專利名稱：一種制備生物活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備生物活性肽的方法。
背景技術(shù)：
生物活性肽是一類結(jié)構(gòu)相對簡單并且具有特殊生理活性的小分子蛋白物質(zhì)。從營養(yǎng)學(xué)角度來說，肽類比同一氨基酸組成的蛋白質(zhì)的消化吸收率要高，且風(fēng)味優(yōu)于單個(gè)氨基酸，也不易產(chǎn)生過敏現(xiàn)象。此外，以肽類作為動(dòng)物氮源的機(jī)體蛋白質(zhì)合成率也高于相應(yīng)的氨基酸，這說明肽類物質(zhì)在生物體內(nèi)具有較高的利用率。生物活性肽分子質(zhì)量在180 IOOOu(單位)之間，呈一定氨基酸順序的小肽、寡肽、低聚肽，具有免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗腫瘤等多種生理活性作用，可獲得更高的生物效價(jià)和營養(yǎng)價(jià)值，是目前研究的熱點(diǎn)之一。長期以來，營養(yǎng)學(xué)界一直認(rèn)為蛋白質(zhì)消化后主要以游離氨基酸(FAA)的形式被吸收，沒有認(rèn)識(shí)到小腸對蛋白質(zhì)或肽吸收具有生理學(xué)意義。蛋白質(zhì)的消化起始于胃，首先鹽酸使之變性，三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)分解成單股、肽鍵暴露，在胃蛋白酶和糜蛋白酶等內(nèi)切酶的作用下，蛋白質(zhì)分子降解為含氨基酸數(shù)量不等的各種多肽。完整肽被小腸細(xì)胞吸收后以肽或氨基酸形式釋放入血液。Kushak等人在1993年發(fā)現(xiàn)以肽的形式存在的氨基酸的吸收比游離氨基酸的吸收速度要快。特別對于幼齡動(dòng)物，小分子肽比大分子肽有更高的營養(yǎng)價(jià)值。目前制取生物活性肽的原料多采用大豆、花生、魚粉等。

發(fā)明內(nèi)容
但是，生物活性肽的需求較大，因此有必要開發(fā)更多種的制備生物活性肽的方法。鑒于上述情況，本發(fā)明人查閱資料之后發(fā)現(xiàn)，以活性干酵母作為原料研究未見報(bào)道。然而，活性干酵母本身含有50%左右的蛋白質(zhì)，氨基酸含量也非常齊全，且富含有B族維生素、豐富的酶系和多種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的生理活性物質(zhì)。隨著酵母應(yīng)用范圍的拓展，我國活性干酵母的年產(chǎn)量也逐年增加，酵母工業(yè)增長勢頭強(qiáng)勁，年平均遞增超過20%。2008年， 國內(nèi)活性干酵母生產(chǎn)量已達(dá)20萬噸。酵母工業(yè)作為生物工程產(chǎn)業(yè)的一個(gè)重要組成部分，有著廣闊的發(fā)展前景。因此，本發(fā)明人考慮是否能夠使用活性干酵母為原料來制備生物活性肽。因而，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，提供一種以與以往的原料不同的原料來制備生物活性肽的方法，拓寬制備生物活性肽的方法的領(lǐng)域，為本領(lǐng)域的技術(shù)人員提供另外的可以選擇制備生物活性肽的方法。為此本發(fā)明人經(jīng)過潛心鉆研，終于成功研發(fā)了一種以與以往的原料不同的原料來制備生物活性肽的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案一種制備生物活性肽的方法，包括如下步驟a)把活性干酵母與水混合形成酵母乳；
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b)通過把所述酵母乳進(jìn)行酶解生成生物活性肽。優(yōu)選地，在步驟b)中，在所述進(jìn)行酶解的過程中使用的酶為木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶。優(yōu)選地，所述步驟b)的具體實(shí)現(xiàn)為bl)把酵母乳連續(xù)自溶；b2)加入酶，進(jìn)行酶解；b3)分解之后進(jìn)行離心分離；b4)把離心分離得到的上清液進(jìn)行濃縮，得到濃縮液；b5)干燥所述濃縮液得到生物活性肽。本發(fā)明還提供一種制備生物活性肽的方法，包括如下步驟1)將活性干酵母加水配制成10 22%的酵母乳，通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把酵母乳的PH調(diào)節(jié)至4. 7 5. 3 ；2)升溫至46. 5 48. 5°C之后，保溫10 15小時(shí)，在保溫期間進(jìn)行攪拌；3)升溫至 54 56°C ；4)通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把PH調(diào)節(jié)至5. 8 6. 0 ；5)加入木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶，加入的木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶分別占所述活性干酵母的重量的0. 05% 0. 3%和0. 05% 0. 3%，進(jìn)行酶解4 8小時(shí)；6)離心分離；7)把上清液濃縮，得到濃縮液；8)干燥即可得到生物活性肽。優(yōu)選地，在步驟5)之后步驟6)之前，還有滅酶處理的步驟。優(yōu)選地，所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為20分鐘以上。優(yōu)選地，所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為25分鐘以上35分鐘以下。優(yōu)選地，所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為30分鐘。優(yōu)選地，得到的濃縮液的濃度為35重量％以上。優(yōu)選地，所述干燥為噴霧干燥。本發(fā)明的制備生物活性肽的方法，通過以活性干酵母為原料，經(jīng)過把活性干酵母與水混合，并進(jìn)行酶解，可以得到生物活性肽。該制備方法是以與以往的原料不同的原料來制備生物活性肽的方法，豐富了制備生物活性肽的方法，使得本領(lǐng)域的技術(shù)人員在制備生物活性肽時(shí)具有更大的可以選擇的空間和余地。
具體實(shí)施例方式為了使得本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本發(fā)明的各個(gè)技術(shù)方案，下面將進(jìn)行詳細(xì)的闡述。本發(fā)明的一個(gè)目的(第一目的)是提供一種以與以往的原料不同的原料來制備生物活性肽的方法，拓寬制備生物活性肽的方法的領(lǐng)域，為本領(lǐng)域的技術(shù)人員提供另外的可以選擇制備生物活性肽的方法。為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供的第1個(gè)技術(shù)方案是，一種制備生物活性肽的方法，其特征在于，包括如下步驟
a)把活性干酵母與水混合形成酵母乳；b)通過把所述酵母乳進(jìn)行酶解生成生物活性肽。在該技術(shù)方案中，本發(fā)明的制備生物活性肽的方法，以活性干酵母為原料來制備生物活性肽。目前，活性干酵母的產(chǎn)量很大，而生物活性肽的需求也比較旺盛，因此，本發(fā)明的第1個(gè)技術(shù)方案的出現(xiàn)，既可以有效地利用活性干酵母，又可以部分地緩解和滿足市場上對于生物活性肽的需求。本發(fā)明提供的第2個(gè)技術(shù)方案是對第1個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)，其改進(jìn)之處在于，在所述步驟b)中，在所述進(jìn)行酶解的過程中使用的酶為木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶。在進(jìn)行酶解的過程中只有使用特定的酶才能夠?qū)⒔湍溉檫M(jìn)行酶解，得到生物活性肽。需要說明的是，在本發(fā)明提供的用于酶解的酶是木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶的組合，不能夠單獨(dú)使用木瓜蛋白酶，也不能夠單獨(dú)使用細(xì)菌蛋白酶，因?yàn)槿绻麊为?dú)使用木瓜蛋白酶或者單獨(dú)使用細(xì)菌蛋白酶都不能夠使得上述酵母乳酶解，不能夠得到生物活性肽。本發(fā)明提供的第3個(gè)技術(shù)方案是對第1個(gè)技術(shù)方案或者對第2個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)，其改進(jìn)之處在于，所述步驟b)的具體實(shí)現(xiàn)為bl)把酵母乳連續(xù)自溶；b2)加入酶，進(jìn)行酶解；b3)分解之后進(jìn)行離心分離；b4)把離心分離得到的上清液進(jìn)行濃縮，得到濃縮液；b5)干燥所述濃縮液得到生物活性肽。通過使得酵母乳連續(xù)自溶，使得酵母乳更加均勻分散，在加入酶之后能夠在均一的環(huán)境下進(jìn)行酶解。酶解之后的產(chǎn)物是懸浮液，如果要得到生物活性肽，需要對該懸浮液進(jìn)行離心分離，離心分離的作用是把上清液中的酶解所得到的生物活性肽與沉淀物分離開來，得到濃縮液，之后對該濃縮液進(jìn)行干燥即可得到生物活性肽。本發(fā)明的另一個(gè)目的(第二目的)是提供一種制備生物活性肽的方法，該制備生物活性肽的制備方法，在制備活性肽時(shí)需嚴(yán)格控制酶解條件，既要保證蛋白質(zhì)能夠充分酶解，使更多的活性肽段被水解出來，同時(shí)又要適當(dāng)控制酶解程度，獲得較高活性的產(chǎn)物，不至于生成寡肽，或者說生成的寡肽的量很少。為了能夠更好地使得本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解提出上述發(fā)明目的的原因，首先對一些背景的資料進(jìn)行描述。目前，制取生物活性肽的方法有很多，許多學(xué)者對此進(jìn)行了研究，并獲得了一系列生物活性肽(也可以簡稱為活性肽)。許慶陵等用木瓜蛋白酶酶解鰱魚制得降血壓肽，體外實(shí)驗(yàn)表明ACE (angiotensin converting enzyme)抑制率達(dá)80%以上。董士遠(yuǎn)等用胰蛋白酶酶解紫貽貝，其酶解液對于病原菌Botryiscinerea的抑菌率達(dá)60%以上。這些現(xiàn)有技術(shù)大多采用大豆、花生、魚粉為原料，采用廉價(jià)的活性干酵母作為原料的研究報(bào)道則沒有。 目前的獲得生物活性肽的方法主要有酶解法、物理化學(xué)處理法和微生物發(fā)酵法。其中，(1) 酶解法成本高而且酶反應(yīng)受多種因素的影響，其生產(chǎn)的小肽往往帶有苦味；酶水解蛋白質(zhì)的方法的優(yōu)點(diǎn)是具有反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)時(shí)間短，效率高，不產(chǎn)生消旋作用，也不破壞氨基酸，產(chǎn)品純度高，產(chǎn)物易分離，成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，優(yōu)于傳統(tǒng)的化學(xué)水解法，是制備活性肽較好的方法。(2)物理化學(xué)處理法在加熱、超聲波、鹽酸等條件的作用下，均會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)不同程度的變性。(3)微生物發(fā)酵法是利用微生物豐富的酶系，降解發(fā)酵后的豆粕，其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，相對分子質(zhì)量降低。隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，人畜爭糧矛盾日益突出，飼料資源的開發(fā)與有效利用尤為重要，人們也逐漸的關(guān)注到酵母這個(gè)新型飼料資源。酵母在畜牧業(yè)生產(chǎn)中得到了實(shí)際應(yīng)用?；钚越湍笐?yīng)用于動(dòng)物飼養(yǎng)中，起源于二十世紀(jì)20年代，最早是用做反芻動(dòng)物的蛋白質(zhì)補(bǔ)充劑。隨后至50年代，人們發(fā)現(xiàn)在反芻動(dòng)物日糧中添加低劑量的活性酵母培養(yǎng)物能提高閹牛的日增重和奶牛的產(chǎn)奶量。現(xiàn)在，通過國內(nèi)外大量的試驗(yàn)證實(shí)在動(dòng)物日糧中添加活性酵母，對改善動(dòng)物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高動(dòng)物的健康狀態(tài)，促進(jìn)生產(chǎn)性能的發(fā)揮等具有明顯的作用。主要作用機(jī)理至今尚無定論，活性酵母及代謝產(chǎn)物中含有未知生長因子促進(jìn)劑。酵母中含有豐富的蛋白質(zhì)、各種氨基酸、B族維生素及寡聚糖等營養(yǎng)物質(zhì)，是飼料中營養(yǎng)的有益補(bǔ)充?；钚越湍缸鳛橐环N真菌益生素具有廣闊的研究和開發(fā)前景，并且具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。結(jié)合上述的現(xiàn)有的技術(shù)以及背景資料，綜合來說，本發(fā)明的第二目的就是要充分利用活性酵母資源，開發(fā)出一種制備生物活性肽的方法，它既能夠保證蛋白質(zhì)能夠充分酶解，使更多的活性肽段被水解出來，同時(shí)又能夠適當(dāng)控制酶解程度，獲得較高活性的產(chǎn)物。為了達(dá)到上述本發(fā)明的第二目的，本發(fā)明提供的第4個(gè)技術(shù)方案是一種制備生物活性肽的方法，包括如下步驟1)將活性干酵母加水配制成10 22%的酵母乳，通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把酵母乳的PH調(diào)節(jié)至4. 7 5. 3 ；2)升溫至46. 5 48. 5°C之后，保溫10 15小時(shí)，在保溫期間進(jìn)行攪拌；3)升溫至 54 56°C ；4)通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把PH調(diào)節(jié)至5. 8 6. 0 ；5)加入木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶，加入的木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶分別占所述活性干酵母的重量的0. 05% 0. 3%和0. 05% 0. 3%，進(jìn)行酶解4 8小時(shí)；6)離心分離；7)把上清液濃縮，得到濃縮液；8)干燥即可得到生物活性肽。本發(fā)明采用自溶法從啤酒廢酵母中制取生物活性肽。其中，自溶溫度、時(shí)間、pH、 自溶促進(jìn)劑(本發(fā)明是指檸檬酸或者氫氧化鈉)等是影響啤酒廢酵母自溶的幾個(gè)主要因素，本發(fā)明通過控制這些參數(shù)既能夠保證蛋白質(zhì)能夠充分酶解，使更多的活性肽段被水解出來，同時(shí)又能夠適當(dāng)控制酶解程度，獲得較高活性的產(chǎn)物。另外，本發(fā)明經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)室小試和工廠試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明從活性干酵母中提取活性肽的工藝可行，酵母蛋白經(jīng)水解后，大部分被降解成二肽、三肽，極少量被降解為大分子肽(或者稱之為多肽)，也極少量被分解為寡肽。最終產(chǎn)品具有很濃的香味，具有一定的誘食效果。下面對第4個(gè)技術(shù)方案的各個(gè)步驟分別進(jìn)行說明。步驟1)將活性干酵母加水配制成10 22 %的酵母乳，通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把酵母乳的PH調(diào)節(jié)至4. 7 5. 3。在本步驟中，百分比指的是重量百分比。
之所以把酵母乳配制成10 22%的濃度，是因?yàn)槿绻湍溉闈舛刃∮?0%，則提取酵母活性肽的得率較低；如果酵母乳濃度大于22%，將影響酵母自溶程度，不利于活性肽的降解和得率。在本步驟中，檸檬酸和/或氫氧化鈉是適用于本發(fā)明的自溶促進(jìn)劑，而且必須選用這樣的自溶促進(jìn)劑。例如，雖然氫氧化鉀也是堿性物質(zhì)，但是卻不能夠替代本發(fā)明的氫氧化鈉，將致使產(chǎn)品中K離子含量過高，影響動(dòng)物生長性能。酵母乳的pH調(diào)節(jié)為4. 7 5. 3的原因在于如果酵母乳的pH小于4. 7，不利于酵母的自溶降解，不離于酵母破壁。如果酵母乳PH大于5. 3，同樣酵母的自溶降解程度即受到影響。步驟2)升溫至46. 5 48. 5°C之后，保溫10 15小時(shí)，在保溫期間進(jìn)行攪拌。之所以升溫至46. 5 48. 5°C，是因?yàn)槿绻麥囟鹊陀?6. 5°C，那酵母的自溶速率將受到影響；如果溫度高于48. 5°C，酵母的自溶降解程度將受到影響。保溫時(shí)間需要在10 15小時(shí)，原因在于，如果保溫時(shí)間小于10小時(shí)，酵母的自溶不完全；如果保溫時(shí)間大于15小時(shí)，那么時(shí)間太長，浪費(fèi)時(shí)間。之所以進(jìn)行攪拌，是為了是酵母自溶速率加快，酵母充分降解自溶。步驟3)升溫至54 56 °C。步驟4)通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把pH調(diào)節(jié)至5. 8 6. 0。之所以升溫至M 56°C是因?yàn)槿绻麥囟鹊陀贛°C，不利與酶活性的發(fā)揮；如果溫度高于56°C，那么酶活力將受到一定抑制，無法發(fā)揮酶解作用。之所以使用檸檬酸和/或氫氧化鈉的原因與步驟1)中的相同。之所以把pH調(diào)節(jié)至5. 8 6.0，是因?yàn)槿绻鹥H小于5. 8，不利與酶活性的發(fā)揮； 如果pH大于6. 0，同樣抑制酶活力的發(fā)揮。步驟幻加入木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶，加入的木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶分別占所述活性干酵母的重量的0. 05% 0. 3%和0. 05% 0. 3%，進(jìn)行酶解4 8小時(shí)。在本步驟中，必須使用木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶的組合，不能夠單獨(dú)使用木瓜蛋白酶，也不能夠單獨(dú)使用細(xì)菌蛋白酶，因?yàn)槿绻麊为?dú)使用木瓜蛋白酶或者單獨(dú)使用細(xì)菌蛋白酶都不能夠使得上述酵母乳酶解，不能夠得到具有上述特點(diǎn)的生物活性肽。之所以加入木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶的特定的重量和采用特定的酶解時(shí)間，也是為了既能夠保證蛋白質(zhì)能夠充分酶解，使更多的活性肽段被水解出來，同時(shí)又能夠適當(dāng)控制酶解程度，獲得較高活性的產(chǎn)物。步驟6)離心分離。步驟7)把上清液濃縮，得到濃縮液。步驟8)干燥即可得到生物活性肽。步驟6) 步驟8)是為了能夠快速地得到生物活性肽。在步驟幻之后步驟6)之前還需要有滅酶處理，滅酶處理是為了使得酶失去活性， 滅酶處理優(yōu)選使用的條件是溫度為80 95°C，時(shí)間為20分鐘以上。最優(yōu)選為30分鐘以上。以上是對本發(fā)明的第4個(gè)技術(shù)方案的各個(gè)步驟的分別說明，下面說明對這些技術(shù)方案的改進(jìn)方案。
本發(fā)明提供的第5個(gè)技術(shù)方案是對第4個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)方案，其改進(jìn)之處在于， 在步驟幻之后步驟6)之前，還有滅酶處理的步驟。滅酶處理可以使得木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶失去活性，以使得在后續(xù)的操作中不會(huì)繼續(xù)進(jìn)行酶解，從而保持了良好的酶解后的肽的種類的分布，即保持具有二肽、三肽為主體，多肽和寡肽為較少量的狀態(tài)。本發(fā)明提供的第6個(gè)技術(shù)方案是對第5個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)方案，其改進(jìn)之處在于， 所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為20分鐘以上。采用上述的滅酶處理溫度和時(shí)間，既可以保證實(shí)現(xiàn)滅酶處理，又可以保證實(shí)現(xiàn)不太浪費(fèi)資源。例如如果滅酶處理的溫度小于80°C，時(shí)間小于20分鐘，那么則有可能存在有一定數(shù)量的未失去活性的酶。本發(fā)明提供的第7個(gè)技術(shù)方案是對第5個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)方案，其改進(jìn)之處在于， 所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為25分鐘以上35分鐘以下。在上述滅酶處理的溫度下，在35分鐘以下既可以實(shí)現(xiàn)滅酶處理，而不需要再延長時(shí)間，使得加熱的熱能無謂地消耗。本發(fā)明提供的第8個(gè)技術(shù)方案是對第5個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)方案，其改進(jìn)之處在于， 所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為30分鐘。此方案為最為優(yōu)選的方案，在該條件下，既能夠?qū)崿F(xiàn)滅酶處理的效果，又那能夠進(jìn)一步改進(jìn)生物活性肽中的肽的種類的分布。本發(fā)明提供的第9個(gè)技術(shù)方案是對第4 8個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)方案，其改進(jìn)之處在于，得到的濃縮液的濃度為35重量％以上。濃縮液在35重量％以上，將有益于后面的干燥步驟，使得干燥的能量消耗不至于太大。本發(fā)明提供的第10個(gè)技術(shù)方案是對第4 9個(gè)技術(shù)方案的改進(jìn)方案，其改進(jìn)之處在于，所述干燥為噴霧干燥。采用噴霧干燥的有益效果在于該干燥工藝速度快，產(chǎn)品含水量低，產(chǎn)品細(xì)度高且均勻。下面列舉具體的實(shí)施例實(shí)施例1稱取活性干酵母，將活性干酵母加水配制成18 %的酵母乳，加入占所述活性干酵母的重量3%的檸檬酸，調(diào)節(jié)pH至4. 7-5. 3。保溫處理把調(diào)節(jié)好的酵母乳升溫至47. 5士 1°C，保溫13小時(shí)，連續(xù)攪拌；升溫處理保溫完成后升溫至55 士 1°C ；調(diào)節(jié)pH:升溫后，調(diào)節(jié)pH = 5.9 士 0. 1 ；加酶處理及滅酶pH調(diào)節(jié)好之后，木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶各加入占所述活性干酵母的重量0. 15%的量，作用6小時(shí)；升溫至85 °C，滅酶30分鐘；分離及濃縮處理滅酶后采用離心機(jī)離心取上清液，將上清液濃縮至35%。采用噴霧干燥對懸浮液進(jìn)行干燥；干燥后的產(chǎn)品即為酵母活性小肽產(chǎn)品。實(shí)施例2
稱取活性干酵母，將活性干酵母加水配制成18%的酵母乳，用檸檬酸和氫氧化鈉， 調(diào)節(jié)PH至5. 0。保溫處理把調(diào)節(jié)好的酵母乳升溫至46. 5°C，保溫13小時(shí)，連續(xù)攪拌；升溫處理保溫完成后升溫至56°C ；調(diào)節(jié)pH:升溫后，調(diào)節(jié)pH = 6.0;加酶處理及滅酶pH調(diào)節(jié)好之后，木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶各加入占所述活性干酵母的重量0. 20%的量，作用8小時(shí)；升溫至90 V，滅酶四分鐘；分離及濃縮處理滅酶后采用離心機(jī)離心取上清液，將上清液濃縮至36%。采用噴霧干燥對懸浮液進(jìn)行干燥；干燥后的產(chǎn)品即為酵母活性小肽產(chǎn)品。實(shí)施例3稱取活性干酵母，將活性干酵母加水配制成18%的酵母乳，用檸檬酸和氫氧化鈉， 調(diào)節(jié)PH至5. 3。保溫處理把調(diào)節(jié)好的酵母乳升溫至48. 5°C，保溫10小時(shí)，連續(xù)攪拌；升溫處理保溫完成后升溫至；調(diào)節(jié)pH:升溫后，調(diào)節(jié)pH = 5.8 ；加酶處理及滅酶pH調(diào)節(jié)好之后，木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶各加入占所述活性干酵母的重量0. 10%的量，作用8小時(shí)；升溫至88 V，滅酶30分鐘；分離及濃縮處理滅酶后采用離心機(jī)離心取上清液，將上清液濃縮至36. 5%。采用噴霧干燥對懸浮液進(jìn)行干燥；干燥后的產(chǎn)品即為酵母活性小肽產(chǎn)品。實(shí)施例4稱取活性干酵母，將活性干酵母加水配制成15%的酵母乳，用檸檬酸和氫氧化鈉， 調(diào)節(jié)PH至5. 0。保溫處理把調(diào)節(jié)好的酵母乳升溫至48. 5°C，保溫15小時(shí)，連續(xù)攪拌；升溫處理保溫完成后升溫至55°C ；調(diào)節(jié)pH:升溫后，調(diào)節(jié)pH = 5.9 ；加酶處理及滅酶pH調(diào)節(jié)好之后，木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶各加入占所述活性干酵母的重量0. 18%的量，作用7小時(shí)；升溫至85 °C，滅酶30分鐘；分離及濃縮處理滅酶后采用離心機(jī)離心取上清液，將上清液濃縮至35%。采用噴霧干燥對懸浮液進(jìn)行干燥；干燥后的產(chǎn)品即為酵母活性小肽產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明上述實(shí)施例的從活性干酵母中提取活性肽的工藝可行，酵母蛋白經(jīng)水解后，大部分被降解成二肽、三肽，極少量被降解為多肽。產(chǎn)品具有很濃的香味，具有一定的誘食效果。采用上述制備方法制備得到的生物活性肽進(jìn)行肉雞養(yǎng)殖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明酵母活性肽可提高肉雞生長速率3%，能替代部分飼料蛋白原料，降低飼料成本。采用上述制備方法制備得到的生物活性肽進(jìn)行保育仔豬養(yǎng)殖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明酵母活性肽促進(jìn)仔豬采食5 %，可使料肉比降低4 %，提高了飼料轉(zhuǎn)化率。
具體的肉雞養(yǎng)殖試驗(yàn)為試驗(yàn)選用1日齡白羽肉雞200羽，隨機(jī)分成4組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽。4個(gè)處理組對照組(基礎(chǔ)日糧)，試驗(yàn)組分別0.5^2 ^ 酵母活性肽添加劑，試驗(yàn)共6周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1)在肉雞日糧中添加0.5 2%的酵母活性肽肉雞精神正常，死淘率相對于對照組未見增加，其中添加1 %的酵母活性肽相對于對照組，平均日增重提高3%。具有很好的促生長作用?；妙~外添加和2%酵母活性肽，肉雞飲水量增加，生長迅速?；媒湍富钚噪目梢蕴娲糠值鞍自希档惋暳铣杀?。另外，試驗(yàn)結(jié)果表明酵母活性肽(指的是利用酵母為原料所制備的生物活性肽) 作為一種飼料添加劑、生長促進(jìn)劑，也可作為飼料蛋白補(bǔ)充原料，富含酵母細(xì)胞發(fā)酵代謝產(chǎn)物、多種微量元素和高純度生物活性肽，可以用于畜禽、水產(chǎn)、反芻等動(dòng)物養(yǎng)殖，也可用于人類營養(yǎng)保健當(dāng)中。比較例1比例例1與實(shí)施例1的不同之處僅在于，在“加酶處理及滅酶”的步驟中，僅使用木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的使用量為0. 15%。比較例2比較例2與實(shí)施例1的不同之處僅在于，在“加酶處理及滅酶”的步驟中，僅使用細(xì)菌蛋白酶，木瓜蛋白酶的使用量為0. 15%。但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，比較例1和比較例2均不能得到“大部分被降解成二肽、三肽， 極少量被降解為多肽”的技術(shù)效果。
10
權(quán)利要求
1.一種制備生物活性肽的方法，其特征在于，包括如下步驟a)把活性干酵母與水混合形成酵母乳；b)通過把所述酵母乳進(jìn)行酶解生成生物活性肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，在步驟b)中，在所述進(jìn)行酶解的過程中使用的酶為木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，所述步驟b)的具體實(shí)現(xiàn)為bl)把酵母乳連續(xù)自溶；b2)加入酶，進(jìn)行酶解；b3)分解之后進(jìn)行離心分離；b4)把離心分離得到的上清液進(jìn)行濃縮，得到濃縮液；b5)干燥所述濃縮液得到生物活性肽。
4.一種制備生物活性肽的方法，其特征在于，包括如下步驟1)將活性干酵母加水配制成10 22%的酵母乳，通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把酵母乳的PH調(diào)節(jié)至4. 7 5.3 ；2)升溫至46.5 48. 5°C之后，保溫10 15小時(shí)，在保溫期間進(jìn)行攪拌；3)升溫至M 56°C；4)通過使用檸檬酸和/或氫氧化鈉把pH調(diào)節(jié)至5.8 6. 0 ；5)加入木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶，加入的木瓜蛋白酶和細(xì)菌蛋白酶分別占所述活性干酵母的重量的0. 05% 0. 3%和0. 05% 0. 3%，進(jìn)行酶解4 8小時(shí)；6)離心分離；7)把上清液濃縮，得到濃縮液；8)干燥即可得到生物活性肽。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，在步驟幻之后步驟6) 之前，還有滅酶處理的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為20分鐘以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為25分鐘以上35分鐘以下。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，所述滅酶處理的溫度為80 95°C，時(shí)間為30分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，得到的濃縮液的濃度為35重量％以上。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備生物活性肽的方法，其特征在于，所述干燥為噴霧干ο
全文摘要
本發(fā)明提供一種制備生物活性肽的方法。該制備生物活性肽的方法，包括如下步驟a)把活性干酵母與水混合形成酵母乳；b)通過把所述酵母乳進(jìn)行酶解生成生物活性肽。本發(fā)明的制備生物活性肽的方法，通過以活性干酵母為原料，經(jīng)過把活性干酵母與水混合，并進(jìn)行酶解，可以得到生物活性肽。該制備方法是以與以往的原料不同的原料來制備生物活性肽的方法，豐富了制備生物活性肽的方法，使得本領(lǐng)域的技術(shù)人員在制備生物活性肽時(shí)具有更大的可以選擇的空間和余地。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102465165SQ20101053545
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月9日
發(fā)明者余明華, 俞學(xué)鋒, 姚鵑, 朱金林, 李知洪, 譚斌 申請人:安琪酵母股份有限公司