專利名稱：抗阿片肽的拮抗肽與該拮抗肽的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及肽段及其編碼基因與應用，特別是涉及一種具有拮抗嗎啡抗傷害作用 的抗阿片肽及其拮抗肽，與該拮抗肽在制備增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受和/或減弱或消 除戒斷癥狀作用的藥物中的應用。
背景技術：
眾所周知，在世界范圍內猖獗的販毒吸毒活動已成為危害社會的一個毒瘤，嚴重 干擾了有序的經濟建設和社會安定，此外，靜脈吸毒還造成了艾滋病人群感染率的攀升。目 前，各國政府雖都加大聯(lián)合打擊毒品走私的力度，但吸毒、販毒活動仍屢禁不止，其中一個 重要的原因就是嗎啡耐受及依賴的原理尚未真正或完全被闡明，國際上尚無有效的戒毒手 段。國外最先采用的”替代療法”是在戒毒過程中用美沙酮一類的藥代替阿片，這種療法將 導致病人對美沙酮類藥物的耐受和依賴。在國內，寧波戒毒所楊國棟先生采用東莨菪鹼配 合其它藥物戒毒，也未完全解決心癮問題。韓濟生教授采用針灸治療儀治療戒斷癥狀，試圖 通過特定頻率的電脈沖刺激提高體內內源性阿片的合成來減輕癥狀，但它的最大缺陷是人 群中針刺鎮(zhèn)痛的有效率有限而且持續(xù)地針刺也存在耐受問題。近來，石家莊中醫(yī)藥專家王 巖對阿片戒斷癥狀進行辯癥施治，采用“金甲丸”治療戒斷綜合癥，正在經臨床進一步檢驗 和完善。因此，迫切需要一種可從源頭上徹底消除嗎啡耐受及依賴，以及減弱或消除戒斷癥 狀的戒毒藥物。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種具有拮抗嗎啡抗傷害作用的抗阿片肽。本發(fā)明所提供的抗阿片肽，命名為99A，是下述氨基酸殘基序列之一1)序列表中的 SEQ ID NO 1 ；2)將序列表中SEQ ID NO=I的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取代、 缺失或添加，具有拮抗嗎啡抗傷害作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十個氨基酸殘基可以是非結構域中的氨基酸殘基， 其改變不會對該蛋白的功能產生影響。序列表中的SEQ ID NO :1由86個氨基酸殘基組成。編碼本發(fā)明抗阿片肽99A的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中 SEQ ID NO 11 的 DNA 序列；2)編碼序列表中SEQ ID NO 1的DNA序列；3)與序列表中SEQ ID NO 11限定的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有拮抗 嗎啡抗傷害作用的核苷酸序列；
4)在高嚴謹條件下可與序列表中的SEQ ID NO 11限定的DNA序列雜交的核苷酸 序列。所述高嚴謹條件為用0. IX SSPE (或0. 1XSSC)，0. 1% SDS的溶液，在65°C下雜
交并洗膜。序列表中的SEQ ID NO :11由258個堿基組成，編碼具有序列表中SEQ ID NO 1的
氨基酸殘基序列的蛋白質。上述抗阿片肽99A的活性片段，可為下述氨基酸殘基序列之一1)序列表中的 SEQ ID NO 2 ；2)序列表中的 SEQ ID NO 3 ；3)序列表中的 SEQ ID NO 4 ；4)將序列表中SEQ ID NO :2_4的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取 代、缺失或添加具有拮抗嗎啡抗傷害作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十個氨基酸殘基可以是非結構域中的氨基酸殘基， 其改變不會對該蛋白的功能產生影響。序列表中的SEQ ID NO :2由14個氨基酸殘基組成，將具有SEQ ID NO 2氨基酸 殘基序列的抗阿片肽命名為99A-16 ；序列表中的SEQ ID NO 3由19個氨基酸殘基組成，將 具有SEQ ID N0:3氨基酸殘基序列的抗阿片肽命名為99A-19 ；序列表中的SEQ ID NO :4由 14個氨基酸殘基組成，將具有SEQID NO 4氨基酸殘基序列的抗阿片肽命名為DBI-16。編碼上述抗阿片肽活性片段的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中 SEQ ID NO 12 的 DNA 序列；2)序列表中 SEQ ID NO 13 的 DNA 序列；3)序列表中 SEQ ID NO 14 的 DNA 序列；4)編碼序列表中SEQ ID NO 2~4的DNA序列；5)與序列表中SEQ ID NO :12_14限定的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有 拮抗嗎啡抗傷害作用中起重要作用的核苷酸序列；6)在高嚴謹條件下可與序列表中的SEQ ID NO 12-14限定的DNA序列雜交的核 苷酸序列。所述高嚴謹條件為用0. IX SSPE (或0. 1XSSC)，0. 1% SDS的溶液，在65°C下雜
交并洗膜。序列表中的SEQ ID NO 12由48個堿基組成，編碼具有序列表中SEQ ID NO 2的 氨基酸殘基序列的蛋白質；序列表中的SEQ ID NO :13由57個堿基組成，編碼具有序列表中 SEQ ID NO :3的氨基酸殘基序列的蛋白質；序列表中的SEQ ID NO 14由48個堿基組成，編 碼具有序列表中SEQ ID NO 4的氨基酸殘基序列的蛋白質。上述抗阿片肽99A的拮抗肽也是本發(fā)明要保護的，可為下述氨基酸殘基序列之1)序列表中的 SEQID NO 5 ；2)序列表中的 SEQID NO 6 ；3)序列表中的 SEQID NO 7 ；4)將序列表中SEQID NO 5~7的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加具有增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受或/和減弱或消除戒斷癥狀作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十個氨基酸殘基可以是非結構域中的氨基酸殘基， 其改變不會對該蛋白的功能產生影響。序列表中的SEQ ID NO 5由21個氨基酸殘基組成，將具有SEQ ID NO :5氨基酸殘 基序列的抗阿片肽的拮抗肽命名為CP-99A-16+5 ；序列表中的SEQ ID NO 6由19個氨基酸 殘基組成，將具有SEQ ID N0:6氨基酸殘基序列的抗阿片肽的拮抗肽命名為CP-99A-19;序 列表中的SEQ ID NO :7由19個氨基酸殘基組成，將具有SEQ ID NO :7氨基酸殘基序列的抗 阿片肽的拮抗肽命名為CP-DBI-16+5。編碼本發(fā)明抗阿片肽99A拮抗肽的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID NO 8的DNA序列；2)序列表中SEQ ID NO 9的DNA序列；3)序列表中 SEQ ID NO 10 的 DNA 序列；4)編碼序列表中SEQ ID NO :5_7的DNA序列；5)與序列表中SEQ ID NO :8_10限定的核苷酸序列具有90%以上同源性且在增強 嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受或/和減弱或消除戒斷癥狀中起重要作用的核苷酸序列；6)在高嚴謹條件下可與序列表中的SEQ ID NO :8_10限定的DNA序列雜交的核苷 酸序列。所述高嚴謹條件為用0. IX SSPE (或0. 1XSSC)，0. 1% SDS的溶液，在65°C下雜
交并洗膜。序列表中的SEQ ID NO 8由63個堿基組成，編碼具有序列表中SEQ ID NO 5的 氨基酸殘基序列的蛋白質；序列表中的SEQ ID NO 9由57個堿基組成，編碼具有序列表中 SEQ ID NO :6的氨基酸殘基序列的蛋白質；序列表中的SEQ ID NO 10由63個堿基組成，編 碼具有序列表中SEQ ID NO 7的氨基酸殘基序列的蛋白質。含有上述抗阿片肽99A的拮抗肽基因的表達載體、轉基因細胞系和宿主菌以及擴 增該基因中任一片段的引物也屬于本發(fā)明的保護范圍。上述抗阿片肽99A的拮抗肽可采用常規(guī)的人工合成方法直接獲得，如可用fmoc保 護的固相合成法等方法人工合成，或可委托美聯(lián)(西安)生物科技有限公司或上海閃晶生 物多肽合成有限公司等生物公司合成，此外，也可用利用微生物發(fā)酵表達的方法獲得。本發(fā)明還提供了一種表達上述抗阿片肽99A的拮抗肽的方法。本發(fā)明所提供的表達上述拮抗肽的方法，是將含有上述抗阿片肽99A的拮抗肽基 因的重組表達載體導入宿主細胞，表達得到抗阿片肽99A的拮抗肽。所述宿主可為大腸桿菌、酵母菌、哺乳動物細胞、昆蟲細胞或枯草桿菌等，優(yōu)選為 大腸桿菌。所述大腸桿菌可為E. coli BL21(DE3)、E. coli DH5 α 或 Ε. coli ToplO 等。用于構建所述含有抗阿片肽99A的拮抗肽基因的表達載體的出發(fā)載體可為任 意一種可在大腸桿菌中表達外源基因的原核表達載體，如pET-22b、pET- 11c、pET_30a、 pET-28a、pET-28b 或 pET_28c 等。以pET_22b為出發(fā)載體，構建的含有抗阿片肽99A的拮抗肽基因的表達載體為 PET-CP-99A-16、pET-CP_99A_19 或 pET_CP-DBI_16。
上述重組表達載體均可按照常規(guī)方法構建。將上述重組表達載體轉化宿主菌的方法可為生物工程領域中常用的轉化方法，如 熱激法、電轉化法、接合轉化法或PEG介導的原生質體轉化法等。培養(yǎng)含有抗阿片肽21Kd的拮抗肽基因的宿主細胞的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，均可為 培養(yǎng)出發(fā)宿主的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。其中，培養(yǎng)所述重組大腸桿菌宿主時需加入誘導劑， 如IPTG等，所加入IPTG的濃度可為0. 1-1. Ommol/L,優(yōu)選為0. 2mmol/L,誘導溫度可為 14-37°C，優(yōu)選為30°C，誘導時間可為2-4小時，優(yōu)選為3小時。本發(fā)明的另一個目的是提供一種增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受或/和減弱或消除 戒斷癥狀的藥物。本發(fā)明所提供的藥物的活性成分為上述抗阿片肽99A的拮抗肽；其中，所述抗阿 片肽的拮抗肽選自以下氨基酸殘基序列之一1)序列表中的 SEQ ID NO 5 ；2)序列表中的 SEQ ID NO 6 ；3)序列表中的 SEQ ID NO 7 ；4)將序列表中SEQ ID NO :5_7的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取 代、缺失或添加具有增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受或/和減弱或消除戒斷癥狀作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十個氨基酸殘基可以是非結構域中的氨基酸殘基， 其改變不會對該蛋白的功能產生影響。需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的輔料，所述輔 料包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、吸收促進劑、表面活性劑、 潤滑劑和穩(wěn)定劑等。本發(fā)明的藥物可以制成注射液、干粉針劑、片劑或粒劑等多種形式。上述各種劑型 的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。上述藥物的成人用量一般為0. 01-0. 5mg/kg體重/次，可以一次或多次使用，療程 一般為10至20天。本發(fā)明提供從豬腦中分離純化出一種抗阿片肽99A及其活性片段，它具有拮抗嗎 啡抗傷害作用，吸毒過程伴隨著毒品劑量的增加可促使該蛋白的合成增加，導致嗎啡耐受 及依賴的形成。本發(fā)明是利用蛋白質分子之間存在相互作用的原理，依照三個活性片段的 序列，設計出了它們的拮抗肽。由于這些拮抗肽的分子量小于2000道爾頓，較容易通過血 腦屏障，在中樞神經系統(tǒng)的相關部位起到抵消內源性抗阿片肽效應的作用。實驗證明人工 合成的拮抗肽可作為內源性抗阿片肽的抑制劑，通過靜脈注射三個活性片段的拮抗肽，可 達到增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受和減弱或消除戒斷癥狀作用。該藥物具有以下優(yōu)點1) 療效顯著活性成分拮抗肽是通過消除吸毒者體內多余的內源性抗阿片肽及其效應來達到 增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受和消除或減弱吸毒者戒斷癥狀的目的，可從源頭上消除戒斷 癥狀；2)獲得的拮抗肽都是一些氨基酸殘基殘基數(shù)量不超過25個的短肽，容易合成，便于 開發(fā)研究；3)這些短肽進入體內容易被降解，不具備產生抗體的副作用，安全性高；4)用藥 方便，可通過靜脈注射方式或舌下含片等多種方式給藥，以消除或減弱嗎啡戒斷的癥狀；本 發(fā)明的抗阿片肽99A活性片段的拮抗肽將在醫(yī)學及戒毒藥物領域發(fā)揮重要作用，應用前景 廣闊。
下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。


圖1為檢測狗腦提取物對電脈沖引起小鼠輸精管收縮效應的影響圖2為檢測側腦室內注入狗腦粗提物(AOS)對大鼠針刺鎮(zhèn)痛效應的影響圖3A和圖3B為抗阿片肽99A對嗎啡抗傷害作用的抑制效應的檢測結果圖4為嗎啡耐受小鼠側腦室內注入抗阿片肽99A的抗血清使對嗎啡的耐受被逆轉 的檢測結果。圖5為免疫組化檢測小鼠腦片上抗阿片肽99A免疫陽性部位圖6為在大鼠韁核微量注射99A對由同側大腦導水管周圍灰質微量注射嗎啡所引 起的嗎啡抗傷害作用影響的檢測結果圖 7A-圖 7D 為抗阿片活性肽段 99A_14、99A-19、DBI_16 和 DBI-19 對嗎啡(20mg/ kgi. P.)抗傷害作用影響的檢測結果圖8A和圖8B為99A_14、99A_19和DBI-16拮抗嗎啡抗傷害作用及DBI-19增強嗎 啡抗傷害作用分別通過不同類型受體介導的鑒定結果圖9為NMDA受體和NOS在抗阿片肽99A及其活性片段拮抗嗎啡抗傷害作用中的 影響的檢測結果圖IOA-圖IOC為拮抗肽CP-99A-16、CP-99A-19和CP-DBI-16對嗎啡抗傷害作用 影響的檢測結果
具體實施例方式下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法，具體步驟可參見 《Molecular Cloning :A Laboratory Manual》(Sambrook，J. ,Russell,DavidW.，Molecular Cloning :A Laboratory Manual,3rd edition，2001，NY，Cold SpringHarbor)。所用引物及DNA序列均由上海生工生物工程有限公司合成。下述實施例中所用實驗小鼠均為8-10周齡、體重20_22g的雄性昆明小鼠(購自 科學院動物所)實施例1、抗阿片肽99A的獲得及其功能驗證一、豬腦抗阿片肽99A的獲得及其劑量依賴效應檢測1、抗阿片肽的發(fā)現(xiàn)在離體的小鼠輸精管標本，給以方波脈沖(0. IMS波寬，1次/秒)刺激 可引起收縮(具體方法參見文獻J. Hughes et al (1975) Effect of morphine on adrenergictransmission in the Mouse Vas deferens. Assessment of agonist and antagonistpotencies of Narcotic analgesics 53, 371-381),然后，先后在灌流液中力卩 入鹽酸嗎啡(3. 2nM)或狗腦提取物(A0S，200l·! g/mL)(為狗腦提取濃縮液先后經S印hadex G-50凝膠(購自Pharmacia公司)過濾，羧甲基-纖維素(CM-C購自H. Reeve-Angel&. Co. Ltd公司)陽離子交換層析后，得到樣品)，觀察對電刺激小鼠輸精管引起收縮效應的影 響。如圖1所示(M代表給嗎啡，MAP代表給狗腦提取物)，實驗發(fā)現(xiàn)在狗腦粗提物中，存在 著可增強電刺激小鼠輸精管收縮的成分，且該樣品的增強收縮效應與嗎啡抑制電刺激小鼠
7輸精管收縮的效應恰恰相反，因此，將該狗腦粗提物注入小鼠側腦室內后，可觀察到嗎啡的 抗傷害作用被顯著地抑制。此外，將上述狗腦粗提物注入針刺鎮(zhèn)痛有效大鼠(6只)的側腦室(400μ g/20y 1/ 只)，以生理鹽水(Saline)為對照(6只)，10分鐘后開始電針誘導，30分鐘后每間隔10分 鐘觀察大鼠對傷害刺激的嘶叫反應。結果如圖2所示(I. C. V.代表通過預先埋藏于側腦室 內的導管微量注射樣品，EA代表電針誘導針刺鎮(zhèn)痛；橫坐標為狗腦粗提物注射后時間，縱 坐標為嘶叫閾的變化)，以生理鹽水(Saline)為對照，經針刺誘導后，大鼠出現(xiàn)針刺鎮(zhèn)痛效 應；狗腦粗提物注射后，再進行針刺誘導，大鼠的針刺鎮(zhèn)痛效應則消失，對照組大鼠的針刺 鎮(zhèn)痛效應仍存在，上述實驗結果提示腦內存在的抗阿片物質可能是針麻鎮(zhèn)痛不全的內在因
ο2、豬腦抗阿片肽99A的獲得及其劑量依賴效應檢測從豬腦中分離純化抗阿片肽-99A的方法，同樣是參考楊樹長等人的方法并稍做 改進(楊樹長等人(1997)，豬腦抗嗎啡鎮(zhèn)痛肽的分離純化及其抗血清對嗎啡耐受影響的初 步研究，中國生物化學雜志11卷3期322-326)，具體方法為將新鮮豬全腦在0. InM乙酸中 勻漿提取，將豬腦提取物的濃縮液先后經S印hadeX-G50凝膠過濾，S-sepharoseFast Flow 離子交換層析(S-s印harose Fast Flow層析柱購自Pharmacia公司)分離后，取第1個洗 脫峰的樣品，經Q-s印harose Fast Flow離子交換層析(Q_s印haroseFast Flow層析柱購 自Pharmacia公司)分離，最后用HPLC純化，得到經純化的抗阿片肽物質。檢測純化的抗阿片物質對嗎啡的抗傷害作用的效應，方法為在腹腔注入20mg/ kg嗎啡后lOmin，將純化的豬腦抗阿片物質分別經側腦室或尾靜脈途徑給小鼠進行注射， 其中，側腦室的注射劑量分別為0. 5,1. 0,2. 0ηΜ/4μ 1，尾靜脈的注射劑量分別為1. 5,3. 0、 5.0mg/kg，以生理鹽水(Saline)為對照，然后檢測嗎啡的抗傷害作用。側腦室注射組的試 驗結果如圖3A所示(橫坐標表示嗎啡注射后時間，縱坐標表示嘶叫閾的變化(％)，n為每 組小鼠數(shù)量，i. P.表示腹腔注射，i.e. v.表示側腦室內注射)，尾靜脈注射組的試驗結果如 圖3B所示，與對照組相比，兩組小鼠的嗎啡抗傷害作用都顯著地被豬腦內抗阿片物質所抑 制，且這種抑制效應與劑量密切相關。將該由豬腦內提取的具有拮抗嗎啡抗傷害作用的蛋 白稱為抗阿片肽99A(A0P-99A)，對該抗阿片肽進行全序列測定，測序結果表明該抗阿片肽 具有序列表中SEQ ID NO :1的氨基酸殘基序列，由86個氨基酸殘基組成，該序列與豬腸DBI 的序列一致。編碼抗阿片肽99A的基因具有序列表中SEQ ID NO 11的核苷酸序列，由258 個堿基組成。二、抗阿片肽99A與嗎啡耐受及依賴關系的檢測1、制備抗阿片肽99A的單克隆抗體用步驟一提取并純化的抗阿片肽99A，按常規(guī)方法制備其單克隆抗體(制備方
:J. Μ. Davis, J. Ε. Pennington, A. M Kubler. , J. F. Consiene (1982) Asimple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas forproduction of monoclonal antibodies.J Immunol Methods 50 ； 141- ；Teruko Tumura, Heins Buer, Chriatian Birr and Rudiger Pipkom. (1983)Antibodies againstsynthetic peptides as a tool for function analysis of the transforming proteinPP60src Cell 34587-596 Sep. 1983 ；Xi Gou. , Ai Wang. , Xi Li. , Zh. Q. Gou and Y. Zhang (1991) Studies onmonoclonal antibody against recombinant granulocytecolony-stimulating factor. Chinese Medical Sciences Journal (6) 5 :212_214)，但由于抗阿片肽 99A 的分子量約 為10Kd，屬于弱抗原，免疫原性較差，因此，在制備抗體前，需要先將其與鑰孔槭血藍蛋白 (KLH)載體偶聯(lián)作為抗原，然后，對Balb/C小鼠進行免疫(進行2次皮下多點注射免疫，中 間間隔兩周)，細胞融合前3天，脾內注射13-20 μ g抗原加強免疫。融合時，在無菌條件下， 取出免疫小鼠的脾細胞與小鼠的SP2tl細胞融合，應用半固體培養(yǎng)技術，經篩選、克隆得到能 產生A0P-99A抗體的雜交瘤細胞，最后從收集的腹水中純化出單克隆抗體。2、抗阿片肽99A與嗎啡耐受及依賴關系的檢測選取20只健康小鼠，每天三次，皮下注射遞增劑量的鹽酸嗎啡，注射劑量由IOmg/ kg遞增至60mg/kg，持續(xù)10天形成對嗎啡耐受的小鼠。在嗎啡耐受及依賴的小鼠，腹腔注射 嗎啡(50mg/kg)后，將步驟1獲得的含有抗阿片肽99A單克隆抗體的抗血清分別按1 100、 1 IOU 1的比例進行稀釋，分別作側腦室內注射，注射劑量為每只12μ1(約含13mg抗 體)，以非耐受小鼠作空白對照(Blank)，以未注射抗血清的嗎啡耐受鼠為對照(Control)， 檢測嗎啡耐受小鼠側腦室內注入抗阿片肽99A抗血清對嗎啡耐受的逆轉作用。檢測結果如 圖4所示(橫坐標為不同實驗組，縱坐標為嗎啡抗傷害曲線下的面積(單位cm2) ；**代表 與耐受鼠對照組相比P < 0. 05，***代表與耐受鼠對照組相比P < 0. 01)，與耐受鼠對照組 相比，嗎啡耐受依抗阿片肽99A抗血清濃度的不同出現(xiàn)不同程度的逆轉，與非耐受的空白 對照組相比，側腦室內注入99A的抗血清(1 1)可完全逆轉50毫克/公斤劑量嗎啡的耐 受?？梢娭灰拱⑵?9A抗體的劑量足以與中樞內源性抗阿片肽99A結合，降低抗阿片 肽99A水平，即可使嗎啡耐受得以逆轉。采用以下兩種方式檢測抗阿片肽99A的單克隆抗體對Naloxone (10mg/kg)誘發(fā)的 戒斷效應_跳躍的治療作用。第一種方式是以遞增劑量嗎啡給小鼠做皮下注射，每天2次， 持續(xù)20天形成對嗎啡的耐受及依賴，在最后一次注射嗎啡后6-8小時，經側腦室內注射上 述獲得的抗阿片肽99A的單克隆抗體，注射劑量為每只12 μ 1 (約含13 μ g抗體)，然后腹 腔注射阿片拮抗劑Naloxone (10mg/kg)以誘發(fā)自發(fā)跳躍癥狀。結果如表1所示，在對照組 (側腦室內注射12μ1 PBS)，5只小鼠都出現(xiàn)自發(fā)跳躍癥狀；在治療組，5只小鼠全都未出現(xiàn) 自發(fā)跳躍癥狀，說明抗阿片肽99A的單克隆抗體可消除由阿片拮抗劑Naloxone誘發(fā)的自發(fā) 跳躍癥狀。表1抗阿片肽99A的單克隆抗體對Naloxone (10mg/kg)誘發(fā)戒斷效應-跳躍的治 療作用的檢測結果
權利要求
1.一種抗阿片肽的拮抗肽，其氨基酸殘基序列為序列表中的SEQ ID NO :6。
2.編碼權利要求1所述的抗阿片肽拮抗肽的基因。
3.根據權利要求2所述的基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列是序列表中的SEQ ID NO :9。
4.含有權利要求2或3所述基因的表達載體。
5.含有權利要求2或3所述基因的轉基因細胞系。
6.含有權利要求2或3所述基因的宿主菌。
7.以權利要求1所述的抗阿片肽的拮抗肽為活性成分的增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受 和/或減弱或消除戒斷癥狀作用的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗阿片肽及其拮抗肽與應用。該抗阿片肽是下述氨基酸殘基序列之一1)序列表中的SEQ ID NO1；2)將序列表中SEQ ID NO1的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加具有拮抗嗎啡抗傷害作用的多肽。其拮抗肽是下述氨基酸殘基序列之一1)序列表中的SEQ ID NO5-7；2)將序列表中SEQ ID NO5-7的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加具有增強嗎啡鎮(zhèn)痛、逆轉嗎啡耐受和/或減弱或消除戒斷癥狀作用的多肽。本發(fā)明的抗阿片肽及其活性片段與拮抗肽將在醫(yī)學及戒毒藥物的制備領域發(fā)揮重要作用，應用前景廣闊。
文檔編號C12N15/11GK102127151SQ20101058113
公開日2011年7月20日 申請日期2007年6月11日 優(yōu)先權日2007年6月11日
發(fā)明者吳才宏, 曲紅, 陳玉珍 申請人:北京大學