專(zhuān)利名稱(chēng)：一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，特別涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑及其 制備方法。
背景技術(shù)：
隨著規(guī)?；a(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的大量出現(xiàn)，養(yǎng)殖密度不斷增加，養(yǎng)殖水體中的排泄物以 及餌料的殘?jiān)粩嘣黾?，致病微生物大量繁殖，養(yǎng)殖水體富營(yíng)養(yǎng)化程度加劇，生態(tài)環(huán)境遭到 嚴(yán)重的破壞，這導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物大規(guī)模且頻繁出現(xiàn)各類(lèi)病害和應(yīng)急狀態(tài)，與此同時(shí)抗生素和 殺菌劑的長(zhǎng)期使用和濫用也進(jìn)一步導(dǎo)致了養(yǎng)殖水體中各種藥物的殘留和致病微生物抗藥 性和耐藥性的提高和，從而進(jìn)一步破壞了養(yǎng)殖水體的生態(tài)環(huán)境。近年來(lái)，微生物制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖上已有所應(yīng)用，但是還存在著不少的問(wèn)題。大多數(shù) 微生物制劑僅針對(duì)養(yǎng)殖水體發(fā)揮功效，但對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物本身并沒(méi)有直接作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑及其 制備方法。該水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑同時(shí)可以改善水產(chǎn)動(dòng)物的生態(tài)環(huán)境，防治 疾病，降低動(dòng)物應(yīng)急狀態(tài)，提高水產(chǎn)動(dòng)物品質(zhì)，縮短上市周期。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為
一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑，其特征在于它是由光合細(xì)菌(/？如而/^^^ elegans)ACCC 10649、酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder)ACCC 20319τ、納豆菌(feci/A/s natto Swamura) ACCC 10614、牛古草芽抱桿菌(ifeci/^/iAs subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T、乳酸桿菌(ZaciococOT1S Iactis) ACCC 11092 和雙歧桿 ^Bifidobacterium sp) ACCC 11054分別進(jìn)行單菌種培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液接種于同 一培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)，待培養(yǎng)液的pH值自然降至3. O 3. 5而得到的，該 制劑中光合細(xì)菌elegans) ACCC 10649 的菌數(shù)彡 5. OX 109cfu/ml，酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數(shù)彡 0. 1 X 109cfu/ml，納豆菌UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌數(shù)彡 5. OX 109cfu/ml，枯草芽孢桿菌(feci/A/s subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌數(shù)彡 5. OX 109cfu/ml，乳酸桿菌 (Lactococcus lactis)ACCC 11092 的菌數(shù)彡 5. OX 109cfu/ml，雙歧桿菌(bifidobacterium sp) ACCC 11054 的菌數(shù)彡 5. 0X109cfu/ml。按上述方案，所述各菌種的種子培養(yǎng)液的重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液 25% 35%，酵母菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，納豆菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，枯草芽孢桿 菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，乳酸桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液 5% 15%?！N水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑的制備方法，其特征在于包括如下步 驟(1)種子培養(yǎng)液的制備
光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的種子培養(yǎng)液的制備將光合細(xì)菌 i Rhodoplanes elegant) ACCC 10649在無(wú)菌條件下接種到液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng) 基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸鎂0. 05g、氯 化鈣0. 3g，pH值調(diào)至6. 08 7. 0之間，放置于光培養(yǎng)箱內(nèi)，28°C -30°C常規(guī)光照培養(yǎng)6 7 天，得到光合細(xì)菌菌數(shù)彡5. OX 109CfU/ml的種子培養(yǎng)液；
酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的種子培養(yǎng)液的制備將酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ在無(wú)菌條件下接種到液體培養(yǎng)基中，所述的液 體培養(yǎng)基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為無(wú)水硫酸鎂1. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、尿素 3. 0g、玉米漿1. 0g、硫酸錳0. 02g、硫酸亞鐵0. 2g，pH值調(diào)至5. 5，30°C _31°C培養(yǎng)4 5天， 得到酵母菌菌數(shù)彡0. 1 X IO9CfuAil的種子培養(yǎng)液；
納豆菌(^Bacillus natto Swamura) ACCC10614的種子培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T 的種子培養(yǎng)液的制 備將納豆菌 UaciWiAS natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢桿菌^^/^狀 subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分別在無(wú)菌條件下接種于液體培養(yǎng) 基中，所述的液體培養(yǎng)基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為蛋白胨10. 0g、牛肉膏 3. 0g、氯化鈉5. 0g, pH值調(diào)至7. 0，28°C 32°C，單菌種培養(yǎng)7 8天，分別得到納豆菌菌數(shù) 彡5. OX 109CfU/ml的納豆菌種子培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌菌數(shù)彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢桿菌種子培養(yǎng)液；
乳酸桿菌(Laciococcw1S lactis) ACCC 11092的種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp) ACCC 11054的種子培養(yǎng)液的制備將乳酸桿菌(Lactococcus lactis) ACCC 11092和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieri腫sp) ACCC 11054分別在無(wú)菌條件下 接種于液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng)基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為番茄 汁200. 0ml、可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化鈉5. 0g、酵母粉6. 0g、吐溫80 1. 0g、 葡萄糖20. 0g, pH值調(diào)至7. 2，30°C 35°C單菌種培養(yǎng)2 3天，分別得到乳酸桿菌菌數(shù) 彡5. OX 109Cfu/ml的乳酸桿菌種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌菌數(shù)彡5. OX 109Cfu/ml的雙歧桿菌 種子培養(yǎng)液；
(2)水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649、酵母菌 {Pichia fermentans lodder)ACCC 20319τ、納豆菌(feci/A/s natto 5kaffl ra)ACCC10614、 枯草芽孢桿菌(feciBws subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ、乳 酸桿菌(Zaciococc^s Iactis)ACCC 11092 和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieri腫 sp)ACCC 11054 的種子培養(yǎng)液按其重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液25% 35%，酵母菌的種子培養(yǎng) 液5% 15%，納豆菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，枯草芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，乳 酸桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，在無(wú)菌條件下分別接種 到同一液體培養(yǎng)基中，接種量為液體培養(yǎng)基重量的1 % 2 %，所述的液體培養(yǎng)基中各組分 在1. OL蒸餾水中的含量為紅糖50. 0g、蜂蜜10. Og,在溶氧度為5 %即發(fā)酵罐中氧氣的體 積與發(fā)酵液的體積比為5%的條件下，28°C 32°C密閉式靜置培養(yǎng)7 15天，使pH值降到 3. 0-3. 5 而成。
利用不同菌種的特性可相應(yīng)地解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中出現(xiàn)的問(wèn)題，但是不同菌種微生物 復(fù)合時(shí)，各菌種之間存在相互排異、搶占碳源/氮源和相互侵蝕的現(xiàn)象。本發(fā)明將不同特性 的菌種分別發(fā)酵，得到種子培養(yǎng)液，然后按一定比例分別接種于同一培養(yǎng)基中混合培養(yǎng)，至 PH值自然降低到3. 0 3. 5而成，在該pH條件下，各菌種處于極端環(huán)境，迫使各菌種進(jìn)入休 眠狀態(tài)，從而可避免不同菌種之間存在的相互排異、搶占碳/氮源和相互侵蝕的現(xiàn)象。在使 用時(shí)，將本發(fā)明制備的水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物復(fù)合制劑放入養(yǎng)殖水域后，由于環(huán)境的改變可使 得菌種解除休眠狀態(tài)，從而使各菌種充分發(fā)揮作用，解決實(shí)際水產(chǎn)養(yǎng)殖中出現(xiàn)的問(wèn)題。本發(fā)明所選用的菌種的功能如下
(1)光合細(xì)菌elegans) ACCC 10649 消耗水體中多余的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，產(chǎn)生 大量對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的有益的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，降低氨氮、硫化物等有害物質(zhì)。(2)酵母菌(/YcAia fermentans lodder)ACCC 20319τ 大量產(chǎn)生動(dòng)物必需的多種
氨基酸。(3)枯草芽抱桿菌(泡<^7/"5· subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242τ 產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶以及枯草菌素。(4)乳酸桿菌(Zactococcm Iactis)ACCC 11092 可分解糖產(chǎn)酸，抑制致病菌及腐 敗菌的繁殖，提高動(dòng)物的餌料的吸收。(5)雙歧桿菌(歷/ii/ο力acterii/ sp)ACCC 11054 維護(hù)腸道正常細(xì)菌菌群平衡， 抑制病原菌的生長(zhǎng)，在腸道內(nèi)合成維生素、氨基酸和提高機(jī)體對(duì)鈣離子的吸收，產(chǎn)生維生素 Bi、B2、B6、B12及丙氨酸、纈氨酸、天冬氨酸和蘇氨酸等。(6)納豆菌UaciBw1S natto ^aswra) ACCC10614 調(diào)節(jié)腸道菌群，增強(qiáng)動(dòng)物細(xì)胞 免疫放應(yīng)，并能生成多種蛋白酶(特別是堿性蛋白酶)、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，降解植物性 飼料種某些復(fù)雜的碳水化合物，從而提高飼料的轉(zhuǎn)化率。本發(fā)明的有益效果
1.促進(jìn)胃腸道內(nèi)微生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)。本制劑中的乳酸桿菌(LactococcmIactis)ACCC 11092、雙歧桿菌(召i/it/o力acieri腫 sp) ACCC 11054、納豆菌 UaciBw1S natto Swamura) ACCC 10614能夠在水產(chǎn)動(dòng)物的腸道內(nèi)迅速定殖，建立起有益菌的種群優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng) 物的營(yíng)養(yǎng)吸收，產(chǎn)生多種水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的氨基酸、維生素和有機(jī)酸，并且雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp)ACCC 11054、納豆菌UaciBw1S aaiio )ACCC10614 能夠明 顯地增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，有效預(yù)防消化道感染、降低應(yīng)急狀態(tài)；
2.凈化養(yǎng)殖水體。本制劑中的光合細(xì)菌elegans)KCCC10649、酵母菌 {Pi chia fermentans Iodder ) ACCC 20319τ 和枯草芽孢桿菌(feci/A/s subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242τ能及時(shí)分解在水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中產(chǎn)生的動(dòng)物排泄 物、代謝物和水體中殘留的餌料，明顯降低養(yǎng)殖水體的富營(yíng)養(yǎng)程度，提高水體的溶氧度，同 時(shí)產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)，為水產(chǎn)動(dòng)物提供了優(yōu)質(zhì)的天然餌料，也為浮游生物提供了生長(zhǎng)所需要 的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而進(jìn)一步建立和完善養(yǎng)殖水體的微生態(tài)環(huán)境。
具體實(shí)施例方式下面用具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明不僅僅局限于以 下實(shí)施例。
實(shí)施例1
水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物制劑的制備方法，包括如下步驟 (1)種子培養(yǎng)液的制備
光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的種子培養(yǎng)液制備將光合細(xì)菌 iRhodoplanes elegans)KCCC 10649在無(wú)菌條件下，接種到液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng) 基中各組分在1. OL蒸餾水中的含量為酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸鎂0. 05克、氯 化鈣0. 3g，pH值調(diào)至6. 08 7. 0之間，放置于常規(guī)光培養(yǎng)箱內(nèi)，28°C 30°C常規(guī)光照培養(yǎng) 6 7天，得到光合細(xì)菌菌數(shù)彡5. OX 109CfU/ml的種子培養(yǎng)液。酵母菌(/YcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的種子培養(yǎng)液的制備將酵母 菌(PicAia fermentans lodder) ACCC 20319τ在無(wú)菌條件下接種到液體培養(yǎng)基中，所述的 液體培養(yǎng)基中各組分在1. OL蒸餾水中的含量為無(wú)水硫酸鎂1. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、尿素 3. 0g、玉米漿1. 0g、硫酸錳0. 02g、硫酸亞鐵0. 2g，pH值調(diào)至5. 5，30°C _31°C培養(yǎng)4 5天， 得到酵母菌菌數(shù)彡0. IX IO9CfuAil的種子培養(yǎng)液。納豆菌UaciBw1S natto Swamura ) ACCC 10614種子培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T 種子培養(yǎng)液的制 備將納豆菌(feci/^As natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢桿菌⑶^以·/^^ subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分別在無(wú)菌條件下接種于液體培養(yǎng) 基中，所述的液體培養(yǎng)基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為蛋白胨10.0g、牛肉膏 3. 0g、氯化鈉5. 0g, pH值調(diào)至7. 0，28°C 32°C單菌種培養(yǎng)7 8天，分別得到納豆菌菌數(shù) 彡5. OX 109CfU/ml的納豆菌種子培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌菌數(shù)彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢桿菌種子培養(yǎng)液。乳酸桿菌(ZaciococcM lactis) ACCC 11092種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp)ACCC 11054種子培養(yǎng)液的制備將乳酸桿菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieri腫sp)ACCC 11054分別在無(wú)菌條件下接種于同一 液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng)基中各組分在1. OL蒸餾水中的含量為番茄汁200. OmL, 可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化鈉5. 0g、酵母粉6. 0g、吐溫80 1. 0g、葡萄糖20. 0g，pH 值調(diào)至7. 2，30°C 35°C單菌種培養(yǎng)2 3天，分別得到乳酸桿菌菌數(shù)彡5. 0 X 109cfu/ml的 乳酸桿菌種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌菌數(shù)> 5. OX 109CfU/ml的雙歧桿菌種子培養(yǎng)液。(2)水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的各菌種的種子培養(yǎng)液按照光合細(xì)菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的種子培養(yǎng)液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 種子培養(yǎng)液、納豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的種子培養(yǎng)液、枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的種子培養(yǎng)液、乳 酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieriws sp) ACCC 11054的種子培養(yǎng)液的重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液25%，酵母菌的種子培 養(yǎng)液5%，納豆菌的種子培養(yǎng)液15%，枯草芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液25%，乳酸桿菌的種子培養(yǎng) 液15%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液15%，在無(wú)菌條件下分別接種到同一液體培養(yǎng)基中，接種量 為液體培養(yǎng)基重量的1 % 2 %，所述的液體培養(yǎng)基中各組分在1.0L蒸餾水中的含量為 紅糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度為5 %即發(fā)酵罐中氧氣體積與發(fā)酵液體積比為5%的條件下，28°C 32°C密閉式靜置培養(yǎng)7 15天，使pH值自然降到3. 0-3. 5而成。經(jīng)檢測(cè)，該水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物復(fù)合制劑為酸性，色澤金黃，pH值為3. 0-3. 5，其制 劑中活菌分別是光合細(xì)菌elegans) ACCC 10649的菌數(shù)彡5. OXlO9Cfu/ ml,酵母獻(xiàn)Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數(shù)彡彡 0. lX109cfu/ml, 納豆菌(Macillus natto Swamura ) ACCC 10614 的菌數(shù)彡 5. 0 X 109cfu/ml，枯草芽孢 tf M^Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌數(shù) 彡 5. OX 109cfu/ml，乳酸桿菌(LaciococcWs lactis) ACCC 11092 的菌數(shù)彡 5. OXlO9Cfu/ ml，雙歧桿菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌數(shù)彡 5. OX 109cfu/ml。實(shí)施例2
(1)種子培養(yǎng)液的制備
采用本實(shí)施例1的方法，制得種子培養(yǎng)液；
(2)水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的各菌種的種子培養(yǎng)液按照光合細(xì)菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的種子培養(yǎng)液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 種子培養(yǎng)液、納豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的種子培養(yǎng)液、枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的種子培養(yǎng)液、乳 酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieriws sp) ACCC 11054的種子培養(yǎng)液的重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液35%，酵母菌的種子培 養(yǎng)液15%，納豆菌的種子培養(yǎng)液25%，枯草芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液15%，乳酸桿菌的種子培養(yǎng) 液5%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液5%，在無(wú)菌條件下分別接種到同一液體培養(yǎng)基中，接種量為 液體培養(yǎng)基重量的1 % 2 %，所述的液體培養(yǎng)基中各組分在1.0L蒸餾水中的含量為紅 糖50. 0g、蜂蜜10. Og,在溶氧度為5 %即發(fā)酵罐中氧氣體積與發(fā)酵液體積比為5%的條件 下，28°C 32°C密閉式靜置培養(yǎng)7 15天，使pH值自然降到3. 0 3. 5而成。經(jīng)檢測(cè)，該水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物復(fù)合制劑為酸性，色澤金黃，pH值為3. 0-3. 5， 其制劑中各菌種的活菌數(shù)分別是光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的 菌數(shù)彡 5. 0X109cfu/ml,酵母獻(xiàn)Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數(shù) 彡 0. IX 109cfu/ml，納豆菌 UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌數(shù)彡 5. 0 X 109cfu/ ml,枯草芽抱桿 Iif {Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌數(shù)彡 5. 0X109cfu/ml,乳酸桿菌(ZaciococOT1S Iactis) ACCC 11092 的菌數(shù) 彡 5. OX 109cfu/ml，雙歧桿菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌數(shù)彡 5. OXlO9Cfu/ ml ο實(shí)施例3
(1)種子培養(yǎng)液的制備
采用本實(shí)施例1的方法，制得種子培養(yǎng)液；
(2)水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的各菌種的種子培養(yǎng)液按照光合細(xì)菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的種子培養(yǎng)液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 種子培養(yǎng)液、納豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的種子培養(yǎng)液、枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的種子培養(yǎng)液、乳酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieriws sp) ACCC 11054的種子培養(yǎng)液的重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液30%，酵母菌的種子培 養(yǎng)液10%，納豆菌的種子培養(yǎng)液20%，枯草芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液20%，乳酸桿菌的種子培養(yǎng) 液10%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液10%，在無(wú)菌條件下分別接種到同一液體培養(yǎng)基中，接種量 為液體培養(yǎng)基重量的1 % 2 %，所述的液體培養(yǎng)基中各組分在1.0L蒸餾水中的含量為 紅糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度為5 %即發(fā)酵罐中氧氣體積與發(fā)酵液體積比為5%的條件 下，28°C -32°C密閉式靜置培養(yǎng)7-15天，使pH值自然降到3. 0 3. 5而成。經(jīng)檢測(cè)，該水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生物復(fù)合制劑為酸性，色澤金黃，pH值為3.0 3. 5， 其制劑中各菌種的活菌數(shù)分別是光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的 菌數(shù)彡 5. 0X109cfu/ml,酵母獻(xiàn)Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數(shù) 彡 0. IX 109cfu/ml，納豆菌 UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌數(shù)彡 5. 0 X 109cfu/ ml,枯草芽抱桿 Iif {Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T 的菌數(shù)彡 5. 0X109cfu/ml,乳酸桿菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092 的菌數(shù) 彡 5. OX 109cfu/ml，雙歧桿菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌數(shù)彡 5. OXlO9Cfu/ ml ο應(yīng)用實(shí)施例
采用本發(fā)明實(shí)施例1制備的水產(chǎn)養(yǎng)殖微生物復(fù)合制劑，分別在蝦池和魚(yú)池中實(shí)施如
下
以蝦池為例試驗(yàn)蝦池面積2畝，放養(yǎng)自繁青蝦蝦苗5萬(wàn)只/畝；對(duì)照蝦池面積2 畝，放養(yǎng)自繁青蝦蝦苗5萬(wàn)只/畝。使用方法在試驗(yàn)蝦池中，于蝦苗放養(yǎng)前10天，采用池水潑灑方法，按照500ml水 產(chǎn)養(yǎng)殖微生物復(fù)合制劑/畝，并將其稀釋200倍，每10天一次，全池潑灑三次。試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)蝦池的溶解氧比對(duì)照池增加85% ；氨氮含量< 0. lmg/mL,比對(duì)照 蝦池平均下降65% ；總產(chǎn)比對(duì)照蝦池增加25kg，增幅15% ；商品率達(dá)90%，并且規(guī)格大，售 價(jià)高，而對(duì)照池商品率為54. 5%，并且規(guī)格小，相對(duì)售價(jià)低。以魚(yú)池為例
試驗(yàn)魚(yú)池面積8畝，每畝放養(yǎng)草魚(yú)、鯽魚(yú)和鰱魚(yú)魚(yú)種共計(jì)90kg ；對(duì)照魚(yú)池面積8畝， 每畝放養(yǎng)草魚(yú)、鯽魚(yú)和鰱魚(yú)魚(yú)種共計(jì)90kg。使用方法在試驗(yàn)魚(yú)池中，于魚(yú)種放養(yǎng)前10天，采用池水潑灑方法，按照500ml水 產(chǎn)養(yǎng)殖微生物復(fù)合制劑/畝，并將其稀釋200倍，每10天一次，全池潑灑三次。試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)魚(yú)池的畝均凈產(chǎn)比對(duì)照魚(yú)池增100kg，增幅25% ；氨氮含量 (0. lmg/mL,亞硝酸鹽含量< 0. 02mg/mL,水體中COD降低50% 60%，水體富營(yíng)養(yǎng)化有效降 低；浮游植物種群數(shù)增加30% 40%，部分藻類(lèi)總數(shù)下降60% 80%，優(yōu)化了水體中浮游植物 的種群結(jié)構(gòu)，抑制了藻類(lèi)的過(guò)度繁殖，建立和完善了養(yǎng)殖水體的微生態(tài)環(huán)境。
權(quán)利要求
一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑，其特征在于它是由光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans)ACCC 10649、酵母菌(Pichia fermentans lodder)ACCC 20319T、納豆菌(Bacillus natto Swamura)ACCC 10614、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtills subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T、乳酸桿菌(Lactococcus lactis)ACCC 11092和雙歧桿菌(Bifidobacterium sp)ACCC 11054分別進(jìn)行單菌種培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液接種于同一培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)，待培養(yǎng)液的pH值自然降至3.0～3.5而得到的，該制劑中光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans)ACCC 10649的菌數(shù)≥5.0×109cfu/ml，酵母菌(Pichia fermentans lodder)ACCC 20319T的菌數(shù)≥0.1×109cfu/ml，納豆菌(Bacillus natto Swamura)ACCC 10614的菌數(shù)≥5.0×109cfu/ml，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtills subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T的菌數(shù)≥5.0×109cfu/ml，乳酸桿菌(Lactococcus lactis)ACCC 11092的菌數(shù)≥5.0×109cfu/ml，雙歧桿菌(Bifidobacterium sp)ACCC 11054的菌數(shù)≥5.0×109cfu/ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑，其特征在于所述各菌 種的種子培養(yǎng)液的重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液25% 35%，酵母菌的種子培養(yǎng) 液5% 15%，納豆菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，枯草芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，乳 酸桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑的制備方法，其特征在 于包括如下步驟(1)種子培養(yǎng)液的制備光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的種子培養(yǎng)液的制備將光合細(xì)菌 i Rhodoplanes elegant) ACCC 10649在無(wú)菌條件下接種到液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng) 基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸鎂0. 05g、氯 化鈣0. 3g，pH值調(diào)至6. 08 7. 0之間，放置于光培養(yǎng)箱內(nèi)，28°C 30°C常規(guī)光照培養(yǎng)6 7天，得到光合細(xì)菌菌數(shù)彡5. OX 109CfU/ml的種子培養(yǎng)液；酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的種子培養(yǎng)液的制備將酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ在無(wú)菌條件下接種到液體培養(yǎng)基中，所述的液 體培養(yǎng)基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為無(wú)水硫酸鎂1. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、尿素 3. 0g、玉米漿1. 0g、硫酸錳0. 02g、硫酸亞鐵0. 2g，pH值調(diào)至5. 5，30°C _31°C培養(yǎng)4 5天， 得到酵母菌菌數(shù)彡0. IX IO9CfuAil的種子培養(yǎng)液；納豆菌(^Bacillus natto Swamura) ACCC10614的種子培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al )ACCC 10242T 的種子培養(yǎng)液的制 備將納豆菌(feci/^As natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢桿菌⑶^以·/^^ subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分別在無(wú)菌條件下接種于液體培養(yǎng) 基中，所述的液體培養(yǎng)基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為蛋白胨10. 0g、牛肉膏 3. 0g、氯化鈉5. 0g, pH值調(diào)至7. 0，28°C 32°C，單菌種培養(yǎng)7 8天，分別得到納豆菌菌數(shù) 彡5. OX 109CfU/ml的納豆菌種子培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌菌數(shù)彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢桿菌種子培養(yǎng)液；乳酸桿菌(Laciococcw1S lactis) ACCC 11092的種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp) ACCC 11054的種子培養(yǎng)液的制備將乳酸桿菌(Lactococcuslactis) ACCC 11092和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieri腫sp) ACCC 11054分別在無(wú)菌條件下 接種于液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng)基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為番茄 汁200. 0ml、可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化鈉5. 0g、酵母粉6. 0g、吐溫80 1. 0g、 葡萄糖20. 0g, pH值調(diào)至7. 2，30°C 35°C單菌種培養(yǎng)2 3天，分別得到乳酸桿菌菌數(shù) 彡5. OX 109Cfu/ml的乳酸桿菌種子培養(yǎng)液和雙歧桿菌菌數(shù)彡5. OX 109Cfu/ml的雙歧桿菌 種子培養(yǎng)液；(2)水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑的制備分別將步驟(1)制備得到的光合細(xì)菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649、酵母菌 {Pichia fermentans lodder)ACCC 20319τ、納豆菌(feci/A/s natto 5kaffltfra)ACCC10614、 枯草芽孢桿菌(feciBws subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T、乳 酸桿菌(Zaciococc^s Iactis)ACCC 11092 和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieri腫 sp)ACCC 11054 的種子培養(yǎng)液按其重量百分?jǐn)?shù)為光合細(xì)菌的種子培養(yǎng)液25% 35%，酵母菌的種子培養(yǎng) 液5% 15%，納豆菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，枯草芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液15% 25%，乳 酸桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養(yǎng)液5% 15%，在無(wú)菌條件下分別接種 到同一液體培養(yǎng)基中，接種量為液體培養(yǎng)基重量的1 % 2 %，所述的液體培養(yǎng)基中各組分 在1. OL蒸餾水中的含量為紅糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度為5 %即發(fā)酵罐中氧氣的體 積與發(fā)酵液的體積比為5%的條件下，28°C 32°C密閉式靜置培養(yǎng)7 15天，使pH值降到 3. 0-3. 5 而成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑及其制備方法。一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑，其特征在于它是由光合細(xì)菌、酵母菌、納豆菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌分別進(jìn)行單菌種培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液接種于同一培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)，待培養(yǎng)液的pH值自然降至3.0～3.5而得到的，該制劑中酵母菌的菌數(shù)≥0.1×109cfu/ml，其余各菌種的菌數(shù)均≥5.0×109cfu/ml。該水產(chǎn)養(yǎng)殖用多菌種微生物復(fù)合制劑同時(shí)可以改善水產(chǎn)動(dòng)物的生態(tài)環(huán)境，防治疾病，降低動(dòng)物應(yīng)急狀態(tài)，提高水產(chǎn)動(dòng)物品質(zhì)，縮短上市周期。
文檔編號(hào)C12N1/00GK101974434SQ201010540308
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月11日
發(fā)明者劉志強(qiáng), 司金安, 唐清池, 尹寶華, 李忠宏, 李旭光, 王學(xué)賓, 王建程, 王照, 白帥, 胡偉, 范道佳, 郭金保, 郭銀保, 陸勤 申請(qǐng)人:唐清池