專利名稱：一種apoA5基因突變檢測(cè)特異性引物和液相芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屈于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種apoA5基因檢測(cè)特異性引物和液相芯片。
背景技術(shù)：
載脂蛋白A5(ap0lip0pr0tein A5 gene，apoA5)，是載脂蛋白家族成員，該基因定位于11號(hào)染色體長(zhǎng)臂q23區(qū)(llq23)，與apoAl/C3/A4基因簇相距約301Λ，基因全長(zhǎng)1889bp，這個(gè)基因有4個(gè)外顯子、2個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)沉默子，編碼1種363個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，對(duì)血漿甘油三脂(triglyceride，TG)水平有重要的影響。血漿TG代謝與心血管疾病的關(guān)系十分密切，目前NCBI已收錄20多個(gè)SNP位點(diǎn)，本發(fā)明目標(biāo)檢測(cè)的apoA5基因突變位點(diǎn)，如表所示
權(quán)利要求
1.一種apoA5基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征在于，主要包括有(A).針對(duì)每種突變分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變的特異性引物組成，所述野生型和突變型的特異性引物分別為針對(duì)Ai;34G突變的SEQ ID NO. 13及SEQ ID NO. 14、針對(duì)T63C突變的SEQ IDNO. 15 及 SEQID NO. 16、針對(duì) C41G 突變的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18、針對(duì) G54T 突變的SEQ IDN0. 19 及 SEQ ID NO. 20、針對(duì) A81G 突變的 SEQ ID N021 及 SEQ ID NO. 22、和 / 或針對(duì) G194A 突變的 SEQ ID NO. 23 及 SEQ ID NO. 24 ；所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. 1-12 ；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 25 SEQ ID NO. 36中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)；(C).用于擴(kuò)增出需要檢測(cè)的、具有突變位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的apoA5基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征在于，所述擴(kuò)增引物為針對(duì) A134G 突變的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38、針對(duì) T63C 突變的 SEQ ID NO. 39 及SEQ IDN0. 40、針對(duì) C41G 突變的 SEQ ID NO. 41 及 SEQ ID NO. 42、針對(duì) G54T 突變的 SEQ IDNO. 43及SEQ ID NO. 44、針對(duì)A8IG突變的 SEQ ID NO. 45及SEQ ID NO. 46、和 /或針對(duì)G194A突變的 SEQ ID NO. 47 及 SEQ ID NO. 48。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的apoA5基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征在于，所述ASPE引物為由SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 14組成的序列、由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 16組成的序列、由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ IDNO. 18組成的序列、由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQID NO. 20組成的序列、由SEQ ID N0. 9和SEQ ID N0. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID N0. 22組成的序列、和/或由SEQ ID NO. 11和SEQ ID N0. 23組成的序列及由SEQID N0. 12和SEQ ID N0. 24組成的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的apoA5基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征在于，(A).所述ASPE引物為由SEQID NO. 1和SEQ ID N0. 13組成的序列及由SEQ ID N0. 2和SEQ ID N0. 14組成的序列、由SEQ ID N0. 3和SEQ ID N0. 15組成的序列及由SEQ IDN0. 4和SEQ ID N0. 16組成的序列、由SEQ ID N0. 5和SEQ ID N0. 17組成的序列及由SEQID N0. 6和SEQ ID N0. 18組成的序列、由SEQ ID N0. 7和SEQ ID N0. 19組成的序列及由SEQ ID N0. 8和SEQ ID N0. 20組成的序列、由SEQ ID N0. 9和SEQ ID N0. 21組成的序列及由 SEQ ID NO. 10 和 SEQ ID N0. 22 組成的序列、和由 SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID N0. 23 組成的序列及由SEQ IDN0. 12和SEQ ID N0. 24組成的序列；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID N0. 25 SEQ ID N0. 36中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)；(C).所述擴(kuò)增引物為針對(duì)A134G突變的SEQID N0. 37及SEQ ID N0. 38、針對(duì)T63C突變的 SEQ ID N0. 39 及 SEQ ID N0. 40、針對(duì) C41G 突變的 SEQ ID N0. 41 及 SEQ ID N0. 42、針對(duì) G54T 突變的 SEQ ID N0. 43 及 SEQ ID N0. 44、針對(duì) A81G 突變的 SEQ ID N0. 45 及 SEQIDN0. 46、和針對(duì) G194A 突變的 SEQ ID N0. 47 及 SEQ ID N0. 48。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的apoA5基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10個(gè)T。
6.一種用于apoA5基因突變檢測(cè)的特異性引物，其特征在于，包括有針對(duì)A134G突變的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14、針對(duì) T63C 突變的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16、針對(duì) C41G 突變的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18、針對(duì) G54T 突變的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ IDNO. 20、針對(duì) A81G 突變的 SEQ ID NO. 21 及 SEQ ID NO. 22、和 / 或針對(duì) G194A 突變的 SEQ IDNO. 23 及 SEQID NO. 24。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種apoA5基因突變檢測(cè)特異性引物和液相芯片，所述液相芯片主要包括有由5’端的tag序列和3’端的特異性引物組成的ASPE引物，所述特異性引物為針對(duì)A134G突變的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14、針對(duì)T63C突變的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16、針對(duì)C41G突變的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18、針對(duì)G54T突變的SEQ ID NO.19及SEQ IDNO.20、針對(duì)A81G突變的SEQ ID NO21及SEQ ID NO.22、和/或針對(duì)G194A突變的SEQ IDNO.23及SEQ ID NO.24；有anti-tag序列包被的微球；擴(kuò)增引物。本發(fā)明所提供的apoA5基因突變檢測(cè)液相芯片的檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序法的吻合率高達(dá)100％，并可實(shí)現(xiàn)多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的并行檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102559850SQ201010590688
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月16日
發(fā)明者朱澤堯, 秦會(huì)娟, 許嘉森, 郭婧 申請(qǐng)人:廣州益善生物技術(shù)有限公司