專利名稱：前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法和相關(guān)檢測(cè)探針及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及疾病相關(guān)基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及前列腺癌相關(guān)融合基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法和相關(guān)檢測(cè)探針及試劑盒。
背景技術(shù)：
Ilr歹(prostatic carcinoma, prostatic cancer, Pea) ^^ ^ ' '] 的惡性腫瘤。在北美地區(qū)，前列腺癌的發(fā)病率僅次于皮膚癌，每6個(gè)美國(guó)男性中就有1人會(huì)患前列腺癌。前列腺癌的死亡率僅次于肺癌，每36個(gè)美國(guó)男性中就有1人會(huì)死于前列腺癌。 在2010年，已報(bào)道了 217，730例前列腺癌病例，32，050例死亡病例。前列腺癌發(fā)病率隨年齡增高，在50歲人群中，發(fā)病率約為2. 14%，在70歲人群中，發(fā)病率上升到8. 02%。我國(guó)近年來(lái)由于人口老齡化，發(fā)病率也開(kāi)始增加。目前前列腺癌的診斷主要依靠三種手段PSA篩查，直腸指檢及經(jīng)直腸B超引導(dǎo)下前列腺穿刺活檢。PSA篩查目前應(yīng)用最廣泛，但特異性較低。PSA> lOng/mL時(shí)，漏診率在 50%以上；PSA為4 lOng/mL，結(jié)合穿刺活檢僅能發(fā)現(xiàn)20% 40%的前列腺癌患者；PSA < 4ng/mL仍有20% 30%患者漏診。PSA篩查不能有效區(qū)分早期前列腺癌和良性前列腺增生，尤其當(dāng)PSA為2 lOng/mL時(shí)，更加無(wú)法判斷。經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)下前列腺穿刺活檢， 是診斷前列腺癌的主要方法。而早期前列腺癌表現(xiàn)主要為組織結(jié)構(gòu)的改變，細(xì)胞病理學(xué)改變不典型，其診斷易受病理檢查者主觀經(jīng)驗(yàn)的影響。2005年發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)前列腺癌組織中，TMPRSS2與ETS相關(guān)基因(ERG，ETVl及 ETV4)之間可以發(fā)生融合，表明非隨機(jī)的基因重排可以發(fā)生在上皮來(lái)源的癌癥中，被認(rèn)為是人類惡性腫瘤中最多見(jiàn)的基因變異形式。目前，檢測(cè)融合基因主要有RT-PCR和FISH兩種方法。RT-PCR對(duì)樣本和技術(shù)要求較高，部分甲醛固定、石蠟包埋標(biāo)本因RNA降解影響結(jié)果的可靠性，不能直接顯示標(biāo)本組織形態(tài)學(xué)的關(guān)系。研究表明，在前列腺癌患者直腸指檢后尿標(biāo)本中，采取RT-PCR檢測(cè) TMPRSS2-ERG融合基因，雖然特異性可達(dá)93%，但敏感性僅為32% 42%。FISH為分子生物學(xué)(探針)與細(xì)胞遺傳學(xué)(染色體)相結(jié)合，檢測(cè)染色體異常的新技術(shù)，開(kāi)辟了間期細(xì)胞遺傳學(xué)研究的新領(lǐng)域。FISH作為一種快速、準(zhǔn)確、直觀的分子遺傳學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用于膀胱癌、乳腺癌、血液系統(tǒng)疾病診斷及預(yù)后判斷中，但對(duì)于應(yīng)用FISH技術(shù)進(jìn)行前列腺癌相關(guān)融合基因的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)外尚不多見(jiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的就是針對(duì)以上存在的問(wèn)題與不足，提供一種前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法和相關(guān)檢測(cè)探針及試劑盒，該檢測(cè)方法設(shè)計(jì)巧妙，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性均能大幅提高，可以快速、準(zhǔn)確、直觀檢測(cè)出前列腺癌相關(guān)融合基因，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確CN 102533945 A
可靠，從而可作為醫(yī)師診斷前列腺癌的參考依據(jù)，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種前列腺癌相關(guān)融合基因 Fish檢測(cè)方法，其特點(diǎn)是，對(duì)前列腺癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理，然后采用雙色融合探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述前列腺癌相關(guān)融合基因。較佳地，所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列， ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4為 SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。更佳地，所述TMPRSS2采用Cy3標(biāo)記，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2 標(biāo)記。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于上述的前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法的雙色融合探針，其特點(diǎn)是，所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、 TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1 所示的核苷酸序列，ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4為SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。較佳地，所述TMPRSS2采用Cy3標(biāo)記，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2 標(biāo)記。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)試劑盒，其特點(diǎn)是，包括雙色融合探針容器，所述雙色融合探針容器內(nèi)具有TMPRSS2/ERG雙色融合探針、 TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1 所示的核苷酸序列，ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4為SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。較佳地，所述I1PRSS2采用Cy3標(biāo)記，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2標(biāo)記。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明的前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法通過(guò)對(duì)前列腺癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理，然后采用雙色融合探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述前列腺癌相關(guān)融合基因，設(shè)計(jì)巧妙，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性均能大幅提高，可以快速、準(zhǔn)確、直觀檢測(cè)出前列腺癌相關(guān)融合基因，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師診斷前列腺癌的參考依據(jù)，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明。下列具體實(shí)施例采用的試劑、儀器、耗材和步驟具體如下1 試劑1.1DNA 探針TMPRSS2/ERG, TMPRSS2/ETV1, TMPRSS2/ETV4 雙色融合探針。TMRPSS2 (Homo sapiens transmembrane protease, serine 2)用 Cy3 標(biāo)記，產(chǎn)生紅色信號(hào)。ERG(Homo sapiens v_ets erythroblastosis virus E26 oncogene homolog(avian) (ERG), transcript variant 2),ETVl (Homo sapiens ets variant 1 (ETVl)),ETV4(Homo sapiens ets variant gene 4 (EIAenhancer binding protein, ElAF) (ETV4))用 Cy2 標(biāo)記，產(chǎn)生綠色信號(hào)。在_20°C下避光保存。溶解在含有硫酸葡聚糖，去離子甲酰胺和SSC的緩沖液中。
權(quán)利要求
1.一種前列腺癌相關(guān)融合基因FiSh檢測(cè)方法，其特征在于，對(duì)前列腺癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理，然后采用雙色融合探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述前列腺癌相關(guān)融合基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法，其特征在于，所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2為SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列，ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4為SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法，其特征在于，所述 TMPRSS2采用Cy3標(biāo)記，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2標(biāo)記。
4.一種用于根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法的雙色融合探針，其特征在于，所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列， ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4為 SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙色融合探針，其特征在于，所述TMPRSS2采用Cy3標(biāo)記，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2標(biāo)記。
6.一種前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括雙色融合探針容器，所述雙色融合探針容器內(nèi)具有TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列，ERG 為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4為SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙色融合探針，其特征在于，所述TMPRSS2采用Cy3標(biāo)記，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2標(biāo)記。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法，對(duì)前列腺癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理，然后采用雙色融合探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在前列腺癌相關(guān)融合基因。較佳地，雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針，其中TMPRSS2、ERG、ETV1和ETV4分別為為SEQ ID NO1-4所示的核苷酸序列。還涉及相關(guān)的雙色融合探針及試劑盒。本發(fā)明的前列腺癌相關(guān)融合基因Fish檢測(cè)方法設(shè)計(jì)巧妙，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性均能大幅提高，可以快速、準(zhǔn)確、直觀檢測(cè)出前列腺癌相關(guān)融合基因，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師診斷前列腺癌的參考依據(jù)，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102533945SQ20101058605
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月13日
發(fā)明者白小萍, 譚睿, 趙翊均 申請(qǐng)人:江蘇百帝生物科技有限公司