專利名稱：一種對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物的生物活性的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物的生物活性的檢測(cè)方法，更具體地說(shuō)是一種對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)的生物活性檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
藥物的生物活性檢測(cè)法是以藥物的生物效應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，測(cè)定藥物有效性的一種方法，從而達(dá)到控制藥品質(zhì)量的作用。其測(cè)定方法包括生物效價(jià)測(cè)定法和生物活性限值測(cè)定法。天然的、人工合成的生物活性物質(zhì)、從動(dòng)物臟器組織中提取制得的生化藥品或多組分生化藥品、中藥等，由于來(lái)源廣泛、多變，制備工藝復(fù)雜，使得其制劑的質(zhì)量控制相對(duì)困難，又往往因?yàn)楹卸喾N活性成分和具有多種藥理作用，因此，僅僅控制少數(shù)成分不能完全控制其質(zhì)量和反映臨床療效。為了使此類藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更好地保證每批藥品的臨床使用安全有效，有必要在現(xiàn)有含量測(cè)定的基礎(chǔ)上增加生物活性檢測(cè)，以綜合評(píng)價(jià)其質(zhì)量。藥物的生物活性檢測(cè)方法可以運(yùn)用多種常用的藥理學(xué)方法進(jìn)行，其中以動(dòng)物實(shí)驗(yàn) (整體實(shí)驗(yàn))和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(離體實(shí)驗(yàn))居多并且比較成熟，但是由于骨的生長(zhǎng)周期比較長(zhǎng)， 因此在對(duì)具有成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)的生物活性檢測(cè)時(shí)， 由于骨生長(zhǎng)周期的限制，不適宜用整體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行；離體實(shí)驗(yàn)，由于組織和器官體外培養(yǎng)的難度很大，所以多選擇細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)載體進(jìn)行試驗(yàn)。目前常規(guī)的公認(rèn)的細(xì)胞生物活性的化學(xué)檢測(cè)法有三種①四唑鹽(MTT)比色法 (原理是活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的藍(lán)紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀以在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反應(yīng)活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比)；②細(xì)胞蛋白質(zhì)含量測(cè)定法(考馬斯亮藍(lán)測(cè)定法，基本原理為考馬斯亮藍(lán)在酸性溶液與蛋白質(zhì)結(jié)合，在595nm波長(zhǎng)處呈最大吸收，其OD值與蛋白質(zhì)含量成正比。主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)、受體及細(xì)胞外代謝物的特異性活性。)③細(xì)胞蛋白質(zhì)合成測(cè)定法(H-亮氨酸摻入法，本原理為細(xì)胞在合成蛋白質(zhì)時(shí)需要攝取外源性氨基酸，用同位素標(biāo)記氨基酸如H-亮氨酸可以摻入細(xì)胞蛋白合成代謝中，通過(guò)測(cè)定細(xì)胞的放射性強(qiáng)度，可了解細(xì)胞蛋白質(zhì)合成代謝情況。)成骨細(xì)胞在骨形成過(guò)程中要經(jīng)歷成骨細(xì)胞增殖，細(xì)胞外基質(zhì)成熟、細(xì)胞外基質(zhì)礦化和成骨細(xì)胞凋亡四個(gè)階段。成骨細(xì)胞增殖期成骨細(xì)胞數(shù)量增加，以形成多層細(xì)胞，并合成、分泌I型膠原以便最終可以礦化形成骨結(jié)節(jié)。在細(xì)胞增殖晚期，與細(xì)胞周期與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因表達(dá)下降，而編碼細(xì)胞外基質(zhì)成熟的蛋白的基因開始表達(dá)，在分化早期主要是堿性磷酸酶表達(dá)，因此堿性磷酸酶(ALP)被認(rèn)為是細(xì)胞外基質(zhì)成熟的早期標(biāo)志，ALPmRNA 表達(dá)此時(shí)可增加10倍以上。成骨細(xì)胞分泌ALP和鈣鹽結(jié)晶體至細(xì)胞外基質(zhì)中，ALP使局部磷酸含量增高，促使基質(zhì)礦化。在細(xì)胞外基質(zhì)成熟期，膠原繼續(xù)合成并相互交聯(lián)、成熟。
4在成骨細(xì)胞分化晚期，當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)入礦化期，細(xì)胞內(nèi)的ALP活性下降，而與細(xì)胞外基質(zhì)中羥磷灰石沉積相關(guān)的基因表達(dá)達(dá)到高峰，如骨橋蛋白(osteopontin)、骨鈣素、骨唾液酸白 (bonesialoprotein)基因。骨鈣素等非膠原蛋白分泌至細(xì)胞外基質(zhì)中，與鈣、磷結(jié)合，然后， 沿膠原分子的長(zhǎng)軸，鈣和磷結(jié)合到膠原分子的側(cè)鏈的膠原氨基酸殘基上，形成羥磷灰石結(jié)晶。體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞在骨礦化期骨鈣素高度增加，此后，骨鈣素逐漸降低，與此同時(shí)，可觀察到膠原酶增加，成骨細(xì)胞開始凋亡，并出現(xiàn)代償性細(xì)胞增殖和膠原合成。常用的比較成熟的三種檢測(cè)方法均為檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)情況，由于成骨細(xì)胞數(shù)量的增加并不能全面反應(yīng)藥物對(duì)成骨細(xì)胞功能的影響情況，而成骨細(xì)胞的功能是反映藥物活性的重要指標(biāo)，因此對(duì)于藥物所具有的促進(jìn)成骨細(xì)胞的特征性功能(堿性磷酸酶分泌、 骨鈣素分泌、膠原蛋白合成等特征性功能)的活性來(lái)說(shuō)，上述三種檢測(cè)方法均存在專屬性不強(qiáng)，無(wú)法全面反應(yīng)藥物的實(shí)際活性的缺點(diǎn)。本發(fā)明的目的在于找到一種簡(jiǎn)單、快速、可操作性強(qiáng)，可用于檢測(cè)具有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和功能的藥物或活性物質(zhì)的活性的方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)單、易行、專屬性強(qiáng)的用于具有促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和功能的作用的藥物或活性物質(zhì)的生物活性的檢測(cè)方法。本發(fā)明方法是通過(guò)檢測(cè)給予藥物或活性物質(zhì)后成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)的含量，檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物(或活性物質(zhì))的生物活性。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的方法包括以下步驟(1)復(fù)蘇凍存細(xì)胞株或者進(jìn)行細(xì)胞的原代培養(yǎng)，接種于培養(yǎng)瓶培養(yǎng)增殖；當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿單層后常規(guī)消化，以含1-25%小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)的培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為(1-9) X10(3_1CI)個(gè)，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)；(2)培養(yǎng)M小時(shí)后，棄培養(yǎng)液，按如下分組加入供試品①細(xì)胞對(duì)照組每孔加含 1-25%小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)培養(yǎng)液的細(xì)胞懸液；②陰性對(duì)照組加含1-25% 小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)的培養(yǎng)液；③供試藥物組將供試藥物以含1-25%小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)的培養(yǎng)液配置到合適的檢測(cè)濃度(本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)公知常識(shí)可確定此檢測(cè)濃度；例如確定該濃度的方法可以是將供試藥物做適當(dāng)梯度稀釋， 獲得連續(xù)稀釋的藥物后，加入到細(xì)胞中，按步驟(1)進(jìn)行培養(yǎng)后測(cè)定上清液、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)及上清液的堿性磷酸酶含量，以堿性磷酸酶含量高并且重復(fù)試驗(yàn)后結(jié)果穩(wěn)定的濃度為最適宜檢測(cè)濃度；也可以根據(jù)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的綜合結(jié)果，確定最適宜檢測(cè)濃度。)。(3)將細(xì)胞培養(yǎng)板置37°C、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)M_336小時(shí)后，測(cè)定上清液、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)及上清液的堿性磷酸酶含量(堿性磷酸酶的測(cè)定方法可以使用任何可行的檢測(cè)方法，例如可以用以下方法進(jìn)行檢測(cè)培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí)，棄培養(yǎng)液，每孔加入0. Olmol/ L的磷酸鹽緩沖液(pH7. 3)洗滌兩次，每孔加入100μ L、0. 的Triton X-100溶液，放置在-20°C冰箱中反復(fù)凍融2次以完全裂解細(xì)胞，每孔加入3 X 10_3mol -L"1對(duì)硝基苯磷酸二鈉鹽(PNPP)溶液及DEA緩沖液各50 μ L，于37°C溫箱內(nèi)反應(yīng)30min后，每孔加入0. 2mol · L-1 的NaOH 50 μ L終止反應(yīng)，于酶標(biāo)儀405nm處測(cè)定OD值。)。(4)用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔A值檢測(cè)波長(zhǎng)405nm。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)
5以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，以t檢驗(yàn)比較差別的顯著性，當(dāng)P < 0. 05時(shí)有活性。還可包括步驟( 根據(jù)公式計(jì)算刺激指數(shù)，用于判斷在測(cè)藥物的活性程度，刺激指數(shù)的計(jì)算公式如下所示
供試品組各孔吸收度平均值-空白對(duì)照組各孔吸收度平均值
朿Il激指教
對(duì)照組各孔吸收度平均值—空白對(duì)照組各孔吸收度平均值
或
=供試品組各孔吸收度平均值
對(duì)照組各孔吸收度平均值當(dāng)刺激指數(shù)在1. 5-20時(shí)認(rèn)定藥物有活性，并且隨著刺激指數(shù)的增大而判定該藥物的活性大小。優(yōu)選地，步驟(3)中細(xì)胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)時(shí)間是72小時(shí)。優(yōu)選地，上述對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)包括對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的天然的或人工合成的生物活性物質(zhì)、從動(dòng)物臟器組織中提取制得的生化藥品或多組分生化藥品以及中藥制劑。優(yōu)選地，上述藥物或活性物質(zhì)包括動(dòng)物骨多肽制劑，包括骨肽制劑(注射劑、口服制劑)、鹿瓜多肽制劑(注射劑、口服制劑)、復(fù)方骨肽注射劑(注射劑、口服制劑)、骨瓜提取物注射劑(注射劑、口服制劑)等動(dòng)物骨多肽的各種制劑[豬骨(包括乳豬)、牛骨(包括胎牛)、馬骨、羊骨、鹿骨(包括馬鹿骨和梅花鹿骨)、豹骨、狗骨等]。優(yōu)選地，上述成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞包括所有動(dòng)物的成骨細(xì)胞原代細(xì)胞，及已經(jīng)建立的成骨或成骨樣細(xì)胞系，可以包括成骨細(xì)胞、軟骨骨細(xì)胞和所有的類成骨細(xì)胞(成骨樣細(xì)胞)，包括成骨樣細(xì)胞株MG-63、成骨樣細(xì)胞UMR106、人成骨樣細(xì)胞0S-732、成骨細(xì)胞系hFOBl. 19(hF0Bs)、人成骨細(xì)胞系H0S-8603、新生小鼠顱骨成骨細(xì)胞、新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞、胎兔顱骨成骨樣細(xì)胞、人成骨樣細(xì)胞MMP、大鼠骨肉瘤成骨樣細(xì)胞MAPK、人成骨樣細(xì)胞SA0S-2 (SaOS-2細(xì)胞)、成骨樣細(xì)胞株R0S17/2. 8、小鼠骨樣細(xì)胞ML0-Y4、小鼠成骨樣細(xì)胞MC3T3-E1、永生化大鼠成骨細(xì)胞系R0B-1、人成骨樣細(xì)胞系0S-732、大鼠R0S17/2. 8細(xì)胞系、成骨樣細(xì)胞系rob-c20、成骨樣細(xì)胞(Hu09細(xì)胞)等任何一種成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞等所有的已經(jīng)建立的成骨或成骨樣細(xì)胞系。[本發(fā)明的創(chuàng)新性]本發(fā)明的創(chuàng)新性在于提供了一種細(xì)胞活性檢測(cè)的新思路一一運(yùn)用專屬性強(qiáng)的細(xì)胞特征性產(chǎn)物作為檢測(cè)指標(biāo)。本發(fā)明的基本原理為堿性磷酸酶(ALP)作為較成熟的參與和促進(jìn)礦化活動(dòng)、與礦化組織形成密切相關(guān)的酶類，與骨礦的沉積、礦化密切相關(guān)，是成骨細(xì)胞分化成熟的重要標(biāo)志；分化程度越高，分泌礦化基質(zhì)的能力越強(qiáng)，則ALP活性越高。目前ALP已被廣泛作為檢測(cè)成骨細(xì)胞分化和礦化的重要參考指標(biāo)之一。但是，現(xiàn)有技術(shù)中從未有人提出將堿性磷酸酶作為指標(biāo)成分來(lái)檢測(cè)藥物的生物活性。這是與現(xiàn)有技術(shù)的內(nèi)容截然不同的概念。而現(xiàn)有的最為常用于檢測(cè)藥物活性的檢測(cè)方法“注射用骨肽用MTT法”存在專屬性不強(qiáng)，無(wú)法全面反應(yīng)藥物的實(shí)際活性的缺點(diǎn)，因而，本發(fā)明人出于提出一種簡(jiǎn)單、易行、專屬性強(qiáng)的藥物活性檢測(cè)方法的想法，從多方面考慮，通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)將堿性磷酸酶作為活性判斷的指標(biāo)成分的檢測(cè)方法能夠獲得很好的效果，因而提出了一種新的藥物活性檢測(cè)方法，由此完成了本發(fā)明。應(yīng)可以看出，這種一種很新穎的想法，并且通過(guò)實(shí)驗(yàn)也證明該方法遠(yuǎn)優(yōu)于現(xiàn)常用的MTT法。本發(fā)明與現(xiàn)有的生物活性檢測(cè)方法(注射用骨肽用MTT法)的比較本發(fā)明的方法用含10 %的小牛血清MEM-aa培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)MG-63細(xì)胞，0. 05 %胰蛋白酶-0. 08% EDTA的消化傳代培養(yǎng)，消化后收集到的細(xì)胞用含10%的小牛血清的MEM-aa培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度的至5 X 104，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100 μ L，其中10孔加含10% 的小牛血清的MEM-aa培養(yǎng)液100 μ L不加細(xì)胞作為空白對(duì)照，置37°C，5%二氧化碳飽和水汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜，棄培養(yǎng)液，加入注射用骨肽供試品溶液200 μ L(樣品的濃度為0. Img 多肽/ml)，每個(gè)供試品做10孔(η = 10)，細(xì)胞對(duì)照組和空白對(duì)照組每孔分別加入MEM-aa 培養(yǎng)基200 μ L，置于37°C、5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，結(jié)束培養(yǎng)前4小時(shí)，棄培養(yǎng)液，每孔加入0. 01mol/L的磷酸鹽緩沖液(ρΗ7· 3)洗滌兩次，每孔加入100 μ L、0. 1 %的Triton X-IOO溶液，放置在-20°C冰箱中反復(fù)凍融2次以完全裂解細(xì)胞，每孔加入3X10_3mol · Γ1 對(duì)硝基苯磷酸二鈉鹽(PNPP)溶液及DEA緩沖液各50 μ L，于37°C溫箱內(nèi)反應(yīng)30min后，每孔加入0. 2mol化―1的NaOH 50 μ L終止反應(yīng)，于酶標(biāo)儀405nm處測(cè)定OD值。比較各樣品與細(xì)胞對(duì)照間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異并按照下列公式計(jì)算刺激指數(shù)，刺激指數(shù)大于2. 0的即為合格藥品。公式為
權(quán)利要求
1.一種對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)的生物活性的檢測(cè)方法，其特征在于通過(guò)檢測(cè)給予藥物后成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞中堿性磷酸酶(ALP)的含量，檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)的生物活性。
2.權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，該方法具體包括以下步驟(1)復(fù)蘇凍存細(xì)胞株或者進(jìn)行細(xì)胞的原代培養(yǎng)，接種于培養(yǎng)瓶培養(yǎng)增殖；當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿單層后常規(guī)消化，以含1-25%小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)的培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為 (1-9)X10(3_1CI)個(gè)，置培養(yǎng)箱培養(yǎng);(2)培養(yǎng)M小時(shí)后，棄培養(yǎng)液，按如下分組加入供試品①細(xì)胞對(duì)照組每孔加含 1-25%小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)培養(yǎng)液的細(xì)胞懸液；②陰性對(duì)照組加含1-25% 小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)的培養(yǎng)液；③供試藥物組將供試藥物以含1-25%小牛血清(胎牛血清、新生牛血清)的培養(yǎng)液配置到合適的檢測(cè)濃度；(3)將細(xì)胞培養(yǎng)板置37°C、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)M-336小時(shí)后，測(cè)定上清液、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)及上清液的堿性磷酸酶含量；(4)用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔A值檢測(cè)波長(zhǎng)405nm；對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，以t檢驗(yàn)比較差別的顯著性，當(dāng)P < 0. 05時(shí)有活性。
3.權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，還包括步驟(5)根據(jù)公式計(jì)算刺激指數(shù)，用于判斷在測(cè)藥物的活性程度，刺激指數(shù)的計(jì)算公式如下所示刺激產(chǎn)教=供試品組各孔吸收度平均值-空白對(duì)照組各孔吸收度平均值 _對(duì)照組各孔吸收度平均值-空白對(duì)照組各孔吸收度平均值或制激戶教=供試品組各孔吸收度平均值 _對(duì)照組各孔吸收度平均值當(dāng)刺激指數(shù)在1. 5-20時(shí)認(rèn)定藥物有活性，并且隨著刺激指數(shù)的增大而判定該藥物的活性大小。
4.權(quán)利要求2或3的檢測(cè)方法，其中步驟(3)中細(xì)胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)時(shí)間是72小時(shí)。
5.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的檢測(cè)方法，其中上述對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)包括對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的天然的或人工合成的生物活性物質(zhì)、從動(dòng)物臟器組織中提取制得的生化藥品或多組分生化藥品以及中藥制劑，如動(dòng)物骨多肽制劑，包括骨肽制劑(注射劑、口服制劑)、鹿瓜多肽制劑(注射劑、口服制劑)、 復(fù)方骨肽注射劑(注射劑、口服制劑)、骨瓜提取物注射劑(注射劑、口服制劑)等動(dòng)物骨多肽的各種制劑。
6.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的檢測(cè)方法，其中成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞包括所有動(dòng)物的成骨細(xì)胞原代細(xì)胞，及已經(jīng)建立的成骨或成骨樣細(xì)胞系，可以包括成骨細(xì)胞、軟骨骨細(xì)胞和所有的類成骨細(xì)胞(成骨樣細(xì)胞)，包括成骨樣細(xì)胞株MG-63、成骨樣細(xì)胞UMR106、人成骨樣細(xì)胞0S-732、成骨細(xì)胞系hFOBl. 19 (hFOBs)、人成骨細(xì)胞系H0S-8603、新生小鼠顱骨成骨細(xì)胞、新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞、胎兔顱骨成骨樣細(xì)胞、人成骨樣細(xì)胞MMP、大鼠骨肉瘤成骨樣細(xì)胞MAPK、人成骨樣細(xì)胞SA0S-2 (SaOS-2細(xì)胞)、成骨樣細(xì)胞株R0S17/2. 8、小鼠骨樣細(xì)胞ML0-Y4、小鼠成骨樣細(xì)胞MC3T3-E1、永生化大鼠成骨細(xì)胞系R0B-1、人成骨樣細(xì)胞系0S-732、大鼠R0S17/2.8細(xì)胞系、成骨樣細(xì)胞系rob-c20、成骨樣細(xì)胞(Hu09細(xì)胞)等任何一種成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞等所有的已經(jīng)建立的成骨或成骨樣細(xì)胞系。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物或活性物質(zhì)的生物活性的檢測(cè)方法，通過(guò)檢測(cè)給予藥物或活性物質(zhì)后成骨細(xì)胞或成骨樣細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)的含量，檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖和功能具有促進(jìn)作用的藥物(或活性物質(zhì))的生物活性。該方法簡(jiǎn)單、易行、專屬性強(qiáng)，是對(duì)現(xiàn)有的生物活性的檢測(cè)方法的創(chuàng)新。
文檔編號(hào)C12Q1/42GK102168126SQ20101059455
公開日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者叢艷, 俞嘉林, 劉少麗, 吳晶晶, 張策, 徐博, 權(quán)曉丹, 李麗靜 申請(qǐng)人:俞嘉林