠李科 植物Hoveniadulcis Thumb.的葉子中)及某些棗屬植物(如大棗、酸棗)葉、種子、果實中 分離出來的。本專利報道的2-(4-甲氧基苯氧基)_丙酸是另一種對蔗糖、葡萄糖及其他所有甜 味物質都有效的甜味抑制劑。目前，國內外生產2- -甲氧基苯氧基)_丙酸主要采用化學 合成法，該過程易產生有毒副產物及有毒化學異構體，給食品安全造成隱患。已知2- -甲 氧基苯氧基)-丙酸天然存在于咖啡豆中，但天然咖啡豆中的2- (4-甲氧基苯氧基)-丙酸 含量僅為0. 55 1. ang/kg，顯然沒有經濟價值。世界上第一株咖啡樹是在非洲之角發(fā)現(xiàn)的，咖啡的種植始于15世紀。它在植物分 類學中屬于茜草科常綠灌木，側枝水平伸展，對生，偶有三枝輪生者；單葉對生，花是2 10 朵叢生于葉腋。果實是核果橢圓形，初果為深綠色，成熟時黃紅色或紫紅色，咖啡的果實是 由外皮、果肉、內果皮、銀皮，和被上述幾層包在最里面的種子(咖啡豆)所形成，種子位于 果實中心部份。到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)以咖啡果實為原料，生產出具有抗甜活性的2- -甲氧基 苯氧基)_丙酸的專利文獻報道。本發(fā)明中采用溶劑提取和大孔樹脂純化相結合的方法，制 得高純度的天然2- -甲氧基苯氧基)_丙酸提取物。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于針對上述問題，利用植物細胞培養(yǎng)技術，通過咖 啡豆細胞懸浮培養(yǎng)法生產2- (4-甲氧基苯氧基)-丙酸，具有生產周期短，產率高，成本低等 特點。本發(fā)明涉及一種抑制甜味、天然高純度2- (4-甲氧基苯氧基)-丙酸的工業(yè)化生產 方法。該提取物中抗甜活性的2- -甲氧基苯氧基)-丙酸含量達99.9%以上。制成的產品可用于抑制某些食品如糖果、蜜餞、月餅等過高的甜度。本發(fā)明的目的通過如下技術方案實現(xiàn)從咖啡果中分離2- -甲氧基苯氧基)_丙酸的方法，包括如下步驟(1)選擇咖啡子葉作為外植體，誘導愈傷組織產生咖啡子葉經過消毒，接種于添 加1 lOymol/L 2，4-二氯苯氧乙酸作為生長素和0.4 0.5 μ mol/L 6-呋喃甲基腺嘌呤 作為細胞分裂素的MS基礎培養(yǎng)基上，溫度為25 30°C，培養(yǎng)3 5周，產生愈傷組織，愈傷 組織經過繼代培養(yǎng)后，挑選優(yōu)選質地松散、顏色黃白、表面濕潤的顆粒狀愈傷組織，生長良 好的愈傷組織培養(yǎng)形成細胞懸浮培養(yǎng)體系，用Co6°r射線以4000r、7000r、10000r、15000r、 20000r和25000r五個不同輻射劑量進行輻射處理，篩選出2- -甲氧基苯氧基)_丙酸 含量高的培養(yǎng)物，分離出原生質，近一步培養(yǎng)獲得完整植株，獲得遺傳性穩(wěn)定一致的突變咖 啡種苗品種1 ；該品種咖啡果實中的2-4-(甲氧基苯氧基)_丙酸平均含量達到0. 2% 0. 8% ；(2)將經過步驟⑴原生質誘變育種的咖啡樹所結的咖啡果實干燥、粉碎，過60 80目篩，用重量濃度為60% 95%的乙醇回流提取2 5次，每次回流1 4h ；濾去濾渣， 提取液真空濃縮至不含乙醇，用60°C 90°C熱水溶解后溶劑萃取2 5次；所述的溶劑為 石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、環(huán)己烷、氯仿和/或二氯甲烷；(3)水層用水飽和的正丁醇萃取2 5次，合并萃取液，減壓濃縮并干燥得 2-(4-甲氧基苯氧基)丙酸粗提物；(4)將粗提物用60°C 90°C熱水溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用2 5倍柱體積 的水洗，棄去洗脫液，再用2 5倍柱體積的重量濃度為10% 40%的乙醇洗脫，棄去洗脫 液，最后用2 5倍柱體積的質量濃度為40% 80%的乙醇洗脫，收集洗脫液；(5)減壓回收乙醇，真空干燥或噴霧干燥得2- -甲氧基苯氧基)_丙酸精提物；(6)精提物在pH = 2-6的酸性條件下進行2 3次重結晶，制得2- -甲氧基苯 氧基)_丙酸。所述的咖啡果實包括外皮、果肉、內果皮、銀皮和咖啡豆。愈傷組織繼代培養(yǎng)方法是優(yōu)選生長良好，祛除發(fā)黃的愈傷組織，接種于與愈傷組 織誘導相同的培養(yǎng)基中，溫度為25 30°C，暗培2 3周，期間更換培養(yǎng)基1 3次。所述細胞懸浮培養(yǎng)體系的形成是在愈傷組織繼代培養(yǎng)后，將篩選出的愈傷組織放 入與愈傷組織誘導相同的液體培養(yǎng)基中，溫度為25 30°C，轉速為120r/min，暗培養(yǎng)8 12天，培養(yǎng)出懸浮單細胞系。大孔吸附樹脂包括ZTC-I、XAD-4、AB-8、X_5、D-10U D-16、DA-201、S_8、H-103、 NK-107、CAD-40和SIP系列各種規(guī)格和型號大孔吸附樹脂。本發(fā)明涉及的抗甜活性的2- -甲氧基苯氧基)_丙酸的生產工藝如下(1)將植物原料干燥、粉碎，過60 80目篩，用60% 95%的乙醇回流提取2 5次，每次回流1 4h;(2)濾去濾渣，提取液真空濃縮至無醇味，用熱水溶解后溶劑萃取2 5次；(3)水層用水飽和的正丁醇萃取2 5次，合并萃取液，減壓濃縮并干燥得 2-(4-甲氧基苯氧基)丙酸粗提物；(4)將粗提物用熱水溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用2 5倍柱體積的水洗，棄去洗脫液，再用2 5倍柱體積的10% 40%的乙醇洗脫，棄去洗脫液，最后用2 5倍柱體積 的40 % 80 %的乙醇洗脫，收集40 % 80 %乙醇洗脫液；(5)減壓回收乙醇，真空干燥或噴霧干燥得244-甲氧基苯氧基)丙酸精提物。(6)精提物在pH = 2-6的酸性條件下進行3次重結晶。所使用的原料包括經特別育種的咖啡屬植物的葉、種子、果實各個部位?；亓魈崛?劑乙醇的優(yōu)選濃度為90%，優(yōu)選提取次數(shù)為3次，每次池。熱水溶解后萃取劑是石油醚、乙 醚、乙酸乙酯、正己烷、環(huán)己烷、氯仿、二氯甲烷或它們的復合物(如石油醚/乙酸乙酯、乙醚 /乙酸乙酯)，優(yōu)選萃取次數(shù)為3次。水飽和的正丁醇的優(yōu)選萃取次數(shù)為萃取3次。采用 的大孔吸附樹脂，包括 ZTC-I，XAD-4, AB-8, X_5，D-101，D-16，DA-201，S_8，H-103，NK-107， CAD-40, SIP系列等各種規(guī)格和型號，優(yōu)選的型號為X-5，D-101, AB-8。上大孔吸附樹脂柱 時，先用4倍柱體積的水洗，再用3倍柱體積的20% 30%的乙醇洗脫，最后用3倍柱體積 的70% 80%的乙醇洗脫。制得的2- -甲氧基苯氧基)丙酸精提物，其特征為白色至淺 黃色，粉末狀，甜味，總得率0. 0.5%，純度80% 85%。精提物在pH = 2-6的酸性 條件下進行3次重結晶，純度提高至99. 9%。本發(fā)明的甜味抑制試驗顯示該提取物具有很 好的抗甜活性，比文獻報道的效果要好。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點1、生產成本較低。育種后咖啡果實中的2-4-(甲氧基苯氧基)_丙酸平均含量達 到0. 2% 0. 8 %，含量較自然咖啡果中的含量高很多，具備工業(yè)化生產的經濟價值；2、提取工藝簡單。采用此提取工藝步驟少，提取過程中有效成分損失少，提取過程 所用的有機溶劑，可以收集循環(huán)使用，不存在副產物污染環(huán)境問題。具體實施方法下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但是實施例并不構成對本發(fā)明要求保 護范圍的限制。實施例1采用原生質誘變育種2- -甲氧基苯氧基)_丙酸含量高的咖啡種苗。首先選 擇咖啡子葉作為外植體，誘導愈傷組織產生，具體工藝為咖啡子葉經過消毒，接種于添加 1 μ mol/L 2，4_ 二氯苯氧乙酸作為生長素和0. 5 μ mol/L 6-呋喃甲基腺嘌呤作為細胞分裂 素的MS基礎培養(yǎng)基上(以在培養(yǎng)基中的濃度計，MS基礎培養(yǎng)基成分組成為(單位mg/L) KNO3 1900, NH4NO3 1650, K2HPO4 170，MgSO4 ·7Η20 370，CaCl2 ·2Η20 440, KI 0. 83, H3BO3 6.2， MnSO4 · 4Η20 22. 3，ZnS04 · 7H20 8. 6，NaMoO4 · 2H20 0. 25，CuS04 · 5H20 0. 025，CoCl2 · 6H20 0. 025，Na2 .EDTA 37. 3，F(xiàn)eSO4 ·7Η20 27. 8，蔗糖 30000，肌醇 100，鹽酸 0. 5，鹽酸吡哆醇 0. 5， 鹽酸硫胺素0. 4，甘氨酸幻，溫度為^°C，培養(yǎng)4周，產生愈傷組織，愈傷組織經過繼代培養(yǎng) 后(具體工藝為優(yōu)選生長良好，祛除發(fā)黃的愈傷組織，接種于與愈傷組織誘導相同的培養(yǎng) 基中，溫度為，暗培3周，期間更換培養(yǎng)基1次)，挑選優(yōu)選質地松散、顏色黃白、表面濕 潤的顆粒狀愈傷組織，生長良好的愈傷組織培養(yǎng)形成細胞懸浮培養(yǎng)體系(具體工藝為將 篩選出的愈傷組織放入與愈傷組織誘導相同的液體培養(yǎng)基中，溫度為^°C，轉速為120r/ min,暗培養(yǎng)10天，培養(yǎng)出懸浮單細胞系)，用Co6°r射線以不同輻射劑量4000r，7000r, IOOOOr, 15000r, 20000r, 25000r五個劑量進行輻射處理，篩選出2- (4-甲氧基苯氧基)-丙 酸含量高的培養(yǎng)物，分離出原生質，近一步培養(yǎng)獲得完整植株，從而獲得遺傳性穩(wěn)定一致的
5突變咖啡種苗品種PK。經測試，該品種咖啡果實中的2-4-(甲氧基苯氧基)_丙酸平均含量 達到0. 2% 0. 8%，已達到工業(yè)化分離的經濟要求。取1 品種的咖啡豆粗粉500kg，用90%的乙醇回流提取3次，每次回流池。濾去 濾渣，提取液真空濃縮至無醇味；用70°C熱水溶解后經乙醚萃取3次，所得水層再用水飽和 的正丁醇萃取3次，合并萃取液，減壓濃縮并干燥得粗提物；將其用70°C熱水溶解，上D-101 型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的水洗，再用3倍柱體積20%質量濃度的乙醇洗脫，棄 去洗液，最后用3倍柱體積80%質量濃度的乙醇洗脫，收集80%質量濃度的乙醇洗脫液，減 壓回收乙醇，真空干燥得2-(4-甲氧基苯氧基)丙酸精提物2. ^ig。精提物再在pH3，15°C的 酸性條件重結晶3次，得到2- -甲氧基苯氧基)丙酸結晶物1. 9kg。全過程得率0. 38%, 終產品為白色粉末，純度99. 9 %。實施例2采用原生質誘變育種2- -甲氧基苯氧基)_丙酸含量高的咖啡種苗。首先選 擇咖啡子葉作為外植體，誘導愈傷組織產生，具體工藝為咖啡子葉經過消毒，接種于添加 5umol/L 2，4-二氯苯氧乙酸作為生長素和0.4 μ mol/L 6-呋喃甲基腺嘌呤作為細胞分裂 素的MS基礎培養(yǎng)基(以在培養(yǎng)基中的濃度計，MS基礎培養(yǎng)基成分組成為(單位mg/L) KNO3 1900, NH4NO3 1650, K2HPO4 170，MgSO4 ·7Η20 370，CaCl2 ·2Η20 440, KI 0. 83, H3BO3 6.2， MnSO4 · 4Η20 22. 3，ZnS04 · 7H20 8. 6，NaMoO4 · 2H20 0. 25，CuS04 · 5H20 0. 025，CoCl2 · 6H20 0. 025，Na2 · EDTA 37. 3，F(xiàn)eSO4 · 7H20 27. 8，蔗糖 30000，肌醇 100，鹽酸 0. 5，鹽酸吡哆醇 0. 5，鹽酸硫胺素0.4，甘氨酸幻上，溫度為25°C，培養(yǎng)6周，產生愈傷組織。愈傷組織經過 繼代培養(yǎng)后(具體工藝為優(yōu)選生長良好，祛除發(fā)黃的愈傷組織，接種于與愈傷組織誘導相 同的培養(yǎng)基中，溫度為25°C，暗培3周，期間更換培養(yǎng)基2次)，挑選優(yōu)選質地松散、顏色黃 白、表面濕潤的顆粒狀愈傷組織，生長良好的愈傷組織培養(yǎng)形成細胞懸浮培養(yǎng)體系(具體 工藝為將篩選出的愈傷組織放入與愈傷組織誘導相同的液體培養(yǎng)基中，溫度為25V，轉 速為120r/min，暗培養(yǎng)12天，培養(yǎng)出懸浮單細胞系)，用Co6°r射線以不同輻射劑量4000r， 7000r, IOOOOr, 15000r, 20000r, 25000r五個劑量進行輻射處理，篩選出2- -甲氧基苯氧 基)_丙酸含量高的培養(yǎng)物，分離出原生質，近一步培養(yǎng)獲得完整植株，從而獲得遺傳性穩(wěn) 定一致的突變咖啡種苗品種Hi。該品種咖啡果實中的2-4-(甲氧基苯氧基)_丙酸平均含 量達到0. 2% 0. 8%，已達到工業(yè)化分離的經濟要求。取1 品種的咖啡果外層果肉粉500kg，用85%的乙醇回流提取2次，每次回流2h。 濾去濾渣，提取液真空濃縮至無醇味；用80°C熱水溶解后經乙酸乙酯萃取2次，所得水層 再用水飽和的正丁醇萃取2次，合并萃取液，減壓濃縮并干燥得粗提物；將其用80°C熱水溶 解，上D-101型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗，再用3倍柱體積15%的乙醇洗脫， 棄去洗液，最后用3倍柱體積75%的乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧 干燥得2-甲氧基苯氧基)丙酸精提物3. ^g。精提物再在pH2，10°C的酸性條件重結晶 3次，得到2- -甲氧基苯氧基)丙酸結晶物2』kg。全過程得率0.5%，終產品為白色粉 末，純度99.9%。實施例3采用原生質誘變育種2-(4-甲氧基苯氧基)_丙酸含量高的咖啡種苗。首先選擇咖 啡子葉作為外植體，誘導愈傷組織產生，具體工藝為子葉經過消毒，接種于添加ΙΟμπιοΙ/L 2，4_ 二氯苯氧乙酸作為生長素和0.5ymol/L 6-呋喃甲基腺嘌呤作為細胞分裂素的 MS基礎培養(yǎng)基(以在培養(yǎng)基中的濃度計，MS基礎培養(yǎng)基成分組成為(單位mg/L) =KNO3 1900，NH4NO3 1650，K2HPO4 170，MgSO4 · 7H20 370，CaCl2 · 2H20 440，KI 0. 83，H3BO3 6. 2， MnSO4 · 4H20 22. 3，ZnS04 · 7H20 8. 6，NaMoO4 · 2H20 0. 25，CuS04 · 5H20 0. 025，CoCl2 · 6H20 0. 025，Na2 .EDTA 37. 3，F(xiàn)eSO4 ·7Η20 27. 8，蔗糖 30000，肌醇 100，鹽酸 0. 5，鹽酸吡哆醇 0. 5， 鹽酸硫胺素0. 4，甘氨酸2. 0)上，溫度為30°C，培養(yǎng)3周，產生愈傷組織)，愈傷組織經過 繼代培養(yǎng)后(具體工藝為優(yōu)選生長良好，祛除發(fā)黃的愈傷組織，接種于與愈傷組織誘導相 同的培養(yǎng)基中，溫度為30°C，暗培2周，期間更換培養(yǎng)基1次)，挑選優(yōu)選質地松散、顏色黃 白、表面濕潤的顆粒狀愈傷組織，生長良好的愈傷組織培養(yǎng)形成細胞懸浮培養(yǎng)體系(具體 工藝為將篩選出的愈傷組織放入與愈傷組織誘導相同的液體培養(yǎng)基中，溫度為30°C，轉 速為120r/min，暗培養(yǎng)8天，培養(yǎng)出懸浮單細胞系)，用Co6°r射線以不同輻射劑量4000r， 7000r, IOOOOr, 15000r, 20000r, 25000r五個劑量進行輻射處理，分離出原生質，近一步培養(yǎng) 獲得完整植株，從而獲得遺傳性穩(wěn)定一致的突變咖啡種苗品種冊。該品種咖啡果實中的 2-4-(甲氧基苯氧基)_丙酸平均含量達到0. 2% 0. 8%，已達到工業(yè)化分離的經濟要求。取1 品種的咖啡果內果皮粗粉500kg，用95 %的乙醇回流提取2次，每次回 流1.證。濾去濾渣，提取液真空濃縮至無醇味；用90°C熱水溶解后經石油醚/乙酸乙酯 (1 l，v/v)萃取3次，所得水層再用水飽和的正丁醇萃取3次，合并萃取液，減壓濃縮并干 燥得粗提物；將其用90°C熱水溶解，上XAD-4型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的水洗， 再用3倍柱體積30 %的乙醇洗脫，棄去洗液，再用3倍柱體積70 %的乙醇洗脫，收集70 %乙 醇洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得2- -甲氧基苯氧基)丙酸精提物1.9kg。精提物再 在pH2，10°C的酸性條件重結晶2次，得到244-甲氧基苯氧基)丙酸結晶物1. 3kg。全過 程得率0.沈％，終產品為白色粉末，純度99. 9 %。試驗例1 本發(fā)明分離的2- -甲氧基苯氧基)丙酸對各種甜味物質的甜度抑制作用。選 定20名味覺良好的受試者，試驗用的甜味劑為蔗糖、結晶果糖、阿斯巴甜三種，濃度分別為 20%U0%,0. 1%，不加提取物時的甜度均設為100。向上述試驗樣中加入不同量的提取物 (50、100、150、200mg/kg)，混勻后，受試者品嘗并得出各樣品相當于參照樣甜度的分數(shù)。用 甜度分數(shù)的平均值來評定抑制效果，結果見表1。在品嘗任意兩個樣品或參照樣之間，都用 蒸餾水漱口，以保證不被前一次殘留的味感干擾。結論本發(fā)明244-甲氧基苯氧基)丙酸提取物對蔗糖、結晶果糖、阿斯巴甜均有 很好的甜度抑制作用。用量為100mg/kg時，即可使上述甜味劑的甜度下降一半左右；用量 為200mg/kg時，甜度基本消失。該提取物對甜味的抑制不僅具有廣泛性和高效性，而且不 會引入任何雜味。表1 2-(4-甲氧基苯氧基)丙酸對各種甜物質的甜度抑制作用
權利要求
1.從咖啡果中分離2- -甲氧基苯氧基)_丙酸的方法，其特征在于包括如下步驟(1)選擇咖啡子葉作為外植體，誘導愈傷組織產生咖啡子葉經過消毒，接種于添加 1 lOymol/L 2，4-二氯苯氧乙酸作為生長素和0.4 0.5 μ mol/L 6-呋喃甲基腺嘌呤作 為細胞分裂素的MS基礎培養(yǎng)基上，溫度為25 30°C，培養(yǎng)3 5周，產生愈傷組織，愈傷 組織經過繼代培養(yǎng)后，挑選優(yōu)選質地松散、顏色黃白、表面濕潤的顆粒狀愈傷組織，生長良 好的愈傷組織培養(yǎng)形成細胞懸浮培養(yǎng)體系，用Co6°r射線以4000r、7000r、10000r、15000r、 20000r和25000r五個不同輻射劑量進行輻射處理，篩選出2- -甲氧基苯氧基)_丙酸 含量高的培養(yǎng)物，分離出原生質，近一步培養(yǎng)獲得完整植株，獲得遺傳性穩(wěn)定一致的突變咖 啡種苗品種1 ；該品種咖啡果實中的2-4-(甲氧基苯氧基)_丙酸平均含量達到0. 2% 0. 8% ；(2)將經過步驟(1)原生質誘變育種的咖啡樹所結的咖啡果實干燥、粉碎，過60 80 目篩，用重量濃度為60% 95%的乙醇回流提取2 5次，每次回流1 4h ；濾去濾渣，提 取液真空濃縮至不含乙醇，用60°C 90°C熱水溶解后溶劑萃取2 5次；所述的溶劑為石 油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、環(huán)己烷、氯仿和/或二氯甲烷；(3)水層用水飽和的正丁醇萃取2 5次，合并萃取液，減壓濃縮并干燥得2- -甲氧 基苯氧基)丙酸粗提物；(4)將粗提物用60°C 90°C熱水溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用2 5倍柱體積的水 洗，棄去洗脫液，再用2 5倍柱體積的重量濃度為10% 40%的乙醇洗脫，棄去洗脫液， 最后用2 5倍柱體積的質量濃度為40% 80%的乙醇洗脫，收集洗脫液；(5)減壓回收乙醇，真空干燥或噴霧干燥得2- -甲氧基苯氧基)_丙酸精提物；(6)精提物在pH= 2-6的酸性條件下進行2 3次重結晶，制得2- -甲氧基苯氧 基)_丙酸。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的咖啡果實包括外皮、果肉、內果皮、 銀皮和咖啡豆。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于愈傷組織繼代培養(yǎng)方法是優(yōu)選生長良好， 祛除發(fā)黃的愈傷組織，接種于與愈傷組織誘導相同的培養(yǎng)基中，溫度為25 30°C，暗培2 3周，期間更換培養(yǎng)基1 3次。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述細胞懸浮培養(yǎng)體系的形成是在愈傷 組織繼代培養(yǎng)后，將篩選出的愈傷組織放入與愈傷組織誘導相同的液體培養(yǎng)基中，溫度為 25 30°C，轉速為120r/min，暗培養(yǎng)8 12天，培養(yǎng)出懸浮單細胞系。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于使用的是大孔吸附樹脂包括ZTC-l、XAD-4、 AB-8、X-5、D-101、D-16、DA-201、S-8、H-103、NK-107、CAD-40 和 SIP 系列各種規(guī)格和型號大 孔吸附樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了從咖啡果中分離2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸的工業(yè)化方法。先選擇咖啡子葉作為外植體，誘導愈傷組織產生，將經過原生質誘變育種的咖啡樹所結的咖啡果實干燥、粉碎，用含水乙醇回流熱提，濾去濾渣，提取液真空濃縮至無醇味；后經溶劑脫脂，水層再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮并干燥得粗提物；待用熱水溶解后，上大孔吸附樹脂柱，先后用水和乙醇洗脫；減壓回收乙醇，真空干燥或噴霧干燥，最后在酸性條件下進行2～3次重結晶，產品純度高達99.9％以上。2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸對各種糖和甜味物質都有很好的甜味抑制作用，可作為新型食品添加劑應用于月餅、糖果、蜜餞中以抑制過高的甜味。
文檔編號C12P7/52GK102115770SQ201010527359
公開日2011年7月6日 申請日期2010年10月28日 優(yōu)先權日2010年10月28日
發(fā)明者鄭建仙 申請人:華南理工大學