專利名稱：制備乳酸菌組合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備至少^g(干重)乳酸菌組合物的方法，所述組合物以至 50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑進行配制，其中通過添加不包含NH3 (氨)的堿使得在至少大部分發(fā)酵過程中pH被控制在3 < pH < 8。
背景技術(shù)：
乳酸菌涉及一類革蘭氏陽性、不生成芽孢的細菌，其進行糖的乳酸發(fā)酵。例如，乳酸菌在商業(yè)上廣泛地用于制備不同的食品，例如酸乳。此外，很多乳酸菌是益生菌——即，當以足夠的量施用時給予宿主(例如人)健康益處的活微生物。乳酸菌產(chǎn)品在商業(yè)上常常作為干燥組合物-例如凍干組合物進行銷售。干燥組合物可以例如是干燥球團或片劑(例如由磨碎的干燥球團制得)。用于人類或動物消費的乳酸菌(例如干燥的乳酸菌)往往以抗壞血酸或抗壞血酸鹽(諸如例如抗壞血酸鈉)作為抗氧化劑進行配制——抗壞血酸鈉例如改善乳酸菌產(chǎn)品的貯存穩(wěn)定性?？箟难徕c是抗壞血酸的鹽(維生素C)，其具有通用的E-編號E301 (參見EU食品添加劑法規(guī))?？箟难徕c和抗壞血酸的結(jié)構(gòu)示于本文圖1。文章-L. Kurtmann 等人，“Storage stability of freeze-dried
Lactobacillus acidophilus(La~5)in relation to water activity and presence of oxygen and ascorbate";Cryobiology(2009), doi:10. 1016/j. cryobiol. 2008.12.001-于 2008年12月公開在互聯(lián)網(wǎng)上。L. Kurtmann等的文章描述當抗壞血酸鈉存在時，在貯存期間在干燥的嗜酸乳桿菌組合物/樣品的表面上觀察到粉色/紅色顏色(參見例如摘要)。這樣的粉色/紅色顏色是不希望有的一例如很多消費者不喜歡這樣的粉色/紅色顏色，因為它可能給干燥的乳酸菌產(chǎn)品帶來不健康的“外表”。在發(fā)酵過程中，乳酸菌產(chǎn)生乳酸——因此，為了在生產(chǎn)過程中不獲得過低的PH，在發(fā)酵過程中通過添加堿來控制pH。通常，控制pH使得在發(fā)酵過程的至少大部分具有3 < pH < 8，因為乳酸菌通常在 PH低于3不適當?shù)厣L。在L. Kurtmann等的文章中，使用了來自Chr. Hansen A/S的嗜酸乳桿菌(La-5 )。 這篇文章泛泛地陳述在發(fā)酵過程中PH被控制(參見材料與方法)。沒有提及如何進行PH 控制。使用NH3作為堿對于在工業(yè)上進行乳酸菌產(chǎn)品的商業(yè)相關(guān)生產(chǎn)頗為正?！聦嵣?，這也許被認為是“標準”。上文討論的L. Kurtmann的文章第179頁右欄指出來自細菌細胞或來自發(fā)酵殘余物的氨基可能與不希望有的粉色/紅色顏色的產(chǎn)生有關(guān)——文章稱“當抗壞血酸被氧化稱脫氫抗壞血酸并與形成色素的氨基反應(yīng)時形成紅色化合物”。如下進一步論述——事實上，可以說L. Kurtmarm的文章這一披露的理論偏離了本發(fā)明的教導(dǎo)(即，不使用包含NH3的堿)。EP-A-1038951 (Nestle[CH])披露了一種用于培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包含作為抗氧化劑的抗壞血酸，并包含如Na2C03、KH2PO4的緩沖劑(參見第3頁、權(quán)利要求3和 4)。描述，例如，抗壞血酸簡單地作為發(fā)酵培養(yǎng)基中適宜的抗氧化劑的例子被提供。換言之，EP-A-1038951沒有直接并毫無疑義地披露制備細菌的方法，其中抗壞血酸被添加到收集的細菌濃縮物——即如下所論述，EP-A-1038951沒有明確地披露如本文中所述的本發(fā)明第一方面(權(quán)利要求1)的步驟(iii)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是提供一種制備以抗壞血酸鹽或抗壞血酸作為抗氧化劑配制的乳酸菌組合物(例如干燥的組合物)的新方法，其中所述組合物在其貯存過程中不產(chǎn)生顯著的粉色/紅色顏色。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)不希望有的粉色/紅色顏色產(chǎn)生與以抗壞血酸鈉配制的不同乳酸菌培養(yǎng)物相關(guān)——即，不僅是L. Kurtmann的文章中分析的嗜酸乳桿菌(La- 5 )組合物/樣品。如本文實施例所示——所述粉色/紅色顏色也存在于其他的商業(yè)相關(guān)培養(yǎng)物中， 例如鼠李糖乳桿菌(LGG )、嗜熱鏈球菌(TH-4 )和動物雙歧桿菌(BB-12 )培養(yǎng)物。通過對此進一步研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)NH3已被用作用于所分析的 La-5 、LGG 、TH-4 和BB-12 組合物的發(fā)酵pH控制的堿。進一步對此工作——本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過使用NaOH而不是NH3作為堿——意外地可以產(chǎn)生以抗壞血酸鈉配制的干燥的La-5 、LGG 、TH-4 和BB-12 組合物，其中所述組合物在其貯存期間不產(chǎn)生顯著的粉色/紅色顏色——對于進一步的細節(jié)，參見本文實施例。因此，本發(fā)明的實質(zhì)可視為不使用包括NH3(氨)的堿。不囿于理論，認為與使用NH3相關(guān)的粉色/紅色顏色問題可以由下面的理論解釋。氨(NH3)與銨(NH4+)平衡。平衡的pKa為9. 25，意味著在pH < 9. 25，大部分作為銨(NH4+)存在，即在本發(fā)明第一方面的步驟(i)中培養(yǎng)物所調(diào)節(jié)到的pH下帶正電。抗壞血酸中兩個-OH基的pKa分別為4. 17和11. 6。這意味著pKa為4. 17的-OH 被去質(zhì)子化，并且在所述抗壞血酸鹽分子中會存在負電荷(多電子的)位點。抗壞血酸鈉和抗壞血酸的結(jié)構(gòu)示于本文圖1。顯然，這在大于4的pH最顯著——然而，由于平衡效應(yīng)，它將——如技術(shù)人員所知曉的，對于大于3的pH也是相關(guān)的。不探究過多的細節(jié)——理論的實質(zhì)在于帶正電的NH3(即NH4+) “攻擊”所述抗壞血酸鹽分子中帶負電(多電子的)位點，這引發(fā)一系列反應(yīng)，最后產(chǎn)生這樣的化合物，其在貯存期間給出/產(chǎn)生所述不希望有的粉色/紅色顏色。對于技術(shù)人員顯然的——NaOH不具有與NH4+相似的帶正電的反應(yīng)基，這是——根據(jù)理論——當使用NaOH作為堿時看不到粉色/紅色顏色的根本原因。上文討論的L. Kurtmann的文章第179頁右欄指出來自細菌細胞或來自發(fā)酵殘余物的氨基可能與不希望有的粉色/紅色顏色的產(chǎn)生有關(guān)——文章稱“當抗壞血酸被氧化為脫氫抗壞血酸并與形成色素的氨基反應(yīng)時形成紅色化合物”。事實上，可以說L. Kurtmann的文章這一披露的理論偏離了本發(fā)明的教導(dǎo)(即，不使用包含NH3的堿)。簡而言之，可以說L. Kurtmann理論是基于其他的現(xiàn)有技術(shù)指示，即可能是氨基與不希望有的粉色/紅色顏色的產(chǎn)生有關(guān)?？偟恼f來，現(xiàn)有技術(shù)中基于氨基的理論可以總結(jié)為現(xiàn)有技術(shù)引用氨基正在攻擊脫氫抗壞血酸(DHA)的羰基碳——這里重要的是注意到羰基碳具有部分的正電荷(即σ +電荷)從而來自所述氨基的單獨的電子對可以攻擊部分帶正電的碳。如上討論——氨的pKa為9. 25，意味著在pH < 9. 25，大部分作為銨(NH4+)存在， 即在本發(fā)明第一方面的步驟(i)中培養(yǎng)物所調(diào)節(jié)到的PH下帶正電。對于技術(shù)人員明顯的——陽性的氨無法攻擊DHA的部分帶正電的羰基碳，意味著通過使用L. Kurtmann的文章中描述的理論的“機理”，氨不能參與不希望有的紅色/粉色顏色的形成。換言之，可以說L. Kurtmann的文章中描述的氨基相關(guān)理論/機制偏離了本發(fā)明的教導(dǎo)，因為可以由該L. Kurtmann理論客觀地導(dǎo)出/理解氨(即在本文中相關(guān)pH的NH4+)不應(yīng)是“危險”的(即NH4+不應(yīng)與不希望有的紅色/粉色顏色的形成有關(guān))。如技術(shù)人員所知曉的——可以常規(guī)地識別出NaOH之外的其他不包括NH3 (氨)的堿諸如例如KOH、Na2CO3.此外，對于技術(shù)人員明顯的，上述理論不僅與抗壞血酸鈉相關(guān)，而且通常與任何相關(guān)的抗壞血酸鹽或抗壞血酸相關(guān)。如上所論述的，這樣的粉色/紅色顏色是不希望，因為例如很多消費者不喜歡這樣的粉色/紅色顏色，因為它可能給乳酸菌產(chǎn)品帶來不健康的“外表”。因此，本發(fā)明對于乳酸菌組合物在商業(yè)上的相關(guān)生產(chǎn)是高度相關(guān)的，所述組合物通常以工業(yè)相關(guān)大規(guī)模進行生產(chǎn)。因此，本發(fā)明的第一方面涉及一種制備至少^ig(干重)的乳酸菌組合物的方法， 所述組合物以至50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑進行配制，其中所述方法包括以下步驟(i)在適宜條件下在包含至少100L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐(生物反應(yīng)器)中發(fā)酵所述乳酸菌，其中通過添加不包括NH3 (氨)的堿使得發(fā)酵過程的至少大部分期間pH被控制在3彡pH彡8 ；(ii)收集所述乳酸菌以獲得乳酸菌濃縮物；(iii)向所述乳酸菌濃縮物添加抗壞血酸鹽或抗壞血酸；以及(iv)以適宜的方式處理步驟(iii)的所述含有抗壞血酸鹽或抗壞血酸的濃縮物，以獲得以至50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑配制的乳酸菌組合物。如技術(shù)人員理解的，不除去在收集步驟(ii)中全部的加入的堿。因此，相關(guān)量的所述添加的堿存在于所述細菌濃縮物中，因此例如當在步驟(iii)中將抗壞血酸鈉添加到濃縮物中時，所述添加的堿也是存在的。如上所論述的，本發(fā)明的實質(zhì)可視為不使用包括NH3(氨)的堿——即步驟(i)中 “添加不包括nh3(氨)的堿”。第一方面的方法的所有其它步驟可以基本上視為根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)所作的常規(guī)步驟。常規(guī)步驟——諸如例如步驟(i)的在適宜條件下發(fā)酵——可以不在本文中進一步詳細論述，因為技術(shù)人員常規(guī)地知曉如何進行這樣的現(xiàn)有技術(shù)常規(guī)步驟。


圖1 抗壞血酸鈉和抗壞血酸的結(jié)構(gòu)。圖2 圖2中所示的圖片顯示在發(fā)酵過程中NH3用于pH調(diào)節(jié)的生產(chǎn)中產(chǎn)生的 BB-12 批次和發(fā)酵過程中NaOH用于pH調(diào)節(jié)的Pilot Plant中產(chǎn)生的兩個批次顏色的差
已圖3 :圖3中的圖片顯示對于La-5 與圖2中相同的內(nèi)容。
具體實施例方式乳酸菌如上論述的，術(shù)語“乳酸菌”涉及一類革蘭氏陽性、不生成芽孢的細菌，其進行糖的乳酸發(fā)酵。優(yōu)選地，所述乳酸菌是選自以下組的乳酸菌屬于乳酸桿菌屬的乳酸菌，諸如瑞士乳桿菌(LactcAacillus helveticus)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbruekii subsp. bulgaricus)、發(fā)酵乳桿菌 (Lactobacillus fermentum) >(H^ILff lif (Lactobacillus salivarius) IE^IIILff lif (Lactobacillus rhamnosus)；屬于乳球菌屬的乳酸菌，諸如乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)；屬于鏈球菌屬的乳酸菌，諸如嗜熱鏈球菌(Sti^ptococcus thermophilus)；屬于明串珠菌屬的乳酸菌，諸如乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)；屬于雙歧桿菌屬的乳酸菌，諸如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、動物雙歧桿菌 (Bifidobacterium animal is)或短小雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)；屬于丙酸桿菌屬的乳酸菌；屬于腸球菌屬的乳酸菌，諸如屎腸球菌(Enterococcus faecum)；和屬于片球菌屬的乳酸菌；.一些文獻理論上論述了雙歧桿菌屬是否是“真正的”乳酸菌。在本文中，雙歧桿菌屬是乳酸菌。在以上乳酸菌組中，優(yōu)選至少一種乳酸菌選自屬于乳酸桿菌屬的乳酸菌；屬于鏈球菌屬的乳酸菌；屬于雙歧桿菌屬的乳酸菌；和屬于乳球菌屬的乳酸菌。
更優(yōu)選地，所述乳酸菌是選自以下組的乳酸菌嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜熱鏈球菌和動物雙歧桿菌。最優(yōu)選地，所述乳酸菌是選自以下組的乳酸菌保藏登錄號為DSM 13241的嗜酸乳桿菌；保藏登錄號為DSM 15954的動物雙歧桿菌菌株；和保藏登錄號為DSM 15957的嗜熱鏈球菌菌株。所述DSM 13241菌株在本文中可以命名為La-5 ,所述DSM159M菌株在本文中可以命名為BB-12 ,而所述DSM 15957菌株在本文中可以命名為TH-4 。抗壞血酸或抗壞血酸鹽如已知的——抗壞血酸鹽是抗壞血酸的鹽本文可優(yōu)選使用抗壞血酸鈉作為適宜的抗壞血酸鹽。其它適宜的抗壞血酸的鹽(抗壞血酸鹽)的實例包括抗壞血酸鈣、抗壞血酸鎂或 2-磷酸抗壞血酸三鈉。使用抗壞血酸也可以是相關(guān)的——然而由于其酸性效果，需要將這考慮在內(nèi)用于相關(guān)的PH調(diào)節(jié)。乳酸菌組合物所述乳酸菌組合物可以包含一種單一菌株(例如嗜酸乳桿菌(La-5 ))或者它可以包含不同菌株的混合物。它還可以包含非乳酸菌諸如例如酵母。所述組合物的重量為優(yōu)選至少^g(干重)、更優(yōu)選至少Mkg(干重)、并最優(yōu)選至少50kg (干重)。如技術(shù)人員所理解的——較高重量的所述組合物與較大的大規(guī)模生產(chǎn)相關(guān)，這由于顯而易見的原因可以是有利的。商業(yè)上，多次使用凍干。因此，如果干燥用于第一方面的步驟(iv)，可以是凍干來獲得凍干的乳酸菌組合物。如上論述的，所述乳酸菌以至50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì)) 進行配制。技術(shù)人員理解術(shù)語“w/w-干物質(zhì)”意為基于所述組合物的干物質(zhì)的重量。例如，如果所述乳酸菌組合物是冷凍組合物——例如10%抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/V-干物質(zhì))應(yīng)理解為干燥例如所述組合物的樣品，然后測得組合物所述的干物質(zhì)的 10 %為抗壞血酸鹽或抗壞血酸。很多次，所述乳酸菌組合物以2%至M %的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì)) 進行配制，或者其以5%至15%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))進行配制。對于技術(shù)人員明顯的，在第一方面的步驟(iii)加入的例如抗壞血酸鈉的量將決定在例如步驟(iv)的干燥后所述乳酸菌組合物中例如抗壞血酸鈉的量(w/V-干物質(zhì))。如對于技術(shù)人員明顯的，可以向第一方面的步驟(iii)中的所述濃縮物添加其它相關(guān)化合物。例如，如果凍干用于步驟(iv)，則存在步驟(iii)中添加的所謂的冷凍保護劑。冷凍保護劑是用于防止生物學(xué)組織免于凍害(由于結(jié)冰引起的損害)的物質(zhì)，適宜的冷凍保護劑的實例為例如蔗糖、麥芽糖糊精、海藻糖或甘油。
發(fā)酵——第一方面的步驟(i)根據(jù)人們使得所述大規(guī)模生產(chǎn)究竟有多大——發(fā)酵罐(生物反應(yīng)器)可以包含至少500L發(fā)酵培養(yǎng)基或至少10000L發(fā)酵培養(yǎng)基。如上論述的，通過添加不包括NH3 (氨)的堿使得在發(fā)酵過程的至少大部分pH被控制在3彡pH彡8。控制pH使得在發(fā)酵過程的至少大部分具有3 < pH < 8，因為乳酸菌通常在pH低于3不適當?shù)厣L。根據(jù)乳酸菌的具體類型——可以控制pH為4彡pH彡7。一般而言，技術(shù)人員知曉如何通過適當添加適量的堿來控制pH。如對于技術(shù)人員明顯的，在本文中——步驟(i)中的術(shù)語“大部分”應(yīng)理解為數(shù)次相對短的時間PH例如變?yōu)榈陀?——例如在不是連續(xù)地添加堿的情況下恰恰在加入過量的堿之前。不包括NH2(M)的堿如上論述的——在本文實施例中，使用NaOH作為不包括NH3(氨)適宜的堿的良好實例。如技術(shù)人員已知的——適宜的實例可以是以下堿組成的堿的組中的至少一種堿 NaOH, KOH、Na2C03> Na2S 和 Na20。在以上列表中，NaOH或KOH通常是最優(yōu)選的。第一方面的步驟(ii)至(iv)如上論述的，第一方面的方法的所有步驟(ii)至(iv)可以基本上視為根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)所作的常規(guī)步驟。例如，如技術(shù)人員已知的，收集所述乳酸菌以獲得乳酸菌濃縮物(步驟(ii))可以通過離心進行。收集也可以通過超濾進行。例如，如技術(shù)人員已知的，可以通過例如在將其添加到所述濃縮物之前溶解干燥的抗壞血酸鈉來將例如抗壞血酸鈉添加到所述乳酸菌濃縮物(步驟(iii))?；蛘?，可以“直接”將干燥的抗壞血酸鈉添加到所述濃縮物中。關(guān)于步驟(iv)具體的處理方法當然將取決于應(yīng)用。例如，如果需要干燥的乳酸菌組合物，那么步驟(iv)中的處理為干燥。如果需要冷凍的乳酸菌組合物，那么步驟(iv)中的處理為冷凍?；蛘撸绻枰后w乳酸菌組合物，那么事實上不需要在步驟(iii)后進行任何進一步的處理。實施例實施例1 顏餼測定如本文中論述的L. Kurtmann的文章中描述的方法進行粉色/紅色顏色測定。如該文章第2頁所闡釋的，通過以下方式進行顏色測定使用采用L*、a*和b*坐標的CIELAB色系測量干燥培養(yǎng)物的表面色，并通過三原色比色計(Minolta Chroma Meter CR-300, Osaka, Japan)進行測量。在該研究中，顏色變化通過b*值和f值來表示，b*值測量黃色(+)或藍色(_)，其中b*值增加反映顏色向黃色和棕色的變化，而a*值測量紅色(+)或綠色(_)。值測定為在所述干燥細菌樣品每三個測量的平均值，其中每次測量在表面上10個不同位置進行。實施例2 以NaOH替換NH3用于發(fā)酵過程中的pH調(diào)節(jié)菌株——商業(yè)上可獲自Chr. Hansen A/S 嗜酸乳桿菌(La-5 );鼠李糖乳桿菌(LGG )動物雙歧桿菌(BB-12 )。嗜熱鏈球菌(TH-4 )方法依照本文第一方面的方法中試生產(chǎn)制備所有三種菌株。對于每一菌株，在一個生產(chǎn)中使用NaOH來調(diào)控發(fā)酵過程中的pH(第一方面的步驟⑴)，而作為對照/參照的是使用NH3來控制pH的另一生產(chǎn)。其它的一切——例如步驟 (iii)中添加的抗壞血酸鈉的量在所述生產(chǎn)中100%相同。所有的產(chǎn)生的乳酸菌組合物在干燥產(chǎn)品中包含約10%的抗壞血酸鈉(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑。凍干(步驟(iv))后——對貯存于30°C /30%相對濕度(RH)分別以NaOH和NH3 制備的凍干的乳酸菌組合物的顏色變化進行跟蹤。以Minolta色度計測量所有產(chǎn)品的顏色(參見實施例1)并照相。MM圖2中所示的圖片顯示在發(fā)酵過程中NH3用于pH調(diào)節(jié)的生產(chǎn)中產(chǎn)生的BB - 12 批次和發(fā)酵過程中NaOH用于pH調(diào)節(jié)的Pilot Plant中產(chǎn)生的兩個批次顏色的差異。圖3中的圖片顯示對于La-5 的同樣內(nèi)容。由所述圖可以看到，將NH3改變成NaOH，顏色大大改善(較少的紅色/粉色顏色)。對于LGG 和TH-4 發(fā)現(xiàn)了相似的明確結(jié)果。Mrk結(jié)果清楚地顯示通過使用NaOH而不是NH3作為堿——可以產(chǎn)生以抗壞血酸鈉配制的干燥的La-5 、LGG 、BB-12 和TH-4 組合物，其中所述組合物在其貯存期間不產(chǎn)生顯著的粉色/紅色顏色。參考文獻1. L. Kurtmann et al. , "Storage stability of freeze—dried Lactobacillus acidophilus(La_5)in relation to water activity and presence of oxygen and ascorbate” ；Cryobiology(2009)，doi:10.1016/j. cryobiol. 2008. 12. 001-于 2008 年 12
月發(fā)表于互聯(lián)網(wǎng)上。
權(quán)利要求
1.一種制備至少^g(干重)的乳酸菌組合物的方法，所述組合物以至50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(W/V-干物質(zhì))作為抗氧化劑進行配制，其中所述方法包括以下步驟(i)在適宜條件下在包含至少100L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐(生物反應(yīng)器)中發(fā)酵所述 Mff，1中誦1 寸添加不句,括NH, ( M )的堿#得發(fā)酵過藍的至Φ大部分其月間dH M^ffeH^h 3彡pH彡8 ；( )收集所述乳酸菌以獲得乳酸菌濃縮物；(iii)向所述乳酸菌濃縮物添加抗壞血酸鹽或抗壞血酸；以及(iv)以適宜的方式處理步驟(iii)的含有抗壞血酸鹽或抗壞血酸的濃縮物，以獲得以至50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑配制的乳酸菌組合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中在權(quán)利要求1的步驟(iii)中添加抗壞血酸鈉。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中權(quán)利要求1的步驟(iv)中的處理為干燥以獲得干燥的乳酸菌組合物。
4.權(quán)利要求1或2的方法，其中權(quán)利要求1的步驟(iv)中的處理為冷凍以獲得冷凍的乳酸菌組合物。
5.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中所述乳酸菌是選自以下組的乳酸菌屬于乳酸桿菌屬的乳酸菌，諸如瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbruekii subsp. bulgaricus)、發(fā)酵乳桿菌 (Lactobacillus fermentum) >(H^ILff lif (Lactobacillus salivarius) IE^IIILff lif (Lactobacillus rhamnosus)；屬于乳球菌屬的乳酸菌，諸如乳酸乳球菌(lactococcus lactis)； 屬于鏈球菌屬的乳酸菌，諸如嗜熱鏈球菌(Sti^ptococcus thermophilus)； 屬于明串珠菌屬的乳酸菌，諸如乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)； 屬于雙歧桿菌屬的乳酸菌，諸如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、動物雙歧桿菌(bifidobacterium animal is)或短小雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)； 屬于丙酸桿菌屬的乳酸菌；屬于腸球菌屬的乳酸菌，諸如屎腸球菌(Enterococcus faecum)；和屬于片球菌屬的乳酸菌。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述乳酸菌是選自以下組的乳酸菌 屬于乳酸桿菌屬的乳酸菌；屬于鏈球菌屬的乳酸菌； 屬于雙歧桿菌屬的乳酸菌；和屬于乳球菌屬的乳酸菌。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述乳酸菌是選自以下組的乳酸菌嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)、鼠李糖乳桿菌、嗜熱鏈球菌和動物雙歧桿菌。
8.權(quán)利要求3的方法，其中步驟(iv)的干燥是凍干以獲得凍干的乳酸菌組合物。
9.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中所述乳酸菌組合物以5%至15%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))進行配制。
10.權(quán)利要求8的方法，其中在權(quán)利要求1的步驟(iii)中還添加冷凍保護劑。
11.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中權(quán)利要求1的步驟(i)中的發(fā)酵罐(生物反應(yīng)器)包含至少500L發(fā)酵培養(yǎng)基。
12.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中權(quán)利要求1的方法為一種制備至少^g(干重) 的干燥乳酸菌組合物的方法，所述組合物以至50%的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑進行配制。
13.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中所述堿為選自以下堿的至少一種堿NaOH、Κ0Η、 Na2C03、Na2S和Na2O,優(yōu)選地其中所述堿是NaOH或Κ0Η。
14.權(quán)利要求14的方法，其中所述堿是NaOH。
15.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中控制權(quán)利要求1的步驟(i)中的PH使得 4 ^ pH ^ 7ο
全文摘要
一種制備至少2kg(干重)乳酸菌組合物的方法，所述組合物以1％至50％的抗壞血酸鹽或抗壞血酸(w/w-干物質(zhì))作為抗氧化劑進行配制，其中通過添加不包括NH3(氨)的堿使得在至少大部分發(fā)酵過程中pH被控制在3≤pH≤8。
文檔編號C12R1/225GK102325873SQ201080008903
公開日2012年1月18日 申請日期2010年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月23日
發(fā)明者比吉特·伊德, 蘇珊娜·亞伯拉罕森 申請人:科·漢森有限公司